Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Diese Arbeit wurde durch die Finanzierung der National Institutes of Health (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889) unterstützt. Ein Teil dieser Arbeit wurde im McKnight Brain Institute an der Advanced Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy (AMRIS) Facility des National High Magnetic Field Laboratory durchgeführt, die von der National Science Foundation Cooperative Agreement No. DMR-1644779 und der Bundesstaat Florida.

Experimente mit Mäusen wurden in Übereinstimmung mit dem Institutional Animal Care and Use Committee der University of Florida (Protokollnummer # 201909320) durchgeführt. Der verwendete Mausstamm war C57BL/6J; Alle Mäuse waren männlich. Diese Methode ist im Allgemeinen auch für Studien mit anderen Standard-Mausstämmen anwendbar. Diese Operation wird optimal von zwei Personen durchgeführt, die zusammenarbeiten.
1. Ersteinrichtung
<ol><li>Perfuse-Lebern mit perfusathal...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Dieser chirurgische Eingriff ist eine Herausforderung und erfordert umfangreiche Übungen, um reproduzierbare Ergebnisse zu erzielen. Isofluran und Trägergas sollten bei Bedarf angepasst werden, um die Lebensfähigkeit des Tieres während des chirurgischen Eingriffs so weit wie möglich zu erhalten. Umwelt, Tageszeit, Alter, Gewicht und einige andere Faktoren beeinflussen die Anästhesie. Gewicht, Ernährung, Stamm der Mäuse und Alter könnten die Operation beeinflussen, da der Fettaufbau die Visualisierung der Pfortad...

Ex-vivo-Perfusionen sind entscheidend für die Untersuchung des Leberstoffwechsels, und die Perfusion durch die Pfortader ist der Standard für diese Studien. Um den Leberstoffwechsel isoliert zu untersuchen, muss die Leber aus dem Körper heraus reseziert werden, um Komplikationen zu vermeiden, die sich aus dem Stoffwechsel in anderen Organen (d.h. dem Ganzkörperstoffwechsel) ergeben, und um die Hormonverfügbarkeit (Insulin, Glucagon usw.) zu kontrollieren. Dieser Ansatz kann für das Verständnis der Auswirkungen von Krankheiten wie Diabetes, NAFLD und NASH auf den Leberstoffwechsel sowie für Mechanismen der Arzneimittelwirkung unerlässlich sein. Dieser Artikel dient als Leitfaden für die hepatische Resektion und Perfusion. Wir haben ein optimiertes Verfahren entwickelt, um diese metabolischen Leberstudien mit ausreichender Strenge und Reproduzierbarkeit durchzuführen. Wird die Operation nicht korrekt durchgeführt, kommt es zu einer ausgeprägten Variabilität der erhaltenen Stoffwechseldaten. Wir beschreiben eine organisierte Methode zur Durchführung von Portalvenenkatheterisierung und Leberresektion im Rahmen von Stoffwechselstudien in situ in einem Kernspinresonanzspektrometer (NMR), wie in der Literatur 1,2,3,4,5 beschrieben.
Derzeit gibt es keine Literatur, die eine ex vivo hepatische Perfusion unter Verwendung einer Glassäule innerhalb einer NMR beschreibt. Es gibt auch keine Video- oder Textpublikation, die ein klares Beispiel dafür liefert, wie das Verfahren mit der Mausleber durchgeführt wird, insbesondere um zu demonstrieren, wie man die Pfortader katheterisiert, eine Leber reseziert, überträgt und die Leber an eine Glassäule hängt. Da die gentechnisch veränderte Maus allgegenwärtig zur Untersuchung des Leberstoffwechsels eingesetzt wird, ist dies ein wesentliches Verfahren, das eine vollständige Beschreibung verdient. Leberperfusionsoperationen sind nicht neu, aber dieser Artikel ist eine Goldstandardmethode, begleitet von einem Video, das die in diesem Papier beschriebene technische Exzellenz demonstriert, um allen zu helfen, die an diesem Verfahren interessiert sind. Die hier vorgestellte Methode würde am besten auf den Echtzeitstoffwechsel angewendet werden, um die Funktion und den Umsatz von Metaboliten in Krankheitsmodellen nachzuweisen.
Diese Methode verwendet eine 100 cm große, wasserummantelte Glassäule, die es der Leber ermöglicht, am Boden der Kanüle zu hängen, die durch Perfusat in einem NMR-Röhrchen eingekapselt ist. Erhitztes Wasser im Glasmantel wird verwendet, um die perfusatierte Temperatur zu kontrollieren. Ein dünnschichtiger Oxygenator wird zur pH-Kontrolle mit 95%/5% O 2/CO2 unter Druck gesetzt. Durch die Verwendung von drei separaten Pumpen wird die perfusate Säulenhöhe eingestellt, die der Leber einen konstanten Druck verleiht. Durchflussraten werden nicht über die Anwendung von konstantem Druck hinaus gesteuert (Abbildung 1). Um zu bestätigen, dass die Leber richtig funktioniert, werden Sauerstoffmessungen zusammen mit den Durchflussraten durchgeführt. In unseren Händen führt diese Reihe von Voraussetzungen zu hochgradig wiederholbaren NMR-Experimenten zur Beurteilung der Stoffwechselfunktion der Leber.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Stoffwechselerkrankungen wie Diabetes, Prädiabetes, nicht-alkoholische Fettlebererkrankung (NAFLD) und nichtalkoholische Steatohepatitis (NASH) werden immer häufiger. Ex-vivo-Leberperfusionen ermöglichen eine umfassende Analyse des Leberstoffwechsels unter Verwendung von Kernspinresonanz (NMR) unter Ernährungsbedingungen, die streng kontrolliert werden können. Da In-silico-Simulationen nach wie vor ein primär theoretisches Mittel zur Beurteilung von Hormonwirkungen und den Auswirkungen pharmazeutischer Interventionen sind, bleibt die durchblutete Leber eines der wertvollsten Testumgebungen für das Verständnis des Leberstoffwechsels. Da diese Studien grundlegende Einblicke in die Leberphysiologie geben, müssen die Ergebnisse genau und reproduzierbar sein. Der größte Faktor für die Reproduzierbarkeit der Ex-vivo-Leberperfusion ist die Qualität der Operation. Daher haben wir eine organisierte und optimierte Methode eingeführt, um Ex-vivo-Mausleberperfusionen im Rahmen von In-situ-NMR-Experimenten durchzuführen. Wir beschreiben auch eine einzigartige Anwendung und diskutieren häufige Probleme, die in diesen Studien aufgetreten sind. Der übergeordnete Zweck besteht darin, einen unkomplizierten Leitfaden für eine Technik zu geben, die wir über mehrere Jahre verfeinert haben und die wir als den goldenen Standard für die Erzielung reproduzierbarer Ergebnisse bei Leberresektionen und Perfusionen im Rahmen von In-situ-NMR-Experimenten betrachten. Der Abstand zum Zentrum des Feldes für den Magneten sowie die Unzugänglichkeit des Gewebes für Eingriffe während des NMR-Experiments machen unsere Methoden neuartig.

Die Leberfunktion wird in erster Linie durch den Sauerstoffverbrauch und die Durchflussrate beurteilt. Ein Durchfluss von 4-8 ml/min und ein Sauerstoffverbrauch von 1 μmol/min.g sind typisch. Diese Maßnahmen variieren je nach spezifischen Versuchsbedingungen und biologischen Unterschieden.
Die genaue Menge des verwendeten Isoflurans hängt von der Art des verwendeten Anästhesiesystems sowie der Umgebung und dem Alter / Gewicht der Maus ab. Während der Operation ändern sich das Isofluran u...

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Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Das Protokoll beschreibt eine einfache Methode zur Resektion einer intakten Mausleber für Stoffwechselstudien durch Pfortaderperfusion.

Ex vivo Leberperfusion durch die Portalader in der Maus

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Dieses Video zeigt ein optimiertes Verfahren, das entwickelt wurde, um metabolische Leberstudien mit ausreichender Strenge und Reproduzierbarkeit durchzuführen, die als Leitfaden für die Durchführung der Leberresektion für ihre vivo-Perfusionsstudien dienen können. Die Technik wird am besten auf den Echtzeit-Stoffwechsel angewendet, um die Funktion in Umsatzmetaboliten in Krankheitsmodellen zu erkennen. Die Perfusion ermöglicht eine präzise Kontrolle der Nährstoffe und Hormone, die der Leber zur Verfügung stehen.Obwohl die Technik nicht auf die Therapie ausgerichtet ist, können Leberdurchblutungen zum Verständnis der Ätiologie und der Auswirkungen von Krankheiten wie Diabetes, NAFLD und NASH auf den Leberstoffwechsel beitragen. Mit der Entwicklung neuer Arzneimittel werden Methoden zur Beurteilung des zentralen Energiestoffwechsels der Leber unerlässlich. Diese Methode kann mit Modellen verschiedener Krankheiten, einschließlich Krebserkrankungen, und in verschiedenen Stadien des Krankheitsverlaufs verwendet werden.Legen Sie zunächst die Nase der Maus nach der Induktion der Anästhesie in einen Nasenkonus und kleben Sie ihre Pfoten ab. Lidocain durch eine subkutane Injektion bilateral in der vorderen Beckenkammregion verabreichen. Führen Sie einen Zehenquetschtest durch, um das Fehlen aller Schmerzreflexe zu bestätigen.Führen Sie eine Zöliotomie durch, um die inneren Organe freizulegen, indem Sie einen drei Zentimeter breiten Schnitt machen. Erweitern Sie den Einschnitt mit einem Hämostat, der die Traktion durch Klemmen des Xiphoid-Prozesses zieht. Verwenden Sie einen Applikator mit Baumwollspitze, um den Dünn- und Dickdarm zu entfernen, der die Pfortader bedeckt.Positionieren Sie eine Seidennaht unter dem Bogen der Pfortader proximal zur Leber. Platzieren Sie die zweite Seidennaht proximal oder distal der Vena mesenterica inferior distal von der Leber mit einer 2-0 Naht. Sobald die Nähte an Ort und Stelle sind, kanülieren Sie die Pfortader mit einem 22-Gauge-Katheter und halten Sie die Fase nach oben.Geben Sie die Pfortader in einem Winkel von nicht mehr als 15 Grad ein. Binden Sie die erste Naht am Katheterzapfer vorbei. Nachdem die Pfortader kanüliert ist, verankern Sie den Katheter zwei bis drei Millimeter distal vom Ast der Pfortader mit der Seidennaht.Befestigen Sie den unteren Teil des Katheters mit der zweiten Naht. Binden Sie einen Knoten mit der Naht, um den Katheter am distalen Teil der Pfortader und dem umgebenden Gewebe zu befestigen. Nachdem der Katheter gesichert ist, führen Sie eine Ein-Milliliter-Spritze mit einer 27-Gauge-Nadel mit 38,1 Millimetern Länge in den Katheter ein, um Blut- und Luftblasen zu spülen.Verwenden Sie einen Silikonschlauch mit einem Innendurchmesser von einem Millimeter und einem Außendurchmesser von fünf Millimetern mit einem festen Stopphahn, um die Perfusionssäule an den Katheter zu koppeln, wodurch der Puffer in die Leber fließen kann und der Beginn der Perfusion markiert wird. Nach dem Starten eines Timers den erhöhten Gefäßdruck durch Einschnitt mit einer Schere in die untere Hohlvene entlasten. Bestätigen Sie den Fluss von Perfusat durch die Leber, indem Sie die homogene Veränderung der Leberfarbe von rosa oder rot zu einem blassgelben beobachten.Sobald der Fluss bestätigt ist, entfernen Sie den Magen, den Dünndarm, den Dickdarm und die rechte Niere aus dem umgebenden Gewebe. Manövrieren Sie mit Hilfe des chirurgischen Assistenten die Leber um die Bauch- und Brusthöhle, während der Chirurg das parietale Peritoneum und das Thoraxgewebe durchschneidet, um die Leber zu resezieren. Heben Sie die Leber nach oben und schneiden Sie das verbleibende Bindegewebe, das die Leber an Ort und Stelle hält, mit einer Schere ab.Manipulieren Sie langsam die Leber, um die Sicht zu erleichtern. Die Durchfluss- und Sauerstoffverbrauchsmessungen sind für die Überwachung der Gesundheit und Funktion der Leber von entscheidender Bedeutung. Es gibt oft einen leichten Unterschied im Sauerstoffverbrauch zwischen gefütterter und nüchterner Leber, der auf einen erhöhten Energiebedarf zurückzuführen ist, der durch die Glukogenese in der nüchternen Leber auferlegt wird.Zu den wichtigsten Schritten gehören das Einführen des Katheters in einem Winkel von 15 Grad, das Visualisieren der Katheterspitze, das Rollen von Handgelenk und Schultern beim Binden der Naht und das Vermeiden von Torsion an der Pfortader. Das ausgeschnittene Gewebe kann nach der Perfusion mit beliebig vielen biochemischen oder analytischen Ansätzen untersucht werden. Ex-vivo-Perfusionen in Kombination mit Echtzeit-MRT und Spektroskopie ermöglichen die Messung von Stoffwechselflüssen in Echtzeit.Dies erstreckt sich natürlich auf die Störung des Flusses aus einem Kontrollzustand als Reaktion auf die Krankheiten.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Nachweis des pH-abhängige Aktivität von<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; und<em&gt; In Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Forschung

Biochemie

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Gehirn Membran Fraktionierung: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Ansatz zur Bewertung der Subsynaptischen Protein-Lokalisierung

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Reinigung von Hepatozyten und sinusförmigen Endothelzellen aus Maus Leber Perfusion

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Ein kolorimetrischen Verfahren zur Messung der Eisengehalt in Pflanzen

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profilerstellung in Leishmaniose, menschliche Zellen und Maus Hoden

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamische Proteomic und MiRNA Analyse des Polysomes von isolierten Maus Herz nach Langendorff Perfusion

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Messung und Interpretation von Sauerstoff-Verbrauch im ganzen fliegen Kopf Segmente

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Ein In Vivo Östrogen-Mangel-Maus-Modell zum Screening exogener Östrogen-Behandlungen von Kardiovaskulärer Dysfunktion nach den Wechseljahren

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Übersetzen von Ribososomen-Affinitätsreinigung (TRAP) zur RNA-Isolierung von Endothelzellen In vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting zur Untersuchung von Protein-Wechselwirkungen bei Caenorhabditis elegans

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...