Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מימון של המכונים הלאומיים לבריאות (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889). חלק מעבודה זו בוצע במכון המוח של מק'נייט במתקן ההדמיה והספקטרוסקופיה המתקדמת של תהודה מגנטית (AMRIS) של המעבדה הלאומית לשדה מגנטי גבוה, הנתמך על ידי הסכם שיתוף הפעולה מס' של הקרן הלאומית למדע. DMR-1644779 ומדינת פלורידה.

ניסויים בהם היו מעורבים עכברים טופלו בהתאם לוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת פלורידה (פרוטוקול מספר #201909320). זן העכבר שבו נעשה שימוש היה C57BL/6J; כל העכברים היו זכרים. שיטה זו ישימה בדרך כלל גם למחקרים המשתמשים בזני עכבר סטנדרטיים אחרים. ניתוח זה מבוצע בצורה אופטימלית על ידי ...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

הליך כירורגי זה הוא מאתגר ודורש תרגול נרחב כדי להשיג תוצאות הניתנות לשחזור. יש להתאים את איזופלורן וגז המוביל לפי הצורך כדי לשמור על הכדאיות של החיה במהלך כמה שיותר מההליך הכירורגי. סביבה, שעה ביום, גיל, משקל ומספר גורמים נוספים ישפיעו על ההרדמה. משקל, תזונה, זן של עכברים וגיל עשויים להשפיע ?...

זלוף Ex vivo הוא חיוני בחקר חילוף החומרים בכבד, וזלוף דרך וריד הפורטל הוא הסטנדרט למחקרים אלה. על מנת לחקור את חילוף החומרים בכבד בבידוד, יש לכרות את הכבד מהגוף כדי למנוע סיבוכים הנובעים מחילוף חומרים באיברים אחרים (כלומר, חילוף חומרים בכל הגוף) ולהפעיל שליטה על זמינות ההורמונים (אינסולין, גלוקגון וכו '). גישה זו יכולה להיות חיונית להבנת ההשפעות של מחלות כגון סוכרת, NAFLD ו- NASH על חילוף החומרים בכבד, כמו גם מנגנונים של פעולה תרופתית. מאמר זה משמש כמדריך לכריתה וזליעה של הכבד. פיתחנו הליך יעיל לביצוע מחקרי כבד מטבוליים אלה בקפדנות ובשכפול מספיקים. אם הניתוח אינו מבוצע כראוי, יש שונות בולטת בנתונים המטבוליים המתקבלים. אנו מתארים שיטה מאורגנת לביצוע צנתור ורידים פורטליים וכריתת כבד בהקשר של מחקרים מטבוליים באתרם בספקטרומטר תהודה מגנטית גרעינית (NMR), כמתואר בספרות 1,2,3,4,5.
נכון לעכשיו, אין ספרות המתארת פרפוזיה של כבד ex vivo באמצעות עמוד זכוכית בתוך NMR. כמו כן, אין סרטון או פרסום טקסט המספק דוגמה ברורה כיצד לבצע את ההליך עם כבד העכבר, במיוחד, המדגים כיצד לצנתר את וריד הפורטל, לכרות כבד, להעביר ולתלות את הכבד על עמוד זכוכית. מכיוון שהעכבר המהונדס גנטית משמש בכל מקום לחקר חילוף החומרים בכבד, זהו הליך חיוני הראוי לתיאור מלא. ניתוחי זלוף בכבד אינם חדשים, אך מאמר זה הוא שיטת תקן זהב המלווה בסרטון המדגים את המצוינות הטכנית המתוארת במאמר זה כדי לסייע לכל מי שמעוניין בהליך זה. השיטה המוצגת כאן תיושם בצורה הטובה ביותר על חילוף חומרים בזמן אמת כדי לזהות את התפקוד והמחזור של מטבוליטים במודלים של מחלות.
שיטה זו משתמשת בעמוד זכוכית מצופה מים בקוטר 100 ס"מ, המאפשר לכבד להיתלות בתחתית הצינורית עטופה על ידי תפרחת בתוך צינור NMR. מים מחוממים במעיל הזכוכית משמשים לשליטה בטמפרטורה המחלחלת. מחמצן שכבה דקה בלחץ עם 95%/5% O2/CO2 לשליטה ב-pH. על ידי שימוש בשלוש משאבות נפרדות, נקבע גובה העמוד המחורץ, המספק לחץ מתמיד לכבד. קצבי הזרימה אינם נשלטים מעבר ליישום של לחץ קבוע (איור 1). כדי לוודא שהכבד מתפקד כראוי, מדידות חמצן נלקחות יחד עם קצבי זרימה. בידינו, קבוצה זו של תנאים מוקדמים מובילה לניסויי NMR הניתנים לחזרה חוזרת על עצמה להערכת התפקוד המטבולי של הכבד.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

מחלות מטבוליות כגון סוכרת, טרום סוכרת, מחלת כבד שומני שאינה אלכוהולית (NAFLD) וסטאטוהפטיטיס לא אלכוהולית (NASH) הופכות נפוצות יותר ויותר. פרפוזיות כבד Ex vivo מאפשרות ניתוח מקיף של חילוף החומרים בכבד באמצעות תהודה מגנטית גרעינית (NMR), בתנאים תזונתיים שניתן לשלוט בהם בקפדנות. מכיוון שבסימולציות סיליקו נותרות אמצעי תיאורטי בעיקר להערכת פעולות הורמונים וההשפעות של התערבות תרופתית, הכבד החדור נותר אחת ממיטות הבדיקה החשובות ביותר להבנת חילוף החומרים בכבד. מכיוון שמחקרים אלה מנחים תובנות בסיסיות על פיזיולוגיה של הכבד, התוצאות חייבות להיות מדויקות וניתנות לשחזור. הגורם הגדול ביותר בשכפול של זלוף כבד ex vivo הוא איכות הניתוח. לכן, הצגנו שיטה מאורגנת ויעילה לביצוע זלופיות כבד של עכברי ex vivo בהקשר של ניסויי NMR באתרם . כמו כן, אנו מתארים יישום ייחודי ודנים בסוגיות נפוצות בהן נתקלנו במחקרים אלה. המטרה הכוללת היא לספק מדריך לא מסובך לטכניקה ששכללנו במשך מספר שנים שאנו רואים בה את תקן הזהב להשגת תוצאות הניתנות לשחזור בניתוחים בכבד ובעיבויים בהקשר של ניסויי NMR באתרם . המרחק למרכז השדה של המגנט, כמו גם חוסר הנגישות של הרקמה להתערבות במהלך ניסוי NMR, הופכים את השיטות שלנו לרדומות.

תפקודי הכבד מוערכים בעיקר על ידי צריכת חמצן וקצב זרימה. קצב זרימה של 4-8 מ"ל לדקה וצריכת חמצן של 1 מיקרומול/min.g הוא אופייני. מדדים אלה ישתנו בהתאם לתנאי הניסוי הספציפיים ולהבדלים הביולוגיים.
הכמות המדויקת של איזופלורן בשימוש תהיה תלויה בסוג מערכת ההרדמה בה נעשה שימוש, כמו גם בס...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

הפרוטוקול מתאר שיטה פשוטה לכריתת כבד עכבר שלם למחקרים מטבוליים באמצעות זלוף ורידים פורטלי.

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

סרטון זה מדגים הליך יעיל שפותח כדי לבצע מחקרי כבד מטבוליים עם מספיק קפדנות ויכולת שכפול, אשר יכול לשמש כמדריך לביצוע כריתת כבד עבור מחקרי ה-vivo perfusion שלו. הטכניקה מיושמת בצורה הטובה ביותר על חילוף חומרים בזמן אמת כדי לזהות את הפונקציה, במטבוליטים תחלופתיים במודלים של מחלות. פרפוזיה מאפשרת שליטה מדויקת בחומרים מזינים ובהורמונים הזמינים לכבד.למרות שהטכניקה אינה מכוונת לטיפול, זלזול בכבד יכול לסייע בהבנת האטיולוגיה וההשפעה של מחלות, כגון סוכרת, NAFLD ו- NASH על חילוף החומרים בכבד. עם פיתוח תרופות חדשות, שיטות להערכת חילוף החומרים של האנרגיה המרכזית בכבד הופכות חיוניות. שיטה זו יכולה לשמש עם מודלים של מספר מחלות, כולל סרטן ובמספר שלבים שונים של התקדמות המחלה.ראשית, מניחים את אפו של העכבר לתוך חרוט אף לאחר אינדוקציה של הרדמה, ומקישים על כפותיו. מתן לידוקאין באמצעות הזרקה תת עורית דו-צדדית באזור הפסגה האיליאק הקדמית. בצע בדיקת צביטה בבוהן כדי לאשר את היעדרם של כל רפלקסי הכאב.בצע celiotomy כדי לחשוף את האיברים הפנימיים על ידי ביצוע חתך ברוחב שלושה סנטימטרים. הרחב את החתך באמצעות המוסטאט המושך את האחיזה על ידי הידוק התהליך הקסיפאואידי. השתמשו באפליקטור עם קצה כותנה כדי לנקות את המעי הדק והמעיים הגסים המכסים את וריד הפורטל.מקם תפר משי מתחת לקשת של וריד הפורטל פרוקסימלי לכבד. מניחים את תפר המשי השני פרוקסימלי או דיסטלי של הדיסטלי של הווריד המזנטרי הנחות מהכבד באמצעות תפר 2-0. לאחר שהתפרים נמצאים במקומם, ניתן לתמרן את וריד הפורטל באמצעות צנתר של 22 מדים, תוך שמירה על ההצבעה על השיפוי כלפי מעלה.הזן את וריד הפורטל בזווית של לא יותר מ-15 מעלות. קשרו את התפר הראשון על פני טאפר הצנתר. לאחר שווריד הפורטל משומר, מעגנים את הצנתר שניים עד שלושה מילימטרים דיסטליים מענף וריד הפורטל עם תפר המשי.מאבטחים את החלק התחתון של הצנתר עם התפר השני. קשרו קשר עם התפר כדי להדק את הצנתר לחלק הדיסטלי של וריד הפורטל והרקמה הסובבת אותו. לאחר אבטחת הצנתר, יש להחדיר מזרק מיליליטר אחד עם מחט בעלת 27 מדים באורך 38.1 מילימטרים לתוך הצנתר כדי לשטוף בועות דם ואוויר.השתמש בקוטר פנימי של 1 מילימטר אחד ובצינור סיליקון בקוטר חיצוני של חמישה מילימטרים עם זין עצירה קבוע כדי להצמיד את עמוד הזלוף לצנתר, מה שמאפשר את זרימת החיץ לתוך הכבד, ומסמן את תחילת הזלוף. לאחר הפעלת טיימר, להקל על לחץ כלי הדם המוגבר על ידי חתך באמצעות מספריים לתוך הווריד הנבוב התחתון cava. אשרו את זרימת ההדבקה דרך הכבד על ידי התבוננות בשינוי הומוגני בצבע הכבד מוורוד או אדום לצהוב חיוור.לאחר אישור הזרימה, יש לבלות את הקיבה, המעי הדק, המעי הגס והכליה הימנית מהרקמה הסובבת. בעזרת העוזר הכירורגי, תמרן את הכבד סביב חלל הבטן ובית החזה כאשר המנתח חותך דרך הצפק הקודקודי ורקמת בית החזה כדי לנתח את הכבד. הרימו את הכבד כלפי מעלה וחתכו את רקמות החיבור הנותרות המחזיקות את הכבד במקומו עם מספריים.לאט לאט לתמרן את הכבד כדי להקל על הראייה. מדידות קצב הזרימה וצריכת החמצן חיוניות לניטור בריאותו ותפקודו של הכבד. לעתים קרובות יש הבדל קל בצריכת החמצן בין כבדים ניזונים לצום, אשר ניתן לייחס לדרישות אנרגיה מוגברות המוטלות על ידי גלוקוגנזה בכבד הצום.השלבים החשובים ביותר כוללים החדרת הצנתר בזווית של 15 מעלות, הדמיית קצה הצנתר, גלגול שורש כף היד והכתפיים בעת קשירת התפר, והימנעות מפיתול בווריד הפורטל. ניתן לחקור את הרקמה שנכרתה לאחר הזלוף עם כל מספר של גישות ביוכימיות או אנליטיות. פרפוזיות Ex vivo בשילוב עם MRI בזמן אמת וספקטרוסקופיה מאפשרות מדידה של שטפים מטבוליים בזמן אמת.באופן טבעי, זה משתרע על הפרעה של שטף ממצב בקרה בתגובה למחלות.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

איתור של הפעילות תלויה pH של<em&gt; Coli Escherichia</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

קרום המוח Fractation: An<em&gt; אקס ויוו</em&gt; גישה כדי להעריך לוקליזציה חלבון subsynaptic

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

טיהור של Hepatocytes ותאי אנדותל Sinusoidal מן הכבד העכבר זלוף

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

שיטה ערכי צבע מוחלטים למדידת תכולת ברזל צמחים

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome פרופיל לישמניה, תאים אנושיים, Testis העכבר

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

פרוטיאומיה מבנית ודינמיקה miRNA ניתוח של Polysomes מן הלב העכבר מבודדים לאחר זלוף Langendorff

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

מדידת ופרשנות חמצן קצב הצריכה כולה לטוס הראש מקטעים

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

A In Vivo אסטרוגן מחסור בעכבר מודל עבור ההקרנה הטיפולים האסטרוגן אקסודוגני של בעיות לב וכלי דם אחרי גיל המעבר

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

תרגום הריבוכמה אהדה לטיהור (מלכודת) לבידוד רנ א מתאי האנדותל בvivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

ב Vivo הידרוקסיל חלבון רדיקלי מדפיס הדפסה לחקר אינטראקציות חלבונים באלבוראבאבדיטיס האלאים

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...