Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
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이 연구는 국립 보건원 (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889)의 기금으로 지원되었습니다. 이 작업의 일부는 국립 과학 재단 협력 협약 No.에 의해 지원되는 국립 고 자기장 연구소의 고급 자기 공명 이미징 및 분광법 (AMRIS) 시설의 McKnight Brain Institute에서 수행되었습니다. DMR-1644779 및 플로리다 주.

마우스와 관련된 실험은 플로리다 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 (프로토콜 번호 #201909320)에 따라 처리되었습니다. 사용된 마우스 균주는 C57BL/6J; 모든 마우스는 수컷이었다. 이 방법은 일반적으로 다른 표준 마우스 균주를 사용한 연구에도 적용 가능하다. 이 수술은 함께 일하는 두 사람이 최적으로 수행합니다.
1. 초기 설정
<ol><li>Krebs-Henseleit 전해질 6(25 mM ...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

이 수술 절차는 도전적이며 재현 가능한 결과를 얻기 위해 광범위한 연습이 필요합니다. 이소플루란과 캐리어 가스는 가능한 한 많은 수술 절차를 통해 동물의 생존력을 유지하기 위해 필요에 따라 조정되어야합니다. 환경, 시간, 나이, 체중 및 기타 여러 요인이 마취에 영향을 미칩니다. 체중,식이 요법, 생쥐의 긴장 및 나이는 지방 축적이 포털 정맥을 시각화하는 것을 방해 할 수 있으므로 수술?...

생체 외 관류는 간 대사 연구에서 매우 중요하며, 포털 정맥을 통한 관류는 이러한 연구의 표준입니다. 간 대사를 개별적으로 연구하기 위해서는 다른 장기의 신진 대사 (즉, 전신 대사)로 인한 합병증을 피하고 호르몬 가용성 (인슐린, 글루카곤 등)을 조절하기 위해 간을 신체에서 절제해야합니다. 이 접근법은 당뇨병, NAFLD 및 NASH와 같은 질병이 간 대사에 미치는 영향뿐만 아니라 약물 작용 메커니즘을 이해하는 데 필수적 일 수 있습니다. 이 기사는 간 절제술과 관류에 대한 가이드 역할을합니다. 우리는 충분한 엄격함과 재현성으로 이러한 대사 간 연구를 수행하기위한 간소화 된 절차를 개발했습니다. 수술이 올바르게 수행되지 않으면 얻은 대사 데이터에 뚜렷한 변동성이 있습니다. 우리는 문헌 1,2,3,4,5에 기재된 바와 같이, 핵 자기 공명 (NMR) 분광계에서 계내에서 대사 연구의 맥락에서 문맥 정맥 카테터 삽입 및 간 절제술을 수행하는 조직화 된 방법을 기술한다.
현재, NMR 내의 유리 컬럼을 이용한 생체외 간 관류를 기술하는 문헌은 없다. 또한 마우스 간으로 절차를 수행하는 방법에 대한 명확한 예를 제공하는 비디오 또는 텍스트 간행물도 없으며, 특히 포털 정맥을 카테터화하고, 간을 절제하고, 간을 유리 기둥에 걸고, 매달아 놓는 방법을 보여줍니다. 유전자 변형 마우스는 간 대사를 연구하는 데 유비쿼터스로 사용되기 때문에 이것은 완전한 설명을받을 가치가있는 필수 절차입니다. 간 관류 수술은 새로운 것이 아니지만이 기사는이 절차에 관심이있는 모든 사람들을 돕기 위해이 논문에 설명 된 기술적 우수성을 보여주는 비디오와 함께 황금 표준 방법입니다. 여기에 제시된 방법은 질병 모델에서 대사 산물의 기능과 회전율을 감지하기 위해 실시간 신진 대사에 가장 잘 적용될 것입니다.
이 방법은 100cm 물 재킷 유리 컬럼을 사용하여 간이 NMR 튜브 내부의 향수에 의해 캡슐화 된 캐뉼라의 바닥에 매달릴 수있게합니다. 유리 재킷의 가열 된 물은 향수 온도를 제어하는 데 사용됩니다. 박층 산소 발생기는 pH 제어를 위해 95 % / 5 % O2 /CO2로 가압됩니다. 세 개의 개별 펌프를 사용하여 향수 컬럼 높이를 설정하여 간에 일정한 압력을 제공합니다. 유량은 일정한 압력의 적용 이상으로 제어되지 않습니다(그림 1). 간이 적절하게 기능하고 있는지 확인하기 위해 산소 측정은 유속과 함께 수행됩니다. 우리의 손에,이 전제 조건의 세트는 간 대사 기능의 평가를위한 매우 반복 가능한 NMR 실험으로 이어집니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

당뇨병, 전당뇨병, 비알콜성 지방간 질환(NAFLD) 및 비알콜성 지방간염(NASH)과 같은 대사성 질환이 점점 더 흔해지고 있습니다. 생체외 간 관류는 엄격하게 조절될 수 있는 영양 조건에서 핵 자기 공명(NMR)을 사용하여 간 대사를 종합적으로 분석할 수 있게 해줍니다. 실리코 시뮬레이션에서와 마찬가지로 호르몬 작용과 제약 개입의 효과를 평가하는 주로 이론적 인 수단으로 남아 있기 때문에 관류 된 간은 간 대사를 이해하기위한 가장 가치있는 테스트 베드 중 하나입니다. 이 연구들이 간 생리학에 대한 기본적인 통찰력을 안내하기 때문에 결과는 정확하고 재현 가능해야합니다. 생체외 간 관류의 재현성의 가장 큰 요인은 수술의 질이다. 따라서, 우리는 현장 NMR 실험의 맥락에서 생체외 마우스 간 관류를 수행하기 위해 조직적이고 간소화 된 방법을 도입했습니다. 우리는 또한 독특한 응용 프로그램을 설명하고 이러한 연구에서 직면 한 일반적인 문제에 대해 논의합니다. 전반적인 목적은 현장 NMR 실험의 맥락에서 간 절제술 및 관류에서 재현 가능한 결과를 얻기위한 황금 표준으로 간주되는 몇 년 동안 정제 한 기술에 대한 복잡하지 않은 가이드를 제공하는 것입니다. 자석에 대한 필드 중심까지의 거리뿐만 아니라 NMR 실험 중에 개입 할 수있는 조직의 접근성이 없기 때문에 우리의 방법은 새로운 방법입니다.

간 기능은 주로 산소 소비와 유속으로 평가됩니다. 4-8 mL/min의 유속과 1 μmol/min.g의 산소 소비가 전형적이다. 이러한 측정은 특정 실험 조건 및 생물학적 차이에 따라 달라질 수 있습니다.
사용되는 이소플루란의 정확한 양은 사용되는 마취 시스템의 유형뿐만 아니라 마우스의 환경 및 연령 / 체중에 따라 다릅니다. 수술 동안, 이소플루란 및 전달 가스는 변하지 않지만, 수술 영...

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Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

이 프로토콜은 포털 정맥 관류를 통한 대사 연구를 위해 손상되지 않은 마우스 간을 절제하는 간단한 방법을 설명합니다.

Ex Vivo 마우스의 포털 정맥을 통한 간 관류

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

이 비디오는 충분한 엄격함과 재현성으로 대사 간 연구를 수행하기 위해 개발 된 간소화 된 절차를 보여 주며, 이는 생체 내 관류 연구를위한 간 절제술을 수행하는 가이드 역할을 할 수 있습니다. 이 기술은 질병 모델의 회전율 대사 산물에서 기능을 감지하기 위해 실시간 신진 대사에 가장 잘 적용됩니다. 관류는 간에서 사용할 수있는 영양소와 호르몬을 정확하게 제어 할 수 있습니다.이 기술은 치료법을 지향하지는 않지만 간 관류는 당뇨병, NAFLD 및 NASH와 같은 질병의 병인과 간 대사에 미치는 영향을 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다. 새로운 의약품이 개발됨에 따라 간 중앙 에너지 대사를 평가하는 방법이 필수적입니다. 이 방법은 암을 포함한 여러 질병의 모델 및 질병 진행의 여러 단계에서 사용할 수 있습니다.우선, 마취 유도 후 마우스의 코를 코 콘에 넣고 발을 테이프로 붙입니다. 전방 장골 볏 부위에서 양측으로 피하 주사를 통해 리도카인을 투여하십시오. 발가락 꼬집음 검사를 수행하여 모든 통증 반사 신경이 없는지 확인하십시오.세 센티미터 너비의 절개를 만들어 내부 장기를 노출시키기 위해 감방 절제술을 실시하십시오. xiphoid 과정에 클램핑하여 견인력을 당기는 지혈제를 사용하여 절개를 확장하십시오. 면봉이 달린 어플리케이터를 사용하여 포털 정맥을 덮고있는 소장과 대장을 청소하십시오.실크 봉합사를 간장에 인접한 포털 정맥의 아치 아래에 놓습니다. 2-0 봉합사를 사용하여 간에서 열등한 장간막 정맥 원위의 근위 또는 원위 두 번째 실크 봉합사를 놓습니다. 봉합사가 제자리에 놓이면 22 게이지 카테터로 포털 정맥을 캐뉼레이트하여 베벨을 위로 향하게하십시오.포털 정맥을 15도 각도로 입력하십시오. 첫 번째 봉합사를 카테터 테이퍼를 지나 묶습니다. 포털 정맥이 캐뉼레이션 된 후, 포털 정맥의 가지에서 두세 밀리미터 원위 카테터를 실크 봉합사로 고정하십시오.두 번째 봉합사로 카테터의 아래 부분을 고정하십시오. 봉합사와 매듭을 매듭아 카테터를 문맥 정맥 및 주변 조직의 원위 부분에 고정시킵니다. 카테터가 고정되면 38.1 밀리미터 길이의 27 게이지 바늘이있는 1 밀리리터 주사기를 카테터에 삽입하여 혈액과 기포를 플러시하십시오.고정 스톱 콕이있는 한 밀리미터 내경과 다섯 밀리미터 외경 실리콘 튜브를 사용하여 관류 컬럼을 카테터에 결합시켜 버퍼가 간으로 흐르게하여 관류의 시작을 표시합니다. 타이머를 시작한 후, 열등한 정맥 카바에 가위를 사용하여 절개하여 증가 된 혈관 압력을 완화시킵니다. 간 색의 균질한 변화를 관찰하여 간을 통한 향수의 흐름을 분홍색 또는 빨간색에서 옅은 노란색으로 확인합니다.흐름이 확인되면 위, 소장, 대장 및 오른쪽 신장을 주변 조직에서 소비하십시오. 외과 조수의 도움으로 외과 의사가 정수리 복막과 흉부 조직을 통해 간을 절단하여 간을 절제하기 위해 복강과 흉강 주위의 간을 조종하십시오. 간을 위쪽으로 들어 올리고 가위로 간을 고정시키는 나머지 결합 조직을 자릅니다.쉽게 볼 수 있도록 간을 천천히 조작하십시오. 유량 및 산소 소비량 측정은 간 건강과 기능을 모니터링하는 데 필수적입니다. 급식하는 간과 금식 간 사이의 산소 소비량에는 종종 약간의 차이가 있으며, 이는 금식 간에서 포도당 생성에 의해 부과 된 에너지 요구가 증가했기 때문일 수 있습니다.가장 중요한 단계는 카테터를 15도 각도로 삽입하고, 카테터 팁을 시각화하고, 봉합사를 묶을 때 손목과 어깨를 구르고, 포털 정맥의 비틀림을 피하는 것입니다. 적출된 조직은 임의의 수의 생화학적 또는 분석적 접근법으로 관류 후에 연구될 수 있다. 실시간 MRI 및 분광법과 결합된 생체외 관류는 대사 플럭스를 실시간으로 측정할 수 있습니다.당연히, 이것은 질병에 대한 반응으로 통제 상태에서 플럭스의 교란으로 확장됩니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

의 pH에 ​​의존 활동의 검출<em&gt; 대장균</em&gt; 보호자 HdeB<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

연구

생화학

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

뇌막 분획 화 :<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Subsynaptic Protein Localization 평가 방법

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Hepatocytes에서 마우스 간 사인 내 피 세포의 정화 관류

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

식물에 철 분 함량을 측정 하는 색도계 방법

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Leishmania, 인간 세포 및 마우스 고환에서 프로 파일링

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

동적 Proteomic 그리고 미르 Langendorff 관류 후 절연 마우스 마음에서에서 Polysomes의 분석

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

측정 및 해석의 전체 산소 소비 속도 비행 머리 세그먼트

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

폐경 후 심장 혈관 기능 장애의 외인성 에스트로겐 치료를 선별하기위한 생체 내 에스트로겐 결핍 마우스 모델

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

생체 내피 세포에서 RNA 격리를 위한 리보솜 친화성 정제(TRAP) 번역

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

체노하브디염 예쁜꼬마선충의 단백질 상호작용 연구를 위한 생체내 하이드록실 라디칼 단백질 발자국

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...