Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av midler fra National Institutes of Health (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889). En del av dette arbeidet ble utført i McKnight Brain Institute ved National High Magnetic Field Laboratorys Advanced Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy (AMRIS) Facility, som støttes av National Science Foundation Cooperative Agreement No. DMR-1644779 og delstaten Florida.

Eksperimenter med mus ble håndtert i samsvar med University of Florida Institutional Animal Care and Use Committee (protokollnummer #201909320). Musestammen som ble brukt var C57BL/6J; alle mus var menn. Denne metoden gjelder generelt for studier som også bruker andre standard musestammer. Denne operasjonen utføres optimalt av to personer som jobber sammen.
1. Første oppsett
<ol><li>Perfuse lever med perfusat som inneholder Krebs-Henseleit elektrolytter...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Denne kirurgiske prosedyren er utfordrende og krever omfattende praksis for å oppnå reproduserbare resultater. Isofluran og bærergass bør justeres etter behov for å opprettholde dyrets levedyktighet gjennom så mye av den kirurgiske prosedyren som mulig. Miljø, tid på dagen, alder, vekt og flere andre faktorer vil påvirke anestesi. Vekt, kosthold, stamme av mus og alder kan påvirke kirurgi som fett oppbygging kan forstyrre visualisering portalen venen. Ved taping av potene ned, må det tas hensyn til ikke å på...

Ex vivo perfusjoner er avgjørende i studiet av levermetabolisme, og perfusjon gjennom portalvenen er standarden for disse studiene. For å studere levermetabolisme isolert, må leveren resected fra kroppen for å unngå komplikasjoner som oppstår fra metabolisme i andre organer (dvs. hele kroppen metabolisme) og å utøve kontroll over hormon tilgjengelighet (insulin, glukagon, etc.). Denne tilnærmingen kan være avgjørende for å forstå effekten av sykdommer som diabetes, NAFLD og NASH på levermetabolisme samt mekanismer for narkotikavirkning. Denne artikkelen fungerer som en guide til leveropprør og perfusjon. Vi har utviklet en strømlinjeformet prosedyre for å utføre disse metabolske leverstudiene med tilstrekkelig strenghet og reproduserbarhet. Hvis operasjonen ikke utføres riktig, er det uttalt variasjon i de metabolske dataene som er oppnådd. Vi beskriver en organisert metode for å utføre portal vene kateterisering og lever reseksjon i sammenheng med metabolske studier in situ i en kjernemagnetisk resonans (NMR) spektrometer, som beskrevet i litteraturen 1,2,3,4,5.
For tiden er det ingen litteratur som beskriver en eks vivo leverperfusjon ved hjelp av en glasssøyle i en NMR. Det er heller ikke en video- eller tekstpublikasjon som gir et klart eksempel på hvordan du utfører prosedyren med muselever, spesielt å demonstrere hvordan man kateteriserer portalvenen, resect en lever, overføre og henge leveren på en glasskolonne. Siden den genetisk modifiserte musen allestedsnærværende brukes til å studere levermetabolisme, er dette en viktig prosedyre som fortjener en fullstendig beskrivelse. Leverperfusjonsoperasjoner er ikke nye, men denne artikkelen er en gullstandardmetode ledsaget av en video som demonstrerer den tekniske fortreffeligheten som er beskrevet i dette dokumentet for å hjelpe alle som er interessert i denne prosedyren. Metoden som presenteres her vil best brukes på sanntidsmetabolisme for å oppdage funksjonen og omsetningen av metabolitter i sykdomsmodeller.
Denne metoden bruker en 100 cm vannjakket glasskolonne, som gjør at leveren kan henge på bunnen av kanylen innkapslet ved å perfusere inne i et NMR-rør. Oppvarmet vann i glassjakken brukes til å kontrollere perfusattemperatur. En tynn lag oksygenator er trykksatt med 95%/5% O2/CO2 for pH-kontroll. Ved å bruke tre separate pumper, er den perfusate kolonnehøyden satt, noe som gir konstant trykk til leveren. Strømningshastighetene styres ikke utover påføringen av konstant trykk (figur 1). For å bekrefte at leveren fungerer riktig, tas oksygenmålinger sammen med strømningshastigheter. I våre hender fører dette settet med forutsetninger til svært repeterbare NMR-eksperimenter for vurdering av levermetabolismens funksjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Metabolske sykdommer som diabetes, pre-diabetes, alkoholfri fettleversykdom (NAFLD) og nonalcoholic steatohepatitis (NASH) blir stadig vanligere. Ex vivo leverperfusjoner tillater en omfattende analyse av levermetabolismen ved hjelp av kjernemagnetisk resonans (NMR), under ernæringsmessige forhold som kan kontrolleres nøye. Som i silico simuleringer forblir en primært teoretisk måte å vurdere hormon handlinger og effekten av farmasøytisk intervensjon, perfused leveren forblir en av de mest verdifulle test senger for å forstå lever metabolisme. Ettersom disse studiene veileder grunnleggende innsikt i leverfysiologi, må resultatene være nøyaktige og reproduserbare. Den største faktoren i reproduserbarheten av ex vivo leverperfusjon er kvaliteten på operasjonen. Derfor har vi introdusert en organisert og strømlinjeformet metode for å utføre ex vivo mus leverperfusjoner i sammenheng med in situ NMR-eksperimenter. Vi beskriver også en unik søknad og diskuterer vanlige problemstillinger i disse studiene. Det overordnede formålet er å gi en ukomplisert guide til en teknikk vi har raffinert over flere år som vi anser som den gylne standarden for å oppnå reproduserbare resultater i leverreksjoner og perfusjoner i sammenheng med in situ NMR-eksperimenter. Avstanden til midten av feltet for magneten samt utilgjengeligheten av vevet til intervensjon under NMR-eksperimentet gjør metodene våre nye.

Leverfunksjonen vurderes primært av oksygenforbruk og strømningshastighet. En strømningshastighet på 4-8 ml / min og oksygenforbruk på 1 μmol / min.g er typisk. Disse tiltakene vil variere avhengig av spesifikke eksperimentelle forhold og biologiske forskjeller.
Den nøyaktige mengden isofluran som brukes vil avhenge av hvilken type anestesisystem som brukes, samt miljøet og musens alder / vekt. Under operasjonen endres ikke isofluran- og leveringsgassen, selv om noen endringer kan vær...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Protokollen beskriver en enkel metode for reseksjon av en intakt muselever for metabolske studier gjennom portal veneperfusjon.

Eks Vivo Leverperfusjon gjennom portalvenen i mus

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Denne videoen demonstrerer en strømlinjeformet prosedyre utviklet for å utføre metabolske leverstudier med tilstrekkelig strenghet og reproduserbarhet, som kan tjene som en veiledning for å utføre leverreservasjon for sine vivo perfusjonsstudier. Teknikken brukes best på sanntidsmetabolisme for å oppdage funksjonen, i omsetningsmetabolitter i sykdomsmodeller. Perfusjon gir presis kontroll over næringsstoffer og hormoner som er tilgjengelige for leveren.Selv om teknikken ikke er rettet mot terapi, kan leverperfusjoner være medvirkende til å forstå etiologien og virkningen av sykdommer, som diabetes, NAFLD og NASH på levermetabolisme. Etter hvert som nye legemidler utvikles, blir metoder for å vurdere leversentral energimetabolisme avgjørende. Denne metoden kan brukes med modeller av flere sykdommer, inkludert kreft og på flere forskjellige stadier av sykdomsprogresjon.Til å begynne med, plasser musens nese i en nesekegle etter induksjon av anestesi, og tapet ned potene. Administrer lidokain gjennom en subkutan injeksjon bilateralt i den fremre iliac crest-regionen. Utfør en tåklemmetest for å bekrefte fraværet av alle smerte reflekser.Utfør celiotomi for å eksponere de indre organene ved å lage et tre centimeter bredt snitt. Utvid snittet ved hjelp av en hemostat som trekker trekkraften ved å klemme på xiphoid-prosessen. Bruk en bomullsspisset applikator for å fjerne tynn- og tykktarmen som dekker portalvenen.Plasser en silke sutur under buen av portalvenen proksimal til leveren. Plasser den andre silke suturen proksimal eller distal av den dårligere mesenteriske venen distal fra leveren ved hjelp av en 2-0 sutur. Når suturene er på plass, kanyler portalvenen med et 22 gauge kateter, og holder skråkanten pekende opp.Angi portalvenen i ikke mer enn 15 graders vinkel. Bind den første suturen forbi kateterets tapper. Etter at portalvenen er kanylert, forankre kateteret to til tre millimeter distalt fra grenen av portalvenen med silke suturen.Fest den nedre delen av kateteret med den andre suturen. Bind en knute med suturen for å feste kateteret til den distale delen av portalvenen og det omkringliggende vevet. Når kateteret er sikret, setter du inn en en milliliter sprøyte med en 27 gauge nål som har en lengde på 38,1 millimeter inn i kateteret for å skylle blod- og luftbobler.Bruk en millimeter indre diameter og fem millimeter ytre diameter silikonrør med en fast stoppkran for å koble perfusjonskolonnen til kateteret, slik at bufferstrømmen inn i leveren, markerer starten på perfusjonen. Etter å ha startet en timer, lindre økt vaskulært trykk ved snitt ved hjelp av saks i den dårligere vena cava. Bekreft strømmen av perfusat gjennom leveren ved å observere den homogene endringen i leverfarge fra rosa eller rød til en blekgul.Når strømmen er bekreftet, utskiller magen, tynntarmen, tykktarmen og høyre nyre fra omkringliggende vev. Ved hjelp av den kirurgiske assistenten, manøvrer leveren rundt buken og thoracic hulrommet som kirurgen kutter gjennom parietal peritoneum og thoracic vev for å resect leveren. Løft leveren oppover og kutt de resterende bindevevene som holder leveren på plass med saks.Manipuler leveren sakte for enkel visning. Strømningshastigheten og oksygenforbruksmålingene er avgjørende for å overvåke leverens helse og funksjon. Det er ofte en liten forskjell i oksygenforbruk mellom matet og fastet lever, noe som kan tilskrives økte energibehov pålagt av glukogenese i fastende leveren.De viktigste trinnene inkluderer å sette inn kateteret i en 15 graders vinkel, visualisere kateterspissen, rulle håndleddet og skuldrene når du knytter suturen, og unngå torsjon på portalvenen. Det utskilte vevet kan studeres etter perfusjonen med et hvilket som helst antall biokjemiske eller analytiske tilnærminger. Ex vivo perfusjoner i kombinasjon med sanntids MR og spektroskopi muliggjør måling av metabolske fluxer i sanntid.Naturligvis strekker dette seg til perturbasjon av flux fra en kontrolltilstand som svar på sykdommene.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Påvisning av pH-avhengig aktivitet av<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Anstand HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; og<em&gt; I Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Hjernemembran Fraksjonering: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tilnærming til vurdering av subsynaptisk protein lokalisering

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Rensing av hepatocytter og sinusformet endotelceller fra musen leveren perfusjon

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Kolorimetrisk metode for å måle jerninnhold i planter

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome profilering i Leishmania, menneskelige celler og mus testikkel

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamisk Proteomic og miRNA analyse av Polysomes fra isolert musen hjertet etter Langendorff perfusjon

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Måling og tolke oksygen forbruk priser helt Fly hodet segmenter

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

An in vivo Østrogenmangel Mouse modell for screening eksogene østrogen behandlinger av kardiovaskulær dysfunksjon etter overgangsalder

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Oversette ribosom affinitet rensing (TRAP) for RNA Isolation fra endothelial celler in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for studiet av proteininteraksjoner i Caenorhabditis elegans

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...