Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por fondos de los Institutos Nacionales de Salud (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889). Una parte de este trabajo se realizó en el Instituto del Cerebro McKnight en la Instalación de Imágenes y Espectroscopía de Resonancia Magnética Avanzada (AMRIS) del Laboratorio Nacional de Alto Campo Magnético, que cuenta con el apoyo del Acuerdo Cooperativo No. DMR-1644779 y el Estado de Florida.

Los experimentos con ratones se manejaron de acuerdo con el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Florida (número de protocolo # 201909320). La cepa de ratón utilizada fue C57BL/6J; todos los ratones eran machos. Este método es generalmente aplicable para estudios que utilizan otras cepas de ratón estándar también. Esta cirugía es realizada de manera óptima por dos individuos que trabajan juntos.
1. Configuración inicial
<ol><li>Hí...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Este procedimiento quirúrgico es desafiante y requiere una práctica extensa para lograr resultados reproducibles. El isoflurano y el gas portador deben ajustarse según sea necesario para mantener la viabilidad del animal a través de la mayor cantidad posible del procedimiento quirúrgico. El medio ambiente, la hora del día, la edad, el peso y varios otros factores afectarán la anestesia. El peso, la dieta, la cepa de ratones y la edad podrían afectar la cirugía, ya que la acumulación de grasa puede interferir co...

Las perfusiones ex vivo son cruciales en el estudio del metabolismo hepático, y la perfusión a través de la vena porta es el estándar para estos estudios. Para estudiar el metabolismo hepático de forma aislada, el hígado debe ser resecado del cuerpo para evitar complicaciones derivadas del metabolismo en otros órganos (es decir, el metabolismo de todo el cuerpo) y para ejercer control sobre la disponibilidad hormonal (insulina, glucagón, etc.). Este enfoque puede ser esencial para comprender los efectos de enfermedades como la diabetes, la EHGNA y la EHNA en el metabolismo hepático, así como los mecanismos de acción de los medicamentos. Este artículo sirve como guía para la resección hepática y la perfusión. Hemos desarrollado un procedimiento simplificado para realizar estos estudios hepáticos metabólicos con suficiente rigor y reproducibilidad. Si la cirugía no se realiza correctamente, existe una pronunciada variabilidad en los datos metabólicos obtenidos. Describimos un método organizado para realizar cateterismo de vena porta y resección hepática en el contexto de estudios metabólicos in situ en un espectrómetro de resonancia magnética nuclear (RMN), tal y como se describe en la literatura 1,2,3,4,5.
Actualmente, no hay literatura que describa una perfusión hepática ex vivo utilizando una columna de vidrio dentro de una RMN. Tampoco hay una publicación de video o texto que proporcione un ejemplo claro de cómo realizar el procedimiento con el hígado de ratón, específicamente, demostrando cómo cateterizar la vena porta, resecar un hígado, transferir y colgar el hígado en una columna de vidrio. Como el ratón modificado genéticamente se utiliza ubicuamente para estudiar el metabolismo hepático, este es un procedimiento esencial que merece una descripción completa. Las cirugías de perfusión hepática no son nuevas, pero este artículo es un método estándar de oro acompañado de un video que demuestra la excelencia técnica descrita en este documento para ayudar a todos los interesados en este procedimiento. El método presentado aquí se aplicaría mejor al metabolismo en tiempo real para detectar la función y la rotación de metabolitos en modelos de enfermedades.
Este método utiliza una columna de vidrio con camisa de agua de 100 cm, que permite que el hígado cuelgue en la parte inferior de la cánula encapsulada por perfusato dentro de un tubo de RMN. El agua caliente en la camisa de vidrio se utiliza para controlar la temperatura de perfusión. Un oxigenador de capa delgada se presuriza con 95% / 5% O2 / CO2 para el control del pH. Mediante el uso de tres bombas separadas, se establece la altura de la columna de perfusato, lo que proporciona una presión constante al hígado. Los caudales no se controlan más allá de la aplicación de presión constante (Figura 1). Para confirmar que el hígado está funcionando adecuadamente, se toman mediciones de oxígeno junto con las tasas de flujo. En nuestras manos, este conjunto de condiciones previas conduce a experimentos de RMN altamente repetibles para la evaluación de la función metabólica hepática.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Las enfermedades metabólicas como la diabetes, la prediabetes, la enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) y la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) son cada vez más comunes. Las perfusiones hepáticas ex vivo permiten un análisis exhaustivo del metabolismo hepático mediante resonancia magnética nuclear (RMN), en condiciones nutricionales que pueden ser rigurosamente controladas. Como las simulaciones in silico siguen siendo un medio principalmente teórico para evaluar las acciones hormonales y los efectos de la intervención farmacéutica, el hígado perfundido sigue siendo uno de los bancos de pruebas más valiosos para comprender el metabolismo hepático. Como estos estudios guían los conocimientos básicos sobre la fisiología hepática, los resultados deben ser precisos y reproducibles. El mayor factor en la reproducibilidad de la perfusión hepática ex vivo es la calidad de la cirugía. Por lo tanto, hemos introducido un método organizado y simplificado para realizar perfusiones hepáticas de ratón ex vivo en el contexto de experimentos de RMN in situ . También describimos una aplicación única y discutimos los problemas comunes encontrados en estos estudios. El propósito general es proporcionar una guía sencilla para una técnica que hemos refinado durante varios años que consideramos el estándar de oro para obtener resultados reproducibles en resecciones hepáticas y perfusiones en el contexto de experimentos de RMN in situ . La distancia al centro del campo para el imán, así como la inaccesibilidad del tejido a la intervención durante el experimento de RMN hace que nuestros métodos sean novedosos.

La función hepática se evalúa principalmente por el consumo de oxígeno y la tasa de flujo. Un caudal de 4-8 mL/min y un consumo de oxígeno de 1 μmol/min.g es típico. Estas medidas variarán dependiendo de las condiciones experimentales específicas y las diferencias biológicas.
La cantidad exacta de isoflurano utilizada dependerá del tipo de sistema de anestesia que se utilice, así como del entorno y la edad / peso del ratón. Durante la cirugía, el isoflurano y el gas de administra...

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Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

El protocolo describe un método sencillo de resección de un hígado de ratón intacto para estudios metabólicos a través de la perfusión de la vena porta.

Ex Vivo Perfusión hepática a través de la vena porta en el ratón

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Este video muestra un procedimiento simplificado desarrollado para realizar estudios hepáticos metabólicos con suficiente rigor y reproducibilidad, que puede servir de guía para realizar la resección hepática para sus estudios de perfusión vivo. La técnica se aplica mejor al metabolismo en tiempo real para detectar la función, en metabolitos de recambio en modelos de enfermedad. La perfusión permite un control preciso de los nutrientes y hormonas disponibles para el hígado.Aunque la técnica no está dirigida hacia la terapia, las perfusiones hepáticas pueden ser fundamentales para comprender la etiología y el impacto de enfermedades, como la diabetes, la EHGNA y la EHNA en el metabolismo hepático. A medida que se desarrollan nuevos productos farmacéuticos, los métodos para evaluar el metabolismo energético central hepático se vuelven esenciales. Este método se puede utilizar con modelos de varias enfermedades, incluidos los cánceres y en varias etapas diferentes de la progresión de la enfermedad.Para empezar, coloque la nariz del ratón en un cono nasal después de la inducción de la anestesia y cierre con cinta adhesiva sus patas. Administrar lidocaína mediante una inyección subcutánea bilateralmente en la región de la cresta ilíaca anterior. Realice una prueba de pellizco del dedo del pie para confirmar la ausencia de todos los reflejos de dolor.Realizar celiotomía para exponer los órganos internos haciendo una incisión de tres centímetros de ancho. Expanda la incisión usando un hemostático que tira de la tracción sujetando el proceso xifoide. Use un aplicador con punta de algodón para limpiar el intestino delgado y grueso que cubre la vena porta.Coloque una sutura de seda debajo del arco de la vena porta proximal al hígado. Coloque la segunda sutura de seda proximal o distal de la vena mesentérica inferior distal del hígado utilizando una sutura 2-0. Una vez que las suturas estén en su lugar, cannulate la vena porta con un catéter de calibre 22, manteniendo el bisel apuntando hacia arriba.Ingrese a la vena porta en un ángulo de no más de 15 grados. Ate la primera sutura más allá del interventor del catéter. Después de canular la vena porta, ancle el catéter de dos a tres milímetros distales de la rama de la vena porta con la sutura de seda.Asegure la parte inferior del catéter con la segunda sutura. Ate un nudo con la sutura para asegurar el catéter a la porción distal de la vena porta y el tejido circundante. Después de asegurar el catéter, inserte una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 27 con una longitud de 38,1 milímetros en el catéter para eliminar las burbujas de sangre y aire.Utilice un tubo de silicona de un milímetro de diámetro interior y cinco milímetros de diámetro exterior con una llave de parada fija para acoplar la columna de perfusión al catéter, permitiendo el flujo del tampón hacia el hígado, marcando el inicio de la perfusión. Después de iniciar un temporizador, alivie el aumento de la presión vascular mediante la incisión con tijeras en la vena cava inferior. Confirme el flujo de perfusato a través del hígado observando el cambio homogéneo en el color del hígado de rosa o rojo a amarillo pálido.Una vez que se confirma el flujo, extirpe el estómago, el intestino delgado, el intestino grueso y el riñón derecho del tejido circundante. Con la ayuda del asistente quirúrgico, maniobre el hígado alrededor de la cavidad abdominal y torácica mientras el cirujano corta a través del peritoneo parietal y el tejido torácico para resecar el hígado. Levante el hígado hacia arriba y corte los tejidos conectivos restantes que mantienen el hígado en su lugar con tijeras.Manipule lentamente el hígado para facilitar la vista. Las mediciones de la tasa de flujo y el consumo de oxígeno son vitales para monitorear la salud y la función del hígado. A menudo hay una ligera diferencia en el consumo de oxígeno entre los hígados alimentados y en ayunas, lo que se puede atribuir al aumento de las demandas de energía impuestas por la glucogénesis en el hígado en ayunas.Los pasos más importantes incluyen insertar el catéter en un ángulo de 15 grados, visualizar la punta del catéter, rodar la muñeca y los hombros al atar la sutura y evitar la torsión en la vena porta. El tejido extirpado se puede estudiar después de la perfusión con cualquier número de enfoques bioquímicos o analíticos. Las perfusiones ex vivo en combinación con la resonancia magnética en tiempo real y la espectroscopia permiten la medición de los flujos metabólicos en tiempo real.Naturalmente, esto se extiende a la perturbación del flujo de un estado de control en respuesta a las enfermedades.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detección de la actividad dependiente del pH de<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Acompañante HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; y<em&gt; En Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Investigación

Bioquímica

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Fraccionamiento de Membranas Cerebrales: Un<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Enfoque para evaluar la localización de proteínas subsinápticas

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Purificación de hepatocitos y células endoteliales sinusoidales del hígado de ratón de perfusión

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Un método colorimétrico para medir el contenido de hierro en plantas

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome perfilado en Leishmania, las células humanas y testículo de ratón

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Proteómicos y miRNA análisis de polisomas de corazón de ratón aislados después de Langendorff la perfusión

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Medición e interpretación de las tasas de consumo de oxígeno en su totalidad operan segmentos de cabeza

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Un modelo de ratón con deficiencia de estrógeno In Vivo para la detección de tratamientos de estrógeno exógeno sorgénicos de la disfunción cardiovascular después de la menopausia

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Traducción de la purificación de afinidad de ribosoma (TRAP) para el aislamiento de ARN de células endoteliales in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

En Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting para el Estudio de Interacciones Proteicas en Caenorhabditis elegans

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...