Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Detta arbete stöddes av finansiering från National Institutes of Health (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889). En del av detta arbete utfördes i McKnight Brain Institute vid National High Magnetic Field Laboratory's Advanced Magnetic Resonance Imaging and Spectroscopy (AMRIS) Facility, som stöds av National Science Foundation Samarbetsavtal nr. DMR-1644779 och delstaten Florida.

Experiment med möss hanterades i enlighet med University of Florida Institutional Animal Care and Use Committee (protokollnummer #201909320). Musstammen som användes var C57BL/6J; alla möss var hanar. Denna metod är allmänt tillämplig för studier med andra vanliga musstammar också. Denna operation utförs optimalt av två individer som arbetar tillsammans.
1. Inledande installation
<ol><li>Perfusera lever med perfusat innehållande Krebs-Henseleit elektrolyter<sup cl...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Detta kirurgiska ingrepp är utmanande och kräver omfattande övning för att uppnå reproducerbara resultat. Isofluran och bärgas bör justeras efter behov för att bibehålla djurets livskraft genom så mycket av det kirurgiska ingreppet som möjligt. Miljö, tid på dagen, ålder, vikt och flera andra faktorer kommer att påverka anestesi. Vikt, kost, stam av möss och ålder kan påverka kirurgi eftersom fettuppbyggnad kan störa visualiseringen av portalvenen. Vid tejpning av tassarna måste man se till att inte b...

Ex vivo-perfusioner är avgörande för studier av levermetabolism, och perfusion genom portalvenen är standarden för dessa studier. För att studera levermetabolismen isolerat måste levern resekteras från kroppen för att undvika komplikationer som uppstår vid metabolism i andra organ (dvs. hela kroppens metabolism) och för att utöva kontroll över hormontillgängligheten (insulin, glukagon, etc.). Detta tillvägagångssätt kan vara viktigt för att förstå effekterna av sjukdomar som diabetes, NAFLD och NASH på levermetabolism samt mekanismer för läkemedelsverkan. Denna artikel fungerar som en guide till leverresektion och perfusion. Vi har utvecklat ett strömlinjeformat förfarande för att utföra dessa metaboliska leverstudier med tillräcklig noggrannhet och reproducerbarhet. Om operationen inte utförs korrekt finns det uttalad variation i de erhållna metaboliska data. Vi beskriver en organiserad metod för att utföra portalvenskateterisering och leverresektion i samband med metaboliska studier in situ i en kärnmagnetisk resonansspektrometer (NMR), som beskrivs i litteraturen 1,2,3,4,5.
För närvarande finns det ingen litteratur som beskriver en ex vivo leverperfusion med användning av en glaskolonn i en NMR. Det finns inte heller en video- eller textpublikation som ger ett tydligt exempel på hur man utför proceduren med muslevern, specifikt, som visar hur man kateteriserar portalvenen, resekterar en lever, överför och hänger levern på en glaskolonn. Eftersom den genetiskt modifierade musen används allestädes närvarande för att studera levermetabolism är detta ett viktigt förfarande som förtjänar en fullständig beskrivning. Leverperfusionsoperationer är inte nya, men den här artikeln är en guldstandardmetod åtföljd av en video som visar den tekniska excellensen som beskrivs i detta dokument för att hjälpa alla som är intresserade av denna procedur. Metoden som presenteras här skulle bäst tillämpas på realtidsmetabolism för att detektera funktionen och omsättningen av metaboliter i sjukdomsmodeller.
Denna metod använder en 100 cm vattenmantlad glaskolonn, som gör att levern kan hänga i botten av kanylen inkapslad genom att perfusera inuti ett NMR-rör. Uppvärmt vatten i glasjackan används för att kontrollera perfusattemperaturen. En tunnskikts oxygenator trycksätts med 95% / 5% O2 / CO2 för pH-kontroll. Genom att använda tre separata pumpar ställs perfusatkolonnhöjden in, vilket ger konstant tryck på levern. Flödeshastigheterna kontrolleras inte utöver tillämpningen av konstant tryck (figur 1). För att bekräfta att levern fungerar korrekt tas syremätningar tillsammans med flödeshastigheter. I våra händer leder denna uppsättning förutsättningar till mycket repeterbara NMR-experiment för bedömning av leverns metaboliska funktion.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Metabola sjukdomar som diabetes, pre-diabetes, alkoholfri fettleversjukdom (NAFLD) och alkoholfri steatohepatit (NASH) blir allt vanligare. Ex vivo leverperfusioner möjliggör en omfattande analys av levermetabolism med hjälp av kärnmagnetisk resonans (NMR), under näringsförhållanden som kan kontrolleras noggrant. Eftersom silico-simuleringar förblir ett primärt teoretiskt sätt att bedöma hormonåtgärder och effekterna av farmaceutisk intervention, är den perfuserade levern fortfarande en av de mest värdefulla testbäddarna för att förstå levermetabolism. Eftersom dessa studier vägleder grundläggande insikter i leverfysiologi måste resultaten vara korrekta och reproducerbara. Den största faktorn i reproducerbarheten av ex vivo leverperfusion är kvaliteten på operationen. Därför har vi introducerat en organiserad och strömlinjeformad metod för att utföra ex vivo musleverperfusioner i samband med in situ NMR-experiment. Vi beskriver också en unik tillämpning och diskuterar vanliga problem som uppstår i dessa studier. Det övergripande syftet är att ge en okomplicerad guide till en teknik som vi har förfinat under flera år som vi anser vara den gyllene standarden för att erhålla reproducerbara resultat i leverresektioner och perfusioner i samband med in situ NMR-experiment. Avståndet till mitten av fältet för magneten samt vävnadens otillgänglighet för intervention under NMR-experimentet gör våra metoder nya.

Leverfunktionen bedöms främst av syreförbrukning och flödeshastighet. En flödeshastighet på 4-8 ml / min och syreförbrukning på 1 μmol / min.g är typisk. Dessa åtgärder kommer att variera beroende på specifika experimentella förhållanden och biologiska skillnader.
Den exakta mängden isofluran som används beror på vilken typ av anestesisystem som används samt musens miljö och ålder/vikt. Under operationen förändras inte isofluran och leveransgas, även om vissa förändri...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Protokollet beskriver en enkel metod för att resektionera en intakt muslever för metaboliska studier genom portalvenperfusion.

Ex Vivo Hepatisk perfusion genom portalvenen i musen

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Denna video visar ett strömlinjeformat förfarande som utvecklats för att utföra metaboliska leverstudier med tillräcklig noggrannhet och reproducerbarhet, vilket kan fungera som en guide för att utföra leverresektion för dess vivo-perfusionsstudier. Tekniken tillämpas bäst på realtidsmetabolism för att detektera funktionen, i omsättningsmetaboliter i sjukdomsmodeller. Perfusion möjliggör exakt kontroll av näringsämnen och hormoner som är tillgängliga för levern.Även om tekniken inte är inriktad på terapi kan leverperfusioner vara avgörande för att förstå etiologin och effekterna av sjukdomar, såsom diabetes, NAFLD och NASH på levermetabolismen. I takt med att nya läkemedel utvecklas blir metoder för att bedöma leverens centrala energimetabolism viktiga. Denna metod kan användas med modeller av flera sjukdomar, inklusive cancer och i flera olika stadier av sjukdomsprogression.Till att börja med placerar du musens näsa i en näskotte efter induktion av anestesi och tejpade ner sina tassar. Administrera lidokain genom en subkutan injektion bilateralt i den främre iliac crestregionen. Utför ett tånyptest för att bekräfta frånvaron av alla smärtreflexer.Utför celiotomi för att exponera de inre organen genom att göra ett tre centimeter brett snitt. Expandera snittet med en hemostat som drar dragkraften genom att klämma fast xiphoidprocessen. Använd en bomullsapplikator för att rensa de små och stora tarmarna som täcker portalvenen.Placera en silkesutur under portalvenens båge proximal mot levern. Placera den andra silkesuturen proximal eller distal av den underlägsna mesenteriska venen distal från levern med en 2-0 sutur. När suturerna är på plats kan du kannulera portalvenen med en 22 gauge kateter och hålla avfasningen pekande uppåt.Gå in i portalvenen i högst 15 graders vinkel. Knyt den första suturen förbi kateterkranen. Efter att portalvenen är kannulerad, förankra katetern två till tre millimeter distal från grenen av portalvenen med silkesuturen.Säkra den nedre delen av katetern med den andra suturen. Knyt en knut med suturen för att säkra katetern till den distala delen av portalvenen och den omgivande vävnaden. När katetern är säkrad, sätt in en en milliliter spruta med en 27 gauge nål med 38,1 millimeter längd i katetern för att spola blod och luftbubblor.Använd ett silikonrör med en millimeters innerdiameter och fem millimeters ytterdiameter med en fast stoppkran för att koppla perfusionskolonnen till katetern, vilket möjliggör buffertens flöde in i levern och markerar starten på perfusionen. Efter att ha startat en timer, lindra ökat vaskulärt tryck genom snitt med sax i den underlägsna vena cava. Bekräfta flödet av perfusat genom levern genom att observera den homogena förändringen i leverfärg från rosa eller röd till en ljusgul.När flödet har bekräftats, skär ut magen, tunntarmen, tjocktarmen och den högra njuren från omgivande vävnad. Med hjälp av den kirurgiska assistenten manövrerar du levern runt buk- och brösthålan när kirurgen skär genom parietal bukhinnan och bröstvävnaden för att resektera levern. Lyft levern uppåt och skär de återstående bindväven som håller levern på plats med sax.Manipulera långsamt levern för att underlätta synen. Flödeshastighets- och syreförbrukningsmätningarna är avgörande för att övervaka leverns hälsa och funktion. Det finns ofta en liten skillnad i syreförbrukning mellan utfodrade och fastande lever, vilket kan hänföras till ökade energibehov som ställs av glukogenes i den fasta levern.De viktigaste stegen inkluderar att sätta in katetern i 15 graders vinkel, visualisera kateterspetsen, rulla handleden och axlarna när du knyter suturen och undviker vridning på portalvenen. Den utskurna vävnaden kan studeras efter perfusionen med valfritt antal biokemiska eller analytiska tillvägagångssätt. Ex vivo-perfusioner i kombination med MR I realtid och spektroskopi möjliggör mätning av metaboliska flöden i realtid.Naturligtvis sträcker sig detta till störning av flöde från ett kontrolltillstånd som svar på sjukdomarna.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detektering av den pH-beroende aktivitet för<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; In Vitro</em&gt; och<em&gt; In Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Hjärnmembranfraktioner: An<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Tillvägagångssätt för att utvärdera lokalisering av subsynaptisk protein

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Rening av hepatocyter och sinusformad Endothelial celler från mus lever Perfusion

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

En kolorimetrisk metod för att mäta järnhalten i växter

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome profilering i Leishmania, mänskliga celler och mus Testis

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dynamisk proteomiska och miRNA analyser av Polysomes från isolerade mus hjärtat efter av Perfusion

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Mäta och tolka syre förbrukning helt flyga Head segment

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

En in vivo östrogenbrist musmodell för screening exogena östrogen behandlingar av kardiovaskulär dysfunktion efter klimakteriet

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Översätta ribosom affinitetsrening (fälla) för RNA-isolering från endotelceller in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans In Vi

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...