Name: ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse
Uploaded: 2022-03-09T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin (R01-DK105346, P41-GM122698, 5U2C-DK119889) finansmanıyla desteklenmiştir. Bu çalışmanın bir kısmı, Ulusal Yüksek Manyetik Alan Laboratuvarı'nın Ulusal Bilim Vakfı İşbirliği Anlaşması No tarafından desteklenen İleri Manyetik Rezonans Görüntüleme ve Spektroskopi (AMRIS) Tesisi'ndeki McKnight Beyin Enstitüsü'nde gerçekleştirildi. DMR-1644779 ve Florida Eyaleti.

Fareleri içeren deneyler, Florida Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (protokol numarası #201909320) ile uyumlu olarak ele alınmıştır. Kullanılan fare suşu C57BL/6J idi; tüm fareler erkekti. Bu yöntem genellikle diğer standart fare suşlarını kullanan çalışmalar için de geçerlidir. Bu ameliyat, birlikte çalışan iki kişi tarafından en uygun şekilde gerçekleştirilir.
1. İlk kurulum
<ol><li>Krebs-Henseleit elektrolitleri 6 (...

<ol>
	<li>Ragavan, M., McLeod, M. A., Giacalone, A. G., Merritt, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+Dihydroxyacetone+Is+a+Sensitive+Probe+of+Hepatic+Gluconeogenic+State.">Hyperpolarized Dihydroxyacetone Is a Sensitive Probe of Hepatic Gluconeogenic State.</a> Metabolites. 11 (7), 441 (2021).</li><li>Lumata, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+(13)C+Magnetic+Resonance+and+Its+Use+in+Metabolic+Assessment+of+Cultured+Cells+and+Perfused+Organs.">Hyperpolarized (13)C Magnetic Resonance and Its Use in Metabolic Assessment of Cultured Cells and Perfused Organs.</a> Methods in Enzymology. 561, 561-573 (2015).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+detection+of+hepatic+gluconeogenic+and+glycogenolytic+states+using+hyperpolarized+[2-13C]+dihydroxyacetone.">Real-time detection of hepatic gluconeogenic and glycogenolytic states using hyperpolarized [2-13C] dihydroxyacetone.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (52), 35859-35867 (2014).</li><li>Moreno, K. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperpolarized+&#948;-[1-13C]+gluconolactone+as+a+probe+of+the+pentose+phosphate+pathway.">Hyperpolarized &#948;-[1-13C] gluconolactone as a probe of the pentose phosphate pathway.</a> NMR in Biomedicine. 30 (6), (2017).</li><li>Merritt, M. E., Harrison, C., Sherry, A. D., Malloy, C. R., Burgess, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flux+through+hepatic+pyruvate+carboxylase+and+phosphoenolpyruvate+carboxykinase+detected+by+hyperpolarized+13C+magnetic+resonance.">Flux through hepatic pyruvate carboxylase and phosphoenolpyruvate carboxykinase detected by hyperpolarized 13C magnetic resonance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (47), 19084-19089 (2011).</li><li>Bailey, L. E., Ong, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Krebs-Henseleit+solution+as+a+physiological+buffer+in+perfused+and+superfused+preparations.">Krebs-Henseleit solution as a physiological buffer in perfused and superfused preparations.</a> Journal of Pharmacological Methods. 1 (2), 171-175 (1978).</li><li>Kolwicz, S. C., Tian, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Cardiac+Function+and+Energetics+in+Isolated+Mouse+Hearts+Using+31P+NMR+Spectroscopy.">Assessment of Cardiac Function and Energetics in Isolated Mouse Hearts Using 31P NMR Spectroscopy.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2069 (2010).</li><li>Hwang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+butylated+hydroxylanisole+against+hydrogen+peroxide-induced+apoptosis+in+primary+cultured+mouse+hepatocytes.">Protective effect of butylated hydroxylanisole against hydrogen peroxide-induced apoptosis in primary cultured mouse hepatocytes.</a> Journal of Veterinary Science. 16 (1), 17-23 (2015).</li><li>Bessems, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+rat+liver:+standardization+of+a+time-honoured+model.">The isolated perfused rat liver: standardization of a time-honoured model.</a> Laboratory Animals. 40 (3), 236-246 (2006).</li><li>Beal, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Small+Animal+Model+of+Ex+Vivo+Normothermic+Liver+Perfusion.">A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (136), e57541 (2018).</li><li>Collins, J. B., Song, J., Mahabir, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Onset+and+duration+of+intradermal+mixtures+of+bupivacaine+and+lidocaine+with+epinephrine.">Onset and duration of intradermal mixtures of bupivacaine and lidocaine with epinephrine.</a> The Canadian Journal of Plastic Surgery. 21 (1), 51-53 (2013).</li><li>. Medical Dictionary Available from: <a target="_blank" href="https://www.merriam-webster.com/medical">https://www.merriam-webster.com/medical</a> (2022)</li><li>Thorpe, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Dissection in Color: The Rat (and the Sheep's Brain). , (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Hepatocytes+and+Sinusoidal+Endothelial+Cells+from+Mouse+Liver+Perfusion.">Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (132), e56993 (2018).</li><li>. Operations Manual Setup, Installation and Maintenance Available from: <a target="_blank" href="https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf">https://www.chem.ucla.edu/dept/Faculty/merchant/pdf/electrode_prep_maintenance.pdf</a> (2006)</li><li>. Heparin Available from: <a target="_blank" href="https://go.drugbank.com/drugs/DB01109">https://go.drugbank.com/drugs/DB01109</a> (2022)</li><li>Overmyer, K. A., Thonusin, C., Qi, N. R., Burant, C. F., Evans, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+anesthesia+and+euthanasia+on+metabolomics+of+mammalian+tissues:+studies+in+a+C57BL/6J+mouse+model.">Impact of anesthesia and euthanasia on metabolomics of mammalian tissues: studies in a C57BL/6J mouse model.</a> PloS One. 10 (2), 0117232 (2015).</li></ol>

Bu cerrahi prosedür zordur ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kapsamlı bir uygulama gerektirir. İzofluran ve taşıyıcı gaz, hayvanın yaşayabilirliğini cerrahi prosedürün mümkün olduğunca büyük bir kısmı boyunca korumak için gerektiği gibi ayarlanmalıdır. Çevre, günün saati, yaş, kilo ve diğer bazı faktörler anesteziyi etkileyecektir. Kilo, diyet, farelerin suşu ve yaş, yağ birikimi portal venin görselleştirilmesine müdahale edebileceğinden ameliyatı etkileyebilir. Pençeler...

Ex vivo perfüzyonlar hepatik metabolizma çalışmasında çok önemlidir ve portal ven yoluyla perfüzyon bu çalışmalar için standarttır. Hepatik metabolizmayı izole olarak incelemek için, diğer organlardaki metabolizmadan (yani tüm vücut metabolizması) kaynaklanan komplikasyonları önlemek ve hormon mevcudiyeti (insülin, glukagon vb.) üzerinde kontrol sağlamak için karaciğer vücuttan rezeke edilmelidir. Bu yaklaşım, diyabet, NAFLD ve NASH gibi hastalıkların hepatik metabolizma üzerindeki etkilerini ve ilaç etki mekanizmalarını anlamak için gerekli olabilir. Bu makale hepatik rezeksiyon ve perfüzyon için bir rehber niteliğindedir. Bu metabolik karaciğer çalışmalarını yeterli titizlik ve tekrarlanabilirlik ile gerçekleştirmek için kolaylaştırılmış bir prosedür geliştirdik. Ameliyat doğru yapılmazsa, elde edilen metabolik verilerde belirgin değişkenlik vardır. Literatür 1,2,3,4,5'te tanımlandığı gibi, nükleer manyetik rezonans (NMR) spektrometresinde in situ metabolik çalışmalar bağlamında portal ven kateterizasyonu ve karaciğer rezeksiyonu yapmak için organize bir yöntem tanımladık.
Şu anda, bir NMR içinde bir cam sütun kullanılarak ex vivo hepatik perfüzyonu tanımlayan bir literatür yoktur. Ayrıca, prosedürün fare karaciğeri ile nasıl gerçekleştirileceğine dair net bir örnek sunan, özellikle portal venin nasıl kateterize edileceğini, bir karaciğerin nasıl rezeke edileceğini, aktarılacağını ve karaciğerin bir cam sütuna nasıl asılacağını gösteren bir video veya metin yayını da yoktur. Genetiği değiştirilmiş fare, karaciğer metabolizmasını incelemek için her yerde kullanıldığından, bu tam bir açıklamayı hak eden önemli bir prosedürdür. Karaciğer perfüzyon ameliyatları yeni değildir, ancak bu makale, bu prosedürle ilgilenen herkese yardımcı olmak için bu makalede açıklanan teknik mükemmelliği gösteren bir video eşliğinde altın standart bir yöntemdir. Burada sunulan yöntem, hastalık modellerinde metabolitlerin işlevini ve döngüsünü tespit etmek için gerçek zamanlı metabolizmaya en iyi şekilde uygulanacaktır.
Bu yöntem, karaciğerin bir NMR tüpü içinde perfüzyonla kapsüllenmiş kanülün dibinde asılı kalmasını sağlayan 100 cm'lik su ceketli bir cam sütun kullanır. Cam ceket içindeki ısıtılmış su, perfüzyon sıcaklığını kontrol etmek için kullanılır. İnce tabakalı bir oksijenatör, pH kontrolü için% 95 / % 5 O 2 / CO2 ile basınçlandırılır. Üç ayrı pompa kullanılarak, karaciğere sabit basınç sağlayan perfüzyon kolon yüksekliği ayarlanır. Akış hızları, sabit basınç uygulamasının ötesinde kontrol edilmez (Şekil 1). Karaciğerin uygun şekilde çalıştığını doğrulamak için, oksijen ölçümleri akış hızları ile birlikte alınır. Ellerimizde, bu ön koşullar kümesi, karaciğer metabolik fonksiyonunun değerlendirilmesi için oldukça tekrarlanabilir NMR deneylerine yol açmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL Luer-Lock Single Use Sterile Disposable Syringe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 cm Water Jacketed Glass Column</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Silk Suture</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>22 Gauge Catherter 1 in. Without Safety</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SRFF2225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>23 G 0.75 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27 G 1.5 in. Hypodemeric Needles</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>26426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x4 in. Surgical Platform</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom Made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Alcohol Wipe</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Circulating Water Bath</td>
			<td>MS Lauda</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model no longer manufactured</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate Operating Scissors; Straight; Sharp-Sharp; 30mm Blade Length; 4 3/4 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5/45 Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 - Fine Forceps</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>11274-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>Fine Scientific Tools</td>
			<td>13015-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injectable 1000 units/mL</td>
			<td>RX Generics</td>
			<td>71288-0402-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>14043-0704-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl 2%</td>
			<td>VEDCO Inc.</td>
			<td>50989-0417-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane-Thin-Layer Oxygenator</td>
			<td>Radnoti</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum Scissors; Curved; Blunt; 27 mm Blade Length; 5 &#34;</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oxygen Meter System</td>
			<td>Hanstech Instruments Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline 0.9% Solution</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Saline is made in lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Variable Speed Analog Console Pump Systems</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Models are custom per application</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weigh boats</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Non-specific Brand</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo hepatic perfusion through the portal vein in mouse

Diyabet, pre-diyabet, alkolsüz yağlı karaciğer hastalığı (NAFLD) ve alkolsüz steatohepatit (NASH) gibi metabolik hastalıklar giderek yaygınlaşmaktadır. Ex vivo karaciğer perfüzyonları, titizlikle kontrol edilebilen beslenme koşullarında nükleer manyetik rezonans (NMR) kullanarak karaciğer metabolizmasının kapsamlı bir analizine izin verir. Siliko simülasyonları, hormon eylemlerini ve farmasötik müdahalenin etkilerini değerlendirmenin birincil teorik bir aracı olmaya devam ettiğinden, perfüze edilmiş karaciğer, hepatik metabolizmayı anlamak için en değerli test yataklarından biri olmaya devam etmektedir. Bu çalışmalar hepatik fizyolojiye ilişkin temel anlayışlara rehberlik ettiğinden, sonuçlar doğru ve tekrarlanabilir olmalıdır. Ex vivo hepatik perfüzyonun tekrarlanabilirliğinde en büyük faktör cerrahinin kalitesidir. Bu nedenle, in situ NMR deneyleri bağlamında ex vivo fare karaciğer perfüzyonlarını gerçekleştirmek için organize ve kolaylaştırılmış bir yöntem sunduk. Ayrıca benzersiz bir uygulamayı tanımlıyoruz ve bu çalışmalarda karşılaşılan ortak sorunları tartışıyoruz. Genel amaç, in situ NMR deneyleri bağlamında hepatik rezeksiyonlarda ve perfüzyonlarda tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için altın standart olarak gördüğümüz birkaç yıl boyunca rafine ettiğimiz bir tekniğe karmaşık olmayan bir rehber sağlamaktır. Mıknatıs için alanın merkezine olan mesafe ve NMR deneyi sırasında dokunun müdahaleye erişilememesi, yöntemlerimizi yeni kılmaktadır.

Karaciğer fonksiyonu öncelikle oksijen tüketimi ve akış hızı ile değerlendirilir. 4-8 mL/dak akış hızı ve 1 μmol/min.g oksijen tüketimi tipiktir. Bu önlemler, belirli deneysel koşullara ve biyolojik farklılıklara bağlı olarak değişecektir.
Kullanılan izofluran'ın tam miktarı, kullanılan anestezi sisteminin tipine, farenin ortamına ve yaşına / ağırlığına bağlı olacaktır. Ameliyat sırasında, izofluran ve dağıtım gazı değişmez, ancak cerrahi alanın ö...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse at JoVE.com

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Protokol, portal ven perfüzyonu yoluyla metabolik çalışmalar için sağlam bir fare karaciğerini rezeke etmenin basit bir yöntemini açıklar.

Eski Vivo Farede Portal Damarından Hepatik Perfüzyon

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Bu video, metabolik karaciğer çalışmalarını yeterli titizlik ve tekrarlanabilirlikle gerçekleştirmek için geliştirilen ve vivo perfüzyon çalışmaları için hepatik rezeksiyon yapmak için bir rehber görevi görebilecek aerodinamik bir prosedürü göstermektedir. Bu teknik, hastalık modellerinde ciro metabolitlerinde işlevi tespit etmek için gerçek zamanlı metabolizmaya en iyi şekilde uygulanır. Perfüzyon, karaciğer için mevcut olan besin maddelerinin ve hormonların hassas kontrolünü sağlar.Teknik tedaviye yönelik olmamasına rağmen, karaciğer perfüzyonları diyabet, NAFLD ve NASH gibi hastalıkların etiyolojisini ve hepatik metabolizma üzerindeki etkisini anlamada etkili olabilir. Yeni farmasötikler geliştikçe, hepatik merkezi enerji metabolizmasını değerlendirmek için yöntemler gerekli hale gelir. Bu yöntem, kanserler de dahil olmak üzere çeşitli hastalıkların modelleriyle ve hastalığın ilerlemesinin birkaç farklı aşamasında kullanılabilir.Başlangıç olarak, anestezi indüksiyonundan sonra farenin burnunu bir burun konisine yerleştirin ve pençelerini bantlayın. Lidokaini, anterior iliak krest bölgesinde bilateral olarak deri altı enjeksiyonu yoluyla uygulayın. Tüm ağrı reflekslerinin yokluğunu doğrulamak için bir ayak parmağı sıkışma testi yapın.Üç santimetre genişliğinde bir kesi yaparak iç organları açığa çıkarmak için çöliyotomi yapın. Ksifoid işlemi sıkıştırarak çekişi çeken bir hemostat kullanarak insizyonu genişletin. Portal damarı kaplayan ince ve kalın bağırsakları temizlemek için pamuk uçlu bir aplikatör kullanın.Portal venin kemerinin altına karaciğere proksimal bir ipek dikiş yerleştirin. İkinci ipek sütürü, inferior mezenterik ven distalinin proksimal veya distalini 2-0 sütür kullanarak karaciğerden yerleştirin. Dikişler yerine oturduğunda, portal damarı 22 gauge kateter ile kanüle edin ve eğimi yukarı doğru tutun.Portal damarına en fazla 15 derecelik bir açıyla girin. Kateter tapperinden geçen ilk dikişi bağlayın. Portal ven kanüle edildikten sonra, kateteri portal venin dalından iki ila üç milimetre distal olarak ipek dikişle sabitleyin.Kateterin alt kısmını ikinci dikişle sabitleyin. Kateteri portal venin distal kısmına ve çevresindeki dokuya sabitlemek için dikişle bir düğüm bağlayın. Kateter sabitlendikten sonra, kan ve hava kabarcıklarını temizlemek için kateterin içine 38.1 milimetre uzunluğunda 27 gauge iğneli bir mililitrelik bir şırınga yerleştirin.Perfüzyon kolonunu katetere bağlamak için sabit bir durdurma horozuna sahip bir milimetre iç çap ve beş milimetre dış çaplı silikon tüp kullanın, böylece tamponun karaciğere akmasına izin vererek perfüzyonun başlangıcını işaretleyin. Bir zamanlayıcıyı başlattıktan sonra, inferior vena kavaya makas kullanarak kesi yaparak artan vasküler basıncı hafifletin. Karaciğer rengindeki homojen değişimi pembe veya kırmızıdan soluk sarıya doğru gözlemleyerek karaciğerden perfüzyon akışını onaylayın.Akış onaylandıktan sonra, mideyi, ince bağırsağı, kalın bağırsağı ve sağ böbreği çevreleyen dokudan çıkarın. Cerrahi asistanın yardımıyla, cerrah karaciğeri rezeke etmek için parietal periton ve torasik dokuyu keserken karaciğeri karın ve göğüs boşluğu etrafında manevra yapın. Karaciğeri yukarı doğru kaldırın ve karaciğeri makasla yerinde tutan kalan bağ dokularını kesin.Görüş kolaylığı için karaciğeri yavaşça manipüle edin. Akış hızı ve oksijen tüketimi ölçümleri, karaciğerin sağlığını ve işlevini izlemek için hayati öneme sahiptir. Beslenen ve oruç tutan karaciğerler arasındaki oksijen tüketiminde genellikle hafif bir fark vardır, bu da aç karaciğerde glukogenez tarafından dayatılan artan enerji taleplerine bağlanabilir.En önemli adımlar arasında kateterin 15 derecelik bir açıyla yerleştirilmesi, kateter ucunun görselleştirilmesi, dikişin bağlanırken bilek ve omuzların yuvarlanması ve portal vende burulmanın önlenmesi sayılabilir. Eksize edilen doku, perfüzyondan sonra herhangi bir sayıda biyokimyasal veya analitik yaklaşımla incelenebilir. Gerçek zamanlı MRG ve spektroskopi ile birlikte Ex vivo perfüzyonlar, metabolik akıların gerçek zamanlı olarak ölçülmesini sağlar.Doğal olarak, bu, hastalıklara yanıt olarak bir kontrol durumundan akının bozulmasına kadar uzanır.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

Detection of the pH-dependent Activity of Escherichia coli Chaperone HdeB In Vitro and In Vivo

pH bağımlı aktivitenin tespiti<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Chaperone HdeB<em&gt; İn Vitro</em&gt; ve<em&gt; İn Vivo</em

Bacteria are frequently exposed to environmental changes, such as alterations in pH, temperature, redox status, light exposure or mechanical force. Many ...

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Beyin Membranı Fraksiyonu: Bir<emEx Vivo</em&gt; Subsınaptik Protein Lokalizasyonunu Değerlendirmede Yaklaşım

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Arıtma tetkikine ve fare karaciğer sinüsoidal endotel hücrelerinden perfüzyon

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

A Colorimetric Method for Measuring Iron Content in Plants

Demir içeriği tesislerinde ölçme kolorimetrik yöntemi

Iron, one of the most important micronutrients in living organisms, is involved in basic processes, such as respiration and photosynthesis. Iron content ...

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome Profiling in Leishmania, Human Cells and Mouse Testis

Polysome LEISHMANIA, insan hücreleri ve fare Testis profil oluşturma

Proper protein expression at the right time and in the right amounts is the basis of normal cell function and survival in a fast-changing environment. For ...

Dynamic Proteomic and miRNA Analysis of Polysomes from Isolated Mouse Heart After Langendorff Perfusion

Dinamik proteomik ve miRNA analiz polizomlar izole fare kalp sonra Langendorff perfüzyon üzerinden

Studies in dynamic changes in protein translation require specialized methods. Here we examined changes in newly-synthesized proteins in response to ...

Measuring and Interpreting Oxygen Consumption Rates in Whole Fly Head Segments

Ölçme ve oksijen Tüketim oranları tamamen yorumlama kafa kesimleri sinek

Regulated metabolic activity is essential for the normal functioning of living cells. Indeed, altered metabolic activity is causally linked with the ...

An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause

Menopoz Sonrası Kardiyovasküler Disfonksiyon Exogenous Östrojen Tedaviler Tarama için Bir In Vivo Östrojen Eksikliği Fare Modeli

Postmenopausal women are at greater risk of developing cardiovascular diseases than premenopausal women. Female mice ovariectomized (OVX) at weaning ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Endotel hücrelerinden RNA yalıtım için Ribosome affinity arıtma (TRAP) çevirisi In vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hydroxyl Radical Protein Footprinting for the Study of Protein Interactions in Caenorhabditis elegans

In Vivo Hidroksil Radikal Protein Ayak İzi Caenorhabditis elegans Protein Etkileşimleri Çalışması için

Fast oxidation of proteins (FPOP) is a hydroxyl radical protein footprinting (HRPF) method used to study protein structure, protein-ligand interactions, ...