Name: ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis
Uploaded: 2021-10-19T15:00:00
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Diese Arbeit wurde von Pascal und Ilana Mantoux finanziert; Europäischer Forschungsrat (ERC-CoG-2016 726497-Cellnaivety); Flight Attendant Medical Research Council (FAMRI); Professur des Israel Cancer Research Fund (ICRF), BSF, Helen and Martin Kimmel Institute for Stem Cell Research, Helen and Martin Kimmel Award for Innovative Investigation; Israel Science Foundation (ISF), Minerva, das Sherman Institute for Medicinal Chemistry, Nella und Leon Benoziyo Center for Neurological Diseases, David und Fela Shapell Family Center for Genetic Disorders Research, Kekst Family Institute for Medical Genetics, Dr. Beth Rom-Rymer Stem Cell Research Fund, Edmond de Rothschild Foundations, Zantker Charitable Foundation, Nachlass von Zvia Zeroni.

Alle Tierversuche wurden nach den Tierschutzrichtlinien des Weizmann Institute of Science durchgeführt und vom zuständigen Weizmann Institut IACUC genehmigt (#01390120-1, 01330120-2, 33520117-2). Gesunde schwangere Frauen wurden gebeten, ihre Einverständniserklärung zur Entnahme von Blut aus ihrer Nabelschnur zu geben, wie vom Rambam Medical Center Helsinki Committee genehmigt (#RMB-0452-15). Gesunde Erwachsene wurden um ihre informierte Zustimmung gebeten, Blut gemäß den Richtlinien des Helsinki-Komitees des Weizm...

<ol>
	<li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-embryo+culture+and+the+study+of+mammalian+embryos+during+organogenesis.">Whole-embryo culture and the study of mammalian embryos during organogenesis.</a> Biological Reviews of the Cambridge Philosophical Society. 53 (1), 81-122 (1978).</li><li>Tam, P. P., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+gastrulation:+the+formation+of+a+mammalian+body+plan.">Mouse gastrulation: the formation of a mammalian body plan.</a> Mechanisms of Development. 68 (1-2), 3-25 (1997).</li><li>Huang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+mouse+embryos.">Intravital imaging of mouse embryos.</a> Science. 368 (6487), 181-186 (2020).</li><li>White, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lived+binding+of+Sox2+to+DNA+predicts+cell+fate+in+the+four-cell+mouse+embryo.">Long-lived binding of Sox2 to DNA predicts cell fate in the four-cell mouse embryo.</a> Cell. 165 (1), 75-87 (2016).</li><li>Tam, P. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+second+neural+axis+by+the+mouse+node.">Induction of a second neural axis by the mouse node.</a> Development. 120 (3), 613-620 (1994).</li><li>Aguilera-Castrejon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+utero+mouse+embryogenesis+from+pre-gastrulation+to+late+organogenesis.">Ex utero mouse embryogenesis from pre-gastrulation to late organogenesis.</a> Nature. 593 (7857), 119-124 (2021).</li><li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture.">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51969 (2014).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+manipulation+of+postimplantation+embryos.">Isolation, culture and manipulation of postimplantation embryos.</a> Manipulating the Mouse Embryo: a Laboratory Manual. , 149-193 (2014).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Development, Growth and Differentiation. 50 (6), 485-497 (2008).</li><li>Mathieu, J., Ruohola-Baker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+remodeling+during+the+loss+and+acquisition+of+pluripotency.">Metabolic remodeling during the loss and acquisition of pluripotency.</a> Development. 144 (4), 541-551 (2017).</li><li>Sturm, K., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+whole+postimplantation+embryos+and+germ+layer+derivatives.">Isolation and culture of whole postimplantation embryos and germ layer derivatives.</a> Methods in Enzymology. 225, 164-190 (1993).</li></ol>

Das hier vorgestellte Kulturprotokoll kann die ordnungsgemäße und kontinuierliche Entwicklung des Mausembryonen ex utero für bis zu sechs Tage von E5.5 bis E11 aufrechterhalten. Zuvor konnten sich Embryonen in diesen Entwicklungsstadien nur für kurze Zeiträume (bis zu 48 h)15 normal in Kultur entwickeln. Die Kopplung des Gasregulationsmoduls an den Rollenkultur-Inkubator zur präzisen Kontrolle der Sauerstoffkonzentration und des hyperbaren Gasdrucks ist entscheidend für die hierin ...

Die intrauterine Entwicklung des Säugetierembryos hat die Untersuchung der frühen Stadien der Postimplantationsentwicklung eingeschränkt1,2. Die Unzugänglichkeit des sich entwickelnden Embryos behindert das Verständnis der wichtigsten Entwicklungsprozesse, die nach der Implantation des Embryos in die Gebärmutter ablaufen, wie z.B. die Erstellung des tierischen Körperplans, die Spezifikation der Keimschichten oder die Bildung von Geweben und Organen. Darüber hinaus erschwert die sehr geringe Größe des frühen postimplantierten Embryos die Beobachtung durch intravitale Bildgebung in utero vor E103. Die Unfähigkeit, lebende Embryonen in diesen Stadien zu beobachten und zu manipulieren, hat die Untersuchung der frühen Embryogenese nach der Implantation auf Momentaufnahmen während der Entwicklung beschränkt.
Die Protokolle für die In-vitro-Kultur von Präimplantations-Säugetierembryonen sind gut etabliert, zuverlässig und werden regelmäßig verwendet4. Dennoch hatten Versuche, Ex-utero-Kultursysteme zu etablieren, die in der Lage sind, das richtige Wachstum von Säugetieren nach der Implantation von Embryonen zu unterstützen, nur begrenzten Erfolg5. Seit über einem Jahrhundert wird eine Vielzahl von Kulturtechniken vorgeschlagen, hauptsächlich durch Kultivierung der Embryonen in herkömmlichen statischen Platten6,7,8 oder rotierenden Flaschen (Walzenkulturen)5,9,10. Diese Plattformen erwiesen sich als hilfreich bei der Erweiterung des Wissens über die Entwicklung von Säugetieren nach der Implantation11,12, obwohl sie für das normale Überleben von Embryonen sehr ineffizient und auf kurze Zeiträume beschränkt waren. Die Embryonen zeigten bereits 24-48 h nach Beginn der Kultur Entwicklungsverzögerung und morphologische Anomalien.
Diese Studie liefert eine detaillierte Beschreibung für den Aufbau des Ex-utero-Embryokultursystems , das eine kontinuierliche Entwicklung von der Prägastrulation zu fortgeschrittenen Organogenese-Stadien über bis zu sechs Tage nach der Implantation ermöglicht13. Dieser Artikel beschreibt das verbesserte Walzenkulturprotokoll, das das Wachstum von E7.5-Embryonen (Neuralplatte und Headfold-Stadium) bis zur Hintergliedmaßenbildung (~ E11) und die erweiterte Kultur von E5.5 / E6.5 durch die Kombination von Kultur auf statischen Platten und Rollenkulturplattformen unterstützt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size filter (250 mL)</td>
			<td>JetBiofil</td>
			<td>FCA-206-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size syringe PVDF filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-well &#181;-plates glass bottom/ibiTreat</td>
			<td>iBidi</td>
			<td>80827/80826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle with adaptor cap for gas inlet</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Hole)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 06</td>
			<td>Used to seal the bottles to the drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Solid)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 07</td>
			<td>Used to seal the rotating drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture bottles</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 03/BTC 04</td>
			<td>Either Glass Bottles (Small) BTC 03 or Glass Bottles (Large) BTC 04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-glucose Monohydrate</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10100-30/45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Pressure Gauge</td>
			<td>Shanghai Benxu Electronics Technology co. Ltd</td>
			<td>BX-DPG80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>11880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>02-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>04-013-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas regulation module</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td>HannaLab1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050061</td>
			<td>glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps (Dumont #5, #55)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (glass)</td>
			<td>Hilgenberg</td>
			<td>3150102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (plastic)</td>
			<td>Alexred</td>
			<td>SO P12201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes (60 mm and 100 mm)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351007/351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision incubator system</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC01</td>
			<td>BTC01 model with gas bubbler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro-coagulant sterile test tubes (5 mL)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#456005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat whole embryo culture serum</td>
			<td>ENVIGO Bioproducts</td>
			<td>B-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic microscope equipped with heating plate</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringes (5, 10 ml) for sera filtration</td>
			<td>Pic Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis

Postimplantations-Säugetier-Embryo-Kulturmethoden waren im Allgemeinen ineffizient und auf kurze Zeiträume nach der Dissektion aus der Gebärmutter beschränkt. Vor kurzem wurden Plattformen für eine sehr robuste und verlängerte Ex-utero-Kultur von Mausembryonen von Ei-Zylinder-Stadien bis zur fortgeschrittenen Organogenese entwickelt. Diese Plattformen ermöglichen eine angemessene und getreue Entwicklung von prägastrulierenden Embryonen (E5.5) bis zur Bildung der hinteren Gliedmaßen (E11). Spätgastrulierende Embryonen (E7.5) werden in diesen Umgebungen in rotierenden Flaschen gezüchtet, während eine erweiterte Kultur aus Vorgastrulationsstadien (E5.5 oder E6.5) eine Kombination aus statischen und rotierenden Flaschenkulturen erfordert. Darüber hinaus sind eine empfindliche Regulierung der O2 - und CO2-Konzentration , des Gasdrucks, des Glukosespiegels und der Verwendung eines spezifischen Ex-utero-Kulturmediums entscheidend für die ordnungsgemäße Embryonalentwicklung. Hier wird ein detailliertes Schritt-für-Schritt-Protokoll für die erweiterte Ex-utero-Mausembryokultur bereitgestellt. Die Fähigkeit, normale Mausembryonen ex utero von der Gastrulation bis zur Organogenese zu züchten, stellt ein wertvolles Werkzeug dar, um die Wirkung verschiedener experimenteller Störungen während der Embryonalentwicklung zu charakterisieren.

Die für E7.5-Embryonen beschriebenen Walzenkulturbedingungen (Spätgastrulationsstadium) unterstützen ein konstantes und normales Embryowachstum mit einer durchschnittlichen Effizienz von fast 75% nach 4 Kulturtagen (Abbildung 2 und Tabelle 1). Die Effizienz der Embryonalentwicklung kann je nach genetischem Hintergrund der Maus variieren, ist aber durchweg robust (Abbildung 2C). Die Supplementierung mit HBS anstelle von HCS ergibt eine Effizie...

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Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

Eine verbesserte Plattform für die Kultur ganzer Embryonen ermöglicht eine kontinuierliche und robuste Ex-utero-Entwicklung von Postimplantations-Mausembryonen für bis zu sechs Tage, von den Vorgastrulationsstadien bis zur fortgeschrittenen Organogenese. In diesem Protokoll beschreiben wir das Standardverfahren für eine erfolgreiche Embryokultur mit statischen Platten und rotierenden Flaschensystemen.

Ex Utero Kultur von Mausembryonen von der Prägastrulation bis zur fortgeschrittenen Organogenese

Postimplantation mammalian embryo culture methods have been generally inefficient and limited to brief periods after dissection out of the uterus. ...

Diese Methode wird grundlegend für das Verständnis der Gastrulation entlang einer Formation bei Säugetieren sein. Indem das Experimentieren mit lebenden Embryonen in Embryonalstadien ermöglicht wird, die lange Zeit in der Gebärmutter der Mutter verborgen waren. Es ermöglicht, setzt effizientes und angemessenes Wachstum von Mausembryonen außerhalb der Gebärmutter für einen längeren Zeitraum von bis zu 6 Tagen fort.Eine schnelle und adäquate Embryonendissektion und Vorgastrulation der Gaskonzentration und des Gasdrucks sind die kritischsten Schritte für ein erfolgreiches Embryonenwachstum. Um mit der Kultivierung von 7,5 Tage alten oder fortgeschritteneren Mausembryonen zu beginnen, schalten Sie den Rotator und die Heizeinheit des Rollkultur-Inkubatorsystems für mindestens 1 Stunde ein, bevor der Embryo seziert wird. Fügen Sie auch Autoklavwasser in die Gaseinlassflasche und das Auslassreagenzglas hinzu.Als nächstes schalten Sie das Gasreglermodul ein, indem Sie den Hauptschalter drücken, und verwenden Sie dann die entsprechenden Regler, um die Sauerstoff- und Kohlendioxidwerte auf 5% einzustellen Öffnen Sie den Gasregler und bewegen Sie den Spannungsschalter im Druckmessumformer, um den Gasdruck auf etwa 6,5 bis 7 Pfund pro Quadratzoll einzustellen. Bestätigen Sie den Gasdruckwert mit einem digitalen Manometer. Überwachen Sie den Gasfluss, indem Sie die Geschwindigkeit der Blasen überprüfen, die im ausgelassenen, mit Wasser gefüllten Reagenzglas entstehen, das im Präzisionsinkubator zugewiesen ist.Stellen Sie die richtige Blasenrate ein, indem Sie das Gasdurchflussventil am Deckel der Wasserflasche schließen oder öffnen. Stellen Sie sicher, dass der Gasstrom die Bildung von Blasen mit einer Geschwindigkeit von 2 bis 4 Blasen pro Sekunde ermöglicht, oder stellen Sie den Blasenfluss an der ersten Stelle ein, an der das Blubbern in das mit Wasser gefüllte Auslassrohr austritt. Als nächstes füllen Sie die Kulturflaschen mit 2 Millilitern Kulturmedium.Verwenden Sie die ausgehöhlten Silikonspäne, um die Flaschen zu versiegeln und stecken Sie sie für 1 Stunde in die ausgehöhlte rotierende Trommel für die Vorwuchtigkeit. Halten Sie die leeren Räume in der rotierenden Trommel mit den massiven Spunden abgedichtet. Als nächstes sezieren Sie die Embryonen einer eingeschläferten schwangeren weiblichen Maus.Reinigen Sie den Bauch mit 70% Ethanol und schneiden Sie die Haut und die Bauchdecke mit einer Schere ab. Lokalisieren Sie ein Ende der Gebärmutter und schneiden Sie an der Kreuzung zwischen dem Eierstock und der Gebärmutter. Schneiden Sie weiter entlang der Gebärmutter bis zum anderen Ende und übertragen Sie sie in eine 100 Millimeter Petrischale, die mit DPBS gefüllt ist.Waschen Sie die Conceptuse schnell in DPBS und schneiden Sie sie paarweise, um die Handhabung des Embryos zu erleichtern. Bewegen Sie alle Paare von Konzepten auf ein vorgleiches Dissektionsmedium in einer 60-Millimeter-Petrischale und schneiden Sie sie dann in die einzelnen Begriffe. Als nächstes entfernen Sie mit einer groben Pinzette die Gebärmutterwand der Conceptusse, indem Sie das Gebärmuttergewebe zerreißen, und schneiden Sie dann mit einer feinen, mikrochirurgischen Pinzette die Spitze der birnenförmigen Dezidua ab.Führen Sie die Pinzette parallel zu seiner langen Achse neben den Embryo ein und öffnen Sie die Pinzette, um die Dezidua in zwei Hälften zu teilen. Greifen Sie schließlich mit einer feinen Pinzette den Embryo aus der Decidua und schälen Sie den Parietal-Eigelbsack vom Embryo, wobei der intakte Ektoplazentakegel am Eizylinder befestigt bleibt. Wählen Sie die Embryonen in der Neuralplatte oder im frühen Kopffaltenstadium, die im Epiblasten keine Schäden zeigen.5 bis 6 ausgewählte Embryonen pro Flasche in die vorgedrungenen Glaskulturflaschen überführen und die Flaschen bei 37 Grad Celsius in eine Atmosphäre von 5% Sauerstoff und 5% Kohlendioxid in das rotierende Kultursystem stellen. Um Vorgastrulations- und Frühgastrulationsembryonen und statische Platten zu kultivieren, fügen Sie 250 Mikroliter frisch zubereitetes ex-utero Embryo-Kulturmedium zu jeder Vertiefung einer 8-Well-Platte hinzu. Stellen Sie die Platten bei 37 Grad Celsius in einen Kohlendioxid-Inkubator für die Vorgleichgewichtung.Nachdem Sie die Embryonen wie zuvor gezeigt aus der Gebärmutter seziert haben, übertragen Sie die einzelnen Embryonen mit einer Mikropipette in jede Vertiefung der 8-Well-Platte und legen Sie die Platte mit 5% Kohlendioxid bei 37 Grad Celsius in den Inkubator. Stellen Sie sich die Embryonen unter einem Stereomikroskop vor und wählen Sie für die Kultur nur diejenigen mit einer wohlgeformten Fruchthöhle ohne offensichtliche Schäden und ohne reichertsche Membran aus. Die in diesem Protokoll beschriebenen Rollkulturbedingungen für 7,5 Tage alte Embryonen unterstützen ein konstantes und normales Embryowachstum mit einer durchschnittlichen Effizienz von fast 75% nach 4 Kulturtagen.Die Effizienz der Embryonalentwicklung variiert je nach genetischem Hintergrund der Maus, ist aber durchweg robust. Die Supplementierung mit HBS anstelle von HCS ergibt nach 4 Tagen Kultur einen Wirkungsgrad von ca. 68%. Die Entwicklung von 6,5 Embryonen und statischen Platten wird korrekt mit einer Effizienz von mehr als 90% unter Verwendung von ex-utero Embryo-Kulturmedium mit HCS und HBS rekapituliert.Kulturen, die von vorgastrulierenden Embryonen ausgehen, zeigen eine Effizienz von 46% der richtigen Entwicklung bis zum frühen Somite-Stadium und fast 17% der Embryonen vervollständigen die richtige Entwicklung nach 6 Tagen Kultur. Die Morphogenese und Gewebeentwicklung verläuft ordnungsgemäß bis zu 42 Somiten. Repräsentative Entwicklungsdefekte, die bei Embryonen für Kulturen beobachtet wurden, die ab dem embryonalen Tag 7.5, 6.5 und 5.5 begonnen wurden, sind hier dargestellt.Embryonen mit geringer Schädigung des Epiblasten oder Embryonen, die die Reichert-Membran behalten, sollten verworfen werden. Frühe Embryonen wachsen nicht richtig oder zeigen schwere Entwicklungsverzögerungen, während die Anheftung des embryonalen Epiblasten an der Oberfläche der Platte das Versagen der weiteren Embryonalentwicklung verursacht. Die wichtigsten Anomalien, die bei defekten Embryonen beobachtet werden, sind die Entwicklung der hinteren Region außerhalb des Dottersacks oder Defekte im Wachstum der Nervenfalten.In Kulturen, die aus 5,5 Tagen alten Embryonen entwickelt wurden, werden häufig Entwicklungsdefekte beobachtet, die das Vorhandensein eines kleinen, unterentwickelten Epiblasten sind. Mit dieser Methode sind Forscher in der Lage, eine Vielzahl von physikalischen oder chemischen Manipulationen bei der Entwicklung postimplantierter Embryonen durchzuführen. Zum Beispiel Manipulation, Zelltransplantation oder Abstammungsverfolgung.Diese Methode ebnet nicht nur den Weg für die detaillierte Untersuchung der Sich entwickelnden Postimplantation von Mäusen, sondern auch für die Implementierung ähnlicher Kulturmethoden in Embryonen anderer Spezies, wie z.B. des Menschen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimierte<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Züchtung von Hühnerembryonen zu fortgeschrittenen Entwicklungsstadium

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero Intraherz Tomato Lektin-Injektionen auf Maus Embryonen zu Nierendurchblutung Messer

The formation and perfusion of developing renal blood vessels (apart from glomeruli) are greatly understudied. As vasculature develops via angiogenesis ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Elektroporation und Organotypischen Kultur der Maus Hippocampus-Gewebe

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex-vivo-Kultur von Schlundbögen auf Herz und Muskelvorläuferzellen und ihre Nische Studieren

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Verwendung<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Upright Droplet Kulturen von Whole Fetal Orgeln zu Entwicklungsprozessen während der Maus Organogenese Studieren

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primäre Endodermal Epithelial Cell Culture aus dem Dottersack-Membran der japanischen Wachtel Embry

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

Quantitative Analyse der Proteinexpression zu studieren Lineage Spezifikation in Maus Präimplantationsembryonen

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

Ableitung von Stammzelllinien aus Präimplantations Mausembryonen

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

Isolation, Kultur und adipogene Induktion von Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Vorbereitung kleiner RNA-Bibliotheken für die Sequenzierung von frühen Mausembryonen

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...