Name: ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis
Uploaded: 2021-10-19T15:00:00
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Questo lavoro è stato finanziato da Pascal e Ilana Mantoux; Consiglio europeo della ricerca (ERC-CoG-2016 726497-Cellnaivety); Consiglio di Ricerca Medica Assistente di Volo (FAMRI); Cattedra israelo cancer research Fund (ICRF), BSF, Helen and Martin Kimmel Institute for Stem Cell Research, Helen and Martin Kimmel Award for Innovative Investigation; Israel Science Foundation (ISF), Minerva, the Sherman Institute for Medicinal Chemistry, Nella and Leon Benoziyo Center for Neurological Diseases, David and Fela Shapell Family Center for Genetic Disorders Research, Kekst Family Institute for Medical Genetics, Dr. Beth Rom-Rymer Stem Cell Research Fund, Edmond de Rothschild Foundations, Zantker Charitable Foundation, Estate of Zvia Zeroni.

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida per la protezione degli animali del Weizmann Institute of Science e approvati dal weizmann Institute IACUC (# 01390120-1, 01330120-2, 33520117-2). Alle donne incinte sane è stato chiesto di dare il loro consenso informato per raccogliere sangue dal loro cordone ombelicale, come approvato dal Rambam Medical Center Helsinki Committee (#RMB-0452-15). Agli adulti sani è stato chiesto il loro consenso informato per raccogliere il sangue secondo l...

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	<li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-embryo+culture+and+the+study+of+mammalian+embryos+during+organogenesis.">Whole-embryo culture and the study of mammalian embryos during organogenesis.</a> Biological Reviews of the Cambridge Philosophical Society. 53 (1), 81-122 (1978).</li><li>Tam, P. P., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+gastrulation:+the+formation+of+a+mammalian+body+plan.">Mouse gastrulation: the formation of a mammalian body plan.</a> Mechanisms of Development. 68 (1-2), 3-25 (1997).</li><li>Huang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+mouse+embryos.">Intravital imaging of mouse embryos.</a> Science. 368 (6487), 181-186 (2020).</li><li>White, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lived+binding+of+Sox2+to+DNA+predicts+cell+fate+in+the+four-cell+mouse+embryo.">Long-lived binding of Sox2 to DNA predicts cell fate in the four-cell mouse embryo.</a> Cell. 165 (1), 75-87 (2016).</li><li>Tam, P. 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T., Terry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+explanted+rat+embryos+in+rotating+tubes.">Culture of explanted rat embryos in rotating tubes.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 35 (1), 135-138 (1973).</li><li>Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+and+historical+review+of+culture+methods+for+vertebrates.">A comparative and historical review of culture methods for vertebrates.</a> International Journal of Developmental Biology. 41 (12), 127-137 (1997).</li><li>Parameswaran, M., Tam, P. P. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+second+neural+axis+by+the+mouse+node.">Induction of a second neural axis by the mouse node.</a> Development. 120 (3), 613-620 (1994).</li><li>Aguilera-Castrejon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+utero+mouse+embryogenesis+from+pre-gastrulation+to+late+organogenesis.">Ex utero mouse embryogenesis from pre-gastrulation to late organogenesis.</a> Nature. 593 (7857), 119-124 (2021).</li><li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture.">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51969 (2014).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+manipulation+of+postimplantation+embryos.">Isolation, culture and manipulation of postimplantation embryos.</a> Manipulating the Mouse Embryo: a Laboratory Manual. , 149-193 (2014).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Development, Growth and Differentiation. 50 (6), 485-497 (2008).</li><li>Mathieu, J., Ruohola-Baker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+remodeling+during+the+loss+and+acquisition+of+pluripotency.">Metabolic remodeling during the loss and acquisition of pluripotency.</a> Development. 144 (4), 541-551 (2017).</li><li>Sturm, K., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+whole+postimplantation+embryos+and+germ+layer+derivatives.">Isolation and culture of whole postimplantation embryos and germ layer derivatives.</a> Methods in Enzymology. 225, 164-190 (1993).</li></ol>

Il protocollo di coltura qui presentato può sostenere uno sviluppo corretto e continuo dell'embrione di topo ex utero per un massimo di sei giorni, da E5.5 a E11. In precedenza, gli embrioni in queste fasi di sviluppo potevano svilupparsi normalmente in coltura solo per brevi periodi (fino a 48 h)15. L'accoppiamento del modulo di regolazione del gas all'incubatore di coltura a rulli per un controllo preciso della concentrazione di ossigeno e della pressione iperbarica del gas è fondamen...

Lo sviluppo intrauterino dell'embrione di mammifero ha limitato lo studio delle prime fasi dello sviluppo post-impianto1,2. L'inaccessibilità dell'embrione in via di sviluppo ostacola la comprensione dei principali processi di sviluppo che si verificano dopo l'impianto dell'embrione nell'utero, come la definizione del piano del corpo animale, la specifica degli strati germinali o la formazione di tessuti e organi. Inoltre, le dimensioni molto ridotte dell'embrione postimpinato precoce rendono difficile l'osservazione mediante imaging intravitale in utero prima di E103. L'incapacità di osservare e manipolare gli embrioni viventi in queste fasi ha limitato lo studio dell'embriogenesi post-impianto precoce a istantanee durante lo sviluppo.
I protocolli per la coltura in vitro di embrioni di mammiferi preimpianto sono ben consolidati, affidabili e utilizzati regolarmente4. Tuttavia, i tentativi di stabilire sistemi di coltura ex utero in grado di supportare una corretta crescita embrionale post-impianto di mammiferi hanno avuto un successo limitato5. Una varietà di tecniche di coltura sono state proposte per oltre un secolo, principalmente coltivando gli embrioni in piastre statiche convenzionali6,7,8 o bottiglie rotanti (colture a rulli)5,9,10. Queste piattaforme si sono rivelate utili per ampliare le conoscenze sullo sviluppo dei mammiferi dopo l'impianto11,12, nonostante siano altamente inefficienti per la normale sopravvivenza degli embrioni e limitate a brevi periodi. Gli embrioni hanno iniziato a mostrare ritardo dello sviluppo e anomalie morfologiche già 24-48 ore dopo l'inizio della coltura.
Questo studio fornisce una descrizione dettagliata per la creazione del sistema di coltura embrionale ex utero che consente uno sviluppo continuo dalla fase pre-costruzione alle fasi avanzate di organogenesi fino a sei giorni di sviluppo post-impianto13. Questo documento descrive il protocollo di coltura a rulli migliorato che supporta la crescita degli embrioni E7.5 (piastra neurale e stadio headfold) fino allo stadio di formazione degli arti posteriori (~ E11) e la coltura estesa da E5.5 / E6.5 combinando la coltura su piastre statiche e piattaforme di coltura a rulli.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size filter (250 mL)</td>
			<td>JetBiofil</td>
			<td>FCA-206-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size syringe PVDF filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-well &#181;-plates glass bottom/ibiTreat</td>
			<td>iBidi</td>
			<td>80827/80826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle with adaptor cap for gas inlet</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Hole)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 06</td>
			<td>Used to seal the bottles to the drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Solid)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 07</td>
			<td>Used to seal the rotating drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture bottles</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 03/BTC 04</td>
			<td>Either Glass Bottles (Small) BTC 03 or Glass Bottles (Large) BTC 04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-glucose Monohydrate</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10100-30/45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Pressure Gauge</td>
			<td>Shanghai Benxu Electronics Technology co. Ltd</td>
			<td>BX-DPG80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>11880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>02-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>04-013-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas regulation module</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td>HannaLab1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050061</td>
			<td>glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps (Dumont #5, #55)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (glass)</td>
			<td>Hilgenberg</td>
			<td>3150102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (plastic)</td>
			<td>Alexred</td>
			<td>SO P12201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes (60 mm and 100 mm)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351007/351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision incubator system</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC01</td>
			<td>BTC01 model with gas bubbler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro-coagulant sterile test tubes (5 mL)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#456005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat whole embryo culture serum</td>
			<td>ENVIGO Bioproducts</td>
			<td>B-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic microscope equipped with heating plate</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringes (5, 10 ml) for sera filtration</td>
			<td>Pic Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis

I metodi di coltura embrionale dei mammiferi post-impianto sono stati generalmente inefficienti e limitati a brevi periodi dopo la dissezione dall'utero. Recentemente sono state sviluppate piattaforme per colture ex utero altamente robuste e prolungate di embrioni di topo da stadi uovo-cilindro fino all'organogenesi avanzata. Queste piattaforme consentono uno sviluppo appropriato e fedele degli embrioni pregastrulanti (E5.5) fino allo stadio di formazione degli arti posteriori (E11). Gli embrioni a gastrulazione tardiva (E7.5) vengono coltivati in bottiglie rotanti in questi ambienti, mentre la coltura estesa dalle fasi di pre-costruzione (E5.5 o E6.5) richiede una combinazione di colture di bottiglie statiche e rotanti. Inoltre, la regolazione sensibile della concentrazione di O2 e CO2 , la pressione del gas, i livelli di glucosio e l'uso di uno specifico terreno di coltura ex utero sono fondamentali per il corretto sviluppo dell'embrione. Qui viene fornito un protocollo dettagliato passo-passo per la coltura estesa di embrioni di topo ex utero. La capacità di far crescere embrioni di topo normali ex utero dalla gastrulazione all'organogenesi rappresenta uno strumento prezioso per caratterizzare l'effetto di diverse perturbazioni sperimentali durante lo sviluppo embrionale.

Le condizioni di coltura a rulli descritte per gli embrioni E7.5 (fase di gastrulazione tardiva) supportano una crescita embrionale costante e normale con un'efficienza media vicina al 75% dopo 4 giorni di coltura (Figura 2 e Tabella 1). L'efficienza dello sviluppo embrionale può variare in base a diversi background genetici di topo, ma è costantemente robusta (Figura 2C). L'integrazione con HBS invece di HCS produce un'efficienza di ~ 68% dop...

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Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

Una piattaforma potenziata per la coltura di embrioni interi consente uno sviluppo continuo e robusto in ex utero di embrioni di topo post-impianto per un massimo di sei giorni, dalle fasi di pre-costruzione fino all'organogenesi avanzata. In questo protocollo, descriviamo in dettaglio la procedura standard per la coltura embrionale di successo utilizzando piastre statiche e sistemi di bottiglie rotanti.

Ex Utero Coltura di embrioni di topo dalla pregastrulazione all'organogenesi avanzata

Postimplantation mammalian embryo culture methods have been generally inefficient and limited to brief periods after dissection out of the uterus. ...

Questo metodo sarà fondamentale per comprendere la gastrulazione lungo una formazione nei mammiferi. Consentendo la sperimentazione in embrioni viventi durante le fasi embrionali che sono state a lungo nascoste all'interno dell'utero materno. Permette, continua la crescita efficiente e appropriata di embrioni di topo al di fuori dell'utero per un periodo prolungato fino a 6 giorni.La dissezione embrionale rapida e adeguata e la pregastrulazione della concentrazione e della pressione del gas sono i passi più critici per una crescita embrionale di successo. Per iniziare a coltivare embrioni di topo di 7,5 giorni o più avanzati, accendere il rotatore e l'unità di riscaldamento del sistema di incubatore di colture a rulli per almeno 1 ora prima delle dissezioni embrionali. Inoltre, aggiungere acqua in autoclave alla bombola di ingresso del gas e alla provetta di uscita.Quindi, accendere il modulo regolatore del gas premendo l'interruttore principale, quindi utilizzare i rispettivi controller per impostare i valori di ossigeno e anidride carbonica al 5% Aprire il regolatore del gas e spostare l'interruttore di tensione nel trasmettitore di pressione per impostare la pressione del gas a circa 6,5-7 libbre per pollice quadrato. Confermare il valore della pressione del gas utilizzando un manometro digitale. Monitorare il flusso di gas controllando la velocità delle bolle create all'interno della provetta riempita d'acqua in uscita allocata all'interno dell'incubatore di precisione.Impostare la corretta velocità di bolla chiudendo o aprendo la valvola di flusso del gas sul coperchio della bottiglia d'acqua. Assicurarsi che il flusso di gas consenta la formazione di bolle ad una velocità da 2 a 4 bolle al secondo o impostare il flusso di bolle nel primo punto in cui il gorgogliamento esce al tubo di uscita riempito d'acqua. Quindi, riempire le bottiglie di coltura con 2 millilitri di terreno di coltura.Utilizzare i bungs di silicio cavi per sigillare le bottiglie e collegarle al tamburo rotante scavato per il pre-bilanciamento per 1 ora. Tenere sigillati gli spazi vuoti nel tamburo rotante utilizzando i bungs solidi. Quindi, sezionare gli embrioni da un topo femmina incinta eutanasizzato.Pulire l'addome con etanolo al 70% e tagliare la pelle e la parete addominale usando le forbici. Individuare un'estremità dell'utero e tagliare all'intersezione tra l'ovaio e l'utero. Continuare a tagliare lungo l'utero fino all'altra estremità e trasferire in una capsula di Petri da 100 millimetri piena di DPBS.Lavare rapidamente i conceptuses in DPBS e tagliarli a coppie per facilitare la gestione degli embrioni. Spostare tutte le coppie di conceptuse in un mezzo di dissezione pre-equilibrato in una capsula di Petri da 60 millimetri, quindi tagliare le singole conceptuses. Successivamente, usando un paio di pinze grossolane, rimuovere la parete uterina dei conceptuses strappando il tessuto uterino, quindi usando una pinza microchirurgica fine, tagliare la punta della decidua a forma di pera.Inserire la pinza accanto all'embrione parallelamente al suo asse lungo e aprire la pinza per dividere la decidua a metà. Infine, utilizzando una pinza fine, afferrare l'embrione dalla decidua e staccare il sacco di tuorlo parietale dall'embrione, lasciando intatto il cono ectoplacentare attaccato al cilindro dell'uovo. Seleziona gli embrioni nella piastra neurale, o nella fase iniziale della piega della testa, che non mostrano danni nell'epiblasto.Trasferire da 5 a 6 embrioni selezionati per bottiglia alle bottiglie di coltura di vetro pre-equilibrate e posizionare le bottiglie nel sistema di coltura rotante a 37 gradi Celsius, in un'atmosfera del 5% di ossigeno e del 5% di anidride carbonica. Per coltivare embrioni di pregastrulazione e gastrulazione precoce e piastre statiche, aggiungere 250 microlitri di terreno di coltura embrionale ex-utero appena preparato a ciascun pozzetto di una piastra di 8 pozzetti. Posizionare le piastre all'interno di un incubatore di anidride carbonica a 37 gradi Celsius per il pre-equilibrio.Dopo aver sezionato gli embrioni fuori dall'utero come dimostrato in precedenza, trasferire i singoli embrioni in ciascun pozzetto della piastra a 8 pozzetti utilizzando una micro pipetta e posizionare la piastra all'interno dell'incubatrice con il 5% di anidride carbonica a 37 gradi Celsius. Immaginate gli embrioni al microscopio stereo e selezionate per la coltura solo quelli con una cavità amniotica ben formata senza danni evidenti e senza la membrana di Reichert. Le condizioni di coltura a rulli descritte in questo protocollo per embrioni di 7,5 giorni supportano una crescita embrionale costante e normale con un'efficienza media vicina al 75% dopo 4 giorni di coltura.L'efficienza dello sviluppo embrionale varia tra i diversi background genetici dei topi, ma è costantemente robusta. L'integrazione con HBS invece di HCS produce un'efficienza di circa il 68% dopo 4 giorni di coltura. Lo sviluppo di 6,5 embrioni e placche statiche è correttamente ricapitolato con un'efficienza superiore al 90% utilizzando un terreno di coltura embrionale ex-utero con HCS e HBS.Le colture a partire da embrioni pregastrulanti mostrano un'efficienza del 46% di sviluppo corretto fino allo stadio di somite precoce e quasi il 17% degli embrioni completa il corretto sviluppo dopo 6 giorni di coltura. La morfogenesi e lo sviluppo tissutale procedono correttamente fino a 42 somiti. I difetti rappresentativi dello sviluppo osservati negli embrioni per colture iniziate dai giorni embrionali 7.5, 6.5 e 5.5 sono mostrati qui.Gli embrioni con danni minori all'epiblasto o gli embrioni che trattengono la membrana di Reichert devono essere scartati. Gli embrioni precoci non cresceranno correttamente o mostreranno gravi ritardi nello sviluppo, mentre l'attaccamento dell'epiblasto embrionale alla superficie della piastra causerà il fallimento di un ulteriore sviluppo embrionale. Le principali anomalie osservate negli embrioni difettosi sono lo sviluppo della regione posteriore al di fuori del sacco vitellino o difetti nella crescita delle pieghe neurali.Nelle colture sviluppate a partire da embrioni di 5,5 giorni si osservano frequentemente un difetto di sviluppo è la presenza di un piccolo epiblasto sottosviluppato. Utilizzando questo metodo, i ricercatori sono in grado di eseguire una varietà di manipolazioni fisiche o chimiche nello sviluppo di embrioni post-impiantati. Ad esempio, manipolazione, trapianto cellulare o tracciamento del lignaggio.Questo metodo non solo apre la strada allo studio dello sviluppo post-impianto del topo in grande dettaglio, ma anche per l'implementazione di metodi di coltura simili in embrioni di altre specie, come l'uomo.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Ottimizzato<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Coltura di Chick embrioni a stadi avanzati di sviluppo

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero iniezioni intra-cardiaca di pomodoro-lectine su embrioni di topo per valutare renale Blood Flow

The formation and perfusion of developing renal blood vessels (apart from glomeruli) are greatly understudied. As vasculature develops via angiogenesis ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex utero elettroporazione e Organotipica Fetta Cultura del mouse ippocampale Tissue

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Cultura Vivo del faringea Archi allo Studio cuore e muscoli Progenitori e la loro nicchia

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Utilizzando<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Upright Droplet Culture di interi organi fetali per studiare i processi evolutivi durante mouse Organogenesi

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primaria endodermico cellule epiteliali Cultura dal tuorlo Sac membrana di giapponesi Quail embrioni

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

Analisi quantitativa di espressione della proteina per studiare Lineage specifica nel topo preimpianto embrioni

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

Derivazione di linee di cellule staminali da embrioni di Preimplantation Mouse

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

Isolamento, cultura e induzione adipogenica di cellule staminali adipose originali adipose-derivate da cellule staminali periaortiche

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Preparazione di piccole librerie di RNA per il sequenziamento da embrioni di topo precoce

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...