Name: ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis
Uploaded: 2021-10-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av Pascal og Ilana Mantoux; Det europeiske forskningsrådet (ERC-CoG-2016 726497-Cellnaivety); Flyvertinne medisinsk forskningsråd (FAMRI); Israel Cancer Research Fund (ICRF) professorat, BSF, Helen og Martin Kimmel Institute for Stem Cell Research, Helen og Martin Kimmel Award for Innovative Investigation; Israel Science Foundation (ISF), Minerva, Sherman Institute for Medical Chemistry, Nella og Leon Benoziyo Center for Neurological Diseases, David og Fela Shapell Family Center for Genetic Disorders Research, Kekst Family Institute for Medical Genetics, Dr. Beth Rom-Rymer Stem Cell Research Fund, Edmond de Rothschild Foundations, Zantker Charitable Foundation, Eiendom Zvia Zeroni.

Alle dyreforsøk ble utført i henhold til Dyrebeskyttelsesretningslinjene til Weizmann Institute of Science og godkjent av relevant Weizmann Institute IACUC (#01390120-1, 01330120-2, 33520117-2). Friske gravide kvinner ble bedt om å gi sitt informerte samtykke til å samle blod fra navlestrengen, som godkjent av Rambam Medical Center Helsinki Committee (#RMB-0452-15). Friske voksne ble bedt om deres informerte samtykke til å få blod samlet inn i henhold til retningslinjene fra Weizmann Institute of Science Helsinki C...

<ol>
	<li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-embryo+culture+and+the+study+of+mammalian+embryos+during+organogenesis.">Whole-embryo culture and the study of mammalian embryos during organogenesis.</a> Biological Reviews of the Cambridge Philosophical Society. 53 (1), 81-122 (1978).</li><li>Tam, P. P., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+gastrulation:+the+formation+of+a+mammalian+body+plan.">Mouse gastrulation: the formation of a mammalian body plan.</a> Mechanisms of Development. 68 (1-2), 3-25 (1997).</li><li>Huang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+mouse+embryos.">Intravital imaging of mouse embryos.</a> Science. 368 (6487), 181-186 (2020).</li><li>White, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lived+binding+of+Sox2+to+DNA+predicts+cell+fate+in+the+four-cell+mouse+embryo.">Long-lived binding of Sox2 to DNA predicts cell fate in the four-cell mouse embryo.</a> Cell. 165 (1), 75-87 (2016).</li><li>Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mouse+development:+whole+embryo+culture+and+micro-manipulation.">Postimplantation mouse development: whole embryo culture and micro-manipulation.</a> International Journal of Developmental Biology. 42 (7), 895-902 (1998).</li><li>Nicholas, J. S., Rudnick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+rat+embryos+in+tissue+culture.">The development of rat embryos in tissue culture.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 20 (12), 656-658 (1934).</li><li>New, D. A., Stein, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultivation+of+mouse+embryos+in+vitro.">Cultivation of mouse embryos in vitro.</a> Nature. 199, 297-299 (1963).</li><li>Rivera-P&#233;rez, J. A., Jones, V., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+whole+mouse+embryos+at+early+postimplantation+to+organogenesis+stages:+developmental+staging+and+methods.">Culture of whole mouse embryos at early postimplantation to organogenesis stages: developmental staging and methods.</a> Methods in Enzymology. 476, 185-203 (2010).</li><li>New, D. A. T., Coppola, P. T., Terry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+explanted+rat+embryos+in+rotating+tubes.">Culture of explanted rat embryos in rotating tubes.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 35 (1), 135-138 (1973).</li><li>Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+and+historical+review+of+culture+methods+for+vertebrates.">A comparative and historical review of culture methods for vertebrates.</a> International Journal of Developmental Biology. 41 (12), 127-137 (1997).</li><li>Parameswaran, M., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalisation+of+cell+fate+and+morphogenetic+movement+of+the+mesoderm+during+mouse+gastrulation.">Regionalisation of cell fate and morphogenetic movement of the mesoderm during mouse gastrulation.</a> Developmental Genetics. 17 (1), 16-28 (1995).</li><li>Beddington, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+second+neural+axis+by+the+mouse+node.">Induction of a second neural axis by the mouse node.</a> Development. 120 (3), 613-620 (1994).</li><li>Aguilera-Castrejon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+utero+mouse+embryogenesis+from+pre-gastrulation+to+late+organogenesis.">Ex utero mouse embryogenesis from pre-gastrulation to late organogenesis.</a> Nature. 593 (7857), 119-124 (2021).</li><li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture.">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51969 (2014).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+manipulation+of+postimplantation+embryos.">Isolation, culture and manipulation of postimplantation embryos.</a> Manipulating the Mouse Embryo: a Laboratory Manual. , 149-193 (2014).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Development, Growth and Differentiation. 50 (6), 485-497 (2008).</li><li>Mathieu, J., Ruohola-Baker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+remodeling+during+the+loss+and+acquisition+of+pluripotency.">Metabolic remodeling during the loss and acquisition of pluripotency.</a> Development. 144 (4), 541-551 (2017).</li><li>Sturm, K., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+whole+postimplantation+embryos+and+germ+layer+derivatives.">Isolation and culture of whole postimplantation embryos and germ layer derivatives.</a> Methods in Enzymology. 225, 164-190 (1993).</li></ol>

Kulturprotokollen som presenteres her kan opprettholde riktig og kontinuerlig museembryoutvikling ex utero i opptil seks dager, fra E5,5 til E11. Tidligere kunne embryoer på disse utviklingsstadiene utvikle seg normalt i kulturen bare i korte perioder (opptil 48 timer)15. Koblingen av gassreguleringsmodulen til rullekulturinkubatoren for presis kontroll av oksygenkonsentrasjon og hyperbar gasstrykk er avgjørende for riktig museembryokultur som er beskrevet her. Økning av gasstrykket ti...

Intrauterin utvikling av pattedyret embryo har begrenset studiet av de tidlige stadiene av postimplantasjon utvikling1,2. Utilgjengeligheten av det utviklende embryoet hemmer forståelsen av viktige utviklingsprosesser som oppstår etter embryoimplantatene i livmoren, for eksempel etableringen av dyrekroppsplanen, spesifikasjon av bakterielagene eller dannelsen av vev og organer. Videre gjør den svært lille størrelsen på det tidlige postimplanterte embryoet det vanskelig å observere ved intravital avbildning i utero før E103. Manglende evne til å observere og manipulere levende embryoer på disse stadiene har begrenset studiet av tidlig embryogenese etterimplantasjon til øyeblikksbilder under utvikling.
Protokoller for in vitro kultur av preimplantasjon pattedyr embryoer er veletablerte, pålitelige og regelmessig utnyttet4. Likevel hadde forsøk på å etablere ex utero kultursystemer som var i stand til å støtte riktig pattedyr postimplantasjon embryovekst begrenset suksess5. En rekke kulturteknikker har blitt foreslått i over et århundre, hovedsakelig ved å dyrke embryoene i konvensjonelle statiske plater6,7,8 eller roterende flasker (rullekulturer)5,9,10. Disse plattformene viste seg å være nyttige for å utvide kunnskapen om pattedyrutvikling etter implantasjon11,12, til tross for at de var svært ineffektive for normal embryooverlevelse og begrenset til korte perioder. Embryoene begynte å vise utviklingshemming og morfologiske anomalier så tidlig som 24-48 timer etter kulturinitiering.
Denne studien gir en detaljert beskrivelse for å sette opp ex utero embryokultursystemet som tillater kontinuerlig utvikling fra pregastrulation til avanserte organogenese stadier over opptil seks dager etterimplantasjon utvikling13. Dette dokumentet beskriver den forbedrede rullekulturprotokollen som støtter veksten av E7,5 embryoer (nevral plate og hodefoldtrinn) til bakre lemdannelsesstadium (~E11) og den utvidede kulturen fra E5.5/E6.5 ved å kombinere kultur på statiske plater og rullekulturplattformer.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size filter (250 mL)</td>
			<td>JetBiofil</td>
			<td>FCA-206-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size syringe PVDF filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-well &#181;-plates glass bottom/ibiTreat</td>
			<td>iBidi</td>
			<td>80827/80826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle with adaptor cap for gas inlet</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Hole)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 06</td>
			<td>Used to seal the bottles to the drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Solid)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 07</td>
			<td>Used to seal the rotating drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture bottles</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 03/BTC 04</td>
			<td>Either Glass Bottles (Small) BTC 03 or Glass Bottles (Large) BTC 04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-glucose Monohydrate</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10100-30/45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Pressure Gauge</td>
			<td>Shanghai Benxu Electronics Technology co. Ltd</td>
			<td>BX-DPG80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>11880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>02-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>04-013-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas regulation module</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td>HannaLab1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050061</td>
			<td>glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps (Dumont #5, #55)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (glass)</td>
			<td>Hilgenberg</td>
			<td>3150102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (plastic)</td>
			<td>Alexred</td>
			<td>SO P12201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes (60 mm and 100 mm)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351007/351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision incubator system</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC01</td>
			<td>BTC01 model with gas bubbler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro-coagulant sterile test tubes (5 mL)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#456005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat whole embryo culture serum</td>
			<td>ENVIGO Bioproducts</td>
			<td>B-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic microscope equipped with heating plate</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringes (5, 10 ml) for sera filtration</td>
			<td>Pic Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis

Postimplantasjon pattedyr embryokultursmetoder har generelt vært ineffektive og begrenset til korte perioder etter disseksjon ut av livmoren. Plattformer har nylig blitt utviklet for svært robust og langvarig ex utero kultur av museembryoer fra eggsylindrede stadier til avansert organogenese. Disse plattformene muliggjør hensiktsmessig og trofast utvikling av pregastrulaterende embryoer (E5.5) til bakre lemdannelsesstadium (E11). Sen gastrulatering embryoer (E7.5) dyrkes i roterende flasker i disse innstillingene, mens utvidet kultur fra pregastrulation stadier (E5.5 eller E6.5) krever en kombinasjon av statiske og roterende flaske kulturer. I tillegg er sensitiv regulering av O2 - og CO2-konsentrasjon , gasstrykk, glukosenivåer og bruk av et spesifikt ex utero-kulturmedium avgjørende for riktig embryoutvikling. Her er en detaljert trinnvis protokoll for utvidet ex utero mus embryokultur gitt. Evnen til å dyrke normale museembryoer ex utero fra gastrulation til organogenese representerer et verdifullt verktøy for å karakterisere effekten av ulike eksperimentelle perturbasjoner under embryonal utvikling.

Rullekulturforholdene beskrevet for E7,5 embryoer (sen-gastrulation stadium) støtter konstant og normal embryovekst med en gjennomsnittlig effektivitet nær 75% etter 4 kulturdager (figur 2 og tabell 1). Effektiviteten av embryoutvikling kan variere på tvers av ulike musegenetiske bakgrunner, men er konsekvent robust (figur 2C). Tilskudd med HBS i stedet for HCS gir en effektivitet på ~ 68% etter 4 dager med ex utero kultur, avhengig...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis at JoVE.com

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

En forbedret plattform for hel-embryo kultur tillater kontinuerlig og robust ex utero utvikling av postimplantasjon mus embryoer i opptil seks dager, fra pregastrulation stadier til avansert organogenese. I denne protokollen beskriver vi standardprosedyren for vellykket embryokultur ved hjelp av statiske plater og roterende flaskesystemer.

Eks Utero Kultur av museembryoer fra pregastrkulering til avansert organogenese

Postimplantation mammalian embryo culture methods have been generally inefficient and limited to brief periods after dissection out of the uterus. ...

Denne metoden vil være grunnleggende for å forstå gastrulation langs en formasjon hos pattedyr. Ved å tillate eksperimentering i levende embryoer under embryonale stadier som lenge har vært skjult inne i mors livmor. Det tillater, fortsetter effektiv og passende vekst av museembryoer utenfor livmoren i en lengre periode på opptil 6 dager.Rask og tilstrekkelig embryospredning og pregastrulering av gasskonsentrasjonen og trykket er de mest kritiske trinnene for vellykket embryovekst. For å begynne å dyrke 7,5 dager gamle eller mer avanserte museembryoer, slå på rotatoren og varmeenheten til rullekulturinkubatorsystemet i minst 1 time før embryoet disseksjoner. Tilsett også autoklavvann til gassinntaksflasken og utløpsprøverøret.Deretter slår du på gassregulatormodulen ved å trykke på hovedbryteren, og deretter bruker du de respektive kontrollerne til å sette oksygen- og karbondioksidverdiene til 5%Åpne gassregulatoren og flytt spenningsbryteren i trykksenderen for å sette gasstrykket til omtrent 6,5 til 7 pund per kvadrattomme. Bekreft gasstrykkverdien ved hjelp av en digital trykkmåler. Overvåk gassstrømmen ved å kontrollere frekvensen av bobler som er opprettet inne i utløpsvannet fylt reagensrør tildelt inne i presisjon inkubatoren.Still inn riktig boblehastighet ved å lukke eller åpne gassstrømventilen på vannflaskens lokk. Sørg for at gassstrømmen tillater dannelse av bobler med en hastighet på 2 til 4 bobler per sekund eller sett boblestrømmen på det første punktet der bobler kommer ut til det vannfylte utløpsrøret. Fyll deretter kulturflaskene med 2 milliliter kulturmedium.Bruk de hule silisiumbollene til å forsegle flaskene og koble dem til den hule roterende trommelen for forhåndslikevekt i 1 time. Oppbevar de tomme plassene i den roterende trommelen forseglet ved hjelp av de faste bollene. Deretter dissekerer embryoene fra en euthanized gravid kvinnelig mus.Rengjør magen med 70% etanol og kutt huden og bukveggen ved hjelp av saks. Finn den ene enden av livmoren og kutt i skjæringspunktet mellom eggstokken og livmoren. Fortsett å kutte langs livmoren til den andre enden og overfør til en 100 millimeter Petri-tallerken fylt med DPBS.Vask konseptbrukerne raskt i DPBS og kutt i par for å lette embryohåndtering. Flytt alle par av conceptuses til forhåndslikevektet disseksjonsmedium i en 60 millimeter Petri-tallerken, og kutt deretter inn i de enkelte konseptbrukerne. Deretter bruker du et par brutto tang, fjern livmorveggen til konseptbrukerne ved å rive livmorvevet, og bruk deretter fine, mikrokirurgiske tang, kutt spissen av den pæreformede decidua.Sett tangene ved siden av embryoet parallelt med sin lange akse og åpne tangene for å dele decidua i halvdeler. Til slutt, ved hjelp av fine tang, ta tak i embryoet fra decidua og skrell parietal eggeplommesekken av embryoet, og la den intakte ektoplacentale kjeglen festet til eggsylinderen. Velg embryoene i nevralplaten, eller tidlig hodefoldstadium, som ikke viser noen skade i epiblasten.Overfør 5 til 6 utvalgte embryoer per flaske til de forhåndslikevektede glasskulturflaskene og legg flaskene i det roterende kultursystemet ved 37 grader Celsius, i en atmosfære på 5% oksygen og 5% karbondioksid. Til kultur pregastrulation og tidlig gastrulation embryoer og statiske plater, tilsett 250 mikroliter av nylagde ex-utero embryo kultur medium til hver brønn av en 8 brønnplate. Plasser platene inne i en karbondioksidinkubator ved 37 grader Celsius for forhåndslikevekt.Etter å ha dissekert embryoene ut av livmoren som vist tidligere, overfør de enkelte embryoene til hver brønn på 8 brønnplaten ved hjelp av en mikropipette og plasser platen inne i inkubatoren med 5% karbondioksid ved 37 grader Celsius. Bilde embryoene under et stereomikroskop og velg for kultur bare de med et velformet fosterhule uten tydelig skade og uten Reicherts membran. Rullekulturforholdene beskrevet i denne protokollen for 7,5 dager gamle embryoer støtter konstant og normal embryovekst med en gjennomsnittlig effektivitet nær 75% etter 4 kulturdager.Effektiviteten av embryoutvikling varierer på tvers av forskjellige musegenetiske bakgrunner, men er konsekvent robust. Tilskudd med HBS i stedet for HCS gir en effektivitet på ca. 68% etter 4 dager med kultur. Utviklingen av 6,5 embryoer og statiske plater er riktig rekapitulert med en effektivitet på mer enn 90% ved bruk av ex-utero embryokulturmedium med både HCS og HBS.Kulturer som starter fra pregastrulaterende embryoer viser en 46% effektivitet av riktig utvikling til tidlig somite stadium og nesten 17% av embryoene fullfører riktig utvikling etter 6 dager med kultur. Morfogenesen og vevsutviklingen fortsetter riktig til 42 somitter. Representative utviklingsfeil observert i embryoer for kulturer initiert fra embryonal dag 7,5, 6,5 og 5,5 er vist her.Embryoer med mindre skade på epiblast eller embryoer som beholder Reicherts membran, bør kastes. Tidlige embryoer vil ikke vokse riktig eller vise alvorlige utviklingsforsinkelser mens vedlegg av embryonal epiblast til overflaten av platen vil føre til svikt i videre embryoutvikling. De viktigste abnormitetene som observeres i defekte embryoer er utviklingen av bakre region utenfor eggeplommesekken eller defekter i veksten av nevrale folder.I kulturer utviklet fra 5,5 dager gamle embryoer observeres ofte utviklingsfeil er tilstedeværelsen av en liten, underutviklet epiblast. Ved hjelp av denne metoden kan forskere utføre en rekke fysiske eller kjemiske manipulasjoner i utviklingen av postimplanterte embryoer. For eksempel manipulering, cellulær transplantasjon eller avledningssporing.Denne metoden baner ikke bare vei for å studere mus etter implantasjon som utvikler seg i detalj, men også for å implementere lignende kulturmetoder i embryoer fra andre arter, for eksempel mennesker.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimalisert<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Dyrking av Chick embryoer til avanserte stadier av utvikling

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

I Utero Intra-hjerte Tomato-lektin injeksjoner på mus embryoer til Gauge Nedsatt Blood Flow

The formation and perfusion of developing renal blood vessels (apart from glomeruli) are greatly understudied. As vasculature develops via angiogenesis ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation og organotypiske Slice Culture of Mouse hippocampus Tissue

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex vivo Culture of Faryngeal Arches å studere Hjerte og Muscle stamfedre og deres nisje

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Bruke<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Upright Droplet Kulturer av Whole føtale organer å studere utviklingsprosesser i løpet Mouse organogenesen

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primær endodermal epithelial Cell Culture fra plommesekken membran av japanske Quail embryoer

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

Kvantitativ analyse av Protein Expression å studere Lineage Spesifikasjon i Mouse Før implantasjon Embryoer

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

Avledning av stamcelleforskningen linjer fra mus Preimplantation embryo

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

Isolasjon, kultur og adipogen induksjon av Neural Crest Original Adipose-Avledet stamceller fra periaortisk fettvev

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Utarbeidelse av små RNA biblioteker for sekvensering fra tidlig mus embryoer

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...