Name: ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis
Uploaded: 2021-10-19T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis at JoVE.com

Detta arbete finansierades av Pascal och Ilana Mantoux; Europeiska forskningsrådet (ERC-Cog-2016 726497-cellnaivety); Flygvärdinnans medicinska forskningsråd (FAMRI); Professur i Israel Cancer Research Fund (ICRF), BSF, Helen och Martin Kimmel Institute for Stem Cell Research, Helen och Martin Kimmel Award for Innovative Investigation; Israel Science Foundation (ISF), Minerva, Sherman Institute for Medicinal Chemistry, Nella och Leon Benoziyo Center for Neurological Diseases, David och Fela Shapell Family Center for Genetic Disorders Research, Kekst Family Institute for Medical Genetics, Dr. Beth Rom-Rymer Stem Cell Research Fund, Edmond de Rothschild Foundations, Zantker Charitable Foundation, Estate of Zvia Zeroni.

Alla djurförsök utfördes enligt Weizmann Institute of Science:s djurskyddsriktlinjer och godkändes av relevanta Weizmann Institute IACUC (#01390120-1, 01330120-2, 33520117-2). Friska gravida kvinnor ombads att ge sitt informerade samtycke till att samla in blod från navelsträngen, vilket godkändes av Rambam Medical Center Helsinki Committee (#RMB-0452-15). Friska vuxna ombads att få sitt informerade samtycke till att få blod samlat enligt riktlinjerna från Weizmann Institute of Science Helsinki Committee (#1566...

<ol>
	<li>New, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-embryo+culture+and+the+study+of+mammalian+embryos+during+organogenesis.">Whole-embryo culture and the study of mammalian embryos during organogenesis.</a> Biological Reviews of the Cambridge Philosophical Society. 53 (1), 81-122 (1978).</li><li>Tam, P. P., Behringer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+gastrulation:+the+formation+of+a+mammalian+body+plan.">Mouse gastrulation: the formation of a mammalian body plan.</a> Mechanisms of Development. 68 (1-2), 3-25 (1997).</li><li>Huang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+mouse+embryos.">Intravital imaging of mouse embryos.</a> Science. 368 (6487), 181-186 (2020).</li><li>White, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-lived+binding+of+Sox2+to+DNA+predicts+cell+fate+in+the+four-cell+mouse+embryo.">Long-lived binding of Sox2 to DNA predicts cell fate in the four-cell mouse embryo.</a> Cell. 165 (1), 75-87 (2016).</li><li>Tam, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postimplantation+mouse+development:+whole+embryo+culture+and+micro-manipulation.">Postimplantation mouse development: whole embryo culture and micro-manipulation.</a> International Journal of Developmental Biology. 42 (7), 895-902 (1998).</li><li>Nicholas, J. S., Rudnick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+rat+embryos+in+tissue+culture.">The development of rat embryos in tissue culture.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 20 (12), 656-658 (1934).</li><li>New, D. A., Stein, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultivation+of+mouse+embryos+in+vitro.">Cultivation of mouse embryos in vitro.</a> Nature. 199, 297-299 (1963).</li><li>Rivera-P&#233;rez, J. A., Jones, V., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+whole+mouse+embryos+at+early+postimplantation+to+organogenesis+stages:+developmental+staging+and+methods.">Culture of whole mouse embryos at early postimplantation to organogenesis stages: developmental staging and methods.</a> Methods in Enzymology. 476, 185-203 (2010).</li><li>New, D. A. T., Coppola, P. T., Terry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+explanted+rat+embryos+in+rotating+tubes.">Culture of explanted rat embryos in rotating tubes.</a> Journal of Reproduction and Fertility. 35 (1), 135-138 (1973).</li><li>Cockroft, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+and+historical+review+of+culture+methods+for+vertebrates.">A comparative and historical review of culture methods for vertebrates.</a> International Journal of Developmental Biology. 41 (12), 127-137 (1997).</li><li>Parameswaran, M., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalisation+of+cell+fate+and+morphogenetic+movement+of+the+mesoderm+during+mouse+gastrulation.">Regionalisation of cell fate and morphogenetic movement of the mesoderm during mouse gastrulation.</a> Developmental Genetics. 17 (1), 16-28 (1995).</li><li>Beddington, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+second+neural+axis+by+the+mouse+node.">Induction of a second neural axis by the mouse node.</a> Development. 120 (3), 613-620 (1994).</li><li>Aguilera-Castrejon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+utero+mouse+embryogenesis+from+pre-gastrulation+to+late+organogenesis.">Ex utero mouse embryogenesis from pre-gastrulation to late organogenesis.</a> Nature. 593 (7857), 119-124 (2021).</li><li>Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+rat+serum+suitable+for+mammalian+whole+embryo+culture.">Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51969 (2014).</li><li>Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture+and+manipulation+of+postimplantation+embryos.">Isolation, culture and manipulation of postimplantation embryos.</a> Manipulating the Mouse Embryo: a Laboratory Manual. , 149-193 (2014).</li><li>Takahashi, M., Nomura, T., Osumi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transferring+genes+into+cultured+mammalian+embryos+by+electroporation.">Transferring genes into cultured mammalian embryos by electroporation.</a> Development, Growth and Differentiation. 50 (6), 485-497 (2008).</li><li>Mathieu, J., Ruohola-Baker, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+remodeling+during+the+loss+and+acquisition+of+pluripotency.">Metabolic remodeling during the loss and acquisition of pluripotency.</a> Development. 144 (4), 541-551 (2017).</li><li>Sturm, K., Tam, P. P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+whole+postimplantation+embryos+and+germ+layer+derivatives.">Isolation and culture of whole postimplantation embryos and germ layer derivatives.</a> Methods in Enzymology. 225, 164-190 (1993).</li></ol>

Odlingsprotokollet som presenteras häri kan upprätthålla korrekt och kontinuerlig utveckling av musembryon ex utero i upp till sex dagar, från E5.5 till E11. Tidigare kunde embryon i dessa utvecklingsstadier utvecklas normalt i kultur endast under korta perioder (upp till 48 h)15. Kopplingen av gasregleringsmodulen till rullodlingsinkubatorn för exakt kontroll av syrekoncentration och övertrycksgastryck är avgörande för den korrekta musembryonkulturen som beskrivs häri. Att öka...

Intrauterin utveckling av däggdjursembryon har begränsat studien av de tidiga stadierna av postimplantation utveckling1,2. Det utvecklande embryots otillgänglighet hindrar förståelsen av viktiga utvecklingsprocesser som uppstår efter embryoimplantaten i livmodern, såsom upprättandet av djurkroppsplanen, specifikation av bakterieskikten eller bildandet av vävnader och organ. Dessutom gör den mycket lilla storleken på det tidiga postimplanterade embryot det svårt att observera genom intravital avbildning in utero före E103. Oförmågan att observera och manipulera levande embryon i dessa skeden har begränsat studien av tidig postimplantation embryogenesis till ögonblicksbilder under utvecklingen.
Protokoll för in vitro-kultur av preimplantation däggdjur embryon är väl etablerade, tillförlitliga och regelbundet används4. Försök att upprätta ex utero kultur system som kan stödja korrekt däggdjur postimplantation embryo tillväxt hade dock begränsad framgång5. En mängd olika kulturtekniker har föreslagits i över ett sekel, främst genom att odla embryona i konventionella statiska plattor6,7,8 eller roterande flaskor (rullkulturer)5,9,10. Dessa plattformar visade sig vara till hjälp för att utöka kunskapen om däggdjursutveckling efter implantation11,12, trots att de var mycket ineffektiva för normal embryoöverlevnad och begränsade till korta perioder. Embryona började visa utvecklingsmässiga retardation och morfologiska anomalier så tidigt som 24-48 h efter kulturinitiering.
Denna studie ger en detaljerad beskrivning för att inrätta ex utero embryo kultursystem som möjliggör kontinuerlig utveckling från pregastrulation till avancerade organogenes stadier under upp till sex dagar av postimplantation utveckling13. Detta dokument beskriver det förbättrade rullkulturprotokollet som stöder tillväxten av E7.5 embryon (neurala plattor och huvudfold-stadium) fram till bakbenet bildas scenen (~ E11) och den utökade kulturen från E5.5/E6.5 genom att kombinera kultur på statiska plattor och rullkultur plattformar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size filter (250 mL)</td>
			<td>JetBiofil</td>
			<td>FCA-206-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m pore size syringe PVDF filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGV033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-well &#181;-plates glass bottom/ibiTreat</td>
			<td>iBidi</td>
			<td>80827/80826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle with adaptor cap for gas inlet</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Hole)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 06</td>
			<td>Used to seal the bottles to the drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bungs (Solid)</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 07</td>
			<td>Used to seal the rotating drum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture bottles</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC 03/BTC 04</td>
			<td>Either Glass Bottles (Small) BTC 03 or Glass Bottles (Large) BTC 04</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-glucose Monohydrate</td>
			<td>J.T. Baker</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond knife</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10100-30/45</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Pressure Gauge</td>
			<td>Shanghai Benxu Electronics Technology co. Ltd</td>
			<td>BX-DPG80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>11880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>02-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>04-013-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas regulation module</td>
			<td>Arad Technologies</td>
			<td>HannaLab1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>35050061</td>
			<td>glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15630056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps (Dumont #5, #55)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (glass)</td>
			<td>Hilgenberg</td>
			<td>3150102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes (plastic)</td>
			<td>Alexred</td>
			<td>SO P12201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Biological industries</td>
			<td>03-031-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dishes (60 mm and 100 mm)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351007/351029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision incubator system</td>
			<td>B.T.C. Engineering, Cullum Starr Precision Engineering</td>
			<td>BTC01</td>
			<td>BTC01 model with gas bubbler kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pro-coagulant sterile test tubes (5 mL)</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#456005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat whole embryo culture serum</td>
			<td>ENVIGO Bioproducts</td>
			<td>B-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic microscope equipped with heating plate</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringes (5, 10 ml) for sera filtration</td>
			<td>Pic Solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex utero culture of mouse embryos from pregastrulation to advanced organogenesis

Postimplantation däggdjur embryo kultur metoder har i allmänhet varit ineffektiva och begränsade till korta perioder efter dissekering ut ur livmodern. Plattformar har nyligen utvecklats för mycket robust och långvarig ex utero kultur av musembryon från äggcylinderstadier till avancerad organogenes. Dessa plattformar möjliggör lämplig och trogen utveckling av förgastrullerande embryon (E5.5) fram till bildandet av bakben (E11). Sena gastrulaterande embryon (E7.5) odlas i roterande flaskor i dessa miljöer, medan utökad odling från förgastrulationsstadier (E5.5 eller E6.5) kräver en kombination av statiska och roterande flaskkulturer. Dessutom är känslig reglering av O2- och CO2-koncentration, gastryck, glukosnivåer och användning av ett specifikt ex utero-odlingsmedium avgörande för korrekt embryoutveckling. Här tillhandahålls ett detaljerat steg-för-steg-protokoll för utökad ex utero-musembryonkultur. Förmågan att odla normala musembryon ex utero från gastrulation till organogenes representerar ett värdefullt verktyg för att karakterisera effekten av olika experimentella störtben under embryonal utveckling.

De rullodlingsförhållanden som beskrivs för E7,5-embryon (sent gastrulationsstadium) stöder konstant och normal embryotillväxt med en genomsnittlig effektivitet nära 75% efter 4 kulturdagar (figur 2 och tabell 1). Effektiviteten i embryoutvecklingen kan variera mellan olika musgenetiska bakgrunder men är genomgående robust (figur 2C). Tillskott med HBS istället för HCS ger en effektivitet på ~ 68% efter 4 dagars ex utero-kultur</e...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis at JoVE.com

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

En förbättrad plattform för helembryonkultur möjliggör kontinuerlig och robust ex utero-utveckling av postimplantationmusembryon i upp till sex dagar, från pregastrulationsstadier till avancerad organogenes. I detta protokoll beskriver vi standardproceduren för framgångsrik embryokultur med statiska plattor och roterande flasksystem.

Ex Utero Kultur av musembryon från pregastrulation till avancerad organogenes

Postimplantation mammalian embryo culture methods have been generally inefficient and limited to brief periods after dissection out of the uterus. ...

Denna metod kommer att vara grundläggande för att förstå gastrulation längs en formation hos däggdjur. Genom att tillåta experiment i levande embryon under embryonala stadier som länge har gömts inuti moderns livmoder. Det möjliggör, fortsätter effektiv och lämplig tillväxt av musembryon utanför livmodern under en längre period på upp till 6 dagar.Snabb och adekvat embryo dissekering och förgastrulation av gaskoncentrationen och trycket är de mest kritiska stegen för framgångsrik embryotillväxt. För att börja odla 7,5 dagar gamla eller mer avancerade musembryon, slå på rotatorn och värmeenheten i rullodlingsinkubatorsystemet i minst 1 timme före embryodissektionerna. Tillsätt också autoklavvatten till gasinloppsflaskan och utloppsteströret.Slå sedan på gasregulatormodulen genom att trycka på huvudbrytaren och använd sedan respektive styrenheter för att ställa in syre- och koldioxidvärdena på 5%Öppna gasregulatorn och flytta spänningsbrytaren i trycksändaren för att ställa in gastrycket på cirka 6,5 till 7 pund per kvadrattum. Bekräfta gastrycksvärdet med hjälp av en digital tryckmätare. Övervaka gasflödet genom att kontrollera hastigheten på bubblor som skapas inuti utloppsvattenfyllda provröret som tilldelats inuti precisionsinkubatorn.Ställ in rätt bubbelhastighet genom att stänga eller öppna gasflödesventilen på vattenflaskans lock. Se till att gasflödet möjliggör bildandet av bubblor med en hastighet av 2 till 4 bubblor per sekund eller ställ in bubbelflödet vid den första punkten där bubblande kommer ut till det vattenfyllda utloppsröret. Fyll sedan odlingsflaskorna med 2 milliliter kulturmedium.Använd de ihåliga silikonbunggarna för att försegla flaskorna och plugga in dem i den ihåliga roterande trumman för förkvämmelse i 1 timme. Håll de tomma utrymmena i den roterande trumman förseglade med hjälp av de fasta bungsna. Dissekera sedan embryona från en avlivad gravid kvinnlig mus.Rengör buken med 70% etanol och skär huden och bukväggen med sax. Hitta ena änden av livmodern och skär vid korsningen mellan äggstocken och livmodern. Fortsätt skära längs livmodern tills den andra änden och överför till en 100 millimeter Petriskål fylld med DPBS.Tvätta snabbt conceptuses i DPBS och skär i par för att underlätta embryohantering. Flytta alla par av konceptanvändar till förkvilibrerat dissekeringsmedium i en 60 millimeter Petri-maträtt och skär sedan i de enskilda konceptanvändarna. Därefter, med hjälp av ett par grova tångar, ta bort livmoderväggen i conceptuses genom att riva livmodervävnaden och sedan använda fina, mikrokirurgiska tångar, skär spetsen på den päronformade decidua.Sätt i tången bredvid embryot parallellt med dess långa axel och öppna tången för att dela decidua i halvor. Slutligen, med hjälp av fina tångar, ta tag i embryot från decidua och skala parietalulula säcken av embryot och lämna den intakta ectoplacental konen fäst vid äggcylindern. Välj embryon i neuralplattan, eller det tidiga huvudvecket, som inte visar någon skada i epiblasten.Överför 5 till 6 utvalda embryon per flaska till de färdigfördelade glaskulturflaskorna och placera flaskorna i det roterande odlingssystemet vid 37 grader Celsius, i en atmosfär av 5% syre och 5% koldioxid. För att odla pregastrulation och tidiga gastrulationsembryon och statiska plattor, tillsätt 250 mikroliter nyberedd ex-utero embryokulturmedium till varje brunn på en 8 välplatta. Placera plattorna inuti en koldioxidinkubator vid 37 grader Celsius för fördilibrering.Efter att ha dissekerat embryona ut ur livmodern som visats tidigare, överför de enskilda embryona till varje brunn på 8-brunnsplattan med en mikropipett och placera plattan inuti inkubatorn med 5% koldioxid vid 37 grader Celsius. Föreställ embryona under ett stereomikroskop och välj endast för kultur de med en välformad fosterhinnan utan uppenbar skada och utan Reicherts membran. Rullkulturen villkor som beskrivs i detta protokoll för 7,5 dagar gamla embryon stöder konstant och normala embryo tillväxt med en genomsnittlig effektivitet nära 75%efter 4 kultur dagar.Effektiviteten i embryoutveckling varierar över olika musgenetiska bakgrunder men är konsekvent robust. Tillskott med HBS istället för HCS ger en effektivitet på cirka 68%efter 4 dagars kultur. Utvecklingen av 6,5 embryon och statiska plattor rekapituleras korrekt med en effektivitet på mer än 90% med ex-utero embryokulturmedium med både HCS och HBS.Kulturer som börjar från pregastrulaterande embryon visar en 46% effektivitet av korrekt utveckling till det tidiga somitstadiet och nästan 17% av embryona slutför korrekt utveckling efter 6 dagars kultur. Morfogenes och vävnad utveckling fortsätter ordentligt tills 42 somites. Representativa utvecklingsdefekter som observerats i embryon för kulturer som initierats från embryonala dag 7,5, 6,5 och 5,5 visas här.Embryon med mindre skador på epiblast eller embryon som behåller Reicherts membran ska kasseras. Tidiga embryon kommer inte att växa ordentligt eller visa allvarliga utvecklingsfördröjningar medan fastsättning av den embryonala epiblasten på plattans yta kommer att orsaka misslyckandet med ytterligare embryoutveckling. De viktigaste avvikelserna som observerats i defekta embryon är utvecklingen av den bakre regionen utanför äggula säcken eller defekter i tillväxten av neurala veck.I kulturer som utvecklats från 5,5 dagar gamla embryon observeras ofta utvecklingsdefekt är närvaron av en liten, underutvecklad epiblast. Med denna metod kan forskare utföra en mängd olika fysiska eller kemiska manipuleringar för att utveckla postimplantaterade embryon. Till exempel manipulation, cellulär transplantation eller härstamning spårning.Denna metod banar inte bara väg för att studera mus efter implantation som utvecklas i detalj, men också för att genomföra liknande odlingsmetoder i embryon från andra arter, såsom mänskliga.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ex Utero Culture of Mouse Embryos from Pregastrulation to Advanced Organogenesis

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimized Ex-ovo Culturing of Chick Embryos to Advanced Stages of Development

Optimerad<em&gt; Ex-ovo</em&gt; Odling av kycklingembryon till avancerade stadier av utveckling

Research in anatomy, embryology, and developmental biology has largely relied on the use of model organisms. In order to study development in live embryos ...

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero Intra-cardiac Tomato-lectin Injections on Mouse Embryos to Gauge Renal Blood Flow

In Utero Intrakardiella Tomat-lektin Injektioner på musembryon att Gauge renala blodflödet

The formation and perfusion of developing renal blood vessels (apart from glomeruli) are greatly understudied. As vasculature develops via angiogenesis ...

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Electroporation and Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Tissue

Ex Utero Elektroporation och Organotypic Slice Kultur av Mouse hippocampus Tissue

Mouse genetics offers a powerful tool determining the role of specific genes during development. Analyzing the resulting phenotypes by immunohistochemical ...

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex Vivo Culture of Pharyngeal Arches to Study Heart and Muscle Progenitors and Their Niche

Ex vivo Kultur av Pharyngeal Arches att studera hjärta och muskelstamfäder och deras nisch

The pharyngeal mesoderm of developing embryos contributes to broad regions of head and heart musculature. We have developed a novel method to study head ...

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Using Ex Vivo Upright Droplet Cultures of Whole Fetal Organs to Study Developmental Processes during Mouse Organogenesis

Använda<em&gt; Ex vivo</em&gt; Upright Dropp Kulturer av hela organ hos fostren att studera utvecklingsprocesser under Mouse Organogenesis

Investigating organogenesis in utero is a technically challenging process in placental mammals due to inaccessibility of reagents to embryos that develop ...

Primary Endodermal Epithelial Cell Culture from the Yolk Sac Membrane of Japanese Quail Embryos

Primär endodermalt epitelceller Culture från gulesäcken membran av japansk vaktel embryon

We established an endodermal epithelial cell culture model (EEC) for studying the function of certain enzymes and proteins in mediating nutrient ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

Kvantitativ analys av proteinuttryck att studera Lineage Specifikation i mus Preimplantatorisk embryon

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Derivation of Stem Cell Lines from Mouse Preimplantation Embryos

Härledning av stamcellslinjer från musembryon preimplantatorisk

Mouse embryonic stem cell (mESC) derivation is the process by which pluripotent cell lines are established from preimplantation embryos. These lines ...

Isolation, Culture, and Adipogenic Induction of Neural Crest Original Adipose-Derived Stem Cells from Periaortic Adipose Tissue

Isolering, kultur och adipogenic Induktion av neurala Crest Original Fett-Härledda stamceller från periaorektisk fettvävnad

An excessive amount of adipose tissue surrounding the blood vessels (perivascular adipose tissue, also known as PVAT) is associated with a high risk of ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Beredning av små RNA-bibliotek för sekvensering från tidiga musembryon

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...