Name: microdissection and dissociation of the murine oviduct: individual segment identification and single cell isolation
Uploaded: 2021-11-04T13:00:00
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이 작품은 AMW (BCRP W81XWH-14-1-0425)에 대한 DoD 획기적인 상에 의해 부분적으로 지원되었다. KCR은 교내 펠로우십에 의해 부분적으로 지원되었다: Pease 암 전 박사 과정 펠로우십과 메리 갈빈 부담 생물 의학 과학 및 캘리포니아 대학, 리버 사이드, 교내 상에서 박사 전 펠로우십: 대학원 위원회 펠러십 위원회 논문 연구 보조금 및 대학원 부문 논문 연도 프로그램 상. 저자는 길리안 M. 라이트와 알리사 M. 쿠마리에게 이 방법의 초기 문제 해결에 도움을 준 것에 대해 감사드립니다.

모든 동물 취급 및 절차는 캘리포니아 대학, 리버사이드 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되고 실험실 동물 관리를 위한 미국 협회, 미국 농무부 및 건강의 국가 학회에서 지침에 따라 이었습니다. 설명된 방법은 C57BL/6 성인, 여성 마우스를 활용하였다. 모든 동물은 조직 수확 전에 참수에 의해 안락사되었다.
참고: 파란색 염료를 사용하여 배반의 효율적인 해부 및 ?...

<ol>
	<li>Stewart, C. A., et al., Kubiak, J. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mouse oviduct developmemt in Mouse Development: From Oocyte to Stem Cells. , 247-262 (2012).</li><li>Ford, M. 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(45), e2565 (2010).</li><li>Schroeder, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RIN:+an+RNA+integrity+number+for+assigning+integrity+values+to+RNA+measurements.">The RIN: an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements.</a> BMC Molecular Biology. 7, 3 (2006).</li><li>McGlade, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-type+specific+analysis+of+physiological+action+of+estrogen+in+mouse+oviducts.">Cell-type specific analysis of physiological action of estrogen in mouse oviducts.</a> The FASEB Journal. 35 (5), 21563 (2021).</li></ol>

oviduct의 세 세그먼트는 조직학적으로, 형태학적으로, 및 기능적으로 구별1,2,3이다. 상피는 oviduct의 한쪽 끝에서 다른 쪽 끝까지 크게 다릅니다. Ciliated 세포는 fimbrial/fundibular 끝에 지배, 분비 세포는 isthmic 지역에서 지배 하는 동안1. 이 전반적인 그라데이션은 한동안 인정되었지만, 최근 연구는 oviductal 세그먼?...

뮤린 배관은 인간 나팔관1과 기능 및 형태학에서 유사합니다. 둘 다 역사적으로 설명된 두 개의 상피 상피 상피 세포로 구성된 의사 섬광 상부로 구성됩니다: 양모 세포 및 분비 세포1,2. oviduct는 세 가지 고전적으로 인식 세그먼트가 있습니다 : fundibulum, 암풀라, 그리고 isthmus. 최근 연구에서, 하와카르 외. 3 7개의 명백한 인구로 상피 세포의 분류의 확장으로 이끌어 내는 oviduct 형태학 및 유전자 발현을 조사했습니다. 또한, 그들은 oviduct3의 뚜렷한 세그먼트로 ampullary-isthmus 접합을 설립했다. 본 명세서에서 기재된 방법은, 농가, 암풀라 및 isthmus에 초점을 맞추고, ampullary-isthmic 접합뿐만 아니라 2,3을 포함하도록 쉽게 확장될 수 있었다. 기금 부족 영역은 오시덕트의 오스티움 또는 개방을 포함하고 있으며, 근접 줄기뿐만 아니라 피모브리알 영역을 포함한다. 자궁쪽으로 이동, 다음 암풀라, 그리고 isthmus입니다. Ciliated 세포는 이 지역의 단부 끝에서 가장 두드러지며, 난소에 근접하거나, 또는 fundibulum이 있는 반면, 분비 세포는 근위 말쪽 또는 isthmus 세그먼트1에서 가장 두드러집니다. 인간 나팔관과는 달리, 뮤린 배관은 메소살핀스, 넓은 인대 복막1,4의 연장에 의해 지원되는 코일 구조입니다. 또한, 마우스 oviduct는 oviduct4로 oocyte 전송의 가능성을 증가 bursal 낭에 싸여있다. 암풀라는 자궁5에 들어가기 전에 개발 배아가 isthmus로 통과하는 수정의 위치로 확인됩니다. 관 세그먼트는 직경 200-400 μm이고 더 긴 ampullary 및 isthmus 영역은 길이가 약 0.5-1.0cm입니다4. oviduct는 에스스트라이스트 사이클 동안 불협화음과 암풀라와 인펀드티불룸은 isthmus1보다 더 현명하지 못합니다.
세포의 증식, 특히 분비 세포는 골반 구멍에서 발견되는 장종양에 전구체 병변을 특성화합니다6. 이러한 전구체 장피상피성 병변은 피모브리알 영역에서만 난소 상피에서 발생합니다. 병변 형성이 일반적으로 우세한 세포 유형이 분모가 아닌 분비2,7,8이 되는 이 부위로 제한되는 이유는 알려지지 않았다. 정상적인 생리적 기능 측면에서 지역성은 난소암의 난소 기원에 대한 관심이 높아졌을 뿐만 아니라, 난소암의 분비성 기원에 대한 관심이 높아지고 있다9,10,11,12,13, 난소 세그먼트의 별도 평가의 중요성을 강조한다.
여기서 설명된 방법은 분할 특이적 유전자 발현 및 해리된 세포의 기능의 후속 다운스트림 분석을 위한 별도의 배반 세그먼트의 수집을 자세히 설명합니다. 전통적으로, 많은 조직은 페놀에 따라 전체 RNA 추출을 위해 처리됩니다: 클로로폼 방법 또는 온컬럼 완전 추출 방법; 그러나, 우리는 RNA 품질이 설명된 조합 방법으로 충분한 수율을 생성하는 동안 유지되었다는 것을 것을을 발견했습니다. 이 방법을 활용하면, oviduct의 매우 작은 기능 세그먼트는 서로 다른 세그먼트를 대표하는 결과를 마스크 할 수있는 전체 oviduct을 조사하는 대신 다운스트림 분석을 위해 처리 될 수있다14.
해리된 뮤린 오비덕탈 세포는 이 조직에서 세포 수율을 제한하기 때문에 혈류 세포측정에 의해 거의 조사되지 않았습니다. 이 문제를 극복하기 위한 한 가지 접근법은 세포를 해리화하고, 배양에서 성장한 다음, 다운스트림 세포 분석을 위한 적절한 세포 수를 얻기 위해 시험관에서 재분화를 자극하는 것입니다15,16,17,18. 이 접근법에 대한 제한은 배양에서 전 생체 및 변경 된 미세 환경이며, 둘 다 유전자 발현을 바꿀 가능성이 있습니다. 또한 형태학적 재분화가 그대로 동물에 존재하는 것과 동일한 전사 및 프로테오믹 시그니처를 가지고 있다는 가정도 있습니다. 현재 해리 방법은 단일 세포 분화를 유지하면서 이성수 배반 세포 집단에서 가장 많은 상피 세포를 달성하도록 설계되었습니다. 추가, 대부분 비 효소 접근은 가능성이 세포 표면 단백질의 손실을 제한.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 mm Stainless steel bead mix</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>SSB05</td>
			<td>Mix 1:1 with 1.4 mm SSB14B, sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.4 mm Stainless steel bead mix</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>SSB14B</td>
			<td>Mix 1:1 with 0.5 mm SSB05, sterilized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline A, pH 7.4 (DPBS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21600-010</td>
			<td>Cold, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm sterile petri dishes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;m cell meshes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-636-548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent Eukaryote Total RNA 6000 Pico Chip kit</td>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td>5067-1513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead Bullet Blender Tissue Homogenizer</td>
			<td>Next Advance</td>
			<td>BBY24M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanlyzer</td>
			<td>Agilent 2100 Bioanalyzer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold plate/pack/surface of choice</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Kept at -20C for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental wax</td>
			<td>Polysciences Inc.</td>
			<td>403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle&#8217;s Medium (DMEM)/ Ham&#8217;s F12</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-090-CV</td>
			<td>Prepare dissection medium: DMEM/ Ham&#8217;s F12, 10% FBS, 25 mM Hepes, 1% Pen-Strep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-015CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine point forceps of choice</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G712b</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-mouse IgG Alexa Fluor 555</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21422</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-rabbit IgG Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H-3784</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoescht 33342</td>
			<td>Cell Signaling Technologies</td>
			<td>4082S</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted compound microscope</td>
			<td>Keyence BZ-X700</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-mouse Occludin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>33-1500</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-enzymatic dissociation buffer</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>5 mM EDTA, 1 g/L glucose, 0.4% BSA, 1X DPBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon macro-mesh 1 mm x 1 mm</td>
			<td>Thomas Scientific</td>
			<td>1210U04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P-6148</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen-Strep</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>10220-718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prolong Gold Antifade Reagent</td>
			<td>Cell Signaling Technologies</td>
			<td>9071S</td>
			<td>Immunocytochemical validation images: antifade mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>10165921001</td>
			<td>Prepare pronase digestion medium: 0.15% Pronase in DMEM/Ham&#39;s F12, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium Iodide</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11 348 639 001</td>
			<td>Viability validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-mouse Acetylated-Tubulin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab179484</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC lysis buffer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555899</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74134</td>
			<td>Utilized for on-column purification in text.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring form microdissection scissors</td>
			<td>Roboz Surgical</td>
			<td>RS-5610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile 3 mL bulb pipettors</td>
			<td>Globe Scientific</td>
			<td>137135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J66015</td>
			<td>Prepare toluidine blue solution: 1% in 1X DPBS, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Buffered Saline-Tween (TBST)</td>
			<td>N/A</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Immunocytochemical validation images; 0.1 N NaCl, 10 mM Tris-Cl pH 7.5, 1% Tween 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X-100</td>
			<td>Mallinckrodt Inc.</td>
			<td>3555</td>
			<td>Immunocytochemical validation images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizol RNA Extraction Reagent</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td>Referred to as RNA extraction reagent. Nucelase-free water, chloroform and isoproponal are required in supplement of performing Trizol extraction per manufacturer&#39;s guidelines</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdissection and dissociation of the murine oviduct: individual segment identification and single cell isolation

마우스 모델 시스템은 유전적 절만성과 실험 적 치료의 저렴한 비용으로 인해 질병 프로세스의 분석에 대한 타의 추종을 불허합니다. 그러나, 그들의 작은 체내에서, 200-400 μm의 직경을 가진 oviduct와 같은 몇몇 구조물은 면역작용화학을 제외하고는 연구하기 상대적으로 어려운 것으로 입증되었습니다. 최근, 면역히토화학 연구는 이전에 인식된 것보다 oviduct 세그먼트에 있는 더 복잡한 다름을 발견했습니다; 따라서, oviduct는 7개의 명백한 상피 세포 모형의 상이한 비율을 가진 4개의 기능적인 세그먼트로 분할됩니다. 상피 세포 모형의 상이한 배아 기원 및 비율은 가능성이 4개의 기능적인 지구가 질병에 분화하기 쉽게 만듭니다. 예를 들어, 전구체 병변은 마우스 모델의 농가 에서 발생하며 인간 나팔관의 상응하는 피모브리알 영역에서 발생한다. 여기서 설명된 프로토콜은 역전사-정량PCR(RT-qPCR) 및 RNA 시퀀싱(RNAseq)과 같은 다운스트림 분석에 필요한 RNA의 충분한 양및 순도를 산출하는 방식으로 마이크로절이 배관을 세분화하는 방법을 상세히 기술한다. 또한 완전히 분화된 난관 세포의 유동 세포측정 또는 단일 세포 RNAeq 분석에 적합한 대부분 비 효소 조직 해리 방법이 기재되어 있다. 설명된 방법은 생식, 불임, 암 및 면역학 분야에서 뮤린 배관을 활용하는 추가 연구를 촉진할 것입니다.

설명된 해리 프로토콜은 두 oviducts의 풀링으로 마우스 당 100,000-120,000 세포를 산출합니다. 이 방법은 다중 모액 세포 테두리를 그대로 두고 다중 모액 세포와 분비 세포를 구별할 수 있게 하고 소화 방법이 탈분화를 방지할 만큼 충분히 부드럽다는 것을 확인할 수 있을 만큼 부드럽습니다. 도 5의 대표적인 면역불성 이미지는 4.2.1 단계 다음 의 작은 세포 덩어리를 나타내며, 4 ...

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Microdissection and Dissociation of the Murine Oviduct: Individual Segment Identification and Single Cell Isolation

RNA 무결성을 유지하면서 개별 세그먼트의 수집을 허용하는 마우스 배반의 미세 절제 방법이 제시된다. 또한, 비효소 성 배관 세포 해리 절차가 설명된다. 이 방법은 기능적으로 상이한 배반 분과 및 해리된 배관 세포의 후속 유전자 및 단백질 분석에 적합합니다.

뮤린 오비덕트의 미세 절제 및 해리: 개별 세그먼트 식별 및 단일 세포 격리

Mouse model systems are unmatched for the analysis of disease processes because of their genetic manipulability and the low cost of experimental ...

다른 oviduct 세그먼트는 뚜렷한 생리적 기능을 가지고 있으며 병리학적 변화에 차별화되기 쉽습니다. 매우 작은 마우스 oviduct에서 다른 세그먼트의 식별은 조직 해리에 의해 잘 분화 된 세포의 좋은 수율의 생산과 마찬가지로 도전적이다. 이 비디오에서는 마우스 배관을 풀고, 서로 다른 세그먼트를 인식하여 개별적으로 분석할 수 있도록 하는 방법을 시연하고, 마지막으로 분화된 분리된 세포의 비교적 높은 수율을 생성하는 방법을 시연할 것입니다.암풀라에 특화 된 환경의 더 나은 이해체 외 수정 기술을 향상 시킬 수 있습니다. 또한, 다른 세그먼트와 fundibulum을 대조적으로, 우리는 더 나은 악성 변화에 대한 fundibulum의 성향을 이해할 수 있습니다. 단세포 해리 절차는 기질뿐만 아니라 난소로부터상피 세포를 해방시다.우리의 방법은 또한 별도로 면역, 부드러운 근육, 그리고 난소의 생리학 및 병리에 상피 세포 기여를 분석하는 기회를 제공합니다. 해부 현미경하에서 일하는 것은 처음에 어려울 수 있습니다. 난 당신의 도구가 oviduct 미세 절에 적합한지 확인하기 위해 자궁과 같은 더 큰 튜브로 연습하는 것이 좋습니다.먼저 치과 용 왁스를 접착제로 페트리 접시에 부착하고 건조하게하십시오. 그런 다음 70 %의 에탄올로 요리를 소독합니다. 이제 서피스가 해부할 준비가 되었습니다.해부를 준비하면 해부 현미경으로 차가운 플랫폼에 치과 왁스가 들어있는 페트리 접시를 고정하십시오. 동물의 복부 표면을 70%에탄올로 소독합니다. 그런 다음 멸균 해부 가위로 복부와 골반 구멍을 엽니다.위장관을 한쪽으로 이동하여 등쪽 양혼 자궁을 찾습니다. 각 자궁 뿔을 따라 신장 바로 아래 자궁 지방 패드에 둘러싸인 각 oviduct 및 난소를 찾습니다. 그런 다음 난소와 해부 가위를 사용하여 여전히 부착 된 해회 자궁 뿔의 일부를 가진 측면 배반소를 모두 소비합니다.각 측면 자궁 경적을 코일 난기와 난소에 부착된 뿔의 약 1~2센티미터로 자릅니다. 차가운 해부 매체의 2 밀리리터에 즉시 조직을 담급하고, 멸균 25 게이지 바늘로 치과 왁스에 자궁 조직을 부착하여 해부를 위한 조직을 확보합니다. 난소 지방 패드와 결합 조직을 깨끗하고 해부하여 oviduct를 명확하게 시각화합니다.1 밀리리터 주사기를 사용하여 멸균 1%의 토루이딘 블루 염료 용액을 1~2방울 에 분배하고 30초에서 1분 동안 배양합니다. 차가운 DPBS로 헹구고 모든 액체를 제거합니다. 코일 난소에서 난소를 가볍게 당깁니다.관 조직을 손상시키지 않고 oviduct에서 난소를 제거하기 위해 넓은 인대의 활액 막에서 잘라. 자궁 관 접합에 측면 발견 oviduct의 탈경 피모브리알 끝을 찾습니다. 튜브를 부드럽게 당기고 스프링폼 마이크로 가위로 메소살핀스를 잘라 내어 배관을 풀어냅니다.튜브를 잘라 내어 기금이 없는 영역을 생성합니다. 그런 다음 2턴과 3회전 사이를 절단하여 암풀 영역을 소비합니다. 마지막으로, 나머지 부분을 자궁 관 접합부로 잘라내어 isthmic 영역입니다.즉시 액체 질소에서 해부 된 조직 세그먼트를 동결 한 다음 RNA 절연을위한 조직에 감기 RNA 추출 시약 및 일대일 균질화 비드 믹스의 200 마이크로 리터를 추가합니다. fimbrial 영역에서 시작하여 스프링 폼 가위로 튜브를 세로로 슬릿하고 포셉을 레버리지로 사용하여 발광 상피를 노출시합니다. 슬릿 열린 부분과 나머지 oviduct를 약 1~ 2밀리미터 세그먼트로 다진다.그런 다음 조직에 따뜻한 비 효소 해리 버퍼의 5 밀리리터를 추가하고 섭씨 37도에서 배양합니다. 폐백, 핵 및 아세틸화 튜룰린에 대해 양성 세포 클러스터의 형광 및 위상 대조 이미지가 여기에 나와 있다. 빨간색은 폐골, 파란색을 나타내며 녹색은 아세틸화된 튜룰린을 나타냅니다.섬광 식 테두리는 프로토콜 전체에 걸쳐 그대로 유지되며 단일 세포에 대한 추가 소화를 견딜 수 있습니다. 이러한 대표적인 이미지에서 병합, 빨간색, 파란색, 위상 대비 및 녹색 채널이 표시됩니다. 짧은 pronase 인큐베이션 후, 세포의 대부분은 단일.프로피듐 요오드 스테인닝은 브라이트필드에서 약 93%의 생존력을 나타내며, 적색 채널 PI 양성 및 병합을 나타낸다. 병합시 인셋은 단일 해리 셀에 그대로 섬모테두리를 표시합니다. 이러한 세포는 적극적으로 섬모를 치고있다.전체 RNA는 마이크로볼륨 분광광광계 및 생체 분석기별 수율 과 품질평가를 받았습니다. 결과는 이 방법이 다운스트림 에세이에 적합한 수율에 필요할 수 있는 2개의 동물에게서 풀링이 필요할 수 있는 기금 식 견본을 제외하고 세그먼트 당 800 내지 1, 200 나노그램 RNA를 산출한다는 것을 보여줍니다. 기금 에 대한 제시 된 결과는 총 4 개의 기금 이성 지역인 두 마리의 동물로 구성됩니다.이 프로토콜은 마이크로볼륨 분광광계 및 생체 분석기로 분석된 순수 RNA를 성공적으로 달성합니다. 시료는 순수 RNA 뉴클레오티드 종의 전형적인 1.8과 2 사이의 260~ 280 나노미터 흡수비를 갖는다. 시료를 생체 분석한 결과, 다운스트림 발현 및 시퀀싱 분석에 적합한 7개 이상의 평가된 RNA 무결성 수로 높은 RNA 무결성을 보였다.관 시스템을 해부 플랫폼에 부착하기 위해 자궁 뿔의 1~2cm를 유지해야합니다. 또한, toluidine 블루 염료의 사용은 oviduct의 빠른 코일링에 도움이됩니다. 코일링이 빨라지고 보존이 향상되고 RNA 의 양이 적어집니다.이 방법은 개별 세그먼트 시퀀싱을 허용하는 RNA 염기서열에 적합한 품질의 RNA를 얻기에 충분하다. 세포 해리는 보다 정확한 세그먼트 및 세포 분석을 허용하는 단세포 시퀀싱 또는 유동 세포측정에 적합합니다. 이 방법은 세그먼트 또는 단일 셀 수준에서 차이를 마스크 전체 튜브 분석을 넘어 필드를 이동하는 데 도움이됩니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Murine Dermal Fibroblast Isolation by FACS

FACS에 의해 쥐 피부 섬유 아세포 격리

Fibroblasts are the principle cell type responsible for secreting extracellular matrix and are a critical component of many organs and tissues. Fibroblast ...

연구

발생학

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

분리 및 Zebrafish의 배아에서 단일 세포의 특성

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

쥐 배아 Hemogenic 내피 세포의 분리

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

Identification Of Erythromyeloid Progenitors And Their Progeny In The Mouse Embryo By Flow Cytometry

Flow Cytometry에 의한 마우스 태아의 적혈구 전구 세포 (Erythromyeloid Progenitors)와 그 자손의 동정

Macrophages are professional phagocytes from the innate arm of the immune system. In steady-state, sessile macrophages are found in adult tissues where ...

The Isolation and Culture of Primary Epicardial Cells Derived from Human Adult and Fetal Heart Specimens

분리와 인간 성인 그리고 태아 심장 표본에서 파생 하는 기본 Epicardial 세포의 문화

The epicardium, an epithelial cell layer covering the myocardium, has an essential role during cardiac development, as well as in the repair response of ...

Isolation of Murine Spermatogenic Cells using a Violet-Excited Cell-Permeable DNA Binding Dye

보라색 흥분 세포 투과성 DNA 결합 염료를 사용하여 뮤린 정자 세포의 격리

Isolation of meiotic spermatocytes is essential to investigate molecular mechanisms underlying meiosis and spermatogenesis. Although there are established ...

Cell Dissociation from the Tongue Epithelium and Mesenchyme/Connective Tissue of Embryonic-Day 12.5 and 8-Week-Old Mice

배아의 날 12.5 및 8 주 된 마우스의 혀 상피 및 메센키메 / 결합 조직에서 세포 해리

Cell dissociation has been an essential procedure for studies at the individual-cell level and/or at a cell-population level (e.g.,&#160;single cell RNA ...

Rapid Isolation of Single Cells from Mouse and Human Teeth

마우스와 인간의 치아에서 단일 세포의 신속한 격리

Mouse and human teeth represent challenging organs for quick and efficient cell isolation for single-cell transcriptomic or other applications. The dental ...

Isolation of Murine Retinal Endothelial Cells for Next-Generation Sequencing

차세대 염기서열분석을 위한 뮤린 망막 내피 세포의 분리

Recent improvements in next-generation sequencing have advanced researchers&#39; knowledge of molecular and cellular biology, with several studies ...

Identification and Isolation of Burst-Forming Unit and Colony-Forming Unit Erythroid Progenitors from Mouse Tissue by Flow Cytometry

유세포분석에 의한 마우스 조직으로부터 파열 형성 단위 및 콜로니 형성 단위 적혈구 전구체의 식별 및 분리

Early erythroid progenitors were originally defined by their colony-forming potential in vitro and classified into burst-forming and colony-forming ...