Name: a robust discovery platform for the identification of novel mediators of melanoma metastasis
Uploaded: 2022-03-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis at JoVE.com

Мы благодарим Отдел передовых исследовательских технологий (DART) в NYU Langone Health и, в частности, Исследовательскую лабораторию экспериментальной патологии, Центр геномных технологий, Лабораторию цитометрии и сортировки клеток, Доклиническое ядро визуализации, которые частично поддерживаются грантом поддержки онкологического центра Перлмуттера NIH / NCI 5P30CA016087. Мы благодарим Междисциплинарную кооперативную группу меланомы Нью-Йоркского университета (PI: Dr. Iman Osman) за предоставление доступа к краткосрочным культурам меланомы, полученным от пациента (10-230BM и 12-273BM), которые были получены с помощью протоколов, одобренных IRB (исследование универсального согласия #s16-00122 и междисциплинарное исследование Melanoma Cooperative Group #10362). Мы благодарим д-ра Роберта Кербеля (Университет Торонто) за предоставление клеточных линий меланомы 113/6-4L и 131/4-5B1* и д-ра Минхарда Херлина (Институт Вистар) за предоставление краткосрочных культур меланомы WM 4265-2, WM 4257s-1, WM 4257-2 меланомы**. E.H. поддерживается NIH/NCI R01CA243446, P01CA206980, премией Американского онкологического общества-Меланомы Research Alliance Team Science Award и NIH Melanoma SPORE (NCI P50 CA225450; ПИ: И.О.). Рисунок 1 был создан с помощью Biorender.com.

ПРИМЕЧАНИЕ: Процедуры для животных, включенные в следующий протокол, были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию Нью-Йоркского университета (IACUC). Все процедуры проводятся в учреждениях, одобренных Ассоциацией по оценке и аккредитации Междунаро...

<ol>
	<li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Cancer+Statistics+2020:+GLOBOCAN+Estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries.">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN Estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).</li><li>Adler, N. R., Haydon, A., McLean, C. A., Kelly, J. W., Mar, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+pathways+in+patients+with+cutaneous+melanoma.">Metastatic pathways in patients with cutaneous melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 30 (1), 13-27 (2017).</li><li>Platz, A., Egyhazi, S., Ringborg, U., Hansson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+cutaneous+melanoma;+a+review+of+NRAS+and+BRAF+mutation+frequencies+in+relation+to+histogenetic+subclass+and+body+site.">Human cutaneous melanoma; a review of NRAS and BRAF mutation frequencies in relation to histogenetic subclass and body site.</a> Molecular Oncology. 1 (4), 395-405 (2008).</li><li>Alonso, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+study+in+melanoma+identifies+epithelial-mesenchymal+transition+as+a+major+determinant+of+metastasis.">A high-throughput study in melanoma identifies epithelial-mesenchymal transition as a major determinant of metastasis.</a> Cancer Research. 67 (7), 3450-3460 (2007).</li><li>Rowe, C. J., Khosrotehrani, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+biological+determinants+of+melanoma+progression:+Should+all+be+considered+for+clinical+management.">Clinical and biological determinants of melanoma progression: Should all be considered for clinical management.</a> Australasian Journal of Dermatology. 57 (3), 175-181 (2016).</li><li>Plebanek, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-metastatic+cancer+exosomes+induce+immune+surveillance+by+patrolling+monocytes+at+the+metastatic+niche.">Pre-metastatic cancer exosomes induce immune surveillance by patrolling monocytes at the metastatic niche.</a> Nature Communications. 8 (1), 1319 (2017).</li><li>Orgaz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+pigment+epithelium-derived+factor+enables+migration,+invasion+and+metastatic+spread+of+human+melanoma.">Loss of pigment epithelium-derived factor enables migration, invasion and metastatic spread of human melanoma.</a> Oncogene. 28 (47), 4147-4161 (2009).</li><li>Ladhani, O., Sanchez-Martinez, C., Orgaz, J. L., Jimenez, B., Volpert, O. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pigment+epithelium-derived+factor+blocks+tumor+extravasation+by+suppressing+amoeboid+morphology+and+mesenchymal+proteolysis.">Pigment epithelium-derived factor blocks tumor extravasation by suppressing amoeboid morphology and mesenchymal proteolysis.</a> Neoplasia. 13 (7), 633-642 (2011).</li><li>Ju, R. J., Stehbens, S. J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+melanoma+cell-stroma+interaction+in+cell+motility,+invasion,+and+metastasis.">The role of melanoma cell-stroma interaction in cell motility, invasion, and metastasis.</a> Frontiers in Medicine - Dermatology. 5, 307 (2018).</li><li>Wiley, H. E., Gonzalez, E. B., Maki, W., Wu, M. T., Hwang, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+CC+chemokine+receptor-7+and+regional+lymph+node+metastasis+of+B16+murine+melanoma.">Expression of CC chemokine receptor-7 and regional lymph node metastasis of B16 murine melanoma.</a> Journal of the National Cancer Institute. 93 (21), 1638-1643 (2001).</li><li>Meier, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+pathways+and+time+courses+in+the+orderly+progression+of+cutaneous+melanoma.">Metastatic pathways and time courses in the orderly progression of cutaneous melanoma.</a> British Journal of Dermatology. 147 (1), 62-70 (2002).</li><li>Turner, N., Ware, O., Bosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+metastasis:+melanoma+and+other+cancers.">Genetics of metastasis: melanoma and other cancers.</a> Clinical &amp; Experimental Metastasis. 35 (5-6), 379-391 (2018).</li><li>Ubellacker, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+protects+metastasizing+melanoma+cells+from+ferroptosis.">Lymph protects metastasizing melanoma cells from ferroptosis.</a> Nature. 585 (7823), 113-118 (2020).</li><li>Cukierman, E., Pankov, R., Stevens, D. R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+cell-matrix+adhesions+to+the+third+dimension.">Taking cell-matrix adhesions to the third dimension.</a> Science. 294 (5547), 1708-1712 (2001).</li><li>Cunningham, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actin-binding+protein+requirement+for+cortical+stability+and+efficient+locomotion.">Actin-binding protein requirement for cortical stability and efficient locomotion.</a> Science. 255 (5042), 325-327 (1992).</li><li>Unger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+carcinomas:+physiologically+relevant+3D+models+to+improve+anti-cancer+drug+development.">Modeling human carcinomas: physiologically relevant 3D models to improve anti-cancer drug development.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 79-80, 50-67 (2014).</li><li>Fong, E. L., Harrington, D. A., Farach-Carson, M. C., Yu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heralding+a+new+paradigm+in+3D+tumor+modeling.">Heralding a new paradigm in 3D tumor modeling.</a> Biomaterials. 108, 197-213 (2016).</li><li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mouse+melanoma+cell+lines+by+their+mortal+malignancy+using+an+experimental+metastatic+model.">Characterization of mouse melanoma cell lines by their mortal malignancy using an experimental metastatic model.</a> Life Science. 70 (7), 791-798 (2002).</li><li>Meeth, K., Wang, J. X., Micevic, G., Damsky, W., Bosenberg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+YUMM+lines:+a+series+of+congenic+mouse+melanoma+cell+lines+with+defined+genetic+alterations.">The YUMM lines: a series of congenic mouse melanoma cell lines with defined genetic alterations.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 29 (5), 590-597 (2016).</li><li>Koya, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibitor+vemurafenib+improves+the+antitumor+activity+of+adoptive+cell+immunotherapy.">BRAF inhibitor vemurafenib improves the antitumor activity of adoptive cell immunotherapy.</a> Cancer Research. 72 (16), 3928-3937 (2012).</li><li>Jenkins, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+murine+BRaf(V600E)+melanoma+cell+lines+with+sensitivity+to+PLX4032.">Multiple murine BRaf(V600E) melanoma cell lines with sensitivity to PLX4032.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 27 (3), 495-501 (2014).</li><li>Tuncer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SMAD+signaling+promotes+melanoma+metastasis+independently+of+phenotype+switching.">SMAD signaling promotes melanoma metastasis independently of phenotype switching.</a> The Journal of Clinical Investigation. 129 (7), 2702-2716 (2019).</li><li>Schwartz, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incipient+Melanoma+Brain+Metastases+Instigate+Astrogliosis+and+Neuroinflammation.">Incipient Melanoma Brain Metastases Instigate Astrogliosis and Neuroinflammation.</a> Cancer Research. 76 (15), 4359-4371 (2016).</li><li>Perez-Guijarro, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multimodel+preclinical+platform+predicts+clinical+response+of+melanoma+to+immunotherapy.">Multimodel preclinical platform predicts clinical response of melanoma to immunotherapy.</a> Nature Medicine. 26 (5), 781-791 (2020).</li><li>Krepler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comprehensive+Patient-Derived+Xenograft+Collection+Representing+the+Heterogeneity+of+Melanoma.">A Comprehensive Patient-Derived Xenograft Collection Representing the Heterogeneity of Melanoma.</a> Cell Reports. 21 (7), 1953-1967 (2017).</li><li>Agrawal, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systems+biology+approach+identifies+FUT8+as+a+driver+of+melanoma+metastasis.">A systems biology approach identifies FUT8 as a driver of melanoma metastasis.</a> Cell. 31 (6), 804-819 (2017).</li><li>Hanniford, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+CDR1as+drives+IGF2BP3-mediated+melanoma+invasion+and+metastasis.">Epigenetic silencing of CDR1as drives IGF2BP3-mediated melanoma invasion and metastasis.</a> Cancer Cell. 37 (1), 55-70 (2020).</li><li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PRMT5+control+of+cGAS/STING+and+NLRC5+pathways+defines+melanoma+response+to+antitumor+immunity.">PRMT5 control of cGAS/STING and NLRC5 pathways defines melanoma response to antitumor immunity.</a> Science Translational Medicine. 12 (551), (2020).</li><li>de Miera, E. V., Friedman, E. B., Greenwald, H. S., Perle, M. A., Osman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+five+new+melanoma+low+passage+cell+lines+representing+the+clinical+and+genetic+profile+of+their+tumors+of+origin.">Development of five new melanoma low passage cell lines representing the clinical and genetic profile of their tumors of origin.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 25 (3), 395-397 (2012).</li><li>Morsi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+a+clinically+relevant+mouse+model+of+melanoma+brain+metastasis.">Development and characterization of a clinically relevant mouse model of melanoma brain metastasis.</a> Pigment Cell Melanoma Research. 26 (5), 743-745 (2013).</li><li>Huynh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+vivo+microRNA+targeting+of+liver+metastasis.">Efficient in vivo microRNA targeting of liver metastasis.</a> Oncogene. 30 (12), 1481-1488 (2011).</li><li>Zou, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+variables+that+affect+human+hepatocyte+AAV+transduction+in+liver+chimeric+mice.">Experimental variables that affect human hepatocyte AAV transduction in liver chimeric mice.</a> Molecular Therapy Methods and Clinical Development. 18, 189-198 (2020).</li><li>Kleffman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanoma-secreted+Amyloid+Beta+Suppresses+Neuroinflammation+and+Promotes+Brain+Metastasis.">Melanoma-secreted Amyloid Beta Suppresses Neuroinflammation and Promotes Brain Metastasis.</a> bioRxiv. , 854885 (2019).</li><li>Curtis, A., Calabro, K., Galarneau, J. R., Bigio, I. J., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+variations+of+skin+pigmentation+in+C57BL/6+mice+affect+optical+bioluminescence+quantitation.">Temporal variations of skin pigmentation in C57BL/6 mice affect optical bioluminescence quantitation.</a> Molecular Imaging and Biology. 13 (6), 1114-1123 (2011).</li><li>Sil, P., Wong, S. W., Martinez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=More+than+skin+deep:+autophagy+is+vital+for+skin+barrier+function.">More than skin deep: autophagy is vital for skin barrier function.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1376 (2018).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+CRISPR+screen+in+a+mouse+model+of+tumor+growth+and+metastasis.">Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis.</a> Cell. 160 (6), 1246-1260 (2015).</li><li>Hart, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+CRISPR+screens+reveal+fitness+genes+and+genotype-specific+cancer+liabilities.">High-resolution CRISPR screens reveal fitness genes and genotype-specific cancer liabilities.</a> Cell. 163 (6), 1515-1526 (2015).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+essential+genes+in+the+human+genome.">Identification and characterization of essential genes in the human genome.</a> Science. 350 (6264), 1096-1101 (2015).</li><li>Edgar, R., Domrachev, M., Lash, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Expression+Omnibus:+NCBI+gene+expression+and+hybridization+array+data+repository.">Gene Expression Omnibus: NCBI gene expression and hybridization array data repository.</a> Nucleic Acids Research. 30 (1), 207-210 (2002).</li><li>Lappalainen, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+European+Genome-phenome+Archive+of+human+data+consented+for+biomedical+research.">The European Genome-phenome Archive of human data consented for biomedical research.</a> Nature Genetics. 47 (7), 692-695 (2015).</li><li>Cerami, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cBio+cancer+genomics+portal:+an+open+platform+for+exploring+multidimensional+cancer+genomics+data.">The cBio cancer genomics portal: an open platform for exploring multidimensional cancer genomics data.</a> Cancer Discovery. 2 (5), 401-404 (2012).</li><li>Grossman, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+a+shared+vision+for+cancer+genomic+data.">Toward a shared vision for cancer genomic data.</a> New England Journal of Medicine. 375 (12), 1109-1112 (2016).</li></ol>

Цель этого технического отчета состоит в том, чтобы предложить стандартизированный, сверху донизу рабочий процесс для исследования потенциальных участников метастазирования меланомы. Поскольку эксперименты in vivo могут быть дорогостоящими и трудоемкими, стратегии максимизации э...

Высокая смертность, связанная с метастатической меланомой, в сочетании с ростом заболеваемости меланомой во всем мире1 (по оценкам, увеличение на 7,86% к 2025 году) требует новых подходов к лечению. Достижения в обнаружении целей зависят от воспроизводимых моделей метастазирования, очень сложного процесса. На протяжении всех этапов метастатического каскада клетки меланомы должны преодолевать бесчисленные барьеры для достижения уклонения иммунной системы и колонизации отдаленных тканей2. Устойчивость и адаптивность клеток меланомы возникают из множества факторов, включая их высокую генетическую мутационную нагрузку3 и их происхождение нервного гребня, которые придают решающую фенотипическую пластичность 3,4,5. На каждом этапе транскрипционные программы позволяют метастазирующим клеткам меланомы переключаться из одного состояния в другое на основе сигналов перекрестных помех с микросредой, включающей иммунную систему6, внеклеточную среду 7,8 и клеточную архитектуру физических барьеров9, с которыми они вступают в контакт. Например, клетки меланомы избегают иммунного надзора, снижая экспрессию важных иммунопраймирующих опухолевых факторов6.
Исследования описывают «преметастатическую нишу», в которой клетки меланомы секретируют хемокины и цитокины, чтобы подготовить отдаленный «целевой» орган для метастазирования10. Эти результаты поднимают важные вопросы о тропизме органов клеток метастатической меланомы и анатомическом пути, который они проходят для доступа к отдаленным тканям. Известно, что после интравазации клетки меланомы метастазируют через лимфатические (лимфатическое распространение) и кровеносные сосуды (гематогенное распространение)2,11. В то время как у большинства пациентов присутствует локализованное заболевание, небольшое подмножество случаев представляет собой отдаленное метастатическое заболевание и отсутствие лимфатической диссеминации (отрицательное вовлечение лимфатических узлов)11, что предполагает существование альтернативных метастатических путей для меланомы.
Когда они колонизируют метастатический участок, клетки меланомы подвергаются эпигенетической и метаболической адаптации12,13. Для доступа и вторжения в новые компартменты клетки меланомы используют протеазы14 и цитоскелетные модификации 11,15, которые позволяют им перемещаться и расти в новом месте. Трудность нацеливания на клетки меланомы заключается в сложности и количестве таких адаптаций; таким образом, на местах следует приложить усилия для экспериментального воссоздания как можно большего числа шагов и адаптаций. Несмотря на многочисленные достижения в анализах in vitro, таких как органоиды и 3D-культуры16,17, эти модели лишь неполностью повторяют метастатический каскад in vivo.
Мышиные модели показали ценность, установив баланс между воспроизводимостью, технической осуществимостью и моделированием заболеваний человека. Внутрисосудистые, ортотопически и гетеротопически имплантированные клетки меланомы из полученных пациентом ксенотрансплантатов или краткосрочных культур в иммуноскомпрометированных или гуманизированных мышах представляют собой основу обнаружения мишеней при метастатической меланоме. Тем не менее, этим системам часто не хватает важнейшего биологического ограничения на метастазирование: иммунной системы. Модели метастазирования сингенной меланомы, которые обладают этим ограничением, относительно редки в этой области. Эти системы, разработанные у иммунокомпетентных мышей, включая B16-F1018, семейство клеточных линийYUMM 19, SM120, D4M321, RIM322 или совсем недавно, клеточные линии меланомы RMS23 и M1 (Mel114433), M3 (HCmel1274), M4 (B2905)24 , облегчают исследование сложной роли иммунного ответа хозяина в прогрессировании меланомы.
Здесь представлен конвейер для идентификации цели метастазирования меланомы. С увеличением и увеличением наборов данных «омики», генерируемых из когорт пациентов с меланомой, мы постулируем, что исследования, имеющие наибольшую клиническую перспективу, связаны с интеграцией больших данных, что приводит к тщательному функциональному и механистическому опросу 25,26,27,28. Используя мышиные модели для изучения потенциальных целей в метастатическом процессе, можно учитывать in vivo-специфические события и тканевые взаимодействия, тем самым увеличивая вероятность клинической трансляции. Изложены многочисленные методы количественной оценки метастатической нагрузки, предоставляющие дополнительные данные о результатах любого данного эксперимента. Описан протокол выделения одной клетки из опухолей в различных органах, чтобы помочь объективной характеристике экспрессии генов в метастатических клетках, которые могут предшествовать одноклеточному или объемному секвенированию РНК.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >#15 Scapel Blade&#160;</td>
			<td >WPI</td>
			<td >500242</td>
			<td >For surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >#3 Scapel Handle</td>
			<td >WPI</td>
			<td >500236</td>
			<td>For surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1 mL Tuberculin syringe, slip tip&#160;</td>
			<td >BD</td>
			<td >309626</td>
			<td>Injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10 mL syringe, slip tip&#160;</td>
			<td >BD</td>
			<td >301029</td>
			<td>Perfusion</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10% Formalin Sodium Buffered</td>
			<td >EK Industries</td>
			<td >4499-20L</td>
			<td>For perfusion/tissue fixative</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >15 mL Conical</td>
			<td >Corning&#160;</td>
			<td>430052</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >15 mL Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td >Falcon</td>
			<td>352196</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >200 Proof Ethanol</td>
			<td >Deacon Labs</td>
			<td >04-355-223</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >22G &#8211; 22mm needle</td>
			<td >BD</td>
			<td >305156</td>
			<td>Perfusion</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4-0 Vicryl Suture</td>
			<td >Ethicon</td>
			<td >J464G</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >4% Carson&#39;s phosphate buffered paraformaldehyde&#160;</td>
			<td >EMS</td>
			<td >15733-10</td>
			<td>For perfusion/tissue fixative</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >40&#181;m</td>
			<td >Corning</td>
			<td >431750</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >5-0 Absorbable Suture&#160;</td>
			<td >Ethicon</td>
			<td >6542000</td>
			<td>Closure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >50 mL Conical&#160;</td>
			<td >Corning&#160;</td>
			<td >430828</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >50mL Conical Polypropylene Centrifuge Tubes</td>
			<td >Falcon</td>
			<td>352070</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >7-0 Silk suture&#160;</td>
			<td >FST</td>
			<td >18020-70</td>
			<td>Ligature</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >70&#181;m</td>
			<td >Corning</td>
			<td >431751</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Anti-fade mounting media&#160;&#160;</td>
			<td >Vector Labs</td>
			<td >H-1000-10</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Approximator applying Forceps, 10cm&#160;</td>
			<td >WPI</td>
			<td>14189</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Avance</td>
			<td >Bruker</td>
			<td >3 HD</td>
			<td>NMR Console&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Biospec 7030&#160;</td>
			<td >Bruker</td>
			<td >7030</td>
			<td>Micro MRI</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >BSA</td>
			<td >Bioreg</td>
			<td >A941</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Castroviejo suturing forceps, straight tips 5.5mm tying platform, 11cm&#160;</td>
			<td >WPI</td>
			<td>WP5025501</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coplin Staining Jar</td>
			<td >Bel-Art&#160;</td>
			<td >F44208-1000</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DAPI</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >D9542-1MG</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >dCas9-KRAB</td>
			<td >Addgene</td>
			<td >110820</td>
			<td>Genetic manipulation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DNase I</td>
			<td >NEB</td>
			<td >M0303L</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DPBS</td>
			<td >Corning</td>
			<td >21-030-CM</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Extra Sharp Uncoated Single Edge Blade</td>
			<td >GEM</td>
			<td >62-0167</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Extracellular Matrix Substrate&#160;</td>
			<td >Corning</td>
			<td>354234</td>
			<td>Consider the Growth Factor Reduced ( as alternative&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >FBS</td>
			<td>Cytiva</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fiji Image J</td>
			<td >Fiji Image J</td>
			<td >Software</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Goat anti-rabbit HRP conjugated multimer&#160;</td>
			<td >Thermo Fisher</td>
			<td >A16104</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Goat Serum</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >PCN5000</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HBSS</td>
			<td >Corning</td>
			<td >21-020-CV</td>
			<td>Tissue processing</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin&#160;</td>
			<td>Richard-Allan Scientific&#160;</td>
			<td >7231</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Illumina III&#160;</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>CLS136334</td>
			<td>BLI Instrument</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin syringe 28G - 8mm needle</td>
			<td >BD</td>
			<td >329424</td>
			<td>Injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Insulin syringe 31G - 6mm needle&#160;</td>
			<td >BD</td>
			<td >326730</td>
			<td>Injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Iris Forceps, 10.2cm, Full Curve, serrated</td>
			<td >WPI</td>
			<td >504478</td>
			<td>For perfusion and surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane USP</td>
			<td >Covetrus</td>
			<td >11695067772</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Jewelers #7 Forceps Titanium 11 cm 0.07 x 0.01 mm Tip</td>
			<td >WPI</td>
			<td>WP6570</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ketamine HCl 100mg/mL</td>
			<td >Mylan Ind.</td>
			<td >1049007</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >lentiCRISPRv2</td>
			<td >Addgene</td>
			<td>98290</td>
			<td>Genetic manipulation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Lycopersicon Esculentum (Tomato) Lectin, DyLight 649</td>
			<td >Invitrogen</td>
			<td>L32472</td>
			<td>Vascular endothelial cells marker</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MEM non-essential amino acids X 100</td>
			<td >Corning</td>
			<td>25-025-CI</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Metzenbaum Scissors</td>
			<td >WPI</td>
			<td >503269</td>
			<td>For surgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microinjection Unit</td>
			<td >KOPF</td>
			<td >5000</td>
			<td>Intracardiac injections</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaCl</td>
			<td >Fisher</td>
			<td>S25877&#160;</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle 30G x 25mm</td>
			<td >BD</td>
			<td>305128</td>
			<td>Intracardiac Injection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle 33G x 15mm</td>
			<td >Hamilton</td>
			<td>7747-01</td>
			<td>Intracarotid Injection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Needle holder, Castroviejo, 14cm, with lock, 1.2mm Serrated Jaws</td>
			<td >WPI</td>
			<td>14137-G</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td >005557</td>
			<td>Murine model</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NU/J mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td >002019</td>
			<td>Murine model</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nuclear Mitotic Apparatus Protein polyclonal rabbit anti-human&#160;</td>
			<td >Abcam</td>
			<td >97585</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Penicillin-Streptomycin 10000U/mL</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >15140122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Percoll</td>
			<td >GE</td>
			<td >0891-01</td>
			<td>density separation solution&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PI Classic Surgical Gloves</td>
			<td >Cardinal Health</td>
			<td >2D72PT75X</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >pLKO Tet-On</td>
			<td >Addgene</td>
			<td >21915</td>
			<td>Genetic manipulation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Povidone-Iodine 10% Solution</td>
			<td >Medline</td>
			<td >MDS093943</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Proparacaine Drops 0.5%</td>
			<td >Akorn Pharma</td>
			<td>AX0501</td>
			<td>Opthalmic local anesthetic</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Puralube Petrolatum Opthalmic Ointment</td>
			<td >Dechra</td>
			<td >83592</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Razor Blade Double Edge Blades&#160;</td>
			<td >EMS</td>
			<td >72000</td>
			<td>Shaving and Vibrotome Brain Slicing&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Reflex 9mm EZ Clip&#160;</td>
			<td >Braintree</td>
			<td>EZC-&#160;KIT</td>
			<td>Wound closure</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >RPMI 1640&#160;</td>
			<td >Corning</td>
			<td >10-040-CM</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Scissors, Spring 10.5cm Str, 8mm Blades</td>
			<td >WPI</td>
			<td>501235</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Semi-Automatic Vibrating Blade Microtome</td>
			<td >Leica</td>
			<td >VT1200</td>
			<td>Brain Slice Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Single Channel Anesthesia Vaporizer System</td>
			<td >Kent Scientific</td>
			<td >VetFlo-1210S&#160;</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Smartbox Tabletop Chamber System and Exhaust Blower</td>
			<td >EZ Systems</td>
			<td >TT4000</td>
			<td>CO2 Euthanasia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile Fenestrated Disposable Drape</td>
			<td >Medline</td>
			<td >NON21002</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile Non-Reinforced Aurora Surgical Gowns with Set-In Sleeves</td>
			<td >Medline</td>
			<td >DYNJP2715</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >T25 Flask</td>
			<td >Corning&#160;</td>
			<td >430639</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tris</td>
			<td >Corning</td>
			<td >46-031-CM</td>
			<td>NuMA Staining</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton X-100</td>
			<td >Sigma-Aldrich</td>
			<td >X100-500ML</td>
			<td>Immunofluorescence</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Troutman tying forceps, 10cm, Curved G pattern, 0.52mm tip with tying platform</td>
			<td >WPI</td>
			<td>WP505210</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Vessel clips 10G Pressure 5x 0.8mm Jaws, 5/pkg</td>
			<td >WPI</td>
			<td>15911</td>
			<td>For microsurgical procedures</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Visiopharm</td>
			<td>Visiopharm</td>
			<td>Visiopharm</td>
			<td>NuMA Staining Quantification Software</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylasine 100mg/mL</td>
			<td >Akorn Pharma</td>
			<td >59399-111-50</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylene</td>
			<td >Fisher</td>
			<td>X3P-1GAL</td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a robust discovery platform for the identification of novel mediators of melanoma metastasis

Метастазирование является сложным процессом, требующим от клеток преодоления барьеров, которые только неполностью моделируются анализами in vitro . Систематический рабочий процесс был создан с использованием надежных, воспроизводимых моделей in vivo и стандартизированных методов для выявления новых игроков в метастазировании меланомы. Этот подход позволяет выводить данные на конкретных экспериментальных этапах, чтобы точно охарактеризовать роль гена в метастазировании. Модели устанавливаются путем введения генетически модифицированных клеток меланомы с помощью внутрисердечных, внутрикожных или подкожных инъекций мышам с последующим мониторингом с последовательной визуализацией in vivo . Как только предварительно установленные конечные точки достигнуты, первичные опухоли и / или органы, несущие метастазы, извлекаются и обрабатываются для различных анализов. Опухолевые клетки могут быть отсортированы и подвергнуты любой из нескольких платформ «омики», включая секвенирование одноклеточной РНК. Органы проходят визуализацию и иммуногистопатологический анализ для количественной оценки общего бремени метастазов и картирования их конкретного анатомического местоположения. Этот оптимизированный конвейер, включая стандартизированные протоколы для приживления, мониторинга, сбора, обработки и анализа тканей, может быть принят для полученных от пациента краткосрочных культур и установленных линий клеток человека и мышей различных типов рака.

Следующие рисунки иллюстрируют, как описанный рабочий процесс был применен для идентификации новых факторов метастазирования меланомы. На рисунке 2 обобщены результаты опубликованного исследования, в котором изучались эффекты глушения фукозилтрансферазы FUT8 при мета...

Watch this Scientific Journal Video about A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis at JoVE.com

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

В этой статье описывается рабочий процесс методов, используемых для тестирования новых потенциальных медиаторов метастазирования меланомы и их механизма (механизмов) действия.

Надежная платформа discovery для идентификации новых медиаторов метастазирования меланомы

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Этот протокол описывает ряд методов в рамках непрерывного рабочего процесса, которые могут быть использованы для оценки эффектов in vivo потенциальных регуляторов метастазирования меланомы, а также метастазирования других солидных злокачественных новообразований. Основным преимуществом нашего систематического рабочего процесса является повышенная воспроизводимость данных благодаря надежным и стандартизированным моделям и методам in vivo. Этот конвейер предлагает путь для обнаружения целей и разработки терапии путем тестирования кандидатов, выведенных из данных Omics или анализов in vitro в условиях in vivo.Кривая обучения, связанная с методами, представленными в этом протоколе, сокращается за счет использования предоставленных материалов и следования подробному описанию при выполнении шагов. В демонстрации процедуры будут помогать Орландо Аристизабаль, научный сотрудник The Preclinical Imaging Core, и Ран Мубарак, инструктор в моей лаборатории. Для внутрикожных инъекций обезболивайте и брейте восьми-10-недельную мышь в шкафу биобезопасности, сохраняя при этом асептические условия.Затем схватите и втягивайте кожу назад против траектории удара иглой и, используя шестимиллиметровую иглу инсулинового шприца 31 калибра, осторожно проколите кожу под острым углом со скосом, обращенным вверх. Вводите 30 микролитров суспензии опухолевой клетки медленно, пока не будет замечено куполообразное колесо. Мониторинг прогрессирования роста опухоли, потери веса и общего состояния здоровья.Во время этих сеансов мониторинга проводите измерения с помощью суппортов и используйте размеры длины и ширины опухоли для расчета объема. Для внутрисердечных инъекций перенесите обезболенную мышь на нагретую платформу ультразвукового аппарата. Затем с помощью гипоаллергенной ленты прикрепите мышь к носовому конусу.Побрить грудную клетку прямым лезвием бритвы или лезвием скальпеля, наклоненным под углом 30 градусов и очистить кожу вокруг процедурной зоны 10% повидон-йодом. Затем поместите ультразвуковой зонд в середину грудной клетки с левой стороны мыши, чтобы захватить горизонтальное окно, ориентированное на получение поперечного обзора левого желудочка. Когда длинная ось зонда обращена вверх, зафиксируйте зонд под углом 50 градусов, а нагретую платформу под углом 20 градусов, затем зафиксируйте зонд и опорную раму в нужном положении.Во время работы внутри шкафа безопасности вытяните клеточную суспензию в туберкулиновый один миллилитровый шприц с 30 калибром однодюймовой иглой. Удалите пузырьки воздуха, присутствующие в шприце. Зафиксируйте шприц в стереотаксическом инжекторе.А затем под ультразвуковым контролем продвиньте иглу через грудную стенку в левый желудочек сердца и медленно введите от 100 до 250 микролитров суспензии опухолевой клетки. Для поэтапной операции по выживанию поместите анестезированную мышь на согревающую прокладку и очистите кожу вокруг области процедуры 10% раствором повидона йода. Надев стерильные средства индивидуальной защиты и перчатки, наложите стерильную драпировку на тело животного.Далее, используя ножницы Iris или скальпель, разрезают кожу, сохраняя пяти-семимиллиметровый резекционный край от края опухоли. При внутрикожных опухолях резецируют опухоль вместе с окружной кожей. При подкожных опухолях рассекают и удаляют опухоль под кожей.После резекции опухоли закройте рану девятимиллиметровым сшивающим устройством. Для визуализации in vivo вводят субстрат d-люциферина мыши путем внутрибрюшинной инъекции с помощью одного миллилитра инсулинового шприца и иглы 28 калибра, затем обезболивают мышь и помещают ее в носовой конус внутри сканера биолюминесцентной визуализации. Запустите инструмент, нажав кнопку инициализировать и установив время экспозиции на auto.Чтобы захватить пустое изображение для вычитания фона, нажмите кнопку «Получить» и сохраните изображение после завершения последовательности получения. Для анализа данных и того же программного обеспечения для обработки изображений in vivo перейдите в папку, в которой сохранены изображения, и откройте изображения всех мышей из одного эксперимента. Установите единицы измерения на излучение и убедитесь, что флажок, указывающий на человека, не установлен, так как это предотвратит нормализацию сигнала между группами.Затем, используя интересующую область или инструмент рисования ROI, нарисуйте круговые ROI для области мозга и прямоугольные ROI для тела, исключите уши и нос в ROI мозга, поскольку они имеют тенденцию излучать неспецифическую яркость. Чтобы свести к минимуму смещение, нарисуйте ROI на фотографиях мышей без наложения люминесцентного сигнала, затем выберите показатель ROI для количественной оценки сигнала и экспорта данных в электронную таблицу. Анализируйте различия между группами, отображая общий люминесцентный поток в интересующих областях тела.После окрашивания NuMA с помощью программного обеспечения нарисуйте ROI, чтобы включить все окрашенные NuMA клетки в ткань органа, за исключением других паренхим органов и пустых пространств. Настройте параметры, чтобы классифицировать положительные и отрицательные клетки NuMA, используя соответствующие положительные и отрицательные элементы управления для каждого органа. Используйте установленный программный алгоритм для количественной оценки общего количества процентов NuMA-положительных клеток для каждого образца.Изображения биолюминесценции, яркого поля, флуоресценции ex vivo и окрашивания гематоксилином и эозином иллюстрируют многосторонний подход к анализу влияния генов-кандидатов на метастазирование меланомы. Глушение фукозилтрансферазы нарушает метастатическую диссеминацию клеток меланомы. Окрашенные NuMA участки легких клеток меланомы, инфицированные контрольным вирусом Линда и супрессором метастазов, экспрессирующим вирус Линды, показаны здесь.Клетки метастатической меланомы помечены зеленым цветом, а область органа разграничена зеленой штриховкой. Поддержание должного напряжения в коже при выполнении внутрикожных инъекций, избегание воздушной эмболии при подготовке шприцев и получение адекватных резекционных краев, которые не должны мешать передвижению животного или предрасполагать его к раневым осложнениям, помогают улучшить успешность и воспроизводимость. Дальнейшее использование мультиплексной визуализации для изучения иммунной фильтрации, секвенирования одноклеточной РНК для анализа экспрессии генов и пространственной транскриптомики может обеспечить дополнительные возможности для изучения внутриопухолевой гетерогенности.Комбинация методов, описанных в этом протоколе, помогла нам определить новые регуляторы метастазирования меланомы в мозг, такие как роль меланомы, секретируемого бета-амилоида в подавлении нейровоспаления и стимулировании метастазирования в мозг.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Расширенный животной модели колоректального метастазами в печени: Визуализация методы и свойства метастатических клонов

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Обнаружение потока гранулярных новообразованной груди Рак стволовых клеток как клеток после разворота апоптоз

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Микроманипуляции циркулирующей опухолевой клетки для молекулярного анализа вниз по течению и метастатического потенциального оценивания

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Поколение печени ортотопические человека увеянные меланомы Ксенотрансплантат Платформы в иммунодефицитных мышей

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

A Novel Stromal Fibroblast-Modulated 3D Tumor Spheroid Model for Studying Tumor-Stroma Interaction and Drug Discovery

Роман Стромальный Фибробласт-Модулированные 3D опухолевой сфероидной модели для изучения опухоли-Строма Взаимодействия и наркотиков Discovery

Tumor-stroma interactions play an important role in cancer progression. Three-dimensional (3D) tumor spheroid models are the most widely used in vitro ...

Enhanced Viability for Ex vivo 3D Hydrogel Cultures of Patient-Derived Xenografts in a Perfused Microfluidic Platform

Улучшенная жизнеспособность для Ex vivo 3D гидрогелевых культур ксенотрансплантатов, полученных пациентами, в переливной микрофлюидной платформе

Patient-derived xenografts (PDX), generated when resected patient tumor tissue is engrafted directly into immunocompromised mice, remain biologically ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Патологический анализ метастазирования в легкие после инъекции опухолевых клеток в латеральную хвостовую вену

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

Modeling Primary Bone Tumors and Bone Metastasis with Solid Tumor Graft Implantation into Bone

Моделирование первичных опухолей костей и метастазов в кости с имплантацией солидного опухолевого трансплантата в кость

Primary bone tumors or bone metastasis from solid tumors result in painful osteolytic, osteoblastic, or mixed osteolytic/osteoblastic lesions. These ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Моделирование метастазирования в головной мозг с помощью инъекции воспалительных клеток рака молочной железы в хвостовую вену

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma

Портальная инъекция органоидов колоректального рака для изучения стромы метастазов в печень

Hepatic metastasis of colorectal cancer (CRC) is a leading cause of cancer-related death. Cancer-associated fibroblasts (CAFs), a major component of the ...