Name: investigating cardiac metabolism in the isolated perfused mouse heart with hyperpolarized [1-13c]pyruvate and 13c/31p nmr spectroscopy
Uploaded: 2023-04-21T12:00:00
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このプロジェクトは、助成金契約番号1379/18に基づいてイスラエル科学財団から資金提供を受けました。イスラエル科学技術省の応用工学科学省のジャボチンスキー奨学金は、D.S.の直接博士課程の学生番号3-15892です。助成金契約第858149号(AlternativesToGd)に基づく欧州連合のホライズン2020研究およびイノベーションプログラム。

ヘブライ大学とハダサ医療センターの合同倫理委員会(IACUC)は、動物福祉の研究プロトコル(MD-19-15827-1)を承認しました。
1. クレブス・ヘンゼライトバッファー調製
<ol><li>実験の前日に、クレブスヘンゼライトバッファー(KHB)26の修正バージョンを準備します。最初に、118 mM NaCl、4.7 mM KCl、0.5 mM ピルビン酸、1.2 mM MgSO 4、25 mM NaHCO3、お?...

分離されたマウス心臓モデルで過分極[1-13C]ピルビン酸代謝、組織エネルギー、およびpHを調査するように設計された実験セットアップを示します。
プロトコル内の重要なステップは次のとおりです:1)バッファーのpHが7.4であることを確認する。2)バッファのすべてのコンポーネントが含まれていることを確認する。3)ヘパリン注射による心臓血管内の血液凝固の回...

心臓代謝の変化は、さまざまな心筋症に関連しており、多くの場合、根底にある病態生理学的メカニズムの基礎を形成します1。しかし、ほとんどの生化学的アッセイでは組織の均質化と細胞溶解および/または放射性トレースが必要であるため、生体組織の代謝を研究するには多くの障害があります。したがって、生体組織における心筋代謝を調べるための新しいツールが急務となっています。過分極した 13C標識基質の磁気共鳴(MR)は、標識部位のMR信号対雑音比(SNR)を数桁3増加させることにより、電離放射線を使用せずに生体組織2の代謝のリアルタイム測定を可能にします。ここでは、単離されたマウス心臓の急速な代謝を研究するための実験セットアップ、獲得アプローチ、および分析アプローチについて説明し、並行して、一般的な組織エネルギーと酸性度の指標を提示します。心筋虚血、不適応肥大、心不全などの心臓病や状態の初期段階では酸塩基バランスが崩れるため、心臓のpHは貴重な指標です6。
過分極[1-13 C]ピルビン酸からの過分極[1-13C]乳酸および[13C]重炭酸塩の生産は、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)およびピルビン酸デヒドロゲナーゼ(PDH)の産生速度を決定するのに役立ちます。単離されたげっ歯類の心臓で過分極基質を使用して行われた以前の研究のほとんどは、複雑な速度論モデルを使用してLDHとPDHの酵素活性を導き出すか、実際の酵素活性率を計算せずに過分極産物の基質に対するシグナル強度比を報告しました2,4,5,6,7,8,9,10、11,12,13,14。ここでは、モデルフリー様式での酵素活性のモニタリングを可能にする生成物選択的飽和励起アプローチ15、16を用いた。このようにして、絶対酵素速度(すなわち、単位時間当たりに生産される生成物のモル数)を決定した。31名P分光法を利用して、無機リン酸(Pi)、ホスホクレアチン(PCr)、およびアデノシン三リン酸(ATP)のシグナルを観察しました。マルチパラメトリック分析を使用して、組織のPi信号の不均一な化学シフトによって実証されるように、心臓のpH分布を特徴付けました。
逆行性灌流マウス心臓(Langendorff heart)17,18,19は、無傷の拍動心臓のex vivoモデルです。このモデルでは、心臓の生存率とpHは少なくとも80分間保存され20、長期の虚血性損傷後の回復の可能性を示しています21,22。それにもかかわらず、顕微手術中の不注意な変動は、心臓全体の組織生存率の変動につながる可能性があります。以前の研究では、この心臓の経時的な劣化が報告されています19。例えば、1時間当たり5%〜10%の収縮機能の低下が観察されている18。アデノシン三リン酸(ATP)シグナルは、心筋のエネルギー状態および生存率について報告することが以前に示されている23。ここでは、灌流された心臓は、ATP含有量によって示されるように、中断のない灌流と酸素供給があったにもかかわらず、生存率レベルに意図しない変動を示すことがあることに注意しました。ここでは、LDHおよびPDH率を心臓のATP含有量に正規化すると、これらの率の心臓間変動が減少することを示しています。
以下のプロトコルでは、NMR分光計での心臓カニュレーション、分離、およびその結果としての灌流に使用される外科的処置について説明します。注目すべきことに、マウス心臓を単離し灌流することを目的とした他の外科的アプローチは、24,25より前に記載されている。
鼓動する心臓の酵素速度(13 C分光法と過分極[1-13C]ピルビン酸を使用)および心臓の生存率と酸性度(31P NMR分光法を使用)に関連するデータを取得するために使用される方法論についても説明します。最後に、代謝酵素活性と組織の生存率と酸性度を決定するための分析方法論について説明します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyperSense DNP Polariser</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>52-ZNP91000</td>
			<td>HyperSense, 3.35 T, preclinical dissolution-DNP hyperpolarizer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMR spectrometer&#160;</td>
			<td>RS2D</td>
			<td></td>
			<td>NMR Cube, 5.8 T, equiped with a 10 mm broad-band probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump&#160;</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>07554-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature probe</td>
			<td>Osensa</td>
			<td>FTX-100-LUX+</td>
			<td>NMR compatible temprature probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Somnosuite low-flow anesthesia system</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lines, tubings, suture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum cured silicone tubes</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>HV-96119-16</td>
			<td>L/S 16 I.D. 3.1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin polyether ether ketone (PEEK) lines</td>
			<td>Upchurch Scientific</td>
			<td></td>
			<td>id. 0.040&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intravenous catheter&#160;</td>
			<td>BD Medical</td>
			<td>381323</td>
			<td>22 G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>W577H</td>
			<td>Wire diameter of 3-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals and pharmaceuticals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[1-13C]pyruvic acid</td>
			<td>Cambridge Isotope Laboratories</td>
			<td>CLM-8077-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>21074</td>
			<td>CAS: 10043-52-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7528</td>
			<td>CAS: 50-99-77</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium</td>
			<td>Rotexmedica</td>
			<td>HEP5A0130C0160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid 37%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>258148</td>
			<td>CAS: 7647-01-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin aspart (NovoLog)</td>
			<td>Novo Nordisk</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Terrel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>793612</td>
			<td>CAS: 7487-88-9</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4504</td>
			<td>CAS: 7447-40-7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9791</td>
			<td>CAS: 7778-77-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Gadot Group</td>
			<td></td>
			<td>CAS: 144-55-8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9625</td>
			<td>CAS: 7647-14-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>655104</td>
			<td>CAS: 1310-73-2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td>CAS: 7558-79-4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monbasic dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>6345</td>
			<td>CAS: 13472-35-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS (biotechnology grade)</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0826</td>
			<td>CAS: 77-86-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trityl radical OX063</td>
			<td>GE Healthcare AS</td>
			<td>NC100136</td>
			<td>OX063</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMR standards</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>13C standard sample</td>
			<td>Cambridge Isotope Laboratories</td>
			<td>DLM-72A</td>
			<td>40% p-dioxane in benzene-D6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>31P standard sample</td>
			<td>Made in house</td>
			<td></td>
			<td>105 mM ATP and 120 mM phenylphosphonic acid in D2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel 2016</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MNova</td>
			<td>Mestrelab Research</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

investigating cardiac metabolism in the isolated perfused mouse heart with hyperpolarized [1-13c]pyruvate and 13c/31p nmr spectroscopy

代謝は細胞生活における重要なプロセスの基礎です。生体組織における代謝ネットワークの機能を評価することは、疾患のメカニズムを理解し、治療法を設計するための重要な情報を提供します。この研究では、逆行性灌流マウス心臓の細胞内代謝活動をリアルタイムで研究するための手順と方法論について説明します。心臓は、心筋虚血を最小限に抑えるために心停止と併せてその場で単離され、核磁気共鳴(NMR)分光計内で灌流されました。分光計内および連続灌流下で、過分極[1-13 C]ピルビン酸を心臓に投与し、その後の過分極[1-13C]乳酸および[13C]重炭酸塩産生速度は、乳酸デヒドロゲナーゼおよびピルビン酸デヒドロゲナーゼ産生の速度をリアルタイムで決定するのに役立ちました。この過分極[1-13C]ピルビン酸の代謝活性は、生成物選択的飽和励起獲得法を用いて、モデルフリー方式でNMR分光法で定量されました。31名P分光法は、心臓エネルギーとpHを監視するために、過分極取得の間に適用されました。このシステムは、健康なマウスと病気のマウスの心臓の代謝活性を研究するのにユニークに有用です。

KHBを灌流したマウス心臓およびバッファーのみから記録した 31Pスペクトルを 図1Aに示します。α、β、およびγ ATP、PCr、およびPiのシグナルが心臓で観察されました。Pi信号は2つの主要な成分で構成されていました:より高いフィールド(信号の左側)では、Pi信号は主にpH7.4のKHBによるものでした。下のフィールド(信号の右側)では、Pi信号はより酸性の環境のため?...

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Investigating Cardiac Metabolism in the Isolated Perfused Mouse Heart with Hyperpolarized [1-13C]Pyruvate and 13C/31P NMR Spectroscopy

過分極した 13C標識代謝物を連続灌流モードで単離灌流マウス心臓に投与するための実験セットアップについて説明します。専用の 13C-NMR取得アプローチにより、代謝酵素活性をリアルタイムで定量でき、マルチパラメトリック 31P-NMR分析により、組織のATP含有量とpHを測定できました。

単離灌流マウス心臓における過分極[1-13 C]ピルビン酸および13C/31P NMR分光法による心臓代謝の調査(英語)

Metabolism is the basis of important processes in cellular life. Characterizing how metabolic networks function in living tissues provides crucial ...

このビデオ Hi.In、灌流マウス心臓の過分極MR研究を実行する方法を学びます。ラボのMD / PhDの学生であるDavid Shaulが、さまざまなテクニックと手順をガイドします。今日、私たちは、31P NMR分光法と組み合わせて、過分極炭素13ピルビン酸代謝を研究するためのプロトコルを学びます。ピルビン酸代謝は、好気性代謝と嫌気性代謝の交差点に立っています。そしてそのように、それは心臓の様々な状態を研究するために非常に価値があります。それでは、始めましょう。マウスの心臓を単離し、10ミリメートルNMRチューブ内でクレブスヘンスライトバッファーで灌流します。次に、心臓をNMR分光計に挿入します。そこでは、アデノシン三リン酸、ホスホクレアチン、無機リン酸の共鳴を観察することにより、心臓のエネルギーとpHを観察するために31Pスペクトルが記録されています。一方、最初の位置で炭素13で標識されたピルビン酸サンプルは過分極しています。そして、溶解が起こった後、それは心臓に注入され、乳酸、無機物、ピルビン酸の組織化された活動をリアルタイムで測定できるようにします。実験の前日に、400ミリリットルの修飾クレブス - ヘンゼライト緩衝液を調製する。最初のステップとして、これらの成分を二重蒸留水で解決します。次に、この溶液をこの酸素混合物で20分間泡立ててから、塩化カルシウムを加えます。pHを7.4に調整します。実験当日、グルコースとインスリンを加えます。ウォーターバスを摂氏40度に設定します。200ミリリットルのKHバッファーを入れたミディアムボトルをバスに挿入します。蠕動ポンプを使用してKHバッファーをリサイクルします。それに接続し、1つの流入ラインと2つの流出ラインを接続します。流入ラインと流出ラインを加熱されたKHバッファーに挿入します。95%O2と5%CO2の酸素ミキサーを使用してください。次に、加熱されたKHバッファーに酸素ラインを挿入します。蠕動ポンプの電源を入れ、毎分7.5ミリリットルの一定の流量に調整します。心臓を導入する前にシステムを調整したい。そのため、流入ラインと流出ラインを10ミリNMR管に挿入し、NMR対応の光温度プローブを挿入します。NMRチューブをマグネットボアに挿入します。加熱タンクを摂氏42度に調整し、NMR加熱を使用して磁石内の温度を摂氏37度に調整します。なお、NMRの温度は、NMR対応の温度コアを用いて、磁石内部のKHバッファーで実際に監視されます。これで、31P分光法を使用して、バッファー内の無機リン酸塩のシグナルを観察できます。これは外科手術に必要な機器です。100ミリリットルのKHバッファーを氷に入れ、同じ酸素混合物で泡立てます。ボックスチャンバー内のマウスを、誘導用の室内空気と混合した3.3%イソフルランで、毎分340ミリリットルの流量で麻酔します。マウスを鼻麻酔に移します。同じ流速で2.9%イソフルランに還元する。足をつまんで、負のペダル痛反射を確認し、マウスが完全に麻酔されていることを確認します。マウスに300単位のヘパリンナトリウムを腹腔内に注射する。剣状突起の2センチ下で皮膚を切ります。腹壁を切って腹腔を露出させます。剣状突起と胸部皮膚の間にシザークランプを配置し、それを使用して胸壁を引っ込め、横隔膜を露出させます。横隔膜の右葉に穴を開けてから、横隔膜の残りの部分を切り取ります。心臓や血管などのより深い臓器との接触を避けながら、胸壁の正中線を横切って切断します。心臓の左心室に200単位のヘパリンナトリウムを注射します。心停止を達成するために0.1ミリリットルの0.5モルのKCLを心臓に注射する。胸腺組織を前方に引っ込め、その根元から切り取って、その下の大動脈を露出させます。大動脈への損傷を避けながら、できるだけ多くの胸腺組織を取り除くようにしてください。静脈内カテーテルが自由に通過できるように、残りの胸郭組織を取り除きます。湾曲した鉗子を大動脈の下に置き、それを使用して大動脈の周りに絹縫合結び目を配置します。湾曲した鉗子を大動脈根に置き、心臓を下方に引っ込めて大動脈を露出させて伸ばします。3ミリリットルの氷冷KHバッファーを左心室に注入して、大動脈から血栓を取り除き、心臓の生存率を維持します。心臓の表面にも数滴を置きます。静脈内カテーテル針を使用して、後壁を損傷することなく大動脈の動脈壁を穿刺します。次に、針でカテーテルを約3ミリメートル挿入します。その後、針を外し、同時にカテーテルチューブをさらに5ミリメートル挿入しますが、左心室には入らないようにします。シアノアクリレート接着剤を大動脈の穿刺領域に配置し、縫合糸を締め付けながらカテーテルチューブが大動脈から滑り落ちるのを防ぐ。大動脈とカニューレチューブの間に結び目をそっと二重にします。さらに5ミリリットルのKHバッファーを左心室に注入し、カニューレ挿入チューブを通って流れることを確認します。これは、カニューレ挿入が成功したことを示します。大動脈根から湾曲した鉗子を取り外します。カニューレ挿入剤や心臓組織との接触を避けながら、心臓を周囲の内臓から切り離します。すぐにカニューレを流れる氷冷KHバッファーシリンジに接続します。心臓への気泡の導入を避けることが重要です。非心臓組織を取り除きます。この段階で、心臓の再開鼓動を観察する必要があります。残りのシルク縫合糸の端を切ります。NMR室で、カニューレをシリンジから外し、灌流系の37度KHバッファーに接続します。次に、心臓を10ミリNMRチューブに挿入します。心臓をプローブの中央に配置し、心臓を入れたNMRチューブをNMR分光計のボアに挿入します。10〜20ヘルツの線幅が達成されるまで、1Hチャネルの水信号を使用してシムを実行します。次に、定常状態で50度のフリップ角度と1.1秒のTRを使用して、心臓の31Pスペクトルを取得します。これらの条件は、PCrおよび無機リン酸のシグナルよりもATPのシグナルに有利である。ATPおよびPCrのシグナルを観察することは、組織がNMR分光計内で生存可能であることを意味する。専用の処理プログラムを使用してスペクトルを解析します。7ヘルツの指数関数的アップライゼーションを実行します。ベースライン補正を使用してから、クレアチンホスホシグナルをマイナス2.5ppmに割り当てます。無機リン酸、ホスホクレアチン、およびATPのシグナルを観察します。ピルビン酸のサンプル、つまり最初の位置を炭素13で標識したサンプルを80分間分極します。80分の分極後、サンプルは溶液の準備ができています。これが溶解が起こる方法です。連続灌流アプローチを使用して溶解内容物を心臓に注入します。このアプローチは、組織の灌流および酸素化レベルを中断することなくピルビン酸を送達するように設計されました。過分極ピルビン酸を含む溶液培地を円錐管に注入し、次にバイパスに手動で注入し、次にバイパスを介して灌流を指示し、バイパス内容物が心臓を連続的に流れ、最終的に洗い流されます。毎分7.5ミリリットルの灌流速度と22ミリリットルのバイパス容量を使用します。そのため、過分極した媒体が心臓を約3分間流れていること。この時間ウィンドウでは、炭素13分光法を使用して、ピルビン酸、乳酸、および重炭酸塩のシグナルを測定します。乳酸励起と重炭酸塩励起を6秒間隔で交互に行う励起スキームを使用します。飽和選択励起を用いて炭素13シグナルを取得しました。このアプローチでは、基質ピルビン酸は最小限に興奮し、代謝産物である乳酸塩および重炭酸塩は完全に励起される。炭素13ピルビン酸代謝を約3分間観察して記録します。代謝調査は、ピルビン酸シグナルが減衰した後に終了します。この図は、KHバッファーを灌流したマウス心臓から記録された31Pスペクトルを示しています。心臓から取得したスペクトルは、アルファ、ベータ、ガンマATP、PCr、およびPiのシグナルを示し、Pi信号は2つの主要な成分で構成され、より高いフィールドに現れる左側の成分は、主にpH7.4のKHバッファーに起因するPi信号を表しています。右側の境界と均質でない成分は、より低いフィールドにあり、より酸性の環境にあるPi信号を示しています。この成分は心臓組織から生じます。次に、Pi信号全体からバッファPi信号を差し引くことにより、組織のPi信号を得た。その後、ppmスケールからpHスケールに変換されました。pHは、加重平均、加重中央値、グローバル最大値、および歪度を計算することにより、組織Pi信号のマルチパラメトリック分析を使用して調査されます。この図は、灌流マウス心臓への過分極炭素13ピルビン酸注入中に、過分極生成物選択的飽和励起アプローチを使用して得られた典型的な炭素13NMRスペクトルを示しています。乳酸ピルビン酸と重炭酸塩のシグナルに注目してください。ピルビン酸信号は、表示目的でここで切り捨てられます。基質および代謝物のシグナル強度の変化は、T1緩和、励起頻度、および流動特性によるものである。次に、これらの信号の積分強度をプロットします。さらに、32秒の実効減衰時定数を使用して、T1崩壊と4D周波数励起の影響について収集されたピルビン酸積分強度を黒丸でプロットしました。この補正により、基板に対して期待される流動ダイナミクスが得られることがわかりました。ウォッシュイン、プラトー、ウォッシュアウト。この補正された信号の時間経過を使用して、さらなる分析のために、NMRチューブ内のピルビン酸濃度が一定で最大である水色で強調表示されている時間ウィンドウを選択しました。LDHとPDHの割合は、選択した各時間ポイントについて計算され、平均化されました。この注射の主な値は、ナノモル/秒の単位で提供されます。要約すると、灌流マウス心臓において過分極ピルビン酸代謝研究を行うための実験系を示した。この情報がお役に立てば幸いです。

Research

JoVE Journal

Biology

Investigating Cardiac Metabolism in the Isolated Perfused Mouse Heart with Hyperpolarized [1-13C]Pyruvate and 13C/31P NMR Spectroscopy

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

ランゲンドルフ灌流ラット心臓の光学的マッピング

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

Characterization of the Isolated, Ventilated, and Instrumented Mouse Lung Perfused with Pulsatile Flow

絶縁型、ベンチレーテッド、および計装のマウス肺の特性評価は、拍動流を灌流

The isolated, ventilated and instrumented mouse lung preparation allows steady and pulsatile pulmonary vascular pressure-flow relationships to be measured ...

Detection of Nitric Oxide and Superoxide Radical Anion by Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy from Cells using Spin Traps

一酸化窒素とスピントラップを使用して、細胞からの電子常磁性共鳴分光法によるスーパーオキシドアニオンラジカルの検出

Reactive nitrogen/oxygen species (ROS/RNS) at low concentrations play an important role in regulating cell function, signaling, and immune response but in ...

Multi-parameter Measurement of the Permeability Transition Pore Opening in Isolated Mouse Heart Mitochondria

単離ミトコンドリアマウス心臓における透水性遷移孔の開口部のマルチパラメータ測定

The mitochondrial permeability transition pore (mtPTP) is a non specific channel that forms in the inner mitochondrial membrane to transport solutes with ...

Intravital Microscopy of the Microcirculation in the Mouse Cremaster Muscle for the Analysis of Peripheral Stem Cell Migration

末梢血幹細胞移動の解析のためのマウス精巣挙筋で微小循環の生体顕微鏡

In the era of intravascular cell application protocols in the context of regenerative cell therapy, the underlying mechanisms of stem cell migration to ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

シングルミトコンドリアスーパーオキシド無傷ハートや点滅の共焦点イメージング<em&gt;インビボ</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

単離された血液灌流ラットの肺の準備にシングル微小血管透過性を定量化する

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Optical Mapping of Intra-Sarcoplasmic Reticulum Ca2+ and Transmembrane Potential in the Langendorff-perfused Rabbit Heart

Optical Mapping of Intra-Sarcoplasmic Reticulum Ca2+ and Transmembrane Potential in the Langendorff-perfused Rabbit Heart

イントラ小胞体のCaの光学マッピング<sup&gt; 2+</sup&gt;とランゲンドルフ灌流ウサギの心臓における膜電位

Sarcoplasmic reticulum (SR) Ca2+ handling plays a key role in normal excitation-contraction coupling and aberrant SR Ca2+ handling is known to play a ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

マウス単離された灌流腎臓テクニック

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

分離と性質、大人マウス心臓から心臓の幹細胞の分化

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...