Name: synthesis of masarimycin, a small molecule inhibitor of gram-positive bacterial growth
Uploaded: 2022-01-07T14:30:00
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La recherche a été soutenue par la National Science Foundation sous le numéro de subvention 2009522. L’analyse RMN de la masarimycine a été soutenue par l’attribution d’un important programme d’instrumentation de recherche de la National Science Foundation sous le numéro de subvention 1919644. Toutes les opinions, constatations et conclusions, ou recommandations exprimées dans ce document sont celles des auteurs et ne reflètent pas nécessairement les points de vue de la National Science Foundation.

1. Méthodes générales
REMARQUE: Tous les composés ont été achetés auprès de fournisseurs standard et utilisés sans autre purification.
<ol><li>Effectuer une chromatographie sur couche mince (TLC) sur une plaque d’aluminium prélaquée de gel de silice XG F254. Détecter les taches sous une lampe UV, par immersion dans la tache de p-anisaldéhyde, ou en exposant à la vapeurI2 .</li>
	<li>Enregistrez tous les spectres de résonance magnétique n...

La masarimycine est un inhibiteur bactériostatique micromolaire unique de la croissance de B. subtilis35 et de S. pneumoniae37 . Chez B. subtilis, il a été démontré que la masarimycine inhibe le GlcNAcase LytG35, tandis que la cible moléculaire précise dans la paroi cellulaire de S. pneumoniae n’a pas été identifiée37. La synthèse de la masarimycine à l’aide de la synthèse organique ...

Le peptidoglycane (PG) est un polymère en forme de maille qui délimite la forme et la structure des cellules dans les bactéries Gram positif et Gram négatif 1,2. Cet hétéropolymère est une matrice de sucres aminés réticulés par de courts peptides 3,4,5,6 avec un squelette composé de résidus de N-acétylglucosamine (GlcNAc) et d’acide N-acétylmuramique (MurNAc) β(1,4)-liés (Figure 1)1. Attaché à la fraction lactyle C-3 de MurNAc est le peptide de la tige. Le métabolisme du PG implique un système étroitement coordonné d’enzymes biosynthétiques et dégradatives pour incorporer de nouveaux matériaux dans la paroi cellulaire 7,8. La dégradation du PG est effectuée par des enzymes collectivement appelées autolysines9 et classées en fonction de la spécificité de la liaison clivée. Les autolysines participent à de nombreux processus cellulaires, notamment la croissance cellulaire, la division cellulaire, la motilité, la maturation du PG, la chimiotaxie, la sécrétion de protéines, la compétence génétique, la différenciation et la pathogénicité10,11. Démêler les fonctions biologiques spécifiques des autolysines individuelles peut être intimidant, en partie à cause de la redondance fonctionnelle. Cependant, des études biophysiquesrécentes 8,12,13 et des études computationnelles12 ont fourni de nouvelles informations sur leurs rôles dans le métabolisme du PG. En outre, des rapports récents ont fourni des informations supplémentaires sur la synthèse14 et les 15,16,17 étapes médiées par membrane dans le métabolisme du PG. Une compréhension approfondie de la relation entre les voies dégradatives et synthétiques du métabolisme du PG pourrait donner lieu à des cibles antibiotiques inexploitées auparavant.
Bien qu’il y ait eu des progrès significatifs dans la méthodologie pour étudier la glycobiologie chez les eucaryotes, la glycobiologie bactérienne et, en particulier, le métabolisme pg n’a pas progressé à un rythme similaire. Les approches chimiques actuelles pour étudier le métabolisme du PG comprennent les antibiotiques marqués par fluorescence18, les sondes fluorescentes19,20 et le marquage métabolique 21,22,23,24. Ces nouvelles approches offrent de nouvelles façons d’interroger le métabolisme de la paroi cellulaire bactérienne. Bien que certaines de ces stratégies soient capables de marquer le PG in vivo, elles peuvent être spécifiques àl’espèce 19, ou ne fonctionner que dans des souches dépourvues d’une autolysine25 particulière. De nombreuses stratégies de marquage du PG sont destinées à être utilisées avec des parois cellulaires isolées26 ou avec des voies de biosynthèse de PG reconstituées in vitro 20,27,28. L’utilisation d’antibiotiques marqués par fluorescence est actuellement limitée aux étapes biosynthétiques et à la transpeptidation18.
Les connaissances actuelles sur les autolysines bactériennes et leur rôle dans le métabolisme de la paroi cellulaire proviennent de l’analyse génétique et biochimique in vitro 11,29,30,31,32. Bien que ces approches aient fourni une mine d’informations sur cette classe importante d’enzymes, il peut être difficile de déchiffrer leur rôle biologique. Par exemple, en raison de la redondance fonctionnelle33, la suppression d’une autolysine dans la plupart des cas n’entraîne pas l’arrêt de la croissance bactérienne. Ceci malgré leur rôle implicite dans la croissance et la divisioncellulaires 7,12. Une autre complication est que la délétion génétique des autolysines bactériennes peut donner naissance à des méta-phénotypes34. Les métaphénotypes proviennent de l’interaction complexe entre la voie affectée par la délétion génétique et d’autres voies interconnectées. Par exemple, un méta-phénotype peut survenir via un effet direct tel que l’absence d’une enzyme, ou un effet indirect tel qu’une perturbation des régulateurs.
Actuellement, il n’existe que quelques inhibiteurs des autolysines glycosidases telles que les N-acétylglucosaminidases (GlcNAcase) et les N-acétylmuramidases, qui peuvent être utilisées comme sondes chimiques pour étudier la dégradation du PG. Pour y remédier, le diamide masarimycine (précédemment appelé fgkc) a été identifié et caractérisé35 comme un inhibiteur bactériostatique de la croissance de Bacillus subtilis qui cible le GlcNAcase LytG32 (Figure 1). LytG est un GlcNAcase36 à action exo-agissante, membre du groupe 2 de la famille des glycosyl hydrolases 73 (GH73). C’est le principal GlcNAcase actif au cours de la croissance végétative32. À notre connaissance, la masarimycine est le premier inhibiteur d’un GlcNAcase à action PG qui inhibe la croissance cellulaire. Des études supplémentaires sur la masarimycine avec Streptococcus pneumoniae ont révélé que la masarimycine inhibe probablement le métabolisme de la paroi cellulaire dans cet organisme37. Ici, la préparation de masarimycine est rapportée pour une utilisation comme sonde de biologie chimique pour étudier la physiologie dans les organismes à Gram positif B. subtilis et S. pneumoniae. Des exemples d’analyse morphologique d’un traitement à concentration inhibitrice inférieure au minimum avec de la masarimycine, ainsi qu’un test de synergie/antagonisme sont présentés. Les tests de synergie et d’antagonisme utilisant des antibiotiques avec des modes d’action bien définis peuvent être un moyen utile d’explorer les connexions entre les processus cellulaires 38,39,40.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-Iodobenzoic acid</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>I7675-25G</td>
			<td>corrosive, irritant, light yellow to orange-brown powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Propanol</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>109827-4L</td>
			<td>flammable, irritant, colorless liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>34851-4L</td>
			<td>flammable, irritant, colorless liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum backed silica plates</td>
			<td>Sorbtech</td>
			<td>4434126</td>
			<td>silica gel XG F254 on aluminum backed plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>chloroform-d</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>151823-50G</td>
			<td>solvent for NMR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Mass Spectrometer</td>
			<td>Advion-Interchim</td>
			<td>Advion CMS</td>
			<td>compact mass spectrometer equiped with APCI source and atmospheric solids analysis probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Costar 96 well flat bottom plates-sterile</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>07-200-90</td>
			<td>for synergy/antagonism assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cover slips</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>12-547</td>
			<td>for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclohexanecarboxaldehyde</td>
			<td>CHEM-IMPEX INT&#39;L INC.</td>
			<td>24451</td>
			<td>flammable, irritant, colorless to pink liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclohexyl isocyanide</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>133302-5G</td>
			<td>irritant, colorless liquid, extremly unpleasant odor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclohexylamine</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>240648-100ML</td>
			<td>corrosive, flammable, irritant, colorless liquid unless contaminated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>537446-4L</td>
			<td>flammable, irritant, colorless liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flash silica cartridge (12g)</td>
			<td>Advion-Interchim</td>
			<td>PF-50SIHP-F0012</td>
			<td>pack of flash silica columns (12g) for purification of masarimycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formaldehyde</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>F8775-25ML</td>
			<td>fixing agent for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>H8651-25G</td>
			<td>buffer for microscopy fixing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexane, mixture of isomers</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>178918-4L</td>
			<td>environmentally damaging, flammable, irritant, health hazard, colorless liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance compact mass spectrometer</td>
			<td>Advion</td>
			<td>expression</td>
			<td>Atmospheric Solids Analysis Probe (ASAP), low resolution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Vac</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>Vacufuge plus</td>
			<td>vacuum aided by centrifugal force and temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>258148-2.5L</td>
			<td>corrosive, irritant, colorless liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>320331-2.5L</td>
			<td>strong acid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>immersion oil</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>12-365-19</td>
			<td>for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine, resublimed crystals</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>41955</td>
			<td>environmentally damaging, irritant, health hazard, dark grey/purple crystals</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mestre Mnova</td>
			<td>MestreLab Research</td>
			<td></td>
			<td>software for processing NMR spectra</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>439193-4L</td>
			<td>flammable, toxic, health hazard, colorless liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>M9140-25G</td>
			<td>microscopy stain for staining cell walls</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>meuller-hinton agar plates + 5% sheep blood</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>B21176X</td>
			<td>growth media for Streptococcus pneumoniae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>meuller-hinton broth</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>DF0757-17-6</td>
			<td>growth media for Streptococcus pneumoniae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope slides</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>22-310397</td>
			<td>for microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave Synthesis Labstation</td>
			<td>MILESTONE</td>
			<td>START SYNTH</td>
			<td>device that requires the ventilation of a fume hood, equipped with synthesis carousel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMR tubes</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>Z562769-5EA</td>
			<td>5mm NMR tubes 600 MHz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclear Magnetic Resonance (NMR)</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>Ascend 400</td>
			<td>large superconducting magnet (400MHz)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>optochin</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>AAB21627MC</td>
			<td>ethylhydrocupreine hydrochloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>petrie plates</td>
			<td>Celltreat</td>
			<td>229695</td>
			<td>for preparing agar plates for bacterial growth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primo Star Bright field/Phase contrast Microscope with ERc5s camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>for morphology studies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>puriFlash</td>
			<td>interchim</td>
			<td>XS520plus</td>
			<td>flash chromatography purification system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>resazurin</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>R7017-1G</td>
			<td>for synergy/antagonism assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary Evaporator</td>
			<td>Heidolph</td>
			<td>Hei-VAP Value &#34;The Collegiate&#34;</td>
			<td>solvent evaporator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>S6014-500G</td>
			<td>irritant, white powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>S271-1</td>
			<td>crystalline, colorless</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>S5886-500G</td>
			<td>for growth of B.subtilis and preparation of LB media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium sulfate</td>
			<td>SIGMA-ALDRICH</td>
			<td>7985592-500G</td>
			<td>anhydrous, granular, white</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tryptone</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>BP1421-500</td>
			<td>for growth of B.subtilis and preparation of LB media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whitney DG250 Workstation</td>
			<td>Microbiology International</td>
			<td>DG250</td>
			<td>anaerobic workstation. Anaerobic gas mixture used: 5% hydrogen, 10% carbon dioxide, balance nitrogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>yeast extract</td>
			<td>fisher chemical</td>
			<td>BP1422-500</td>
			<td>for growth of B.subtilis and preparation of LB media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen Lite (blue) software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>for acquiring micrographs</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis of masarimycin, a small molecule inhibitor of gram-positive bacterial growth

Le peptidoglycane (PG) dans la paroi cellulaire des bactéries est une structure macromoléculaire unique qui confère une forme et une protection contre l’environnement environnant. Au cœur de la compréhension de la croissance et de la division cellulaires se trouve la connaissance de la façon dont la dégradation du PG influence la biosynthèse et l’assemblage de la paroi cellulaire. Récemment, le marquage métabolique du PG par l’introduction de sucres ou d’acides aminés modifiés a été rapporté. Alors que l’interrogation chimique des étapes biosynthétiques avec de petites molécules inhibitrices est possible, les outils de biologie chimique pour étudier la dégradation du PG par les autolysines sont sous-développés. Les autolysines bactériennes sont une large classe d’enzymes qui sont impliquées dans la dégradation étroitement coordonnée du PG. Ici, un protocole détaillé est présenté pour la préparation d’une sonde à petite molécule, la masarimycine, qui est un inhibiteur de la N-acétylglucosaminidase LytG dans Bacillus subtilis, et le métabolisme de la paroi cellulaire chez Streptococcus pneumoniae. La préparation de l’inhibiteur par micro-ondes et la synthèse organique classique est fournie. Son applicabilité en tant qu’outil d’étude de la physiologie à Gram positif dans les essais biologiques est présentée.

La masarimycine est une petite molécule inhibitrice bactériostatique de B. subtilis et S. pneumoniae et il a été démontré qu’elle inhibe l’exo-action GlcNAcase LytG chez B. subtilis35,37 et cible la paroi cellulaire chez S. pneumoniae37. La masarimycine peut être préparée efficacement par la synthèse organique classique ou assistée par micro-ondes avec des rendements compris entre 55% et 7...

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Synthesis of Masarimycin, a Small Molecule Inhibitor of Gram-Positive Bacterial Growth

Un protocole détaillé est présenté pour la préparation du diamide bactériostatique masarimycine, une sonde à petites molécules qui inhibe la croissance de Bacillus subtilis et Streptococcus pneumoniae en ciblant la dégradation de la paroi cellulaire. Son application en tant que sonde chimique est démontrée dans des essais de synergie/antagonisme et des études morphologiques avec B. subtilis et S. pneumoniae.

Synthèse de la masarimycine, une petite molécule inhibitrice de la croissance bactérienne à Gram positif

Peptidoglycan (PG) in the cell wall of bacteria is a unique macromolecular structure that confers shape, and protection from the surrounding environment. ...

La masarimycine est l’un des rares inhibiteurs des autolysines bactériennes qui arrête la croissance cellulaire bactérienne. Il peut être utilisé pour étudier les différences entre l’inactivation chimique et génétique des autolysines, et fournit une approche orthogonale de la génétique pour étudier la physiologie bactérienne. La synthèse de la masarimycine peut sembler intimidante.Suivez attentivement les étapes indiquées. En cas de doute sur le fonctionnement d’une étape de réaction, confirmez par chromatographie sur couche mince et les modifications des valeurs RF. Pour commencer, préparez une solution 0,1 molaire de cyclohexylamine, de cyclohexylcarboxaldéhyde, d’acide ortho-iodobenzoïque et d’isocyanure de cyclohexyle dans du méthanol.Ajouter la barre d’agitation magnétique, puis mélanger cinq millilitres de cyclohexylamine et cinq millilitres de cyclohexyl carboxaldéhyde dans une fiole à fond rond coiffée et placer la fiole dans un bain de sable sur un agitateur à plaque chauffante pendant 30 minutes à 40 degrés Celsius. Surveillez la température à l’aide d’un thermomètre placé à environ un centimètre sous la surface du sable. Après 30 minutes, ajouter cinq millilitres d’isocyanure de cyclohexyle à la solution et remuer pendant 20 minutes supplémentaires à 50 degrés Celsius.Ensuite, ajoutez cinq millilitres d’acide ortho-iodobenzoïque au mélange réactionnel et continuez à remuer à 55 degrés Celsius pendant trois à cinq heures. Après trois heures d’agitation, surveillez périodiquement la progression de la réaction par chromatographie sur couche mince, ou TLC, à des intervalles d’environ une heure. Considérons la réaction comme terminée lorsqu’un seul point avec un facteur de rétention égal à 0,3 est visible sur la plaque TLC.Retirez le solvant dans l’évaporateur rotatif sous pression réduite. Une fois que tout le méthanol est évaporé, dissoudre le produit brut séché dans 30 millilitres d’acétate d’éthyle et le transférer dans un entonnoir de séparation. Extraire séquentiellement l’acétate d’éthyle avec de l’acide chlorhydrique à une molaire, de l’eau, une solution saturée de bicarbonate de sodium, de l’eau à nouveau et une solution saturée de chlorure de sodium, en éliminant les couches aqueuses à chaque extraction.Ensuite, retirez la couche d’acétate d’éthyle de l’entonnoir de séparation et collectez-la dans une fiole d’Erlenmeyer. Ajouter une spatule pleine de sulfate de sodium anhydre pour éliminer l’eau résiduelle de l’acétate d’éthyle. Filtrer la solution d’acétate d’éthyle séchée à travers un papier filtre numéro un pour éliminer le sulfate de sodium.Ensuite, lavez le papier filtre avec une petite quantité d’acétate d’éthyle. La solution d’acétate d’éthyle filtrée a été évaporée à sec sur un évaporateur rotatif sous pression réduite pour obtenir de la masarimycine sous forme d’huile une fois que tout l’acétate d’éthyle est retiré. Dissoudre l’huile de masarimycine dans un à deux millilitres d’une solution d’hexane 9:1 en isopropanol et remuer sur une plaque magnétique jusqu’à ce que le composé entier soit dissous.Pour purifier la masarimycine dissoute, effectuez une chromatographie flash avec une colonne flash de silice de 12 grammes, en phase normale. Équilibrez la colonne flash avec 10 volumes de colonne de phase mobile avec les instruments réglés à un débit de 15 millilitres par minute. Une fois l’équilibrage terminé, prélever la masarimycine dissoute à l’aide d’une seringue de cinq millilitres.Connectez la seringue directement au sommet de la colonne flash équilibrée et injectez la solution dans la colonne. Reconnectez la colonne chargée au système de chromatographie flash et lancez l’élution du gradient. Eluter masarimycine de la colonne en utilisant l’élution de gradient à une concentration finale de phase mobile de 10:90 hexane en isopropanol sur 12 volumes de colonne.Surveillez l’élution de la masarimycine par absorption à 230 et 254 nanomètres. Pour l’étude de morphologie, cultivez bacillus subtilis 11774 sur des plaques de gélose LB à 37 degrés Celsius. Dans toutes les expériences ultérieures, utilisez des cellules de deuxième passage cultivées dans cinq millilitres de bouillon LB jusqu’à ce que la densité optique à 600 nanomètres atteigne 1.Ensuite, à l’aide d’une pipette, ajouter la masarimycine aux tubes de culture marqués traités à une concentration finale de 3,8 micromoles. Pour les tubes de culture étiquetés témoins, ajouter un volume équivalent de DMSO. Placez les échantillons dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant 90 minutes en agitant à 150 tr / min.Après 90 minutes, fixez chimiquement les cultures dans un mélange 1:10 de milieux de culture et de tampon de fixation à quatre degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, utilisez une pipette pour appliquer 10 à 20 microlitres des échantillons chimiquement fixés sur des lames de microscope en verre et les laisser sécher à l’air. Ensuite, fixez à la chaleur les échantillons séchés à l’air en chauffant les lames de verre à l’aide d’un brûleur Bunsen.Après fixation thermique, tacher les échantillons avec 100 microlitres de bleu de méthylène à 0,1%. Après une incubation de 10 minutes avec la tache, lavez l’excès de colorant avec de l’eau distillée. Ensuite, chauffez doucement les lames colorées à 60 degrés Celsius dans un four pendant 15 à 20 minutes pour amener les cellules à un plan focal commun.Scellez les échantillons colorés en plaçant un couvercle de microscope sur les cellules colorées. Ensuite, scellez les bords à l’aide de ciment à lame de microscope. Placez la lame de microscope scellée sur la scène du microscope et mettez l’image au point à un grossissement de 100X à l’aide de la microscopie à champ lumineux.Placez une goutte d’huile d’immersion sur la lame du microscope et mettez le champ de vision au point à l’aide d’un grossissement de 1000X. Acquérir des micrographies à l’aide d’une caméra fixée au microscope et à son logiciel associé. Obtenez des images à l’aide des paramètres de balance des blancs et d’ouverture automatiques du logiciel.La chromatographie flash permet une purification rapide de la masarimycine avec une grande pureté. L’évaluation de la synergie ou de l’antagonisme avec l’inhibiteur de l’ATPase optochine chez S.pneumoniae est présentée ici. La concentration la plus faible du composé pour inhiber la croissance bactérienne, indiquée par la couleur bleue, est considérée comme la valeur minimale de concentration inhibitrice en présence d’un co-médicament.En revanche, les puits de couleur rose indiquent une croissance bactérienne. Les essais phénotypiques utilisant la masarimycine à 0,75 fois les concentrations inhibitrices minimales ont démontré un phénotype semblable à celui de la saucisse pour B.subtilis et un phénotype agglutinant pour S.pneumoniae. Faites attention à la température de la réaction.Assurez-vous que la réaction est complète en surveillant avec TLC. Cette méthode peut être utilisée en conjonction avec des antibiotiques marqués par fluorescence pour étudier les modifications de la paroi cellulaire par microscopie.

Research

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Biochemistry

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Recherche

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Procédé pour l&#39;identification d&#39;inhibiteurs de petites molécules de l&#39;interaction protéine-protéine entre HCN1 et TRIP8b

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