Name: preparing and rearing axenic insects with tissue cultured seedlings for host-gut microbiota interaction studies of the leaf beetle
Uploaded: 2021-10-08T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing and Rearing Axenic Insects with Tissue Cultured Seedlings for Host-Gut Microbiota Interaction Studies of the Leaf Beetle at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door de National Natural Science Foundation of China (31971663) en het Young Elite Scientists Sponsorship Program door CAST (2020QNRC001).

1. Insectenopfok
<ol><li>Houd de P. versicolora populatie in een groeikamer op de conditie van 27 °C en 70 ± 5% relatieve vochtigheid met een fotoperiode van 16 h licht/8 h donker. Leg ze in geperforeerde plastic dozen met betegeld nat absorberend papier en voer ze verse populierentakken. Spuit schoon water op absorberend papier om vocht vast te houden en ververs de takken om de twee dagen.</li>
	<li>Isoleer volwassenen voor ovipositie na verpopping. Voer ze zachte bladeren om meer eieren te...

<ol>
	<li>Moran, N. A., Ochman, H., Hammer, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolutionary+and+ecological+consequences+of+gut+microbial+communities.">Evolutionary and ecological consequences of gut microbial communities.</a> Annual Review of Ecology, Evolution, and Systematics. 50 (1), 451-475 (2019).</li><li>Warnecke, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metagenomic+and+functional+analysis+of+hindgut+microbiota+of+a+wood-feeding+higher+termite.">Metagenomic and functional analysis of hindgut microbiota of a wood-feeding higher termite.</a> Nature. 450 (7169), 560-565 (2007).</li><li>Tokuda, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiber-associated+spirochetes+are+major+agents+of+hemicellulose+degradation+in+the+hindgut+of+wood-feeding+higher+termites.">Fiber-associated spirochetes are major agents of hemicellulose degradation in the hindgut of wood-feeding higher termites.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (51), 11996-12004 (2018).</li><li>Wang, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+microbiome+confer+multigenerational+host+resistance+after+sub-toxic+pesticide+exposure.">Changes in microbiome confer multigenerational host resistance after sub-toxic pesticide exposure.</a> Cell Host &amp; Microbe. 27 (2), 213-224 (2020).</li><li>Shin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+microbiome+modulates+host+developmental+and+metabolic+homeostasis+via+insulin+signaling.">Drosophila microbiome modulates host developmental and metabolic homeostasis via insulin signaling.</a> Science. 334 (6056), 670-674 (2011).</li><li>Storelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactobacillus+plantarum+promotes+Drosophila+systemic+growth+by+modulating+hormonal+signals+through+TOR-dependent+nutrient+sensing.">Lactobacillus plantarum promotes Drosophila systemic growth by modulating hormonal signals through TOR-dependent nutrient sensing.</a> Cell Metabolism. 14 (3), 403-414 (2011).</li><li>Salem, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitamin+supplementation+by+gut+symbionts+ensures+metabolic+homeostasis+in+an+insect+host.">Vitamin supplementation by gut symbionts ensures metabolic homeostasis in an insect host.</a> Proceedings. Biological Sciences. 281 (1796), 20141838 (2014).</li><li>Koch, H., Schmid-Hempel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Socially+transmitted+gut+microbiota+protect+bumble+bees+against+an+intestinal+parasite.">Socially transmitted gut microbiota protect bumble bees against an intestinal parasite.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (48), 19288-19292 (2011).</li><li>Cirimotich, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+microbe-mediated+refractoriness+to+Plasmodium+infection+in+Anopheles+gambiae.">Natural microbe-mediated refractoriness to Plasmodium infection in Anopheles gambiae.</a> Science. 332 (6031), 855-858 (2011).</li><li>Kaltenpoth, M., Gottler, W., Herzner, G., Strohm, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiotic+bacteria+protect+wasp+larvae+from+fungal+infestation.">Symbiotic bacteria protect wasp larvae from fungal infestation.</a> Current Biology. 15 (5), 475-479 (2005).</li><li>Yuan, C., Xing, L., Wang, M., Hu, Z., Zou, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+modulates+gut+immunity+and+promotes+baculovirus+infection+in+Helicoverpa+armigera.">Microbiota modulates gut immunity and promotes baculovirus infection in Helicoverpa armigera.</a> Insect Science. , (2021).</li><li>Dillon, R. J., Vennard, C. T., Charnley, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromones+-+Exploitation+of+gut+bacteria+in+the+locust.">Pheromones - Exploitation of gut bacteria in the locust.</a> Nature. 403 (6772), 851 (2000).</li><li>Xu, L. T., Lou, Q. Z., Cheng, C. H., Lu, M., Sun, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut-associated+bacteria+of+Dendroctonus+valens+and+their+involvement+in+verbenone+production.">Gut-associated bacteria of Dendroctonus valens and their involvement in verbenone production.</a> Microbial Ecology. 70 (4), 1012-1023 (2015).</li><li>Schretter, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gut+microbial+factor+modulates+locomotor+behaviour+in+Drosophila.">A gut microbial factor modulates locomotor behaviour in Drosophila.</a> Nature. 563 (7731), 402-406 (2018).</li><li>Jia, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiome+modulates+Drosophila+aggression+through+octopamine+signaling.">Gut microbiome modulates Drosophila aggression through octopamine signaling.</a> Nature Communications. 12 (1), 2698 (2021).</li><li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+and+immunological+effects+of+gut+microbiota+in+leaf+beetles+at+the+local+and+systemic+levels.">Metabolic and immunological effects of gut microbiota in leaf beetles at the local and systemic levels.</a> Integrative Zoology. 16 (3), 313-323 (2021).</li><li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+action+of+the+gut+microbiota+in+environmental+RNA+interference+in+a+leaf+beetle.">Synergistic action of the gut microbiota in environmental RNA interference in a leaf beetle.</a> Microbiome. 9 (1), 98 (2021).</li><li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+in+an+invasive+bark+beetle+infected+by+a+pathogenic+fungus+accelerates+beetle+mortality.">Gut microbiota in an invasive bark beetle infected by a pathogenic fungus accelerates beetle mortality.</a> Journal of Pest Science. 92, 343-351 (2019).</li><li>Berasategui, A., Shukla, S., Salem, H., Kaltenpoth, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+applications+of+insect+symbionts+in+biotechnology.">Potential applications of insect symbionts in biotechnology.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 100 (4), 1567-1577 (2016).</li><li>Tikhe, C. V., Martin, T. M., Howells, A., Delatte, J., Husseneder, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+genetically+engineered+Trabulsiella+odontotermitis+as+a+'Trojan+Horse'+for+paratransgenesis+in+termites.">Assessment of genetically engineered Trabulsiella odontotermitis as a 'Trojan Horse' for paratransgenesis in termites.</a> BMC Microbiology. 16 (1), 202 (2016).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fighting+malaria+with+engineered+symbiotic+bacteria+from+vector+mosquitoes.">Fighting malaria with engineered symbiotic bacteria from vector mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (31), 12734-12739 (2012).</li><li>Leonard, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+symbionts+activate+honey+bee+immunity+and+limit+pathogens.">Engineered symbionts activate honey bee immunity and limit pathogens.</a> Science. 367 (6477), 573-576 (2020).</li><li>Kietz, C., Pollari, V., Meinander, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+germ-free+Drosophila+to+study+gut-microbe+interactions:+protocol+to+rear+Drosophila+under+axenic+conditions.">Generating germ-free Drosophila to study gut-microbe interactions: protocol to rear Drosophila under axenic conditions.</a> Current Protocols in Toxicology. 77 (1), 52 (2018).</li><li>Brummel, T., Ching, A., Seroude, L., Simon, A. F., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+lifespan+enhancement+by+exogenous+bacteria.">Drosophila lifespan enhancement by exogenous bacteria.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (35), 12974-12979 (2004).</li><li>Correa, M. A., Matusovsky, B., Brackney, D. E., Steven, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+axenic+Aedes+aegypti+demonstrate+live+bacteria+are+not+required+for+mosquito+development.">Generation of axenic Aedes aegypti demonstrate live bacteria are not required for mosquito development.</a> Nature Communications. 9 (1), 4464 (2018).</li><li>Romoli, O., Schonbeck, J. C., Hapfelmeier, S., Gendrin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+germ-free+mosquitoes+via+transient+colonisation+allows+stage-specific+investigation+of+host-microbiota+interactions.">Production of germ-free mosquitoes via transient colonisation allows stage-specific investigation of host-microbiota interactions.</a> Nature Communications. 12 (1), 942 (2021).</li><li>Berasategui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota+of+the+pine+weevil+degrades+conifer+diterpenes+and+increases+insect+fitness.">Gut microbiota of the pine weevil degrades conifer diterpenes and increases insect fitness.</a> Molecular Ecology. 26 (15), 4099-4110 (2017).</li><li>Lin, X. L., Kang, Z. W., Pan, Q. J., Liu, T. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+five+antibiotics+on+larval+gut+bacterial+diversity+of+Plutella+xylostella+(Lepidoptera:+Plutellidae).">Evaluation of five antibiotics on larval gut bacterial diversity of Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae).</a> Insect Science. 22 (5), 619-628 (2015).</li><li>Muhammad, A., Habineza, P., Hou, Y., Shi, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+red+palm+weevil+Rhynchophorus+Ferrugineus+(Olivier)+(Coleoptera:+Dryophthoridae)+germ-free+larvae+for+host-gut+microbes+interaction+studies.">Preparation of red palm weevil Rhynchophorus Ferrugineus (Olivier) (Coleoptera: Dryophthoridae) germ-free larvae for host-gut microbes interaction studies.</a> Bio-protocol. 9 (24), 3456 (2019).</li><li>Gelman, D. B., Bell, R. A., Liska, L. J., Hu, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+diets+for+rearing+the+Colorado+potato+beetle,+Leptinotarsa+decemlineata.">Artificial diets for rearing the Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata.</a> Journal of Insect Science. 1, 7 (2001).</li><li>Bengtson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+program+for+the+evaluation+of+artificial+diets.">A comprehensive program for the evaluation of artificial diets.</a> Journal of the World Aquaculture Society. 24 (2), 285-293 (2007).</li><li>Utsumi, S., Ando, Y., Ohgushi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+feeding+preference+in+a+leaf+beetle:+the+importance+of+phenotypic+plasticity+of+a+host+plant.">Evolution of feeding preference in a leaf beetle: the importance of phenotypic plasticity of a host plant.</a> Ecology Letters. 12 (9), 920-929 (2009).</li><li>Ishihara, M., Ohgushi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reproductive+inactivity+and+prolonged+developmental+time+induced+by+seasonal+decline+in+host+plant+quality+in+the+willow+leaf+beetle+Plagiodera+versicolora+(Coleoptera:+Chrysomelidae).">Reproductive inactivity and prolonged developmental time induced by seasonal decline in host plant quality in the willow leaf beetle Plagiodera versicolora (Coleoptera: Chrysomelidae).</a> Environmental Entomology. 35 (2), 524-530 (2006).</li><li>Bright, M., Bulgheresi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+complex+journey:+transmission+of+microbial+symbionts.">A complex journey: transmission of microbial symbionts.</a> Nature Reviews: Microbiology. 8 (3), 218-230 (2010).</li><li>Hassan, B., Siddiqui, J. A., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertically+transmitted+gut+bacteria+and+nutrition+influence+the+immunity+and+fitness+of+Bactrocera+dorsalis+larvae.">Vertically transmitted gut bacteria and nutrition influence the immunity and fitness of Bactrocera dorsalis larvae.</a> Frontiers in Microbiology. 11, 596352 (2020).</li><li>Hosokawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obligate+bacterial+mutualists+evolving+from+environmental+bacteria+in+natural+insect+populations.">Obligate bacterial mutualists evolving from environmental bacteria in natural insect populations.</a> Nature Microbiology. 1, 15011 (2016).</li><li>Habineza, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+promoting+effect+of+gut+microbiota+on+growth+and+development+of+red+palm+weevil,+Rhynchophorus+ferrugineus+(Olivier)+(Coleoptera:+Dryophthoridae)+by+modulating+its+nutritional+metabolism.">The promoting effect of gut microbiota on growth and development of red palm weevil, Rhynchophorus ferrugineus (Olivier) (Coleoptera: Dryophthoridae) by modulating its nutritional metabolism.</a> Frontiers in Microbiology. 10, 1212 (2019).</li><li>Meilan, R., Ma, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poplar+(Populus+spp.).">Poplar (Populus spp.).</a> Methods in Molecular Biology. 344, 143-151 (2006).</li><li>Wani, Z. A., Ashraf, N., Mohiuddin, T., Riyaz-Ul-Hassan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant-endophyte+symbiosis,+an+ecological+perspective.">Plant-endophyte symbiosis, an ecological perspective.</a> Applied Microbiology and Biotechnology. 99 (7), 2955-2965 (2015).</li><li>Grout, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meristem-tip+culture.">Meristem-tip culture.</a> Methods in Molecular Biology. 6, 81-91 (1990).</li></ol>

Bereiding van kiemvrije larven en het verkrijgen van gnotobiotische larven door specifieke bacteriestammen opnieuw te introduceren, zijn krachtige methoden om de mechanismen die ten grondslag liggen aan gastheer-microbe-interacties op te helderen. Pas uitgekomen larven verkrijgen darmmicrobiota op twee belangrijke manieren: verticale overdracht van de moeder naar het nageslacht of horizontale acquisitie van broers en zussen en de omgeving34. De eerste kan worden vervuld door ouderlijke overdracht ...

Net als bij zoogdieren is het spijsverteringskanaal van insecten een holte voor voedselvertering en -absorptie. De meeste insecten herbergen diverse commensale bacteriën die gedijen in hun darmen en leven van voeding geleverd door gastheren1. De darmcommensale gemeenschap heeft een diepgaande invloed op meerdere fysiologische processen bij insecten, waaronder voedselvertering en ontgifting 2,3,4, voeding en ontwikkeling 5,6,7, verdediging tegen pathogenen en parasieten 8,9,10,11, chemische communicatie 12,13 en gedragingen14 ,15. Intrigerend genoeg kunnen sommige darmmicrobiota facultatief pathogeen zijn of worden gemanipuleerd door pathogenen binnen te dringen om de infectie te verergeren, wat aangeeft dat darmbacteriën in sommige gevallen schadelijk kunnen zijn 16,17,18. Darmbacteriën kunnen ook dienen als een microbiële hulpbron voor biotechnische toepassingen en ongediertebestrijding. Lignocellulose-verterende bacteriën uit fytofagote en xylofagische insecten werden bijvoorbeeld gebruikt om plantencellen te verteren voor de ontwikkeling van biobrandstoffen19. De verspreiding van gemanipuleerde darmsymbionten die bioactieve moleculen tot expressie brengen, is een nieuwe en veelbelovende tactiek om land- en bosbouwplagen en muggen die infectieziekten overbrengen te beheren 19,20,21, die ook kunnen worden gebruikt om de fitheid van nuttige insecten te verbeteren 22. Illustreren hoe een darmbacterie zich in vivo gedraagt, wordt daarom als een prioriteit beschouwd om zijn functie volledig te benutten en verder te benutten voor verschillende toepassingen.
Dieren kunnen 1 tot >1000 symbiotische microbiële soorten in de darmherbergen 1. Als gevolg hiervan is het moeilijk om nauwkeurig te verifiëren hoe individuele bacteriële taxa of hun assemblage in een dier presteren en of de gastheer of zijn microbiële partners een specifieke functie aansturen. Daarom is het voorbereiden van axeenlarven om gnotobiotische insecten te verkrijgen door mono- of multi-species kolonisatie noodzakelijk om de bacteriële functie en interactie met insecten te onderzoeken23. Op dit moment zijn het toedienen van antibioticacocktails en het steriliseren van het oppervlak van insecteneieren gebruikelijke methoden om darmbacteriën te verwijderen 14,24,25,26. Antibioticadiëten kunnen darmbacteriën echter niet volledig elimineren en hebben een negatief effect op de fysiologie van gastheerinsecten27,28. Bijgevolg kan het gebruik van met antibiotica behandelde insecten de ware vermogens van sommige darmbacteriën verdoezelen. Gelukkig kan oppervlaktesterilisatie van eieren dit probleemtenietdoen 23,29, wat geen of verwaarloosbare effecten heeft op experimentele insecten. Bovendien kunnen kunstmatige diëten niet volledig lijken op natuurlijk insectenvoer en het ontwikkelen van een kunstmatig dieet is een kostbaar en arbeidsintensief proces30,31.
De wilgenbladkever, Plagiodera versicolora (Laicharting) (Coleoptera: Chrysomelidae), is een wijdverspreide bladetende plaag die zich voornamelijk voedt met heilzame bomen, zoals wilgen (Salix) en populier (Populus L.) 32,33. Hier werd de wilgenbladkever gebruikt als representatief bladetende insect om een protocol te ontwikkelen om een kiemvrij insect voor te bereiden en groot te brengen. We maakten gebruik van plantenweefselkweek om kiemvrije populierenbladeren te verkrijgen om P. versicolora axeenlarven uit gesteriliseerde eieren te kweken. De axeenstatus van P. versicolora-larven werd geverifieerd via cultuurafhankelijke en cultuuronafhankelijke testen. Dit protocol kan axeeninsecten in stand houden die de wilde toestand beter nabootsen dan het fokken van insecten met een kunstmatig dieet. Wat nog belangrijker is, deze methode is handig tegen zeer lage kosten, wat de haalbaarheid verhoogt van het verkrijgen van axeeninsecten voor toekomstige interactiestudies tussen insecten en darmmicrobiota, vooral voor niet-modelinsecten zonder goed ontwikkelde kunstmatige diëten.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m syringe filters</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGP033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mg/mL NAA stock solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>a. Prepare 0.1 M NaOH solution (dissolve 0.8 g NaOH in 200 mL of distilled water). 
			b. Add 0.2 g NAA in a 250 mL beaker, add little 0.1 M NaOH solution until NAA dissolved, and adjust the final volume to 200 mL with distilled water. 
			c. Filter the solution to remove bacteria with a 0.22 &#181;m syringe filter and a 50 mL sterile syringe, subpackage the solution in 1.5 mL centrifuge tubes and restore at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>F600620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10x PBS stock solution</td>
			<td>Biosharp Life Sciences</td>
			<td>BL302A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 M KOH solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Dissolve 22.44 g KOH (molecular weight: 56.1) in 200 mL of distilled water and autoclave it for 20 min at 121 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>250 mL and 2,000 mL beakers</td>
			<td>Shubo</td>
			<td>sb16455</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile syringes</td>
			<td>Jinta</td>
			<td>JT0125789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>500 mL measuring cylinder</td>
			<td>Shubo</td>
			<td>sb1601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50x TAE stock solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>a.&#160;Dissolve 242 g Tris and 18.612 g EDTA in 700 mL of distilled water. 
			b. Adjust pH to 7.8 with about 57.1 mL of acetic acid. 
			c. Adjust the final volume to 1,000 mL. 
			d. The stock solution was diluted to 1x TAE buffer when used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Xingheda trade</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-naphthalene acetic acid (NAA)</td>
			<td>Solarbio Life Sciences</td>
			<td>86-87-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbing paper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>22.3 cm x 15.3 cm x 9 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Coolaber</td>
			<td>9002-18-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>111860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclave</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MLS-3781L-PC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead-beating homogenizer</td>
			<td>Jing Xin</td>
			<td>XM-GTL64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA extraction kit</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>116560200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Saiguo Biotech</td>
			<td>1340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Jiaojie</td>
			<td></td>
			<td>70 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel electrophoresis unit</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>164-5052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel Signal Green nucleic acid dye</td>
			<td>TsingKe</td>
			<td>TSJ003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Germ-free poplar seedlings</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Shan Xin poplar from Ludong University in Shandong Province</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Golden Star Super PCR Master Mix (1.1&#215;)</td>
			<td>TsingKe</td>
			<td>TSE101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Growth chamber</td>
			<td>Ruihua</td>
			<td>HP400GS-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB agar medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>a. Dissolve 5 g tryptone, 5 g NaCl, 2.5 g yeast extract in 300 mL of distilled water. 
			b. Adjust the final volume to 500 mL, transfer the solution to a 1,000 mL conical flask, and add 7.5 g agar. 
			c. Autoclave the medium for 20 min at 121 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge</td>
			<td>DRAGONLAB</td>
			<td>D1008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS basic medium</td>
			<td>Coolaber</td>
			<td>PM1121-50L</td>
			<td>M0245</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS solid medium for germ-free poplar seedling culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>a. Dissolve 4.43 g MS basic medium powder and 30 g sucrose in 800 mL of distilled water. 
			b. Adjust the pH to about 5.8 with 2 M KOH by a pH meter. 
			c. Adjust the final volume to 1,000 mL, separate into two parts, transfer into two 1,000 mL conical flasks, and add 2.6 g agar per 500 mL. 
			d. Autoclave for 20 min at 121 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop 1000 spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paintbrush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 cm width, used to collect the eggs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>PM-996</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Thermal Cyclers</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>6331000076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Supin</td>
			<td></td>
			<td>90 mm diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>METTLER TOLEDO</td>
			<td>FE20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 0.2-2 &#181;L</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>ECS000699</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 100-1,000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000267</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 20-200 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipettes 2-20 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000232</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plant tissue culture container</td>
			<td>Chembase</td>
			<td>ZP21</td>
			<td>240 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic box</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2.35 L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium hydroxide (KOH)</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers for amplifying the bacterial 16S rRNA gene</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td></td>
			<td>27-F: 5&#8217;-ACGGATACCTTGTTACGAC-3&#8217;, 1492R: 5&#8217;-ACGGATACCTTGTTACGAC-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steel balls</td>
			<td></td>
			<td>0.25 mm</td>
			<td>used to grind tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>SZ61</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co. Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trans2K plus II DNA marker</td>
			<td>Transgene Biotech</td>
			<td>BM121-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris base</td>
			<td>Biosharp Life Sciences</td>
			<td>1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptone</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>&#160;LP0037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV transilluminator</td>
			<td>Monad Biotech</td>
			<td>QuickGel 6100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>Scilogex</td>
			<td>MX-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willow branches</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Sha Lake Park, Wuhan, China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willow leaf beetle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Huazhong Agricultural University, Wuhan, China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>LP0021</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparing and rearing axenic insects with tissue cultured seedlings for host-gut microbiota interaction studies of the leaf beetle

Insectendarmen worden gekoloniseerd door diverse bacteriën die de fysiologische eigenschappen van de gastheer diepgaand kunnen beïnvloeden. Het introduceren van een bepaalde bacteriestam in een axeeninsect is een krachtige methode om de microbiële darmfunctie te verifiëren en de mechanismen op te helderen die ten grondslag liggen aan interacties tussen darmmicroben en gastheer. Het toedienen van antibiotica of het steriliseren van eioppervlakken zijn twee veelgebruikte methoden om darmbacteriën van insecten te verwijderen. Naast de mogelijke nadelige effecten van antibiotica op insecten, gaven eerdere studies echter aan dat het voeren van antibiotica darmbacteriën niet kon elimineren. Kiemvrije kunstmatige diëten worden dus over het algemeen gebruikt om axeeninsecten te behouden, wat een vervelend en arbeidsintensief proces is dat niet volledig kan lijken op voedingscomponenten in natuurlijk voedsel. Hier wordt een efficiënt en eenvoudig protocol beschreven om axeenlarven van een bladkever (Plagiodera versicolora) te bereiden en te onderhouden. In het bijzonder werden oppervlakken van de kevereieren gesteriliseerd, waarna kiemvrije populierenbladeren werden gebruikt om axeenlarven op te voeden. De axeenstatus van de insecten werd verder bevestigd door middel van cultuurafhankelijke en cultuuronafhankelijke testen. Gezamenlijk, door het combineren van eierdesinfectie en kiemvrije teelt, werd een efficiënte en handige methode ontwikkeld om axeen P. versicolora te verkrijgen, een gemakkelijk overdraagbaar hulpmiddel voor andere bladetende insecten.

De levensfasen van P. versicolora zijn weergegeven in figuur 1. Het volwassen mannetje is kleiner dan het volwassen vrouwtje (figuur 1A). In het veld clustert de kever zijn eieren op een blad; hier werden vier eieren losgemaakt van een blad (figuur 1B). De populierenstengelsegmenten en zaailingen die worden gebruikt voor het fokken van axeeninsecten zijn weergegeven in figuur 2. De darm van een...

Watch this Scientific Journal Video about Preparing and Rearing Axenic Insects with Tissue Cultured Seedlings for Host-Gut Microbiota Interaction Studies of the Leaf Beetle at JoVE.com

Preparing and Rearing Axenic Insects with Tissue Cultured Seedlings for Host-Gut Microbiota Interaction Studies of the Leaf Beetle

Om een axeeninsect te verkrijgen, wordt het eioppervlak gesteriliseerd en wordt de uitgekomen larve vervolgens grootgebracht met behulp van axeenbladeren. Deze methode biedt een efficiënte manier voor axeeninsectenbereiding zonder antibiotica toe te dienen of een kunstmatig dieet te ontwikkelen, dat ook kan worden toegepast op andere bladetende insecten.

Het voorbereiden en fokken van axeeninsecten met weefsel gekweekte zaailingen voor gastheer-darmmicrobiota-interactiestudies van de bladkever

Insect guts are colonized by diverse bacteria that can profoundly impact the host&#39;s physiological traits. Introducing a particular bacterial strain ...

De darmbacteriën kunnen meerdere fysiologische processen van insectengastheren beïnvloeden. Het voorbereiden en onderhouden van axeenlarven is een krachtig hulpmiddel om darmbacteriënfuncties te bestuderen. De belangrijkste voordelen van dit protocol zijn dat plantenweefselkweek wordt gebruikt om kiemvrije bladeren te verkrijgen om axeenbladetende insecten te achterhalen die zijn afgeleid van oppervlaktegesteriliseerde eieren, en dat deze methode niet wordt beperkt door kunstmatige diëten.Deze methode is handig en verhoogt de zichtbaarheid van het behoud van axeeninsecten voor toekomstige darmbacteriënstudies, vooral voor niet-modelinsecten zonder goed ontwikkelde kunstmatige diëten. Houd de P.versicolora-populatie in een groeikamer op 27 graden Celsius en 70% relatieve vochtigheid, met een licht van 16 uur en een donkere fotoperiode van acht uur. Plaats de insecten in geperforeerde plastic dozen met gekanteld nat absorberend papier en voer ze verse populierentakken.Spuit schoon water op absorberend papier om vocht vast te houden en ververs de takken om de twee dagen. Isoleer volwassenen voor ovipositie na verpopping en voer ze zachte bladeren om meer eieren te verkrijgen. Verzamel binnen 24 uur nieuw gelegde eieren en plaats ze gedurende 60 uur op vochtig absorberend papier om axeenlarven te bereiden.Bereid MS-medium in één milligram per milliliter alfa-naftaleenazijnzuur of NAA-stamoplossingen. Voeg in een bioveiligheidskap 50 microliter van de NAA-voorraadoplossing toe aan 500 milliliter MS-medium en schud om goed te mengen. Giet vervolgens ongeveer 50 milliliter per weefselkweekcontainer en wacht op stolling.Steriliseer scalpels en tangen in een alcohollampvlam in de bioveiligheidskap. Snijd drie tot vier centimeter stengelsegmenten met apicale knoppen of laterale knoppen van populierenzaailingen bij ongeveer een maand groei en breng ze in het kweekmedium, een of twee stengelsegmenten per container. Incubeer deze stengelsegmenten ongeveer 30 dagen in een groeikamer.En gebruik deze kiemvrije bladeren om de axeenlarven te voeden. Autoclaaf Petrischaaltjes, verfkwasten, filtreerpapier, gedestilleerd water in een petrischaaltje met LB-agarmedium. Leg bladeren met aanhangende eieren in een petrischaaltje.Verwijder vervolgens voorzichtig de eieren van de bladeren met een tang en breng ze over naar een andere petrischaal. Was deze eieren acht minuten met 75% ethanol. Herhaal vervolgens de was vier keer met steriel water.Breng de eieren over op LB-agarmedium om vocht te behouden voor het uitkomen. Plaats de petrischaal in een groeikamer en wacht tot de eieren binnen 24 uur uitkomen. Tegel in een bioveiligheidskap drie stukken nat filterpapier in een petrischaaltje en plaats kiemvrije populierenbladeren op het papier.Verzamel de larven en plaats ze op de bladeren. Sluit de petrischaal af met Parafilm en incubeer deze in een groeikamer. Vervang de bladeren om de twee dagen.Breng voor de conventioneel gekweekte groepen de eieren van de bladeren over naar een petrischaal met vochtig filterpapier en voed deze larve met kiemvrije populierenbladeren. Selecteer willekeurig drie eerste, tweede en derde instarlarven uit de kiemvrije en conventioneel gekweekte groepen. Ontleed de derde instarlarven met een steriele schaar en tang onder een stereomicroscoop en verzamel hun ingewanden in microcentrifugebuizen.Verzamel intacte eerste en tweede instar larven in buizen. Voeg 100 microliter PBS en drie stalen kogels toe aan de buizen van 1,5 milliliter en maal de weefsels tot homogenaten met behulp van een kralenklophomogenisator. Voeg 100 microliter homogenaat toe aan LB-agarmedium en -plaat met behulp van een steriele glazen spreidstaaf.Incubeer de platen bij 37 graden Celsius gedurende 24 uur. Observeer vervolgens de bacteriekolonies. Extraheer het totale DNA van de eerder verkregen weefsels met behulp van een DNA-extractiekit en meet de DNA-concentratie met een spectrofotometer.Amplify het bacteriële 16S rRNA-gen met behulp van universele 16S rRNA-primers met PCR, waardoor de reactie wordt opgezet zoals beschreven in het teksthandschrift. Bewaar de PCR-producten bij vier graden Celsius tot verdere analyse. Meng de PCR-producten met nucleïnezuurkleurstof en analyseer ze met behulp van elektroforese op een 1% agarose-gel in 1X TAE-buffer.Gebruik 10 microliter van een DNA-marker als referentie. Observeer de gel met een UV-transilluminator en zoek naar het doelfragment rond 1.500 basenparen. Hoewel er geen bacteriekolonies werden waargenomen in een kiemvrije groep, werden ze waargenomen in alle conventioneel gekweekte groepen, wat aangeeft dat larven uit gesteriliseerde eieren die weefsel gekweekte populierenbladeren kregen, geen bacteriën bevatten.De 1.500 basenpaar PCR-banden verschenen in alle conventioneel gekweekte groepen. Daarentegen werd geen band waargenomen in de kiemvrije groepen of de negatieve controle, wat impliceert dat er geen darmbacteriën bestonden in axeenlarven. Voor insectensoorten met kleine eieren moesten de soorten ontsmettingsmiddelen en sterilisatieduur worden geoptimaliseerd.Bovendien moeten endofyten in weefsel gekweekte planten opmerkelijk zijn. Dit protocol biedt een nieuwe methode om kiemvrije insecten te behouden, wat een handig hulpmiddel is om interactiestudies tussen insecten en darmbacteriën te vergemakkelijken, vooral voor niet-modelinsecten zonder goed ontwikkelde kunstmatige diëten.

Research

JoVE Journal

Biology

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo and in vitro Studies of Adaptor-clathrin Interaction

In vivo en in vitro studies van Adapter-clathrine Interactie

A major endocytic pathway initiates with the formation of clathrin-coated vesicles (CCVs) that transport cargo from the cell surface to endosomes1-6. CCVs ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

A Guide to Modern Kwantitatieve TL Western Blotting met Troubleshooting Strategies

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

Methoden voor de extractie van endosymbionten uit de Whitefly<em&gt; Bemisia tabaci</em

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to ...

Application of Passive Head Motion to Generate Defined Accelerations at the Heads of Rodents

Toepassing van passieve hoofdbeweging om gedefinieerde versnellingen te genereren bij de hoofden van knaagdieren

Exercise is widely recognized as effective for various diseases and physical disorders, including those related to brain dysfunction. However, molecular ...

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Methods for Rearing the Parasitoid Ganaspis brasiliensis, a Promising Biological Control Agent for the Invasive Drosophila suzukii

Methoden voor het fokken van de parasitoïde Ganaspis brasiliensis, een veelbelovend biologisch bestrijdingsmiddel voor de invasieve Drosophila suzukii

Native to East Asia, the spotted-wing drosophila, Drosophila suzukii (Matsumura) (Diptera: Drosophilidae), has established widely in the Americas, Europe, ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

Isolatie, karakterisering en therapeutische toepassing van extracellulaire blaasjes uit gekweekte menselijke mesenchymale stamcellen

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...

Enhancing Survival and Development of Marmosets with Hand-Rearing Approach

Hand-Rearing Method for Infant Marmosets

Marmoset Research - Scope and Challenges (Video) | JoVE

Handopfokmethode voor zijdeaapjes voor zuigelingen

The common marmoset (Callithrix jacchus) is a small and highly social New World monkey with high reproduction rates, which has been proven to be a ...

Rearing Germ-Free Nasonia Wasps

Optimizing the Rearing Procedure of Germ-Free Wasps

Optimizing the Rearing Procedure of Germ-Free Wasps (Video) | JoVE 

Optimaliseren van de opfokprocedure van kiemvrije wespen

Aseptic rearing technology is a method of culturing insects under sterile or almost sterile conditions, which can effectively eliminate the influence of ...

Germ-Free Wasp Embryo Collection and Rearing with Nasonia-Rearing Medium (NRM)

Germ-Free Wasp Embryo Collection and Rearing with Nasonia-Rearing Medium (NRM) (Video) | JoVE 

Kiemvrije wespenembryoverzameling en opfok met Nasonia-opfokmedium (NRM)

Improved Methods for Imaging Maize Leaf Primordia

Improved Methods for Preparing Transverse Sections and Unrolled Whole Mounts of Maize Leaf Primordia for Fluorescence and Confocal Imaging

Improved Methods for Preparing Transverse Sections and Unrolled Whole Mounts of Maize Leaf Primordia for Fluorescence and Confocal Imaging (Video) | JoVE 

Verbeterde methoden voor het voorbereiden van dwarsdoorsneden en het uitrollen van hele bergen van primordia van maïsbladeren voor fluorescentie en confocale beeldvorming

In maize (Zea mays) and other grasses (Poaceae), the leaf primordia are deeply ensheathed and rolled within the leaf whorl, making it difficult to study ...