Name: a flexible platform for monitoring cerebellum-dependent sensory associative learning
Uploaded: 2022-01-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Flexible Platform for Monitoring Cerebellum-Dependent Sensory Associative Learning at JoVE.com

Questo lavoro è supportato da sovvenzioni del National Institutes of Mental Health NRSA F32 MH120887-03 (a G.J.B.) e R01 NS045193 e R01 MH115750 (a S.S-H.W.). Ringraziamo i dottori Bas Koekkoek e Henk-Jan Boele per le discussioni utili per l'ottimizzazione della configurazione DEC e i dottori Yue Wang e Xiaoying Chen per le discussioni utili per ottimizzare la configurazione DTSC.

I protocolli sugli animali qui descritti sono stati approvati dai comitati per la cura e l'uso degli animali dell'Università di Princeton.
1. Impostazione del CFS
<ol><li>Collegare il cavo CSI (Camera Serial Interface) alla telecamera Raspberry NoIR V2 e alla porta della telecamera sull'SBC.</li>
	<li>Scaricare il sistema operativo per l'SBC sul computer host. Scrivere l'immagine del sistema operativo su una scheda micro secure digital (microSD). NOTA: le istruzioni dett...

<ol>
	<li>McCormick, D. A., Lavond, D. G., Clark, G. A., Kettner, R. E., Rising, C. E., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+engram+found?+Role+of+the+cerebellum+in+classical+conditioning+of+nictitating+membrane+and+eyelid+responses.">The engram found? Role of the cerebellum in classical conditioning of nictitating membrane and eyelid responses.</a> Bulletin of the Psychonomic Society. 18 (3), 103-105 (1981).</li><li>McCormick, D. A., Clark, G. A., Lavond, D. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+localization+of+the+memory+trace+for+a+basic+form+of+learning.">Initial localization of the memory trace for a basic form of learning.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 79 (8), 2731-2735 (1982).</li><li>McCormick, D. A., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellum:+essential+involvement+in+the+classically+conditioned+eyelid+response.">Cerebellum: essential involvement in the classically conditioned eyelid response.</a> Science. 223 (4633), 296-299 (1984).</li><li>Krupa, D. J., Thompson, J. K., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+a+memory+trace+in+the+mammalian+brain.">Localization of a memory trace in the mammalian brain.</a> Science. 260 (5110), 989-991 (1993).</li><li>Llin&#225;s, R., Sugimori, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+properties+of+in+vitro+Purkinje+cell+dendrites+in+mammalian+cerebellar+slices.">Electrophysiological properties of in vitro Purkinje cell dendrites in mammalian cerebellar slices.</a> The Journal of Physiology. 305, 197-213 (1980).</li><li>Mintz, M., Lavond, D. G., Zhang, A. A., Yun, Y., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+inferior+olive+NMDA+lesion+leads+to+unilateral+deficit+in+acquisition+and+retention+of+eyelid+classical+conditioning.">Unilateral inferior olive NMDA lesion leads to unilateral deficit in acquisition and retention of eyelid classical conditioning.</a> Behavioral and Neural Biology. 61 (3), 218-224 (1994).</li><li>Welsh, J. P., Harvey, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar+lesions+and+the+nictitating+membrane+reflex:+performance+deficits+of+the+conditioned+and+unconditioned+response.">Cerebellar lesions and the nictitating membrane reflex: performance deficits of the conditioned and unconditioned response.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 9 (1), 299-311 (1989).</li><li>Mauk, M. D., Steinmetz, J. E., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+using+stimulation+of+the+inferior+olive+as+the+unconditioned+stimulus.">Classical conditioning using stimulation of the inferior olive as the unconditioned stimulus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83 (14), 5349-5353 (1986).</li><li>Steinmetz, J. E., Lavond, D. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classical+conditioning+in+rabbits+using+pontine+nucleus+stimulation+as+a+conditioned+stimulus+and+inferior+olive+stimulation+as+an+unconditioned+stimulus.">Classical conditioning in rabbits using pontine nucleus stimulation as a conditioned stimulus and inferior olive stimulation as an unconditioned stimulus.</a> Synapse. 3 (3), 225-233 (1989).</li><li>Chettih, S. N., McDougle, S. D., Ruffolo, L. I., Medina, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptive+timing+of+motor+output+in+the+mouse:+The+role+of+movement+oscillations+in+eyelid+conditioning.">Adaptive timing of motor output in the mouse: The role of movement oscillations in eyelid conditioning.</a> Frontiers in Integrative Neuroscience. 5, 72 (2011).</li><li>Heiney, S. A., Wohl, M. P., Chettih, S. N., Ruffolo, L. I., Medina, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar-dependent+expression+of+motor+learning+during+eyeblink+conditioning+in+head-fixed+mice.">Cerebellar-dependent expression of motor learning during eyeblink conditioning in head-fixed mice.</a> The Journal of Neuroscience. 34 (45), 14845-14853 (2014).</li><li>Heiney, S. A., Kim, J., Augustine, G. J., Medina, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precise+control+of+movement+kinematics+by+optogenetic+inhibition+of+purkinje+cell+activity.">Precise control of movement kinematics by optogenetic inhibition of purkinje cell activity.</a> Journal of Neuroscience. 34 (6), 2321-2330 (2014).</li><li>Ten Brinke, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+models+of+pavlovian+conditioning:+Cerebellar+cortical+dynamics+in+awake+behaving+mice.">Evolving models of pavlovian conditioning: Cerebellar cortical dynamics in awake behaving mice.</a> Cell Reports. 13 (9), 1977-1988 (2015).</li><li>Gao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitatory+cerebellar+nucleocortical+circuit+provides+internal+amplification+during+associative+conditioning.">Excitatory cerebellar nucleocortical circuit provides internal amplification during associative conditioning.</a> Neuron. 89 (3), 645-657 (2016).</li><li>Giovannucci, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar+granule+cells+acquire+a+widespread+predictive+feedback+signal+during+motor+learning.">Cerebellar granule cells acquire a widespread predictive feedback signal during motor learning.</a> Nature Neuroscience. 20 (5), 727-734 (2017).</li><li>Ten Brinke, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+modulation+of+activity+in+cerebellar+nuclei+neurons+during+pavlovian+eyeblink+conditioning+in+mice.">Dynamic modulation of activity in cerebellar nuclei neurons during pavlovian eyeblink conditioning in mice.</a> eLife. 6, 28132 (2017).</li><li>Wang, X., Yu, S., Ren, Z., De Zeeuw, C. I., Gao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+FN-MdV+pathway+and+its+role+in+cerebellar+multimodular+control+of+sensorimotor+behavior.">A FN-MdV pathway and its role in cerebellar multimodular control of sensorimotor behavior.</a> Nature Communications. 11 (1), 6050 (2020).</li><li>Albergaria, C., Silva, N. T., Pritchett, D. L., Carey, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+modulates+associative+learning+in+mouse+cerebellum.">Locomotor activity modulates associative learning in mouse cerebellum.</a> Nature Neuroscience. 21 (5), 725-735 (2018).</li><li>Kim, O. A., Ohmae, S., Medina, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cerebello-olivary+signal+for+negative+prediction+error+is+sufficient+to+cause+extinction+of+associative+motor+learning.">A cerebello-olivary signal for negative prediction error is sufficient to cause extinction of associative motor learning.</a> Nature Neuroscience. 23 (12), 1550-1554 (2020).</li><li>Yamada, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+experience+remodels+genome+architecture+in+neural+circuit+to+drive+motor+learning.">Sensory experience remodels genome architecture in neural circuit to drive motor learning.</a> Nature. 569 (7758), 708-713 (2019).</li><li>Horlington, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Startle+response+circadian+rhythm+in+rats:+lack+of+correlation+with+motor+activity.">Startle response circadian rhythm in rats: lack of correlation with motor activity.</a> Physiology &amp; Behavior. 5 (1), 49-53 (1970).</li><li>Yeomans, J. S., Li, L., Scott, B. W., Frankland, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile,+acoustic+and+vestibular+systems+sum+to+elicit+the+startle+reflex.">Tactile, acoustic and vestibular systems sum to elicit the startle reflex.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 26 (1), 1-11 (2002).</li><li>. Raspberry Pi Operating system images Available from: <a target="_blank" href="https://www.raspberrypi.com/software/operationg-systems/">https://www.raspberrypi.com/software/operationg-systems/</a> (2021)</li><li>. VNC Server. VNC&#174; Connect Available from: <a target="_blank" href="https://www.realvnc.com/en/connect/download/vnc/">https://www.realvnc.com/en/connect/download/vnc/</a> (2021)</li><li>. Anaconda: The world's most popular data science platform Available from: <a target="_blank" href="https://xddebuganaconda.xdlab.co/">https://xddebuganaconda.xdlab.co/</a> (2021)</li><li>De Zeeuw, C. I., Ten Brinke, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+learning+and+the+cerebellum.">Motor learning and the cerebellum.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (9), 021683 (2015).</li><li>Badura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+cognitive+and+social+development+require+posterior+cerebellar+activity.">Normal cognitive and social development require posterior cerebellar activity.</a> eLife. 7, 36401 (2018).</li><li>Koekkoek, S. K. E., Den Ouden, W. L., Perry, G., Highstein, S. M., De Zeeuw, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+kinetic+and+frequency-domain+properties+of+eyelid+responses+in+mice+with+magnetic+distance+measurement+technique.">Monitoring kinetic and frequency-domain properties of eyelid responses in mice with magnetic distance measurement technique.</a> Journal of Neurophysiology. 88 (4), 2124-2133 (2002).</li><li>Kloth, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar+associative+sensory+learning+defects+in+five+mouse+autism+models.">Cerebellar associative sensory learning defects in five mouse autism models.</a> eLife. 4, 06085 (2015).</li><li>Boele, H. -. J., Koekkoek, S. K. E., De Zeeuw, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebellar+and+extracerebellar+involvement+in+mouse+eyeblink+conditioning:+the+ACDC+model.">Cerebellar and extracerebellar involvement in mouse eyeblink conditioning: the ACDC model.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 3, (2010).</li><li>Lin, C., Disterhoft, J., Weiss, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whisker-signaled+eyeblink+classical+conditioning+in+head-fixed+Mice.">Whisker-signaled eyeblink classical conditioning in head-fixed Mice.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (109), e53310 (2016).</li><li>Pereira, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+animal+pose+estimation+using+deep+neural+networks.">Fast animal pose estimation using deep neural networks.</a> Nature Methods. 16 (1), 117-125 (2019).</li><li>Mathis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DeepLabCut:+markerless+pose+estimation+of+user-defined+body+parts+with+deep+learning.">DeepLabCut: markerless pose estimation of user-defined body parts with deep learning.</a> Nature Neuroscience. 21 (9), 1281-1289 (2018).</li></ol>

La piattaforma con i protocolli associati qui descritti può essere utilizzata per tracciare in modo affidabile il comportamento animale in due attività di apprendimento associativo sensoriale. Ogni compito dipende dalla comunicazione intatta attraverso il percorso in fibra di arrampicata. Nel progetto qui descritto, incorporiamo elementi per facilitare l'apprendimento e la registrazione / perturbazione della risposta cerebellare. Questi includono una ruota per consentire la locomozione libera <s...

Il condizionamento pavloviano dell'associazione sub-seconda tra stimoli per suscitare una risposta condizionata è stato a lungo utilizzato per sondare l'apprendimento cerebellare-dipendente. Ad esempio, nel classico condizionamento ritardato dell'occhio (DEC), gli animali imparano a fare un battito di ciglia protettivo tempestivo in risposta a uno stimolo condizionale neutro (CS; ad esempio, un lampo di luce o un tono uditivo) quando è accoppiato ripetutamente con uno stimolo incondizionato (US; ad esempio, un soffio d'aria applicato alla cornea) che provoca sempre un battito di ciglia riflesso, e che arriva alla fine o vicino alla fine del CS. La risposta appresa è indicata come risposta condizionata (CR), mentre la risposta riflessa è indicata come risposta incondizionata (UR). Nei conigli, le lesioni specifiche del cervelletto interrompono questa forma di apprendimento 1,2,3,4. Inoltre, i picchi complessi di cellule di Purkinje, guidati dai loro ingressi in fibra rampicante5, forniscono un segnale 6,7 necessario e sufficiente 8,9 per l'acquisizione di CR correttamente temporizzati.
Più recentemente, sono stati sviluppati paradigmi di apprendimento associativo dipendenti dalla fibra rampicante per topi fissi a testa. DEC è stato il primo paradigma di apprendimento associativo ad essere adattato a questa configurazione10,11. Dec in topi fissi è stato utilizzato per identificare le regioni cerebellari 11,12,13,14,15,16,17 e gli elementi circuitali 11,1 2,13,14,15,18,19 che sono necessari per l'acquisizione e l'estinzione delle attività. Questo approccio è stato utilizzato anche per dimostrare come la rappresentazione fisiologica a livello cellulare dei parametri del compito si evolve con l'apprendimento 13,15,16.
Oltre all'eyeblink, il paradigma del condizionamento tattile dello startle ritardato (DTSC) è stato recentemente sviluppato come un nuovo compito di apprendimento associativo per topi fissi a testa20. Concettualmente simile al DEC, DTSC prevede la presentazione di un CS neutro con un US, un tap to the face di intensità sufficiente per innestare un riflesso di startle21,22 come UR. Nel paradigma DTSC, sia l'UR che il CR vengono letti come locomozione all'indietro su una ruota. DTSC è stato ora utilizzato per scoprire come l'apprendimento associativo altera l'attività cerebellare e i modelli di espressione genica20.
In questo lavoro, è stato sviluppato un metodo per applicare in modo flessibile DEC o DTSC in un'unica piattaforma. Gli attributi di stimolo e piattaforma sono schematizzati nella Figura 1. Il design incorpora la capacità di tracciare il comportamento degli animali con una telecamera e un encoder rotativo per tracciare la locomozione del mouse su una ruota. Tutti gli aspetti della registrazione dei dati e della struttura di prova sono controllati da microcontrollori accoppiati (Arduino) e da un computer a scheda singola (SBC; Raspberry Pi). È possibile accedere a questi dispositivi tramite un'interfaccia utente grafica fornita. Qui presentiamo un flusso di lavoro per l'installazione, la preparazione e l'esecuzione degli esperimenti e una pipeline di analisi personalizzata per la visualizzazione dei dati.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#34;B&#34; Quick Base For C&#38;B METABOND - 10 mL bottle</td>
			<td>Parkell</td>
			<td>S398</td>
			<td>Dental cement solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#34;C&#34; Universal TBB Catalyst - 0.7 mL</td>
			<td>Parkell</td>
			<td>S371</td>
			<td>Catalyst</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>#8 Washers</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>W8S038</td>
			<td>Washers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.250&#34; (1/4&#34;) x 8.00&#34; Stainless Steel Precision Shafting</td>
			<td>Servocity</td>
			<td>634172</td>
			<td>1/4&#34; shaft</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.250&#8221; (0.770&#34;) Clamping Hub</td>
			<td>Servocity</td>
			<td>545588</td>
			<td>Clamping hub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34; to 6 mm Set Screw Shaft Coupler- 5 pack</td>
			<td>Actobotics</td>
			<td>625106</td>
			<td>Shaft-coupling sleeve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/4&#34;-20 Cap Screws, 3/4&#34; Long</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SH25S075</td>
			<td>1/4&#34; bolt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 pcs 5 mm 395&#8211;400 nm UV Ultraviolet LED Light Emitting Diode Clear Round Lens 29 mm Long Lead (DC 3V) LEDs Lights +100 pcs Resistors</td>
			<td>EDGELEC</td>
			<td>&#8206;ED_YT05_U_100Pcs</td>
			<td>CS LEDs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 m Micro HDMI to DVI-D Cable - M/M - 2 m Micro HDMI to DVI Cable - 19 pin HDMI (D) Male to DVI-D Male - 1920 x 1200 Video</td>
			<td>Star-tech</td>
			<td>&#8206;HDDDVIMM2M</td>
			<td>Raspberry Pi4B to monitor cable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>256 GB Ultra Fit USB 3.1 Flash Drive</td>
			<td>SanDisk</td>
			<td>&#8206;SDCZ430-256G-G46</td>
			<td>USB thumb drive</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3.3 V&#8211;5 V 4 Channels Logic Level Converter Bi-Directional Shifter Module</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B00ZC6B8VM</td>
			<td>Logic level shifter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>32 GB 95 MB/s (U1) microSDHC EVO Select Memory Card</td>
			<td>Samsung</td>
			<td>&#8206;MB-ME32GA/AM</td>
			<td>microSD card</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.50&#34; Aluminum Channel</td>
			<td>Servocity</td>
			<td>585444</td>
			<td>4.5&#34; aluminum channel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48-LED CCTV Ir Infrared Night Vision Illuminator</td>
			<td>Towallmark</td>
			<td>SODIAL</td>
			<td>Infrared light array</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4PCS Breadboards Kit Include 2PCS 830 Point 2PCS 400 Point Solderless Breadboards for Proto Shield Distribution Connecting Blocks</td>
			<td>REXQualis</td>
			<td>B07DL13RZH</td>
			<td>Breadboard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 Port Gigabit Unmanaged Ethernet Network Switch</td>
			<td>TP-Link</td>
			<td>&#8206;TL-SG105</td>
			<td>Ethernet switch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 V 2.5 A Raspberry Pi 3 B+ Power Supply/Adapter</td>
			<td>Canakit</td>
			<td>&#8206;DCAR-RSP-2A5</td>
			<td>Power supply for Raspberry Pi 3B+</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 ETHILON BLACK 1 x 18&#34; C-3</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>668G</td>
			<td>Sutures</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 mm Shaft Encoder 2000 PPR Pushpull Line Driver Universal Output Line Driver Output 5-26 V dc Supply</td>
			<td>Calt</td>
			<td>&#160;B01EWER68I</td>
			<td>Rotary encoder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#216;1/2&#34; Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4&#34;-20 Tap, L = 1&#34;, 5 Pack</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TR1-P5</td>
			<td>Optical posts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#216;1/2&#34; Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4&#34;-20 Tap, L = 2&#34;, 5 Pack</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TR2-P5</td>
			<td>Optical posts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#216;1/2&#34; Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4&#34;-20 Tap, L = 4&#34;, 5 Pack</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TR4-P5</td>
			<td>Optical posts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#216;1/2&#34; Optical Post, SS, 8-32 Setscrew, 1/4&#34;-20 Tap, L = 6&#34;, 5 Pack</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>TR6-P5</td>
			<td>Optical posts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#216;1/2&#34; Post Holder, Spring-Loaded Hex-Locking Thumbscrew, L = 2&#34;</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>PH2</td>
			<td>Optical post holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adapter-062-M X LUER LOCK-F</td>
			<td>The Lee Co.</td>
			<td>TMRA3201950Z</td>
			<td>Solenoid valve luer adapter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aeromat Foam Roller Size: 36&#34; Length</td>
			<td>Aeromat</td>
			<td>B002H3CMUE</td>
			<td>Foam roller</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum Breadboard 10&#34; x 12&#34; x 1/2&#34;, 1/4&#34;-20 Taps</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MB1012</td>
			<td>Aluminum breadboard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amazon Basics HDMI to DVI Adapter Cable, Black, 6 Feet, 1-Pack</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>HL-007347</td>
			<td>Raspberry Pi3B+ to monitor cable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arduino&#160; Uno R3</td>
			<td>Arduino</td>
			<td>A000066</td>
			<td>Arduino Uno (microcontroller board)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Arduino Due</td>
			<td>Arduino</td>
			<td>&#8206;A000062</td>
			<td>Arduino Due (microcontroller board)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bench Power Supply, Single, Adjustable, 3 Output, 0 V, 24 V, 0 A, 2 A</td>
			<td>Tenma</td>
			<td>72-8335A</td>
			<td>Power supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Scratch- and UV-Resistant Cast Acrylic Sheet, 12&#34; x 24&#34; x 1/8&#34;</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>8560K257</td>
			<td>Acrylic sheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CNC Stepper Motor Driver 1.0&#8211;4.2 A 20&#8211;50 V DC 1/128 Micro-Step Resolutions for Nema 17 and 23 Stepper Motor</td>
			<td>Stepper Online</td>
			<td>B06Y5VPSFN</td>
			<td>Stepper motor driver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Compressed Air Regulator, Inline Relieving, Brass Housing, 1/4 NPT</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>6763K13</td>
			<td>Air source regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swab</td>
			<td>Puritan</td>
			<td>806-WC</td>
			<td>Cotton swab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dell 1908FP 19&#34; Flat Panel Monitor - 1908FPC</td>
			<td>Dell</td>
			<td>1908FPC</td>
			<td>Computer monitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flex Cable for Raspberry Pi Camera</td>
			<td>Adafruit</td>
			<td>2144</td>
			<td>camera serial interface cable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Torque Nema 17 Bipolar Stepper Motor 92 oz&#183;in/65 N&#183;cm 2.1 A Extruder Motor</td>
			<td>Stepper Online</td>
			<td>17HS24-2104S</td>
			<td>Stepper motor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>66794001725</td>
			<td>Isoflurane</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Krazy Maximum Bond Permanent Glue, 0.18 oz.</td>
			<td>Krazy Glue</td>
			<td>KG483</td>
			<td>Cyanoacrylate glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine HCl</td>
			<td>VetOne</td>
			<td>510212</td>
			<td>Lidocaine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-Strength Steel Hex Nut, Grade 2, Zinc-Plated, 1/4&#34;-20 Thread Size</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>90473A029</td>
			<td>Nuts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M3 x 50 mm Partially Threaded Hex Key Socket Cap Head Screws 10 pcs</td>
			<td>Uxcell</td>
			<td>A16040100ux1380</td>
			<td>M3 bolt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEMA 17 Stepper Motor Mount</td>
			<td>ACTOBOTICS</td>
			<td>555152</td>
			<td>Stepper motor mount</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Official Raspberry Pi Power Supply 5.1 V 3 A with USB C - 1.5 m long</td>
			<td>Adafruit</td>
			<td>4298</td>
			<td>Power supply for Raspberry Pi 4B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optixcare Dog &#38; Cat Eye Lube Lubricating Gel, 0.70-oz tube</td>
			<td>Optixcare</td>
			<td>142422</td>
			<td>Opthalimic ointment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Stainless Steel Ball Bearing, Shielded, Trade No. R188-2Z, 13000 rpm Maximum Speed</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>3759T57</td>
			<td>Bearing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Female/Female Jumper Wires - 40 x 6&#34;</td>
			<td>Adafruit</td>
			<td>266</td>
			<td>Wires</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Female/Male &#39;Extension&#39; Jumper Wires - 40 x 6&#34; (150 mm)</td>
			<td>Adafruit</td>
			<td>826</td>
			<td>Wires</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Premium Male/Male Jumper Wires - 40 x 6&#34;</td>
			<td>Adafruit</td>
			<td>758</td>
			<td>Wires</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Radiopaque L-Powder for C&#38;B METABOND - 5 g</td>
			<td>Parkell</td>
			<td>S396</td>
			<td>Dental cement powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raspberry Pi (3B+ or 4B)</td>
			<td>Adafruit</td>
			<td>3775 or 4295</td>
			<td>Raspberry Pi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Raspberry Pi NoIR Camera Module V2 - 8MP 1080P30</td>
			<td>Raspberry Pi Foundation</td>
			<td>RPI3-NOIR-V2</td>
			<td>Raspberry NoIR V2 camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right-Angle Bracket, 1/4&#34; (M6) Counterbored Slot, 8-32 Taps</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>AB90E</td>
			<td>Right-angle bracket</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right-Angle Clamp for &#216;1/2&#34; Posts, 3/16&#34; Hex</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>RA90</td>
			<td>Right-angle optical post clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Right-Angle End Clamp for &#216;1/2&#34; Posts, 1/4&#34;-20 Stud and 3/16&#34; Hex</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>RA180</td>
			<td>Right-angle end clamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RJ45 Cat-6 Ethernet Patch Internet Cable</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>&#8206;CAT6-7FT-5P-BLUE</td>
			<td>Ethernet cable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotating Clamp for &#216;1/2&#34; Posts, 360&#176; Continuously Adjustable, 3/16&#34; Hex</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SWC</td>
			<td>Rotating optical post clamps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spike &#38; Hold Driver-0.1 TO 5 MS</td>
			<td>The Lee Co.</td>
			<td>IECX0501350A</td>
			<td>Solenoid valve driver</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swivel Base Adapter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>UPHA</td>
			<td>Post holder adapter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB 2.0 A-Male to Micro B Cable, 6 feet</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>&#8206;7T9MV4</td>
			<td>USB2 type A to USB2 micro cable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB 2.0 Printer Cable - A-Male to B-Male, 6 Feet (1.8 m)</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B072L34SZS</td>
			<td>USB2 type B to USB2 type A cable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VHS-M/SP-12 V</td>
			<td>The Lee Co.</td>
			<td>INKX0514900A</td>
			<td>Solenoid valve</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc-Plated Steel 1/4&#34; washer, OD 1.000&#34;</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>91090A108</td>
			<td>Washers</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a flexible platform for monitoring cerebellum-dependent sensory associative learning

Gli input di fibre rampicanti alle cellule di Purkinje forniscono segnali istruttivi critici per l'apprendimento associativo dipendente dal cervelletto. Lo studio di questi segnali in topi fissi facilita l'uso di metodi di imaging, elettrofisiologici e optogenetici. Qui, è stata sviluppata una piattaforma comportamentale a basso costo (~ $ 1000) che consente il monitoraggio dell'apprendimento associativo in topi fissi a testa che locomotano liberamente su una ruota da corsa. La piattaforma incorpora due paradigmi di apprendimento associativo comuni: il condizionamento dell'eyeblink e il condizionamento dello startle tattile ritardato. Il comportamento viene monitorato utilizzando una telecamera e il movimento della ruota da un rilevatore. Descriviamo i componenti e la configurazione e forniamo un protocollo dettagliato per la formazione e l'analisi dei dati. Questa piattaforma consente l'incorporazione della stimolazione optogenetica e dell'imaging a fluorescenza. Il design consente a un singolo computer host di controllare più piattaforme per addestrare più animali contemporaneamente.

Flusso di lavoro per esperimenti e analisi DEC Una corretta selezione dei parametri sperimentali è importante per il successo dell'allenamento di condizionamento ritardato dell'occhio (DEC). Per i dati qui presentati, la GUI è stata utilizzata per scegliere una durata CS di 350 ms e una durata STATUNITENSE di 50 ms. Questo accoppiamento si traduce in un intervallo inter-stimolo di 300 ms: abbastanza lungo da prevenire la produzione di CR a bassa ampiezza10 e abbastanza breve ...

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A Flexible Platform for Monitoring Cerebellum-Dependent Sensory Associative Learning

Abbiamo sviluppato un'unica piattaforma per tracciare il comportamento degli animali durante due attività di apprendimento associativo dipendenti dalla fibra di arrampicata. Il design a basso costo consente l'integrazione con esperimenti optogenetici o di imaging diretti verso l'arrampicata dell'attività cerebellare associata alle fibre.

Una piattaforma flessibile per il monitoraggio dell'apprendimento associativo sensoriale dipendente dal cervelletto

Climbing fiber inputs to Purkinje cells provide instructive signals critical for cerebellum-dependent associative learning. Studying these signals in ...

I paradigmi di apprendimento associativo sensoriale hanno rivelato molto sulla funzione del cervelletto e sulla sua relazione con il resto del cervello e sul comportamento. Usando il topo come organismo modello, presentiamo un metodo con dettagli sufficienti per i laboratori di tutto il mondo per implementare questi potenti metodi in modo efficace ed economico. Il nostro protocollo consentirà ai ricercatori di impostare più comportamenti dipendenti dal cervelletto.Le funzioni principali della nostra piattaforma di ricerca possono essere facilmente modificate per adattarsi a una particolare domanda di ricerca. Per iniziare, collegare il cavo di interfaccia seriale della fotocamera alla fotocamera e la porta della fotocamera sull'SBC. Quindi scaricare il sistema operativo per l'SBC sul computer host e creare un file chiamato ssh nella scheda microSD.Espellere la scheda microSD dalla macchina host. Inserirlo nello slot per schede microSD SBC e alimentare l'SBC. Successivamente, per preparare l'SBC ad accettare una connessione cablata all'host, aprire un terminale, digitare il comando ifconfig"e registrare l'indirizzo IP Ethernet dell'SBC.Quindi vai alla scheda Interfaccia dell'impostazione Configurazione Raspberry Pi e abilita le opzioni per fotocamera, SSH e VNC. Per stabilire la connessione cablata, collegare un cavo Ethernet alla porta Ethernet dell'SBC e di un computer host e collegare l'altra estremità di questi cavi a uno switch Ethernet. Quindi, utilizzando un client di elaborazione di rete virtuale, ad esempio VNC, accedere al desktop utilizzando l'indirizzo IP SBC e l'autenticazione predefinita.Quindi, scaricare il software richiesto e le librerie Python necessarie per SBC. Per consentire il controllo diretto sul microcontrollore, scaricare l'ambiente di sviluppo integrato del microcontrollore o il software IDE. Quindi aprire una finestra del terminale SBC, passare alla directory Download e installare l'IDE.Dopo aver aperto l'IDE del microcontrollore, selezionare Strumenti, quindi Gestisci librerie e installare la libreria Encoder di Paul Stoffregen. Infine, inserire una chiavetta USB in una porta USB dell'SBC e immettere i comandi per il montaggio del dispositivo di archiviazione esterno USB. Dopo aver collegato l'SBC alla porta di programmazione del microcontrollore, aprire lo sketch di download con l'IDE del microcontrollore e caricarlo sul microcontrollore.Quindi, scaricare e installare la versione appropriata dell'IDE Arduino sul computer host. Quindi scarica il DTSC_US. ino sketch al computer host.Collegare il cavo da USB A a USB B al computer host e al microcontrollore. Apri lo sketch e caricalo sul microcontrollore. Collegare i fili alla breadboard del microcontrollore, ai LED, all'encoder rotativo, al motore passo-passo con un driver e all'elettrovalvola con driver.Quindi collegare un canale di un alimentatore ai pin V positivi e GND del driver del motore passo-passo. Dopo aver acceso l'alimentatore, impostare la tensione del canale collegato su 25 volt. Quindi, collegare il cavo positivo di un alimentatore al pin di tensione di tenuta del driver dell'elettrovalvola e l'altro cavo positivo al pin di tensione spike.Dopo aver acceso l'alimentatore, impostare il canale collegato alla tensione di picco a 12 volt e il canale collegato alla tensione di attesa a 2,5 volt. Quindi collegare una fonte d'aria regolata a una pressione di 20 libbre per pollice quadrato all'elettrovalvola. Successivamente, per realizzare la ruota da corsa, tagliare una ruota da tre pollici da un rullo di schiuma e praticare un foro di un quarto di pollice nel centro esatto della ruota.Quindi inserire un albero da un quarto di pollice nella ruota e fissarlo in posizione utilizzando mozzi di serraggio. Fissare l'encoder rotativo su un canale in alluminio da 4,5 pollici. Quindi stabilizzare il canale in alluminio sulla breadboard in alluminio.Dopo aver collegato la ruota all'encoder rotativo, stabilizzare il lato libero dell'albero della ruota con un cuscinetto inserito in un morsetto terminale ad angolo retto, installato su un montante ottico montato su breadboard. Quindi, posizionare i poggiatesta utilizzando montanti ottici e morsetti ad angolo retto. Quindi posizionare il LED di stimolo condizionale e l'uscita dell'elettrovalvola per lo stimolo incondizionato DEC attorno alla ruota assemblata.Quindi, montare il motore passo-passo utilizzato per lo stimolo incondizionato DTSC e la fotocamera Pi su un palo ottico. Posiziona l'array di luce a infrarossi sullo stesso lato della Pi Camera, leggermente sopra e direttamente rivolto verso il punto in cui verrà posizionata la faccia dell'animale. Crea uno stimolo tattile per il condizionamento dello startle tattile ritardato nastrando la schiuma sul bordo di un pezzo di acrilico.Montare su un albero da un quarto di pollice utilizzando un mozzo di serraggio, quindi collegare lo stimolo tattile all'albero motore passo-passo. Per impiantare una piastra frontale, anestetizzare il mouse, quindi praticare un'incisione con un bisturi lungo la linea mediana del cuoio capelluto, dal bordo posteriore degli occhi al cranio. Stendere l'incisione aperta e bloccare entrambi i lati con emostati per tenerla aperta.Usando la colla cianoacrilata, attaccare la piastra della testa al cranio. Quindi applicare una miscela di polvere di cemento dentale, solvente e catalizzatore su tutte le aree dell'osso esposto. Suturare la pelle chiusa, dietro e davanti alla piastra della testa.Quindi iniettare analgesia postoperatoria, consentendo al topo di recuperare per almeno cinque giorni. Per preparare i topi alle sessioni comportamentali, consenti loro di abituarsi alla piattaforma montandoli nel poggiatesta. Prima della sessione, assicurarsi che l'uscita dell'elettrovalvola sia centrata sull'occhio bersaglio, posizionata a meno di un centimetro di distanza, e che lo stimolo tattile sia centrato sul naso del topo, posizionato a circa 1,5 centimetri di distanza.Per la preparazione della sessione DTSC, avviare la GUI da un terminale SBC. Eseguire una sessione di test di tre prove e assicurarsi che i dati registrati che vengono stampati sul terminale mostrino una deflessione superiore a 20, ma inferiore a 100 passaggi. Per eseguire una sessione, montare un mouse sul poggiatesta e avviare la GUI dal terminale SBC.Per salvare le registrazioni della videocamera, premi il pulsante Stream prima di iniziare la sessione. Inserisci le informazioni di identificazione per l'animale nel campo ID animale e premi il pulsante Imposta. Quindi inserisci i parametri dell'esperimento desiderato e premi il pulsante Carica su Arduino.Infine, premi Avvia sessione per iniziare la sessione. I risultati dell'allenamento DEC di una sessione di registrazione con illuminazione accettabile sono mostrati qui. Le condizioni di illuminazione accettabili hanno comportato un buon contrasto tra l'occhio e la pelliccia perioculare.Le prestazioni di un singolo topo addestrato per otto sessioni hanno mostrato tracce comportamentali, senza alcuna risposta condizionata nel topo non addestrato e robuste risposte condizionate una volta che il mouse è stato addestrato. Un video di prova di esempio mostra un mouse addestrato che chiude con successo l'occhio in risposta allo stimolo condizionale del LED, mentre il mouse non allenato non lampeggia fino allo stimolo incondizionato. La risposta condizionata aumenta di dimensioni e frequenza attraverso sessioni comportamentali eseguite nell'arco di giorni.Condizioni di illuminazione non ottimali limitano fortemente la qualità dei dati acquisiti. Quando il contrasto tra l'occhio e la pelliccia circostante è basso, lievi cambiamenti nell'immagine possono alterare significativamente la forma registrata della risposta incondizionata in una singola sessione e ridurre il rapporto segnale-rumore per rilevare la posizione delle palpebre. I risultati dell'allenamento DTSC per un mouse addestrato per cinque sessioni sono presentati qui.Un video di prova di esempio mostra un mouse addestrato che supporta con successo la rotellina in risposta allo stimolo condizionale del LED, mentre un mouse non addestrato non riesce a muovere la rotellina fino a quando non viene applicato lo stimolo tattile incondizionato. La frequenza e l'ampiezza della risposta condizionata aumentano man mano che l'allenamento procede. In una coorte di animali addestrati con uno stimolo incondizionato che ha prodotto risposte incondizionate a bassa ampiezza, nessun animale ha imparato a produrre costantemente risposte condizionate dopo quattro giorni di addestramento.Per un comportamento di successo, il comfort dell'animale durante la corsa sul carro è fondamentale. È importante assicurarsi che la ruota giri liberamente e in modo uniforme prima di abituare gli animali al carro. Utilizzando questa piattaforma flessibile, abbiamo ripreso e perturbato con successo l'attività dei neuroni di Purkinje, le cellule di uscita del cervelletto, durante l'apprendimento negli animali fissi.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

C. elegans Positive Butanone Learning, Short-term, and Long-term Associative Memory Assays

C. elegans Learning Positivo Butanone, a breve termine e lungo termine saggi di memoria associativa

The memory of experiences and learned information is critical for organisms to make choices that aid their survival. C. elegans navigates its environment ...

Ricerca

Neuroscienze

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-imaging di traslocazione della PKC in SF9 cellule e nei neuroni sensoriali Aplysia

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution

Registrazione ottica di attività neurale suprathreshold con risoluzione singola cellula e single-picco

Signaling of information in the vertebrate central nervous system is often carried by populations of neurons rather than individual neurons. Also ...

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitive Associative Olfactory Learning in Drosophila Larvae

Appetitivo apprendimento associativo olfattiva in<em&gt; Drosophila</em&gt; Le larve

In the following we describe the methodological  details of appetitive associative olfactory learning in Drosophila larvae. The setup, in combination with ...

Isolation of Sensory Neurons of Aplysia californica for Patch Clamp Recordings of Glutamatergic Currents

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Isolamento dei neuroni sensoriali<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Per Bloccare Registrazioni patch di correnti glutamatergico

The marine gastropod mollusk Aplysia californica has a venerable  history as a model of nervous system function, with particular significance in  studies ...

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A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Fabrication of High Contact-Density, Flat-Interface Nerve Electrodes for Recording and Stimulation Applications

Fabbricazione di High Contact-Density, Flat-Interface Elettrodi nervose per la registrazione e la stimolazione Applicazioni

Many attempts have been made to manufacture multi-contact nerve cuff electrodes that are safe, robust and reliable for long term neuroprosthetic ...

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Condizionamento del corteggiamento di Drosophila come misura dell&#39;apprendimento e della memoria

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