Name: ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium
Uploaded: 2022-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium at JoVE.com

המחקר מומן על ידי המועצה לאנרגיה אטומית של טייוואן (מענק מס' A-IE-01-03-02-02), משרד המדע והטכנולוגיה (מענק מס' NMRPG3E6202-3) ופרויקט המחקר הרפואי צ'אנג גונג (מענק מס' CMRPG3H1281).

כל הליכי הניסוי במחקרים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של המחקר בבית החולים לזכר צ'אנג גונג ודבקו בהצהרת ARVO לשימוש בבעלי חיים במחקר עיניים וראייה.
1. מודל ריפוי פצע Ex vivo של אפיתל הקרנית של העכבר
<ol><li>הכנת העכברים<ol><li>מתן הרדמה כללית לעכברי C57BL/6 על ידי אספקה ...

<ol>
	<li>Sridhar, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+cornea+and+ocular+surface.">Anatomy of cornea and ocular surface.</a> Indian Journal of Ophthalmology. 66 (2), 190-194 (2018).</li><li>Henriksson, J. T., McDermott, A. M., Bergmanson, J. P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimensions+and+morphology+of+the+cornea+in+three+strains+of+mice.">Dimensions and morphology of the cornea in three strains of mice.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 50 (8), 3648-3654 (2009).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MANF+promotes+diabetic+corneal+epithelial+wound+healing+and+nerve+regeneration+by+attenuating+hyperglycemia-induced+endoplasmic+reticulum+stress.">MANF promotes diabetic corneal epithelial wound healing and nerve regeneration by attenuating hyperglycemia-induced endoplasmic reticulum stress.</a> Diabetes. 69 (6), 1264-1278 (2020).</li><li>Ma, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+epithelial+injury-induced+norepinephrine+promotes+Pseudomonas+aeruginosa+keratitis.">Corneal epithelial injury-induced norepinephrine promotes Pseudomonas aeruginosa keratitis.</a> Experimental Eye Research. 195, 108048 (2020).</li><li>Chan, M. F., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+corneal+injury.">Animal models of corneal injury.</a> Bio Protocol. 5 (13), 1516 (2015).</li><li>Lan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+and+function+of+mesenchymal+stem+cells+in+corneal+injury.">Kinetics and function of mesenchymal stem cells in corneal injury.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (7), 3638-3644 (2012).</li><li>Watanabe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+corneal+epithelial+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo+by+annexin+A5.">Promotion of corneal epithelial wound healing in vitro and in vivo by annexin A5.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (5), 1862-1868 (2006).</li><li>Murataeva, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+CB2R+receptors+are+upregulated+with+corneal+injury+and+regulate+the+course+of+corneal+wound+healing.">Cannabinoid CB2R receptors are upregulated with corneal injury and regulate the course of corneal wound healing.</a> Experimental Eye Research. 182, 74-84 (2019).</li><li>Carter, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+impact+of+2D+and+3D+culture+conditions+on+the+therapeutic+effects+of+human+mesenchymal+stem+cell+secretome+on+corneal+wound+healing+in+vitro+and+ex+vivo.">Characterizing the impact of 2D and 3D culture conditions on the therapeutic effects of human mesenchymal stem cell secretome on corneal wound healing in vitro and ex vivo.</a> Acta Biomaterialia. 99, 247-257 (2019).</li><li>Sanie-Jahromi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+limbal+stem+cells+on+polycaprolactone+and+polycaprolactone/gelatin+fibrous+scaffolds+and+transplantation+in+animal+model.">Propagation of limbal stem cells on polycaprolactone and polycaprolactone/gelatin fibrous scaffolds and transplantation in animal model.</a> Bioimpacts. 10 (1), 45-54 (2020).</li><li>Sun, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+membrane+protein+(EMP2)+antibody+blockade+reduces+corneal+neovascularization+in+an+In+vivo+model.">Epithelial membrane protein (EMP2) antibody blockade reduces corneal neovascularization in an In vivo model.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 60 (1), 245-254 (2019).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+receptor+1+suppresses+transient+receptor+potential+vanilloid+1-induced+inflammatory+responses+to+corneal+injury.">Cannabinoid receptor 1 suppresses transient receptor potential vanilloid 1-induced inflammatory responses to corneal injury.</a> Cell Signal. 25 (2), 501-511 (2013).</li><li>Bai, J. Q., Qin, H. F., Zhao, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+mouse+model+of+grade+II+corneal+alkali+burn.">Research on mouse model of grade II corneal alkali burn.</a> International Journal of Ophthalmology. 9 (4), 487-490 (2016).</li><li>Oh, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+protein+TSG-6+reduces+inflammatory+damage+to+the+cornea+following+chemical+and+mechanical+injury.">Anti-inflammatory protein TSG-6 reduces inflammatory damage to the cornea following chemical and mechanical injury.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (39), 16875 (2010).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+effects+of+biohcly+in+an+in+vivo+model+of+mechanical+wounds+in+the+rabbit+cornea.">Evaluation of the effects of biohcly in an in vivo model of mechanical wounds in the rabbit cornea.</a> Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 35 (3), 189-199 (2019).</li><li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+nintedanib+thermos-sensitive+hydrogel+on+neovascularization+in+alkali+burn+rat+model.">Effect of nintedanib thermos-sensitive hydrogel on neovascularization in alkali burn rat model.</a> International Journal of Ophthalmology. 13 (6), 879-885 (2020).</li><li>Yao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+mesenchymal+stem+cells+on+cornea+wound+healing+induced+by+alkali+burn.">Role of mesenchymal stem cells on cornea wound healing induced by alkali burn.</a> PLoS One. 7 (2), 30842 (2012).</li></ol>

מודלים של עכברים וארנבים של פגיעות בקרנית מספקים פלטפורמה שימושית של ex vivo ו-in vivo למעקב אחר ריפוי פצעים, בדיקת טיפולים חדשים ולימוד מנגנונים בסיסיים של ריפוי פצעים ומסלולי טיפול. מודלים שונים של בעלי חיים יכולים לשמש לניסוי לטווח קצר או ארוך, בהתאם למטרת המחקר. לדוגמה, לאחר יצירת פ...

הקרנית האנושית מורכבת מחמש שכבות עיקריות וממלאת תפקיד מרכזי בשבירת העין לשמירה על חדות הראייה והשלמות המבנית להגנה על רקמות תוך עיניות1. החלק החיצוני ביותר של הקרנית הוא אפיתל הקרנית, המורכב מחמש עד שש שכבות של תאים המתמיינים ברצף מתאי הבסיס ונעים כלפי מעלה כדי לנשור מפני השטח של העין1. בהשוואה לקרנית בבני אדם ובארנבים ניו זילנדיים, לקרנית העכבר מבנה קרנית דומה, אך פריפריה דקה יותר מהחלק המרכזי בשל עובי מופחת באפיתל ובסטרומה2. בגלל מיקומו הייחודי במערכת האופטית העינית, עלבונות חיצוניים רבים כגון פגיעה מכנית, חיסון חיידקי וחומרים כימיים עלולים לסכן בקלות את שלמות האפיתל ולהוביל עוד יותר לפגם אפיתל מסכן ראייה, קרטיטיס זיהומיות, המסת קרנית ואפילו ניקוב הקרנית.
למרות שחומרים טיפוליים שונים, כגון חומרי סיכה, אנטיביוטיקה, חומרים אנטי דלקתיים, מוצרי אוטו-סרום וקרומי מי שפיר כבר שימשו לשיפור אפיתל מחדש ולהפחתת צלקות, שיטות טיפול פוטנציאליות אחרות שיכולות לאפשר ריפוי פצעים, להפחית דלקת ולדכא היווצרות צלקות עדיין מפותחות ונבחנות על פלטפורמות שונות. הוצעו מודלים שונים של בעלי חיים לריפוי פצעי אפיתל בקרנית, ביניהם הסרת אפיתל קרנית באמצעות מסיר טבעות חלודה בקרנית בעכבר סוכרתי3, שריטות ליניאריות מעל אפיתל הקרנית של עכבר על ידי מחט סטרילית 25 גרם לחיסון חיידקי4, הסרה בעזרת טרפין של אפיתל הקרנית על ידי מסיר טבעת חלודה בקרנית5, צריבה אפיתל מעל מחצית הקרנית ולימבוס6 שחיקת קרנית ארנב בסיוע טרפין על ידי להב אזמל עמום7, ופגיעה בקרנית בקר על ידי הקפאת הבזק בחנקן נוזלי8.,
מלבד פגיעה מכנית באפיתל הקרנית, חומרים כימיים הם גם עלבונות נפוצים בפני השטח של העין, במיוחד חומרים חומציים ואלקליים. נתרן הידרוקסידי (NaOH, 0.1-1 N עבור 30-60 שניות) הוא אחד הכימיקלים הנפוצים במודלים של מורין וארנב של כוויות כימיות בקרנית 9,10,11,12,13. 100% אתנול הוחל גם על הקרנית במודל הכוויה הכימית של חולדה, ולאחר מכן גריטה מכנית נוספת באמצעות להב כירורגי14. מכיוון ששמירה על משטח עיני בריא מסתמכת על יחידות תפקודיות, כולל העפעפיים, בלוטות המייבומיאן, מערכת הדמעות, הלחמית והקרנית, למודלים של בעלי חיים in vivo יש כמה יתרונות על פני תאי אפיתל של הקרנית בתרבית ex vivo או רקמות הקרנית. במאמר זה, מודל העכבר של פצע שחיקה הקרנית, ואת מודל ארנב של כוויה אלקלית הקרנית מודגמים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6/0 Ethicon vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>6/0VICRYL</td>
			<td>tarsorrhaphy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer lid speculum</td>
			<td>katena</td>
			<td>K1-5355</td>
			<td>15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer needle holder</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K6-3310</td>
			<td>without lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barron Vacuum Punch 8.0 mm</td>
			<td>katena</td>
			<td>K20-2108</td>
			<td>for cutting filter paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>National Laboratory Animal Center</td>
			<td>RMRC11005</td>
			<td>mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo forceps 0.12 mm</td>
			<td>katena</td>
			<td>K5-2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal rust ring remover with 0.5 mm burr</td>
			<td>Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX</td>
			<td>CHI-675</td>
			<td>for debridement of the corneal epithelium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Toyo Roshi Kaisha,Ltd.</td>
			<td>1.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodum ophthalmic strips U.S.P</td>
			<td>OPTITECH</td>
			<td>OPTFL100</td>
			<td>staining for corneal epithelial defect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>61763-23-3</td>
			<td>intraperitoneal or intramuscular anesthetics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Zealand White Rabbits</td>
			<td>Livestock Research Institute, Council of Agriculture,Executive Yuan</td>
			<td></td>
			<td>Rabbit models</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline</td>
			<td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td>
			<td>100-120-1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proparacaine</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>ALC2UD09</td>
			<td>topical anesthetics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punch 2mm</td>
			<td>STIEFEL</td>
			<td>22650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaOH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>a chemical agent for alkali burn</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA</td>
			<td>SV11</td>
			<td>microscope for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott Tenotomy Scissors Medium</td>
			<td>katena</td>
			<td>K4-3004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine hydrochloride 23.32 mg/10 mL</td>
			<td>Elanco animal health Korea Co., LTD.</td>
			<td>047-956</td>
			<td>intraperitoneal or intramuscular anesthetics</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium

פגיעה בקרנית בפני השטח של העין, כולל כוויה כימית וטראומה, עלולה לגרום לצלקות קשות, סימפלפרון, מחסור בתאי גזע לימבליים בקרנית, ולגרום לפגם אפיתל גדול ומתמשך בקרנית. פגם אפיתל עם אטימות הקרנית הבאה וניאו-וסקולריזציה היקפית גורמים לליקוי ראייה בלתי הפיך ומעכבים ניהול עתידי, במיוחד קרטופלסטיקה. מכיוון שהמודל החייתי יכול לשמש כפלטפורמה יעילה לפיתוח תרופות, מפותחים כאן מודלים של פגיעה בקרנית העכבר וצריבה אלקלית לאפיתל קרנית ארנבת. ארנב לבן ניו זילנדי משמש במודל הכוויה האלקלי. ריכוזים שונים של נתרן הידרוקסידי יכולים להיות מיושמים על האזור המעגלי המרכזי של הקרנית במשך 30 שניות תחת הרדמה תוך שרירית ומקומית. לאחר השקיה איזוטונית תקינה של מי מלח, הוסר אפיתל קרנית רופף שאריות עם בור הקרנית עמוק עד לשכבת באומן בתוך אזור מעגלי זה. ריפוי פצעים תועד על ידי כתמים פלואורסצאין תחת אור כחול קובלט. עכברי C57BL/6 שימשו במודל הטראומטי של אפיתל קרנית מורין. הקרנית המרכזית של המורין סומנה באמצעות ניקוב עור, בקוטר 2 מ"מ, ולאחר מכן פוזרה על ידי מסיר טבעת חלודה בקרנית עם בור 0.5 מ"מ תחת סטריאוסקופ. מודלים אלה יכולים לשמש באופן פרוספקטיבי כדי לאמת את ההשפעה הטיפולית של טיפות עיניים או סוכנים מעורבים כגון תאי גזע, אשר עשויים להקל על התחדשות אפיתל הקרנית. על ידי התבוננות באטימות הקרנית, ניאו-וסקולריזציה היקפית וגודש בלחמית באמצעות סטריאומיקרוסקופ ותוכנות הדמיה, ניתן לנטר השפעות טיפוליות במודלים אלה של בעלי חיים.

מודל ריפוי פצעים Ex vivo של אפיתל הקרנית של העכבר: לאחר הטריה in vivo של אפיתל הקרנית של עכבר עם מסיר טבעת חלודה קרנית ידני, ניתן למצוא אזור קרנית מרכזי מדוכא קלות עם כתם פלואורסצאין חיובי באזור המרכזי של 2 מ"מ (איור 3A-B). לאחר קצירת גל...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium at JoVE.com

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

כאן, מודלים של בעלי חיים המבוססים על עכבר וארנב מפותחים עבור פגיעה מכנית וכימית של אפיתל הקרנית כדי לסנן טיפולים חדשים ואת המנגנון הבסיסי.

מודלים של בעלי חיים של Ex Vivo ו-In Vivo לפציעות מכניות וכימיות של אפיתל הקרנית

Corneal injury to the ocular surface, including chemical burn and trauma, may cause severe scarring, symblepharon, corneal limbal stem cells deficiency, ...

מודלים של בעלי חיים Ex vivo ו-in vivo הוקמו לחקר פגיעות מכניות וכימיות בקרנית. הטכניקה מספקת פלטפורמה קלה לבנייה עבור חוקרים לחקור פגיעה מכנית וכימית של הקרנית. כדי ליצור פצע אפיתל של הקרנית מורין, סמן את הקרנית המרכזית של העכבר המורדם באמצעות ניקוב ביופסיה של העור כדי לאשר אזור מוגבל היטב ומדיד היטב של הפצע.הכנס בעדינות את האגרוף מעל הקרנית המרכזית כדי להשאיר סימן מעגלי הפחת את אפיתל הקרנית עד לשכבת באומן באמצעות מסיר טבעת חלודה קרנית ידני עם בור 0.5 מילימטר המבטיח שלא לפגוע בשכבת באומן. הסר את שאריות הרקמות הרופפות בשולי הפצע בעזרת מלקחיים בקרנית. אשר את אזור ההטריה עם כתמים פלואורסצנטיים על ידי הנחת טיפה של מי מלח רגילים על נייר פלואורסצאין כדי להמיס פלואורסצאין ולאחר מכן הנחת הטיפה המכילה פלואורסצאין על פגם אפיתל מורין כדי לדמיין אותו תחת אור כחול קובלט.המשך עם תרבית ex vivo של מודל פצע שחיקת הקרנית על ידי לחיצה עדינה על שולי המסלול העליונים והנחותים של עכברים מורדמים כדי לדחוף את גלגל העין החוצה. הכניסו את קצה מספריים הקרנית הסגורים לחלל הרטרובולברי לאורך דופן המסלול התחתון כדי להבטיח שלא יחדרו את גלגל העין. החזק את גלגל העין יציב עם מלקחיים קרנית 0.3 מ"מ ולאחר מכן לחתוך את עצב הראייה ואת הרקמה הרכה periorbital עם מספריים הקרנית כדי לבודד את גלגל העין.לתרבית אקס ויו של גלגלי עיניים מורין, הכינו צלחת בת 48 בארות עם שעווה מומסת בתוך הבאר והמתינו להתמצקות, ואז בעזרת קצה מלקחיים של לחמית, צרו חור עגול על פני השטח של שעווה מוצקה כדי להתאים לגלגלי העיניים. הניחו את גלגלי העיניים שנקטפו ישירות על צלחת 48 בארות עם תחתיות ודפנות מכוסות שעווה כדי לבסס ייצוב. תרבית את גלגלי העיניים עם DMEM המכיל 1% נסיוב בקר עוברי עם או בלי אנטיביוטיקה בהתאם למטרת המחקר.לטבול את משטח העין עם מדיום התרבית מבלי לגרום לגלגל העין לצוף ולתעד את מהלך ריפוי הפצע על ידי צביעת פלואורסצאין ואיסוף תמונות במצלמה דיגיטלית תחת אור כחול קובלט. כדי לגרום לפציעת כוויה בסיסית, הניחו נייר סינון עגול בקוטר של 8 מ"מ בצלחת פטרי. בעזרת טפטפת, מוסיפים 0.5 נתרן הידרוקסידי רגיל לצלחת הפטרי כדי להשרות את ניירות הסינון ולרוקן את התמיסה העודפת מנייר הסינון לפני הנחתם על קרנית הארנב המורדמת.לאחר פתיחת העפעפיים עם ספקולום עפעפיים, יש לוודא כי קרום הארנב אינו מפריע להחדרת נייר הסינון והניחו את נייר הסינון הספוג אלקליות על הקרנית המרכזית למשך 30 שניות. הסר את נייר הסינון ושטוף את משטח העין עם 10 מיליליטר של מלוחים רגילים כדי לשטוף את החומר אלקלי. כדי להשלים את הפגם בקרנית, יש לכרות את אפיתל הקרנית בתוך האזור האופוס עד לקרום באומן באמצעות מסיר טבעות חלודה בקרנית.יש לאשר את אזור ההטריה עם כתמים פלואורסצאין מתחת לאור הכחול קובלט ולהסיר שאריות אפיתל הקרנית באמצעות מלקחיים בקרנית. כדי להבטיח את מצב הפצע עם tarsorrhaphy, לאשר כי קרום nictitating מכסה בצורה חלקה את פני השטח של העין ואת הפגם אפיתל הקרנית בצד האף. בצע tarsorrhaphy זמני עם או בלי חומרים מקומיים באמצעות תפר 6-0 כדי להגן על פני השטח של העין ולמנוע מהארנב לשרוט אותו, ודא כי התפר עבור tarsorrhaphy הוא 3 עד 4 מ"מ מן השוליים העליון והתחתון עם ארבעה עד חמישה קשרים וקשרים ארוכים יותר כדי למנוע את הארנב לשבור את התפרים.במודל ריפוי הפצעים ex vivo של אפיתל הקרנית של העכבר, אזור הקרנית המרכזי בדיכאון קל עם כתם פלואורסצאין חיובי נצפה בשני המילימטרים המרכזיים לאחר הטריה in vivo של אפיתל הקרנית של העכבר. תרבית האקס ויו של גלגלי העיניים המורין המקובעים על צלחת תרבית 48 בארות מצופה שעווה נבדקה ותועדה מדי יום בתוך צלחת תרבית של 48 בארות תחת מיקרוסקופ סטריאו. יום לאחר הריסת אפיתל הקרנית המורין, התגלה פגם אפיתל עגול אחד מוכתם פלואורסצאין בקוטר 2 מילימטרים בתצלומים דיגיטליים שהתקבלו תחת אור כחול קובלט.לאחר יצירת פגיעה אלקלית באפיתל הקרנית של הארנבת, נצפתה צביעה פלואורסצאין חיובית עם או בלי אור כחול קובלט מעל הקרנית המרכזית עם שוליים עגולים ברורים ומלאים. פצע אפיתל הקרנית re-epithelialization עם pannus ingrowth נצפתה מן הלימבוס. השלבים החשובים ביותר הם הליכים ליצירת פגמים חלקים ואפילו אפיתליאליים על משטחי הקרנית של העכבר והארנב.ניתן לבדוק טיפולים רפואיים וכירורגיים חדשים בפלטפורמות אלה. ההשפעה של אפיתל מחדש ניתן לפקח לאחר הליכים. ניאו-וסקולריזציה ואטימות של הקרנית לאחר פציעה בפרוטוקול זה יהיו צורך בלתי מסופק במחקר נוסף.

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

נוהל saphenous אדם הוורידים<em&gt; Ex Vivo</em&gt; זלוף וחיצוני חיזוק

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

אימות של Nanobody ונוגדנים מבוסס<em&gt; In vivo</em&gt; ניסויי גידול xenograft NIRF הדמיה בעכברים באמצעות<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cytometry הזרימה ומיקרוסקופי

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In vivo לשעבר vivo גישות לחקר סרטן השחלות גרורתי התיישבות של מבני ספוט החלב בהצפק שומני

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Sacs Ex Vivo המעיים להעריך חדירות ריריות מודלים של מחלות במערכת העיכול

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

דור של Microtumors שימוש 3D אדם Biogel תרבות מערכת תאי Glioblastoma נגזרות חולות להרכבת פרופיל Kinomic ובדיקת תגובה לתרופה

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

בשנת Vivo הערכה של תכונות מכניות ו Viscoelastic של לשון עכברוש

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...