Name: ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium
Uploaded: 2022-04-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium at JoVE.com

Çalışma, Tayvan Atom Enerjisi Konseyi (Hibe No. A-IE-01-03-02-02), Bilim ve Teknoloji Bakanlığı (Hibe No. NMRPG3E6202-3) ve Chang Gung Tıbbi Araştırma Projesi (Hibe No. CMRPG3H1281).

Hayvan çalışmalarındaki tüm deneysel prosedürler, Chang Gung Memorial Hastanesi'ndeki Araştırma Etik Komitesi tarafından onaylandı ve hayvanların oftalmik ve görme araştırmalarında kullanılması için ARVO beyanına bağlı kaldı.
1. Fare kornea epitelinin Ex vivo yara iyileşme modeli
<ol><li>Farelerin hazırlanması<ol><li>C57BL/6 farelere ketamin hidroklorür (80-100 mg/kg vücut ağırlığı) ve ksilazin (5-10 mg/kg vücut ağırlığı) intrap...

<ol>
	<li>Sridhar, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+of+cornea+and+ocular+surface.">Anatomy of cornea and ocular surface.</a> Indian Journal of Ophthalmology. 66 (2), 190-194 (2018).</li><li>Henriksson, J. T., McDermott, A. M., Bergmanson, J. P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dimensions+and+morphology+of+the+cornea+in+three+strains+of+mice.">Dimensions and morphology of the cornea in three strains of mice.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 50 (8), 3648-3654 (2009).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MANF+promotes+diabetic+corneal+epithelial+wound+healing+and+nerve+regeneration+by+attenuating+hyperglycemia-induced+endoplasmic+reticulum+stress.">MANF promotes diabetic corneal epithelial wound healing and nerve regeneration by attenuating hyperglycemia-induced endoplasmic reticulum stress.</a> Diabetes. 69 (6), 1264-1278 (2020).</li><li>Ma, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+epithelial+injury-induced+norepinephrine+promotes+Pseudomonas+aeruginosa+keratitis.">Corneal epithelial injury-induced norepinephrine promotes Pseudomonas aeruginosa keratitis.</a> Experimental Eye Research. 195, 108048 (2020).</li><li>Chan, M. F., Werb, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+corneal+injury.">Animal models of corneal injury.</a> Bio Protocol. 5 (13), 1516 (2015).</li><li>Lan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+and+function+of+mesenchymal+stem+cells+in+corneal+injury.">Kinetics and function of mesenchymal stem cells in corneal injury.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (7), 3638-3644 (2012).</li><li>Watanabe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+corneal+epithelial+wound+healing+in+vitro+and+in+vivo+by+annexin+A5.">Promotion of corneal epithelial wound healing in vitro and in vivo by annexin A5.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (5), 1862-1868 (2006).</li><li>Murataeva, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+CB2R+receptors+are+upregulated+with+corneal+injury+and+regulate+the+course+of+corneal+wound+healing.">Cannabinoid CB2R receptors are upregulated with corneal injury and regulate the course of corneal wound healing.</a> Experimental Eye Research. 182, 74-84 (2019).</li><li>Carter, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+impact+of+2D+and+3D+culture+conditions+on+the+therapeutic+effects+of+human+mesenchymal+stem+cell+secretome+on+corneal+wound+healing+in+vitro+and+ex+vivo.">Characterizing the impact of 2D and 3D culture conditions on the therapeutic effects of human mesenchymal stem cell secretome on corneal wound healing in vitro and ex vivo.</a> Acta Biomaterialia. 99, 247-257 (2019).</li><li>Sanie-Jahromi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+limbal+stem+cells+on+polycaprolactone+and+polycaprolactone/gelatin+fibrous+scaffolds+and+transplantation+in+animal+model.">Propagation of limbal stem cells on polycaprolactone and polycaprolactone/gelatin fibrous scaffolds and transplantation in animal model.</a> Bioimpacts. 10 (1), 45-54 (2020).</li><li>Sun, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+membrane+protein+(EMP2)+antibody+blockade+reduces+corneal+neovascularization+in+an+In+vivo+model.">Epithelial membrane protein (EMP2) antibody blockade reduces corneal neovascularization in an In vivo model.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 60 (1), 245-254 (2019).</li><li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cannabinoid+receptor+1+suppresses+transient+receptor+potential+vanilloid+1-induced+inflammatory+responses+to+corneal+injury.">Cannabinoid receptor 1 suppresses transient receptor potential vanilloid 1-induced inflammatory responses to corneal injury.</a> Cell Signal. 25 (2), 501-511 (2013).</li><li>Bai, J. Q., Qin, H. F., Zhao, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+on+mouse+model+of+grade+II+corneal+alkali+burn.">Research on mouse model of grade II corneal alkali burn.</a> International Journal of Ophthalmology. 9 (4), 487-490 (2016).</li><li>Oh, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+protein+TSG-6+reduces+inflammatory+damage+to+the+cornea+following+chemical+and+mechanical+injury.">Anti-inflammatory protein TSG-6 reduces inflammatory damage to the cornea following chemical and mechanical injury.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (39), 16875 (2010).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+effects+of+biohcly+in+an+in+vivo+model+of+mechanical+wounds+in+the+rabbit+cornea.">Evaluation of the effects of biohcly in an in vivo model of mechanical wounds in the rabbit cornea.</a> Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 35 (3), 189-199 (2019).</li><li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+nintedanib+thermos-sensitive+hydrogel+on+neovascularization+in+alkali+burn+rat+model.">Effect of nintedanib thermos-sensitive hydrogel on neovascularization in alkali burn rat model.</a> International Journal of Ophthalmology. 13 (6), 879-885 (2020).</li><li>Yao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+mesenchymal+stem+cells+on+cornea+wound+healing+induced+by+alkali+burn.">Role of mesenchymal stem cells on cornea wound healing induced by alkali burn.</a> PLoS One. 7 (2), 30842 (2012).</li></ol>

Kornea yaralanmasının fare ve tavşan modelleri, yara iyileşmesini izlemek, yeni terapötikleri test etmek ve yara iyileşmesi ve tedavi yollarının altında yatan mekanizmaları incelemek için yararlı bir ex vivo ve in vivo platform sağlar. Araştırmanın amacına bağlı olarak kısa süreli veya uzun vadeli bir deney için farklı hayvan modelleri kullanılabilir. Örneğin, in vivo fare korneasında bir epitel defekti oluşturulduktan sonra, sıvı terapötik ajanları küçük bir ...

İnsan korneası beş ana tabakadan oluşur ve göz içi dokuları korumak için görme keskinliğini ve yapısal bütünlüğü korumak için oküler refraksiyonda önemli bir rol oynar1. Korneanın en dış kısmı, bazal hücrelerden sırayla farklılaşan ve oküler yüzey1'den dökülmek üzere yukarı doğru hareket eden beş ila altı hücre katmanından oluşan kornea epitelidir. İnsanlarda ve Yeni Zelanda tavşanlarında kornea ile karşılaştırıldığında, fare korneası benzer bir kornea yapısına sahiptir, ancak epitel ve stroma2'deki kalınlığın azalması nedeniyle orta kısımdan daha ince bir çevreye sahiptir. Oküler optik sistemdeki benzersiz konumu nedeniyle, mekanik yaralanma, bakteriyel aşılama ve kimyasal ajanlar gibi birçok dış hakaret, epitel bütünlüğünü kolayca tehlikeye atabilir ve ayrıca görmeyi tehdit eden epitel defekti, enfeksiyöz keratit, kornea erimesi ve hatta kornea perforasyonuna yol açabilir.
Kayganlaştırıcılar, antibiyotikler, antienflamatuar ajanlar, oto-serum ürünleri ve amniyotik membran gibi çeşitli terapötik ajanlar yeniden epitelizasyonu iyileştirmek ve skarlaşmayı azaltmak için zaten kullanılmış olsa da, yara iyileşmesini sağlayabilecek, inflamasyonu azaltabilecek ve skar oluşumunu baskılayabilecek diğer potansiyel tedavi yöntemleri hala farklı platformlarda geliştirilmekte ve test edilmektedir. Diyabetik fare3'te kornea pas halkası sökücü ile kornea epitelinin çıkarılması, bakteriyel aşılama için steril 25 G iğne ile fare kornea epiteli üzerinde doğrusal çizikler 4, kornea pas halkası sökücü5 ile kornea epitelinin trefin yardımlı çıkarılması, korneanın yarısından fazlasında epitel koter ve limbus6 dahil olmak üzere kornea epitelinin yara iyileşmesiiçin çeşitli hayvan modelleri önerilmiştir , donuk bir neşter bıçağı7 ile trefin ile kolaylaştırılmış tavşan kornea aşınması ve sıvı azotta ani donma ile sığır kornea yaralanması8.
Kornea epitelindeki mekanik yaralanma dışında, kimyasal ajanlar da oküler yüzeye, özellikle asidik ve alkali ajanlara yaygın olarak rastlanan hakaretlerdir. Sodyum hidroksit (NaOH, 30-60 s için 0.1-1 N), kornea kimyasal yanığı 9,10,11,12,13'ün murin ve tavşan modellerinde yaygın olarak kullanılan kimyasallardan biridir. Sıçan kimyasal yanık modelinde korneaya da %100 etanol uygulanmış, bunu cerrahi bıçak14 kullanılarak ek mekanik kazıma yapılmıştır. Sağlıklı bir oküler yüzeyin bakımı, göz kapakları, Meibomian bezleri, lakrimal sistem, konjonktiva ve kornea dahil olmak üzere fonksiyonel birimlere dayandığından, in vivo hayvan modellerinin ex vivo kültürlü kornea epitel hücreleri veya kornea dokuları üzerinde bazı yararları vardır. Bu makalede, kornea aşınma yarasının fare modeli ve kornea alkali yanığının tavşan modeli gösterilmiştir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>6/0 Ethicon vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>6/0VICRYL</td>
			<td>tarsorrhaphy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer lid speculum</td>
			<td>katena</td>
			<td>K1-5355</td>
			<td>15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barraquer needle holder</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K6-3310</td>
			<td>without lock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barron Vacuum Punch 8.0 mm</td>
			<td>katena</td>
			<td>K20-2108</td>
			<td>for cutting filter paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>National Laboratory Animal Center</td>
			<td>RMRC11005</td>
			<td>mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Castroviejo forceps 0.12 mm</td>
			<td>katena</td>
			<td>K5-2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal rust ring remover with 0.5 mm burr</td>
			<td>Algerbrush IITM; Alger Equipment Co., Inc. Lago Vista, TX</td>
			<td>CHI-675</td>
			<td>for debridement of the corneal epithelium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Toyo Roshi Kaisha,Ltd.</td>
			<td>1.11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodum ophthalmic strips U.S.P</td>
			<td>OPTITECH</td>
			<td>OPTFL100</td>
			<td>staining for corneal epithelial defect</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>61763-23-3</td>
			<td>intraperitoneal or intramuscular anesthetics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Zealand White Rabbits</td>
			<td>Livestock Research Institute, Council of Agriculture,Executive Yuan</td>
			<td></td>
			<td>Rabbit models</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal saline</td>
			<td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td>
			<td>100-120-1101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proparacaine</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>ALC2UD09</td>
			<td>topical anesthetics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Skin biopsy punch 2mm</td>
			<td>STIEFEL</td>
			<td>22650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaOH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td>a chemical agent for alkali burn</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA</td>
			<td>SV11</td>
			<td>microscope for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Westcott Tenotomy Scissors Medium</td>
			<td>katena</td>
			<td>K4-3004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine hydrochloride 23.32 mg/10 mL</td>
			<td>Elanco animal health Korea Co., LTD.</td>
			<td>047-956</td>
			<td>intraperitoneal or intramuscular anesthetics</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo and in vivo animal models for mechanical and chemical injuries of corneal epithelium

Kimyasal yanık ve travma da dahil olmak üzere oküler yüzeyde kornea hasarı, ciddi skarlaşma, simblefaron, kornea limbal kök hücre eksikliğine neden olabilir ve büyük, kalıcı bir kornea epitel defektine neden olabilir. Aşağıdaki kornea opaklığı ve periferik neovaskülarizasyon ile birlikte epitel defekti geri dönüşümsüz görme bozukluğuna neden olur ve başta keratoplasti olmak üzere gelecekteki tedaviyi engeller. Hayvan modeli etkili bir ilaç geliştirme platformu olarak kullanılabildiğinden, burada farede kornea yaralanması ve tavşan kornea epiteline alkali yanık modelleri geliştirilmiştir. Yeni Zelanda beyaz tavşanı alkali yanık modelinde kullanılır. Farklı konsantrasyonlarda sodyum hidroksit, korneanın merkezi dairesel bölgesine kas içi ve topikal anestezi altında 30 s boyunca uygulanabilir. Bol miktarda izotonik normal salin irrigasyonundan sonra, artık gevşek kornea epiteli, bu dairesel alan içinde Bowman tabakasının derinliklerine kadar kornea çapağı ile çıkarıldı. Yara iyileşmesi, Kobalt mavi ışığı altında floresein boyaması ile belgelenmiştir. C57BL/6 fareler murin kornea epitelinin travmatik modelinde kullanıldı. Murin merkezi kornea, 2 mm çapında bir cilt zımbası kullanılarak işaretlendi ve daha sonra stereomikroskop altında 0.5 mm'lik bir çapak ile kornea pas halkası sökücü ile debride edildi. Bu modeller, göz damlalarının veya potansiyel olarak kornea epitel rejenerasyonunu kolaylaştıran kök hücreler gibi karışık ajanların terapötik etkisini doğrulamak için prospektif olarak kullanılabilir. Stereomikroskop ve görüntüleme yazılımı ile kornea opaklığı, periferik neovaskülarizasyon ve konjonktiva tıkanıklığı gözlenerek bu hayvan modellerinde terapötik etkiler izlenebilir.

Fare kornea epitelinin Ex vivo yara iyileşme modeli: Fare kornea epitelinin elde tutulan kornea pas halkası sökücü ile in vivo debridmanından sonra, merkezi 2 mm'lik alanda pozitif floresein lekesi ile hafif depresif bir merkezi kornea alanı bulunabilir (Şekil 3A-B). Fare göz küresini topladıktan sonra, önemli bir dönüş yapmadan balmumu kaplı 48 delikli bir kültür plakasına kolayca sa...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium at JoVE.com

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

Burada, kornea epitelinin mekanik ve kimyasal hasarı için fare ve tavşana dayalı hayvan modelleri, yeni terapötikleri ve altta yatan mekanizmayı taramak için geliştirilmiştir.

Kornea Epitelinin Mekanik ve Kimyasal Yaralanmaları için Ex Vivo ve In Vivo Hayvan Modelleri

Corneal injury to the ocular surface, including chemical burn and trauma, may cause severe scarring, symblepharon, corneal limbal stem cells deficiency, ...

Mekanik ve kimyasal kornea yaralanmalarını incelemek için Ex vivo ve in vivo hayvan modelleri oluşturuldu. Bu teknik, araştırmacıların korneanın mekanik ve kimyasal yaralanmalarını incelemeleri için kolayca oluşturulmuş bir platform sağlar. Bir murin kornea epitel yarası oluşturmak için, anestezi uygulanan farenin merkezi korneasını yaranın iyi sınırlandırılmış ve iyi ölçülebilir bir alanını doğrulamak için bir cilt biyopsi yumruğu kullanarak işaretleyin.Dairesel bir iz bırakmak için yumruğu merkezi korneanın üzerine hafifçe girintileyin ve kornea epitelini, Bowman'ın tabakasına zarar vermemek için 0,5 milimetrelik bir çapak ile elde tutulan bir kornea pas halkası sökücü kullanarak Bowman'ın tabakasına kadar indirin. Yara kenarındaki artık gevşek dokuları kornea forsepsleri ile çıkarın. Floresan boyama ile debridman alanını, floreseini çözmek için bir floresein kağıdına bir damla normal salin koyarak ve daha sonra floresan içeren damlayı kobalt mavisi ışık altında görselleştirmek için murin epitel defektine yerleştirerek onaylayın.Göz küresini dışarı itmek için ötenazi yapılmış farelerin üstün ve inferior orbital kenarlarına hafifçe bastırarak murin kornea aşınma yara modelinin ex vivo kültürü ile devam edin. Kapalı kornea makaslarının ucunu, göz küresine nüfuz etmemesini sağlamak için inferior orbital duvar boyunca retrobulber boşluğa sokun. Göz küresini 0.3 milimetrelik kornea forsepsleri ile sabit tutun ve ardından göz küresini izole etmek için optik siniri ve periorbital yumuşak dokuyu kornea makası ile kesin.Murin göz kürelerinin ex vivo kültürlenmesi için, kuyunun içinde erimiş balmumu ile 48 delikli bir plaka hazırlayın ve katılaşmayı bekleyin, daha sonra konjonktiva forsepslerinin ucuyla, göz kürelerini yerleştirmek için katılaşmış balmumu yüzeyinde yuvarlak bir delik oluşturun. Stabilizasyon sağlamak için hasat edilen göz kürelerini doğrudan balmumu kaplı tabanları ve yan duvarları olan 48 delikli plakaya yerleştirin. Çalışmanın amacına bağlı olarak %1 fetal sığır serumu içeren DMEM ile göz kürelerinin antibiyotikli veya antibiyotiksiz olarak kültürlenmesi.Göz küresinin yüzmesine neden olmadan oküler yüzeyi kültür ortamına daldırın ve floresein boyama ve kobalt mavisi ışık altında bir dijital kamera ile fotoğraf toplama yoluyla yara iyileşmesinin seyrini belgeleyin. Alkali yanık yaralanmasına neden olmak için, bir Petri kabına 8 milimetre çapında dairesel bir filtre kağıdı yerleştirin. Bir damlalık kullanarak, filtre kağıtlarını ıslatmak için Petri kabına 0.5 normal sodyum hidroksit ekleyin ve fazla çözeltiyi anestezi uygulanmış tavşan korneasına yerleştirmeden önce filtre kağıdından boşaltın.Göz kapaklarını bir kapak spekulumu ile açtıktan sonra, tavşan niktitasyon zarının filtre kağıdının yerleştirilmesine müdahale etmediğinden emin olun ve alkali ıslatılmış filtre kağıdını 30 saniye boyunca merkezi korneaya yerleştirin. Filtre kağıdını çıkarın ve alkali malzemeyi yıkamak için oküler yüzeyi 10 mililitre normal salin ile durulayın. Kornea defektini tamamlamak için, opasifize edilmiş bölgedeki kornea epiteli, kornea pas halkası sökücü kullanarak Bowman'ın zarına kadar debride edin.Debridman bölgesini kobalt mavisi ışığı altında floresein boyaması ile onaylayın ve kornea forsepsleri kullanarak artık kornea epitelini çıkarın. Tarsorrafi ile yara durumunu güvence altına almak için, niktitasyon zarının oküler yüzeyi ve burun tarafındaki kornea epitel defektini düzgün bir şekilde kapladığını doğrulayın. Oküler yüzeyi korumak ve tavşanın çizilmesini önlemek için 6-0 sütür kullanarak topikal ajanlarla veya topikal ajanlar olmadan geçici bir tarsorrafi uygulayın, tarsorrafi sütürünün tavşanın dikişleri kırmasını önlemek için dört ila beş bağ ve daha uzun düğümlerle üst ve alt kapak kenar boşluklarından 3 ila 4 milimetre olduğundan emin olun.Fare kornea epitelinin ex vivo yara iyileşme modelinde, fare kornea epitelinin in vivo debridmanından iki milimetre sonra santralde pozitif floresein boyalı hafif depresif merkezi kornea alanı gözlenmiştir. Balmumu kaplı 48 delikli bir kültür plakasına sabitlenmiş murin göz kürelerinin ex vivo kültürü, stereo mikroskop altında 48 delikli bir kültür plakası içinde günlük olarak incelendi ve belgelendi. Murin kornea epitelinin parçalanmasından bir gün sonra, kobalt mavisi ışık altında elde edilen dijital fotoğraflarda 2 milimetre çapında bir dairesel floresein boyalı epitel defekti ortaya çıkarıldı.Tavşan kornea epitelinde alkali bir yaralanma oluştuktan sonra, merkezi kornea üzerinde kobalt mavisi ışıklı veya kobalt mavisi ışık olmadan net ve tam dairesel bir kenar boşluğu ile pozitif floresein boyaması gözlendi. Limbustan pannus büyümesi ile kornea epitelyal yarasının yeniden epitelizasyonu gözlendi. En önemli adımlar, fare ve tavşan kornea yüzeylerinde pürüzsüz ve hatta epitel kusurları oluşturmak için prosedürlerdir.Yeni tıbbi ve cerrahi terapötikler bu platformlarda test edilebilir. İşlemlerden sonra yeniden epitelizasyonun etkisi izlenebilir. Bu protokolde kornea neovaskülarizasyonu ve yaralanma sonrası opaklık, daha fazla araştırma için karşılanmamış bir ihtiyaç olacaktır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Ex Vivo and In Vivo Animal Models for Mechanical and Chemical Injuries of Corneal Epithelium

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Tıp

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

Procedure for Human Saphenous Veins Ex Vivo Perfusion and External Reinforcement

İnsan Safen Ven Prosedürü<em&gt; Ex vivo</em&gt; Perfüzyon ve Dış Takviye

The mainstay of contemporary therapies for extensive occlusive arterial disease is venous bypass graft. However, its durability is threatened by intimal ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose

Vivo ve Ex Vivo Periton yağ içinde Samanyolu Nokta Yapıların Yumurtalık Kanseri Metastatik Kolonizasyon Eğitim Yaklaşımlar içinde

High-grade serous ovarian cancer (HGSC), the cause of widespread peritoneal metastases, continues to have an extremely poor prognosis; fewer than 30% of ...

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

The epithelial barrier is the first innate defense of the gastrointestinal tract and selectively regulates transport from the lumen to the underlying ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Kinomic Profil Yöntemi ve İlaç Tepki Testi için 3D İnsan BIOGEL Kültür Sisteminin Kullanılması Microtumors ve Hasta kaynaklı Glioblastom Hücreleri Üretimi

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

Sıçan Dilinin Mekanik ve Viskoelastik Özelliklerinin In Vivo Değerlendirilmesi

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...