Name: isolation of cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval and embryonic zebrafish for electrophysiological studies
Uploaded: 2022-02-09T14:30:00
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この作業は、NIHがCGNにHL140024を、CMCにHL150277を付与したことで支援されました。図 1 と図 2 は BioRender.com を使用して作成されました。

すべてのゼブラフィッシュ(野生型AB株、オスとメスの両方)は、ワシントン大学施設動物管理および使用委員会(IACUC)のガイドラインに従って、実験のために飼育、維持、および取り扱われました。
1.成体、幼体、および仔魚のゼブラフィッシュからの心房、心室、および球根動脈の分離
<ol><li>コールドショック、すなわち4°Cの水に浸して~10秒間魚を安楽死?...

<ol>
	<li>Vascotto, S. G., Beckham, Y., Kelly, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish's+swim+to+fame+as+an+experimental+model+in+biology.">The zebrafish's swim to fame as an experimental model in biology.</a> Biochemistry and Cell Biology. 75 (5), 479-485 (1997).</li><li>Love, D. R., Pichler, F. B., Dodd, A., Copp, B. R., Greenwood, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+for+high-throughput+screens:+The+present+and+future+using+zebrafish.">Technology for high-throughput screens: The present and future using zebrafish.</a> Current Opinion in Biotechnology. 15 (6), 564-571 (2004).</li><li>Ke&#223;ler, M., Rottbauer, W., Just, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+use+of+zebrafish+for+novel+cardiac+drug+discovery.">Recent progress in the use of zebrafish for novel cardiac drug discovery.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 10 (11), 1231-1241 (2015).</li><li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+dissection+in+larval,+juvenile+and+adult+zebrafish,+Danio+rerio.">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), e3165 (2011).</li><li>Brette, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+isolated+ventricular+myocytes+from+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Characterization of isolated ventricular myocytes from adult zebrafish (Danio rerio).</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 374 (1), 143-146 (2008).</li><li>Sander, V., Sune, G., Jopling, C., Morera, C., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+primary+cardiomyocytes+from+adult+zebrafish+hearts.">Isolation and in vitro culture of primary cardiomyocytes from adult zebrafish hearts.</a> Nature protocol. 8, 800-809 (2013).</li><li>Nemtsas, P., Wettwer, E., Christ, T., Weidinger, G., Ravens, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+zebrafish+heart+as+a+model+for+human+heart?+An+electrophysiological+study.">Adult zebrafish heart as a model for human heart? An electrophysiological study.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 48 (1), 161-171 (2010).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+consequences+of+KATP+overactivity+in+Cantu+syndrome.">Cardiovascular consequences of KATP overactivity in Cantu syndrome.</a> JCI insight. 3 (15), 137799 (2018).</li><li>Singareddy, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-sensitive+potassium+channels+in+zebrafish+cardiac+and+vascular+smooth+muscle.">ATP-sensitive potassium channels in zebrafish cardiac and vascular smooth muscle.</a> The Journal of Physiology. , (2021).</li><li>Burns, C. G., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hearts+from+zebrafish+embryos.">Purification of hearts from zebrafish embryos.</a> BioTechniques. 40 (3), 274-282 (2006).</li><li>Seiler, C., Abrams, J., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+zebrafish+intestinal+smooth+muscle+development+using+a+novel+sm22&#945;-b+promoter.">Characterization of zebrafish intestinal smooth muscle development using a novel sm22&#945;-b promoter.</a> Developmental Dynamics. 239, 2806-2812 (2010).</li><li>Yang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+amount+in+situ+hybridization+and+transgene+via+microinjection+in+zebrafish.">Whole amount in situ hybridization and transgene via microinjection in zebrafish.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 36 (3), 243-247 (2003).</li><li>Kompella, S. N., Brette, F., Hancox, J. C., Shiels, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenanthrene+impacts+zebrafish+cardiomyocyte+excitability+by+inhibiting+IKr+and+shortening+action+potential+duration.">Phenanthrene impacts zebrafish cardiomyocyte excitability by inhibiting IKr and shortening action potential duration.</a> The Journal of General Physiology. 153 (2), 202012733 (2021).</li><li>Jou, C. J., Spitzer, K. W., Tristani-Firouzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blebbistatin+effectively+uncouples+the+excitation-contraction+process+in+zebrafish+embryonic+heart.">Blebbistatin effectively uncouples the excitation-contraction process in zebrafish embryonic heart.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 25 (4-5), 419-424 (2010).</li></ol>

ゼブラフィッシュ心室筋細胞を単離する以前の方法5,6は、培養または電気生理学的研究のために筋細胞を生成することを目的としており、より低い収量の細胞を提供し、細胞の品質および生存率に悪影響を及ぼす複数回の遠心分離の長いステップを伴った。ここで説明するプロトコルは信頼性が高く、重要な心血管組織(心室、心房、およびVSM)のそ...

ゼブラフィッシュは小型硬骨魚類であり、長い間モデル脊椎動物として使用されてきました1、そして最近、遺伝子や薬物のハイスループットスクリーニングのための実行可能な脊椎動物システムとして目立つようになりました2,3。しかし、ゼブラフィッシュ組織の生理学的分析は十分に発達していません。心血管系では、ゼブラフィッシュ心臓4の解剖および心室心筋細胞5,6,7の単離のための方法が記載されている。心房筋細胞の効果的な単離に関する詳細な説明はほとんどなく、パッチクランプ研究のための血管平滑筋(VSM)製剤の報告もありません。.
現在の研究では、電気生理学的および機能的研究に実行可能なゼブラフィッシュの心臓および血管筋細胞の単離のための方法論について説明しています。このアプローチには、ゼブラフィッシュ心室筋細胞単離のための以前に報告されたプロトコルの変更が含まれ5,6、哺乳類VSM細胞分離8からの方法を適応させ、球根状動脈(BA)からのゼブラフィッシュ血管平滑筋細胞の単離を可能にします。このプロトコルにより、ゼブラフィッシュから単離された心房、心室、およびVSM細胞を効率的に取得でき、パッチクランプ試験で最大8時間9確実に使用できます。
完全に親生物の外で発達するほぼ透明な幼虫にもかかわらず、心血管発達の研究における有望な個体発生の可能性を探求することは、若い年齢で組織を抽出し分析する際の課題によって制限されてきました。現在の記事では、適応された公開された抽出方法10を使用して、受精後3日(dpf)に分離されたゼブラフィッシュの心臓のパッチクランプ実験を実証することにより、この制限に対処します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22364111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>19 Guage Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030119479</td>
			<td>For embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axopatch 200B amplifier and Digidata 1200 digitizer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Used for action potential recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Mini Centrifuge</td>
			<td>Southern Labware</td>
			<td>MLX-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>203390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Strainer Sieve</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-06336-71</td>
			<td>100 &#956;m sieve for embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type H</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type II</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>324626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastase</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>Style #5</td>
			<td>Ceramic-coated forceps for adult and juvenile CV tissue isolation (Need two)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Petri Dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5981</td>
			<td>For dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Hematocrit Capillary Tubes</td>
			<td>Kimble Chase</td>
			<td>41A2502</td>
			<td>Soda lime glass for patch pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur Pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5606</td>
			<td>100 mm x 20 mm, for embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>806552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>For adult and juvenile zebrafish decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Fine Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>Style #SF</td>
			<td>For isolating larval CV tissues (Need two)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermoshaker</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>13687711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine Methanesulfonate (MS222)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For anaesthetizing zebrafish larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6522</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval and embryonic zebrafish for electrophysiological studies

ゼブラフィッシュは、心臓血管研究におけるモデル脊椎動物生物として長い間使用されてきました。ゼブラフィッシュの心血管組織から個々の細胞を単離することの技術的困難は、それらの電気生理学的特性を研究する上で制限されてきた。ゼブラフィッシュ心臓の解剖および心室心筋細胞の単離については、以前の方法が記載されている。しかしながら、電気生理学的特性評価のためのゼブラフィッシュ心房および血管筋細胞の単離は詳述されていなかった。この研究では、パッチクランプ実験に適した、単離された幼体および成体のゼブラフィッシュの心室および心房心筋細胞、ならびに球根状動脈からの血管平滑筋(VSM)細胞を日常的に提供する新規および修正された酵素プロトコルについて説明します。発生の胚および幼虫段階で分離されたゼブラフィッシュの心血管組織に関する電気生理学的研究の文献的証拠はありません。幼虫および胚の心臓からの個々の細胞に対するパッチクランプ実験を可能にする部分解離技術が実証されています。

上記のプロトコルは、野生型および変異ゼブラフィッシュの心血管系におけるATP感受性カリウム(KATP)チャネルの広範な研究で最近報告されたように、パッチクランプ研究に適した一貫した品質の十分な心臓および血管筋細胞を確実かつ日常的に提供します9。単離された心筋細胞からのこのようなKATPチャネル活性の記録の代表的な痕跡を図3A</...

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Isolation of Cardiac and Vascular Smooth Muscle Cells from Adult, Juvenile, Larval and Embryonic Zebrafish for Electrophysiological Studies

本プロトコルは、電気生理学的研究に適した、成体、幼若、幼虫、および胚性ゼブラフィッシュ(Danio rerio)からの生存可能な心臓および血管平滑筋細胞の急性単離を記載している。

電気生理学的研究のための成体、幼若、幼虫および胚性ゼブラフィッシュからの心臓および血管平滑筋細胞の単離(英語)

Zebrafish have long been used as a model vertebrate organism in cardiovascular research. The technical difficulties of isolating individual cells from the ...

パッチクランプ電気生理学を用いて天然のイオンチャネル特性を研究するには、急性に単離された細胞へのアクセスが必要です。このプロトコルは、異なる年齢のゼブラフィッシュから個々の心血管筋細胞にアクセスする方法を説明しています。このプロトコルは堅牢で、シンプルで、再現性が容易で、比較的高い収量と生存率で天然状態のゼブラフィッシュから心血管筋細胞を分離します。はじめに、魚を灌流緩衝液で部分的に満たした大きなペトリ皿に移し、それを解剖顕微鏡の下に置きます。腹側を解剖スコープに向けて、利き手ではない手で魚を持ちます。利き手の細い鉗子で、魚の胸筋とひれをそっと引き裂いて、心房、心室、球動脈などの心臓血管組織を明らかにします。球根動脈と腹側大動脈の交差する先端で球根動脈をそっと引っ張ります。鉗子をつまんで大動脈から球根動脈を慎重に分離し、心房の先端を収束する複数の静脈枝に配置します。次に、心房の先端を副鼻腔静脈から引き抜き、心臓血管組織を体の他の部分から隔離します。心筋細胞を解剖するには、心房と心室を心血管組織から引き抜きます。細かい鉗子を使用して心室に穏やかな裂け目を作り、心臓組織が明るい赤から淡いサーモン色に変わったときに確実にできる余分な血液を排出します。単離された心房と心室を灌流バッファーを含む別の1.5ミリリットルの遠沈管にプールします。チューブ内の灌流バッファーを750マイクロリットルの消化バッファーと交換します。チューブを摂氏37度、毎分800回転のサーモシェーカーに置きます。組織が半透明になるまで消化できるようにします。ベンチトップミニ遠心分離機で組織を2, 000倍Gで3〜5秒間静かに回転させて消化を終了し、上清消化バッファーを750マイクロリットルの停止バッファーと交換します。停止バッファーを500〜750マイクロリットルの灌流バッファーに静かに交換し、火炎研磨されたパスツールピペットを使用して組織を30回粉砕して細胞を分散させます。次に、心室を静かに粉砕します。均一なサンプリングを行うには、細胞を数回ゆっくりと上下にピペットで動かして再懸濁してから、対応する研究のために細胞を一滴加えます。心臓血管組織から成体の球動脈を摘み取り、5つの球根動脈をS1バッファーを含む1.5ミリリットルの遠沈管にプールします。S1を400マイクロリットルのS2バッファーに置き換え、サーモシェーカーで摂氏37度、毎分800回転で20分間、球根動脈のパパイン消化を可能にします。部分的に消化された球根動脈を1分間落ち着かせ、S2上清をコラゲナーゼを含む500マイクロリットルのS3バッファーと交換します。サーモシェーカーで37°C、毎分800回転で3〜5分間組織を消化します。ベンチトップミニ遠心分離機で2, 000倍Gで3〜5秒間組織を静かに回転させて消化を終了し、S3上清を500マイクロリットルのS1と交換します。ペレット化された組織を穏やかに粉砕して、血管平滑筋細胞を分散させます。適切なサイズのガラスカバースリップ上に分散した血管平滑筋細胞をプレート化します。カバースリップを室温で30分間保持してセルを付着させ、次の6時間以内に使用してください。胚を麻酔します。次に、胚を5ミリリットルの遠沈管に移して濃縮し、余分な培地を取り除きます。胚を3ミリリットルの冷灌流バッファーで2回洗浄した後、2ミリリットルの灌流バッファーに再懸濁します。胚性心臓隔離装置を使用して、1ミリリットルの胚を針に引き込み、直ちにチューブに戻します。断片化した胚を漏斗に入れた100マイクロメートルの細胞ストレーナーふるいに通します。ろ過した心臓を別の5ミリリットルの遠心チューブに集めます。ろ液をよく混合し、1ミリリットルのアリコートを1.5ミリリットルの遠沈管に分離します。ベンチトップミニ遠心分離機ですべてのチューブを5秒間遠心分離し、上清を廃棄します。1ミリリットルの灌流バッファーを使用して、チューブ内のペレットの連続再懸濁を実行します。心臓を2回軽くピペットで動かしてから、対応する研究のために滴を加えます 球根動脈から単離された細胞について、血管平滑筋細胞をtagln:EGFP発現によって確認した。単離された心筋細胞からのATP感受性カリウムチャネル活性の記録の代表的な痕跡がここに示されています。成功したシングルチャンネル録音は、胚の心臓から摘出されたパッチで得られました。心室筋細胞は安定した過分極膜電位を示し,パッチピペットによる電流注入により活動電位を刺激した。心房筋細胞は自発的な活動電位発火を示した。活動電位特性はここに要約されています。心筋細胞解離中に緩衝液を交換する際には、消化組織が乱されないように注意する必要があります。組織の断片化は、ピペット粉砕によってのみ達成されるべきです。球根組織のコラーゲン消化中に、毎分浮遊、拡張、および半透明の組織を調べます。組織の断片化が明らかになったら、消化を中止します。細胞が単離されると、それらは何時間も生き続け、パッチクランプ技術を使用した電気生理学的分析に使用できます。これにより、例えば、これらのゼブラフィッシュ組織におけるATP感受性カリウムチャネルが哺乳類のものと本質的に同一であることを示すことができました。

Research

JoVE Journal

Biology

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

遺伝子発現解析のための胚ゼブラフィッシュとcDNA合成からのRNA分離

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

ヒト臍帯動脈平滑筋細胞の単離（HUASMC）

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

大人と胚骨格筋のMicroexplantの文化と骨格筋幹細胞の単離

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

幼虫の心臓の解剖、少年と大人ゼブラフィッシュ、ゼブラフィッシュ</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

ゼブラフィッシュ胚骨格筋のレーザー招いた傷害

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

成人骨格筋からの個々の筋線維とその衛星細胞の単離および培養

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

解離調製物から胚および幼虫のゼブラフィッシュ骨格筋線維の分析

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

新生児マウスから肺動脈平滑筋細胞の単離

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

マウス冠動脈血管平滑筋細胞の単離

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

分離と性質、大人マウス心臓から心臓の幹細胞の分化

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...