Name: isolation of cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval and embryonic zebrafish for electrophysiological studies
Uploaded: 2022-02-09T14:30:00
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Este trabalho foi apoiado pelo NIH concede HL140024 à CGN e HL150277 à CMC. As figuras 1 e figura 2 foram criadas com BioRender.com.

Todos os zebrafish (cepa tipo selvagem AB, tanto masculino quanto feminino) foram criados, mantidos e tratados para os experimentos seguindo as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Washington (IACUC).
1. Isolamento do átrio, ventrículo e arterioso bulboso de zebrafish adulto, juvenil e larval
<ol><li>Eutanize peixes usando choque frio, ou seja, imergindo em água de 4 °C, por ~10 s.</li>
	<li>Usando fórceps curvos, transfira...

<ol>
	<li>Vascotto, S. G., Beckham, Y., Kelly, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish's+swim+to+fame+as+an+experimental+model+in+biology.">The zebrafish's swim to fame as an experimental model in biology.</a> Biochemistry and Cell Biology. 75 (5), 479-485 (1997).</li><li>Love, D. R., Pichler, F. B., Dodd, A., Copp, B. R., Greenwood, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+for+high-throughput+screens:+The+present+and+future+using+zebrafish.">Technology for high-throughput screens: The present and future using zebrafish.</a> Current Opinion in Biotechnology. 15 (6), 564-571 (2004).</li><li>Ke&#223;ler, M., Rottbauer, W., Just, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+use+of+zebrafish+for+novel+cardiac+drug+discovery.">Recent progress in the use of zebrafish for novel cardiac drug discovery.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 10 (11), 1231-1241 (2015).</li><li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+dissection+in+larval,+juvenile+and+adult+zebrafish,+Danio+rerio.">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), e3165 (2011).</li><li>Brette, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+isolated+ventricular+myocytes+from+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Characterization of isolated ventricular myocytes from adult zebrafish (Danio rerio).</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 374 (1), 143-146 (2008).</li><li>Sander, V., Sune, G., Jopling, C., Morera, C., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+primary+cardiomyocytes+from+adult+zebrafish+hearts.">Isolation and in vitro culture of primary cardiomyocytes from adult zebrafish hearts.</a> Nature protocol. 8, 800-809 (2013).</li><li>Nemtsas, P., Wettwer, E., Christ, T., Weidinger, G., Ravens, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+zebrafish+heart+as+a+model+for+human+heart?+An+electrophysiological+study.">Adult zebrafish heart as a model for human heart? An electrophysiological study.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 48 (1), 161-171 (2010).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+consequences+of+KATP+overactivity+in+Cantu+syndrome.">Cardiovascular consequences of KATP overactivity in Cantu syndrome.</a> JCI insight. 3 (15), 137799 (2018).</li><li>Singareddy, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-sensitive+potassium+channels+in+zebrafish+cardiac+and+vascular+smooth+muscle.">ATP-sensitive potassium channels in zebrafish cardiac and vascular smooth muscle.</a> The Journal of Physiology. , (2021).</li><li>Burns, C. G., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hearts+from+zebrafish+embryos.">Purification of hearts from zebrafish embryos.</a> BioTechniques. 40 (3), 274-282 (2006).</li><li>Seiler, C., Abrams, J., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+zebrafish+intestinal+smooth+muscle+development+using+a+novel+sm22&#945;-b+promoter.">Characterization of zebrafish intestinal smooth muscle development using a novel sm22&#945;-b promoter.</a> Developmental Dynamics. 239, 2806-2812 (2010).</li><li>Yang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+amount+in+situ+hybridization+and+transgene+via+microinjection+in+zebrafish.">Whole amount in situ hybridization and transgene via microinjection in zebrafish.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 36 (3), 243-247 (2003).</li><li>Kompella, S. N., Brette, F., Hancox, J. C., Shiels, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenanthrene+impacts+zebrafish+cardiomyocyte+excitability+by+inhibiting+IKr+and+shortening+action+potential+duration.">Phenanthrene impacts zebrafish cardiomyocyte excitability by inhibiting IKr and shortening action potential duration.</a> The Journal of General Physiology. 153 (2), 202012733 (2021).</li><li>Jou, C. J., Spitzer, K. W., Tristani-Firouzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blebbistatin+effectively+uncouples+the+excitation-contraction+process+in+zebrafish+embryonic+heart.">Blebbistatin effectively uncouples the excitation-contraction process in zebrafish embryonic heart.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 25 (4-5), 419-424 (2010).</li></ol>

Métodos anteriores para isolar mócitos ventricularesde zebrafish 5,6, destinados a gerar miócitos para cultura ou estudos eletrofisiológicos, forneceram células de menor rendimento e envolveram longas etapas de múltiplas centrífugas que afetaram negativamente a qualidade e a viabilidade da célula. Os protocolos descritos aqui são confiáveis, abrangem cada um dos tecidos cardiovasculares significativos (ventrículo, atria e VSM), e, principalmente, são ...

Zebrafish são pequenos peixes teleost que têm sido usados há muito tempo como um modelo de organismo vertebrado1 e recentemente ganharam destaque como um sistema viável de vertebrados para rastreamento de alto rendimento de genes e drogas 2,3. No entanto, a análise fisiológica dos tecidos de zebrafish não é bem desenvolvida. No sistema cardiovascular, foram descritos métodos para dissecção de corações de zebrafish4 e isolamento de miócitos cardíacos ventriculares 5,6,7. Há poucas descrições detalhadas do isolamento efetivo de miócitos atrial e nenhum relato de preparações vasculares de músculo liso (VSM) para estudos de grampo de remendo.
O trabalho atual descreve metodologia para o isolamento de mócitos cardíacos e vasculares de zebrafish, viáveis para estudos eletrofisiológicos e funcionais. Esta abordagem inclui modificações de protocolos previamente relatados para o isolamento ventricular do mócito ventricular de zebrafish 5,6 e adapta métodos de isolamento de células VSM8, permitindo o isolamento de zebrafish vascular smooth muscle cell do arteriosus bulboso (BA). Os protocolos resultam em rendimentos eficientes de células atrial, ventricular e VSM isoladas de zebrafish que podem ser usados de forma confiável em estudos de grampo de remendo por até 8 h9.
Apesar de suas larvas quase transparentes que se desenvolvem inteiramente fora do organismo parental, explorar seu potencial ongenético prometido no estudo do desenvolvimento cardiovascular tem sido limitado por desafios na extração e análise de tecidos em uma idade jovem. O artigo atual aborda essa limitação demonstrando experimentos de grampo de remendo em corações de zebrafish isolados já em 3 dias após a fertilização (dpf), utilizando um método de extração adaptado e publicado10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22364111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>19 Guage Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030119479</td>
			<td>For embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axopatch 200B amplifier and Digidata 1200 digitizer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Used for action potential recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Mini Centrifuge</td>
			<td>Southern Labware</td>
			<td>MLX-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>203390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Strainer Sieve</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-06336-71</td>
			<td>100 &#956;m sieve for embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type H</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type II</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>324626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastase</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>Style #5</td>
			<td>Ceramic-coated forceps for adult and juvenile CV tissue isolation (Need two)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Petri Dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5981</td>
			<td>For dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Hematocrit Capillary Tubes</td>
			<td>Kimble Chase</td>
			<td>41A2502</td>
			<td>Soda lime glass for patch pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur Pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5606</td>
			<td>100 mm x 20 mm, for embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>806552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>For adult and juvenile zebrafish decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Fine Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>Style #SF</td>
			<td>For isolating larval CV tissues (Need two)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermoshaker</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>13687711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine Methanesulfonate (MS222)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For anaesthetizing zebrafish larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6522</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval and embryonic zebrafish for electrophysiological studies

Os zebrafish têm sido usados há muito tempo como um modelo de organismo vertebrado em pesquisas cardiovasculares. As dificuldades técnicas de isolar células individuais dos tecidos cardiovasculares dos zebrafish têm sido limitantes no estudo de suas propriedades eletrofisiológicas. Métodos anteriores foram descritos para dissecção de corações de zebrafish e isolamento de miócitos cardíacos ventriculares. No entanto, o isolamento dos mócitos atrial e vascular de zebrafish para caracterização eletrofisiológica não foi detalhado. Este trabalho descreve protocolos enzimáticos novos e modificados que fornecem rotineiramente cardiomiocócitos ventriculares e atrials isolados, bem como células de músculo liso vascular (VSM) do arteriosus bulboso, adequados para experimentos de grampo de remendo. Não houve evidência literária de estudos eletrofisiológicos sobre tecidos cardiovasculares de zebrafish isolados em estágios embrionários e larvais de desenvolvimento. Técnicas parciais de dissociação que permitem experimentos de grampo de remendo em células individuais de corações larvais e embrionários são demonstradas.

Os protocolos acima fornecem de forma confiável e rotineiramente miócitos cardíacos e vasculares suficientes de qualidade consistente para estudos de grampo de remendo, como recentemente relatado em estudos extensivos de canais de potássio sensíveis a ATP (KATP) em cardiovasculatura de zebrafish de tipo selvagem e mutante9. Traços representativos de gravações de tais atividades do canalK ATP de cardiomiócitos isolados são mostrados na Figura 3A-...

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Isolation of Cardiac and Vascular Smooth Muscle Cells from Adult, Juvenile, Larval and Embryonic Zebrafish for Electrophysiological Studies

O presente protocolo descreve o isolamento agudo de células musculares lisas cardíacas e vasculares viáveis de zebrafish adulto, juvenil, larval e embrionário (Danio rerio), adequados para estudos eletrofisiológicos.

Isolamento de células musculares lisas cardíacas e vasculares de zebrafish adulto, juvenil, larval e embrionário para estudos eletrofisiológicos

Zebrafish have long been used as a model vertebrate organism in cardiovascular research. The technical difficulties of isolating individual cells from the ...

Estudar propriedades do canal de íons nativos usando eletrofisiologia de grampos requer acesso a células isoladas agudamente. Este protocolo descreve métodos para acessar miócitos cardiovasculares individuais de zebrafish em diferentes idades. Este protocolo é robusto, simples, facilmente reproduzível, e isola miócitos cardiovasculares de zebrafish em seu estado natal com rendimento e viabilidade relativamente altos.Para começar, transfira o peixe para uma grande placa de Petri parcialmente preenchida com tampão de perfusão e coloque-o sob um microscópio dissecando. Segure o peixe na mão não dominante com o lado ventral voltado para o escopo de dissecção. Com os fórceps finos na mão dominante, rasgue suavemente os músculos peitorais e as barbatanas do peixe para revelar os tecidos cardiovasculares, incluindo átrio, ventrículo e bulbo arteriosus.Puxe suavemente o bulbus arteriosus na ponta interseccionar do bulbo arteriosus e da aorta ventral. Separe cuidadosamente o bulbo arterioso da aorta beliscando os fórceps, localizando a ponta do átrio nos múltiplos ramos venosos que convergem. Em seguida, tire a ponta do átrio do ânseio do seio para isolar os tecidos cardiovasculares do resto do corpo.Para dissecar cardiomiócitos, arrancar o átrio e ventrículo do tecido cardiovascular. Faça uma ruptura suave no ventrículo usando fórceps finos para drenar o excesso de sangue, o que pode ser assegurado quando o tecido cardíaco passa de vermelho brilhante para uma cor de salmão pálido. Acumule o átrio isolado e o ventrículo em um tubo de centrífuga separado de 1,5 mililitro contendo tampão de perfusão.Substitua o tampão de perfusão nos tubos por 750 microliters de tampão de digestão. Coloque os tubos em um termoshaker a 37 graus Celsius e 800 rotações por minuto. Permita a digestão dos tecidos até que se tornem translúcidos.Acabe com a digestão girando suavemente os tecidos em uma minicentrifuagem de bancada a 2.000 vezes G por três a cinco segundos e substitua o tampão de digestão sobrenante por 750 microliters de tampão de parada. Substitua suavemente o tampão de parada por 500 a 750 microliters de tampão de perfusão e triturar os tecidos 30 vezes usando uma pipeta Pasteur polida em chamas para dispersar as células. Em seguida, triturar suavemente os ventrículos.Para amostragem uniforme, pipete suavemente as células para cima e para baixo algumas vezes para resuspend, antes de adicionar uma gota delas para estudos correspondentes. Retire o bulbo arteriosus adulto dos tecidos cardiovasculares e poça cinco bulbus arteriosus em um tubo de centrífuga de 1,5 mililitro contendo tampão S1. Substitua o S1 por 400 microliters de tampão S2 e permita a digestão papain do bulbo arteriosus em um termoshaker a 37 graus Celsius e 800 rotações por minuto durante 20 minutos.Deixe que o bulbus arteriosus parcialmente digerido se acalme por um minuto e substitua o supernatante S2 por 500 microliters de tampão S3 contendo colagemnase. Digerir os tecidos em um termoshaker a 37 graus Celsius e 800 revoluções por minuto por três a cinco minutos. Acabe com a digestão girando suavemente os tecidos em uma minicentrifutura de bancada a 2.000 vezes G por três a cinco segundos, e substitua o supernatante S3 por 500 microliters de S1. Triturar suavemente os tecidos pelleted para dispersar células musculares lisas vasculares.Placa dispersou células musculares lisas vasculares em deslizamentos de tampa de vidro de tamanho apropriado. Mantenha os deslizamentos de cobertura em temperatura ambiente por 30 minutos para as células anexarem e use-as nas próximas seis horas. Anestesiar os embriões.Em seguida, concentre os embriões transferindo-os para um tubo de centrífuga de cinco mililitros e, em seguida, remova o excesso de mídia. Lave os embriões com três mililitros de tampão de perfusão fria duas vezes, depois resuspensá-los em dois mililitros de tampão de perfusão. Usando o aparelho de isolamento cardíaco embrionário, desenhe um mililitro dos embriões na agulha e expulse-os imediatamente para o tubo.Passe os embriões fragmentados através de uma peneira de 100 micrômetros colocada em um funil. Colete os corações filtrados em outro tubo de centrífuga de cinco mililitros. Misture bem o filtrado e separe as alíquotas de um mililitro em tubos de centrífuga de 1,5 mililitro.Centrifugar todos os tubos em uma minicentrifuagem de bancada por cinco segundos e descarte o supernatante. Realize a ressuspensão serial das pelotas nos tubos usando um mililitro de tampão de perfusão. Pipeta suavemente os corações para cima e para baixo duas vezes antes de adicionar uma gota para estudos correspondentes Para células isoladas de bulbus arteriosus, as células musculares lisas vasculares foram confirmadas pela expressão tagln:EGFP.Traços representativos de gravações de atividade de canal de potássio sensível ao ATP de cardiomiócitos isolados são mostrados aqui. Gravações de um único canal bem sucedidas foram obtidas em patches extirpados dos corações embrionários. Os miócitos ventriculares apresentaram potenciais estáveis de membrana hiperpolarizada, e os potenciais de ação foram estimulados através da injeção atual através da pipeta de remendo.Miócitos atrial exibiam ação espontânea potencial de disparo. As propriedades potenciais de ação são resumidas aqui. Ao substituir os tampões durante a dissociação da cardiomiócito, deve-se tomar cuidado para que os tecidos digestivos não sejam perturbados.A fragmentação tecidual deve ser realizada apenas por trituração de pipeta. Durante a digestão colágena dos tecidos bulbosos, examine para tecidos flutuantes, dilatados e translúcidos a cada minuto. Uma vez que a fragmentação do tecido é aparente, cesse a digestão.Uma vez que as células são isoladas, elas podem ser mantidas vivas por horas e usadas para análise eletrofisiológica usando técnicas de grampo de remendo. Isso nos permitiu, por exemplo, mostrar que os canais de potássio sensíveis ao ATP nesses tecidos de zebrafish são essencialmente idênticos aos dos mamíferos.

Research

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