Name: isolation of cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval and embryonic zebrafish for electrophysiological studies
Uploaded: 2022-02-09T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cardiac and Vascular Smooth Muscle Cells from Adult, Juvenile, Larval and Embryonic Zebrafish for Electrophysiological Studies at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами NIH HL140024 для CGN и HL150277 для CMC. Рисунки 1 и 2 были созданы с помощью BioRender.com.

Все рыбки данио (штамм дикого типа AB, как мужской, так и женский) были выращены, поддержаны и обработаны для экспериментов в соответствии с руководящими принципами Комитета по уходу и использованию животных Вашингтонского университета (IACUC).
1. Выделение предсердий, жел...

<ol>
	<li>Vascotto, S. G., Beckham, Y., Kelly, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish's+swim+to+fame+as+an+experimental+model+in+biology.">The zebrafish's swim to fame as an experimental model in biology.</a> Biochemistry and Cell Biology. 75 (5), 479-485 (1997).</li><li>Love, D. R., Pichler, F. B., Dodd, A., Copp, B. R., Greenwood, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technology+for+high-throughput+screens:+The+present+and+future+using+zebrafish.">Technology for high-throughput screens: The present and future using zebrafish.</a> Current Opinion in Biotechnology. 15 (6), 564-571 (2004).</li><li>Ke&#223;ler, M., Rottbauer, W., Just, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progress+in+the+use+of+zebrafish+for+novel+cardiac+drug+discovery.">Recent progress in the use of zebrafish for novel cardiac drug discovery.</a> Expert Opinion on Drug Discovery. 10 (11), 1231-1241 (2015).</li><li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+dissection+in+larval,+juvenile+and+adult+zebrafish,+Danio+rerio.">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), e3165 (2011).</li><li>Brette, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+isolated+ventricular+myocytes+from+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Characterization of isolated ventricular myocytes from adult zebrafish (Danio rerio).</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 374 (1), 143-146 (2008).</li><li>Sander, V., Sune, G., Jopling, C., Morera, C., Izpisua Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+in+vitro+culture+of+primary+cardiomyocytes+from+adult+zebrafish+hearts.">Isolation and in vitro culture of primary cardiomyocytes from adult zebrafish hearts.</a> Nature protocol. 8, 800-809 (2013).</li><li>Nemtsas, P., Wettwer, E., Christ, T., Weidinger, G., Ravens, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+zebrafish+heart+as+a+model+for+human+heart?+An+electrophysiological+study.">Adult zebrafish heart as a model for human heart? An electrophysiological study.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 48 (1), 161-171 (2010).</li><li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+consequences+of+KATP+overactivity+in+Cantu+syndrome.">Cardiovascular consequences of KATP overactivity in Cantu syndrome.</a> JCI insight. 3 (15), 137799 (2018).</li><li>Singareddy, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATP-sensitive+potassium+channels+in+zebrafish+cardiac+and+vascular+smooth+muscle.">ATP-sensitive potassium channels in zebrafish cardiac and vascular smooth muscle.</a> The Journal of Physiology. , (2021).</li><li>Burns, C. G., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hearts+from+zebrafish+embryos.">Purification of hearts from zebrafish embryos.</a> BioTechniques. 40 (3), 274-282 (2006).</li><li>Seiler, C., Abrams, J., Pack, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+zebrafish+intestinal+smooth+muscle+development+using+a+novel+sm22&#945;-b+promoter.">Characterization of zebrafish intestinal smooth muscle development using a novel sm22&#945;-b promoter.</a> Developmental Dynamics. 239, 2806-2812 (2010).</li><li>Yang, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+amount+in+situ+hybridization+and+transgene+via+microinjection+in+zebrafish.">Whole amount in situ hybridization and transgene via microinjection in zebrafish.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 36 (3), 243-247 (2003).</li><li>Kompella, S. N., Brette, F., Hancox, J. C., Shiels, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenanthrene+impacts+zebrafish+cardiomyocyte+excitability+by+inhibiting+IKr+and+shortening+action+potential+duration.">Phenanthrene impacts zebrafish cardiomyocyte excitability by inhibiting IKr and shortening action potential duration.</a> The Journal of General Physiology. 153 (2), 202012733 (2021).</li><li>Jou, C. J., Spitzer, K. W., Tristani-Firouzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blebbistatin+effectively+uncouples+the+excitation-contraction+process+in+zebrafish+embryonic+heart.">Blebbistatin effectively uncouples the excitation-contraction process in zebrafish embryonic heart.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 25 (4-5), 419-424 (2010).</li></ol>

Предыдущие методы выделения желудочковых миоцитов рыбок данио 5,6, направленные на генерацию миоцитов для культуральных или электрофизиологических исследований, обеспечивали клетки с более низким выходом и включали длительные этапы множественных центрифугаций, чт...

Рыбки данио - это небольшие телеостные рыбы, которые долгое время использовались в качестве модельного организма позвоночных1 и недавно приобрели известность как жизнеспособная система позвоночных для высокопроизводительного скрининга генов и лекарств 2,3. Однако физиологический анализ тканей рыбок данио развит недостаточно. В сердечно-сосудистой системе описаны методы рассечения сердца рыбок данио4 и выделения желудочковых сердечных миоцитов 5,6,7. Существует несколько подробных описаний эффективного выделения предсердных миоцитов и нет сообщений о препаратах гладкой мускулатуры сосудов (VSM) для исследований зажимов.
В настоящей работе описана методология выделения сердечных и сосудистых миоцитов рыбок данио, жизнеспособных для электрофизиологических и функциональных исследований. Этот подход включает модификации ранее сообщенных протоколов выделения желудочковых миоцитов рыбок данио 5,6 и адаптирует методы из изоляции клеток VSM млекопитающих8, что позволяет выделять сосудистые гладкомышечные клетки рыбок данио из луковичного артериоза (БА). Протоколы приводят к эффективному выходу изолированных предсердных, желудочковых и VSM клеток рыбок данио, которые могут быть надежно использованы в исследованиях зажимов в течение 8 ч9.
Несмотря на их почти прозрачные личинки, которые развиваются полностью вне родительского организма, изучение их обещанного онтогенетического потенциала в изучении сердечно-сосудистого развития было ограничено проблемами в извлечении и анализе тканей в молодом возрасте. В настоящей статье рассматривается это ограничение путем демонстрации экспериментов с зажимом патча на сердцах рыбок данио, изолированных уже через 3 дня после оплодотворения (dpf), с использованием адаптированного, опубликованного метода экстракции10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22364111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL Syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-955-459</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>19 Guage Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305187</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-Butanedione Monoxime (BDM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B0753</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Centrifuge Tubes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EP0030119479</td>
			<td>For embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axopatch 200B amplifier and Digidata 1200 digitizer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td></td>
			<td>Used for action potential recordings</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Mini Centrifuge</td>
			<td>Southern Labware</td>
			<td>MLX-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blebbistatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>203390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell-Strainer Sieve</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-06336-71</td>
			<td>100 &#956;m sieve for embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type H</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type II</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004188</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D0632</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>324626</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elastase</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>Style #5</td>
			<td>Ceramic-coated forceps for adult and juvenile CV tissue isolation (Need two)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2ATP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8937</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Petri Dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5981</td>
			<td>For dissociation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-Hematocrit Capillary Tubes</td>
			<td>Kimble Chase</td>
			<td>41A2502</td>
			<td>Soda lime glass for patch pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS003118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur Pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5606</td>
			<td>100 mm x 20 mm, for embryonic heart isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>806552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>For adult and juvenile zebrafish decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S8045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super Fine Forceps</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>Style #SF</td>
			<td>For isolating larval CV tissues (Need two)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermoshaker</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>13687711</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine Methanesulfonate (MS222)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For anaesthetizing zebrafish larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin Inhibitor</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T6522</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of cardiac and vascular smooth muscle cells from adult, juvenile, larval and embryonic zebrafish for electrophysiological studies

Рыбки данио уже давно используются в качестве модели организма позвоночных в сердечно-сосудистых исследованиях. Технические трудности выделения отдельных клеток из сердечно-сосудистых тканей рыбок данио ограничивают изучение их электрофизиологических свойств. Предыдущие методы были описаны для рассечения сердца рыбок данио и выделения желудочковых сердечных миоцитов. Однако выделение предсердных и сосудистых миоцитов рыбок данио для электрофизиологической характеристики не было подробно описано. В этой работе описываются новые и модифицированные ферментативные протоколы, которые обычно обеспечивают изолированные ювенильные и взрослые желудочковые и предсердные кардиомиоциты рыбок данио, а также сосудистые гладкомышечные клетки (VSM) из луковичного артериоза, подходящие для экспериментов с зажимом пластырей. Литературных свидетельств электрофизиологических исследований сердечно-сосудистых тканей рыбок данио, выделенных на эмбриональной и личиночной стадиях развития, не имеется. Продемонстрированы методы частичной диссоциации, позволяющие проводить эксперименты с зажимом пластыря на отдельных клетках личиночного и эмбрионального сердец.

Вышеуказанные протоколы надежно и регулярно обеспечивают достаточное количество сердечных и сосудистых миоцитов постоянного качества, поддающихся исследованиям зажимов, о чем недавно сообщалось в обширных исследованиях АТФ-чувствительных калиевых (KATP) каналов в кардиовакуля?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cardiac and Vascular Smooth Muscle Cells from Adult, Juvenile, Larval and Embryonic Zebrafish for Electrophysiological Studies at JoVE.com

Isolation of Cardiac and Vascular Smooth Muscle Cells from Adult, Juvenile, Larval and Embryonic Zebrafish for Electrophysiological Studies

Настоящий протокол описывает острую изоляцию жизнеспособных сердечных и сосудистых гладкомышечных клеток от взрослых, ювенильных, личиночных и эмбриональных рыбок данио (Danio rerio), пригодных для электрофизиологических исследований.

Выделение сердечных и сосудистых гладкомышечных клеток из взрослых, ювенильных, личиночных и эмбриональных рыбок данио для электрофизиологических исследований

Zebrafish have long been used as a model vertebrate organism in cardiovascular research. The technical difficulties of isolating individual cells from the ...

Изучение свойств нативных ионных каналов с помощью электрофизиологии патч-зажима требует доступа к остро изолированным клеткам. Этот протокол описывает методы доступа к отдельным сердечно-сосудистым миоцитам от рыбок данио в разном возрасте. Этот протокол является надежным, простым, легко воспроизводимым и изолирует сердечно-сосудистые миоциты от рыбок данио в их родном состоянии с относительно высокой урожайностью и жизнеспособностью.Для начала переложите рыбу в большую чашку Петри, частично заполненную перфузионным буфером, и поместите ее под рассекающий микроскоп. Держите рыбу в недоминирующей руке брюшной стороной лицом к рассечению. С тонкими щипцами в доминирующей руке осторожно разорвите грудные мышцы и плавники рыбы, чтобы выявить сердечно-сосудистые ткани, включая предсердие, желудочек и bulbus arteriosus.Осторожно потяните bulbus arteriosus на пересекающемся кончике bulbus arteriosus и вентральной аорты. Осторожно отделите bulbus arteriosus от аорты, защемляя щипцы, располагая кончик предсердий в нескольких венозных ветвях, которые сходятся. Затем отсоедините кончик предсердия от синусового венозуса, чтобы изолировать сердечно-сосудистые ткани от остальной части тела.Чтобы рассечь кардиомиоциты, вырвите предсердие и желудочек из сердечно-сосудистой ткани. Сделайте нежный разрыв в желудочек, используя тонкие щипцы, чтобы слить лишнюю кровь, что может быть обеспечено, когда сердечная ткань превратится из ярко-красного в бледно-лососевый цвет. Объедините изолированное предсердие и желудочек в отдельную 1,5-миллилитровую центрифужную трубку, содержащую перфузионный буфер.Замените перфузионный буфер в пробирках 750 микролитрами буфера пищеварения. Поместите трубки на термошарик при 37 градусах Цельсия и 800 оборотах в минуту. Допускайте переваривание тканей до тех пор, пока они не станут полупрозрачными.Завершите пищеварение, осторожно раскручивая ткани в мини-центрифуге в 2000 раз G в течение трех-пяти секунд и замените буфер пищеварения супернатанта 750 микролитрами остановочного буфера. Осторожно замените останавливающий буфер от 500 до 750 микролитров перфузионного буфера и тритурируйте ткани 30 раз, используя огнеполированную пипетку Пастера для диспергирования клеток. Затем аккуратно протритурируйте желудочки.Для равномерного отбора проб осторожно перемешайте клетки вверх и вниз пару раз, чтобы повторно суспендировать, прежде чем добавить каплю их для соответствующих исследований. Выщипните взрослый bulbus arteriosus из сердечно-сосудистых тканей и объедините пять bulbus arteriosus в 1,5-миллилитрную центрифужную трубку, содержащую буфер S1. Замените S1 400 микролитрами буфера S2 и позвольте папаину переваривать bulbus arteriosus на термошейкере при 37 градусах Цельсия и 800 оборотах в минуту в течение 20 минут.Дайте частично переваренному bulbus arteriosus успокоиться на одну минуту и замените супернатант S2 500 микролитрами буфера S3, содержащего коллагеназу. Переваривайте ткани на термошейкере при 37 градусах Цельсия и 800 оборотах в минуту в течение трех-пяти минут. Завершите пищеварение, осторожно раскручивая ткани в мини-центрифуге на 2000 раз G в течение трех-пяти секунд, и замените супернатант S3 на 500 микролитров S1. Аккуратно тритурируйте гранулированные ткани, чтобы рассеять гладкомышечные клетки сосудов.Пластинчатые диспергированные сосудистые гладкомышечные клетки на стеклянных крышках слипов соответствующего размера. Держите крышку при комнатной температуре в течение 30 минут, чтобы клетки прикрепились, и используйте их в течение следующих шести часов. Обезболивают эмбрионы.Затем сконцентрируйте эмбрионы, перенеся их в пятимиллилитровую центрифужную трубку, затем удалите лишнюю среду. Дважды промыть эмбрионы тремя миллилитрами буфера холодной перфузии, затем повторно суспендировать их в двух миллилитрах перфузионного буфера. Используя аппарат изоляции эмбрионального сердца, втяните один миллилитр эмбрионов в иглу и немедленно изгоните их обратно в трубку.Пропустите фрагментированные эмбрионы через 100-микрометровое сито клеточного ситечка, помещенное в воронку. Соберите отфильтрованные сердца в другую пятимиллилитровую центрифужную трубку. Хорошо перемешайте фильтрат и разделите одномилитровые аликвоты в 1,5-миллилитровые центрифужные трубки.Центрифугируйте все трубки на настольной мини-центрифуге в течение пяти секунд и выбросьте супернатант. Проводят серийную ресуспензию гранул в пробирках с использованием одного миллилитра перфузионного буфера. Осторожно пипеткой сердца вверх и вниз дважды, прежде чем добавить каплю для соответствующих исследований Для клеток, выделенных из bulbus arteriosus, сосудистые гладкомышечные клетки были подтверждены экспрессией tagln: EGFP.Здесь показаны репрезентативные следы записей активности АТФ-чувствительных калиевых каналов от изолированных кардиомиоцитов. Успешные одноканальные записи были получены в пластырях, вырезанных из эмбриональных сердец. Желудочковые миоциты демонстрировали стабильные гиперполяризованные мембранные потенциалы, а потенциалы действия стимулировались с помощью инъекции тока через пипетку пластыря.Предсердные миоциты проявляли спонтанное возбуждение потенциала действия. Свойства потенциала действия обобщены здесь. При замене буферов во время диссоциации кардиомиоцитов следует позаботиться о том, чтобы пищеварительные ткани не были нарушены.Фрагментация тканей должна осуществляться только тритурацией пипетки. Во время коллагенового переваривания тканей бульбуса каждую минуту исследуйте на наличие плавающих, расширенных и полупрозрачных тканей. Как только фрагментация тканей очевидна, прекратите пищеварение.Как только клетки изолированы, их можно поддерживать в живых в течение нескольких часов и использовать для электрофизиологического анализа с использованием методов зажима пластыря. Это позволило нам, например, показать, что АТФ-чувствительные калиевые каналы в этих тканях рыбок данио по существу идентичны таковым у млекопитающих.

Research

JoVE Journal

Biology

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

РНК Изоляция от эмбриональных данио рерио и кДНК синтеза для анализа экспрессии генов

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells (HUASMC)

Isolation of Human Umbilical Arterial Smooth Muscle Cells HUASMC

Изоляция по правам артерии пуповины гладкомышечных клеток (HUASMC)

The human umbilical cord (UC) is a biological sample that can be easily obtained just after birth. This biological sample is, most of the time, discarded ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Взрослые и эмбриональные скелетных мышц Microexplant культуры и выделение скелетных мышц стволовых клеток

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Сердце Dissection в личинок, несовершеннолетних и взрослых данио рерио, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

Лазерная нанесенные травмы рыбок данио эмбриональных скелетных мышц

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Выделение и культура Индивидуальные мышечных волокон и их сателлитные клетки от взрослых скелетных мышц

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

Анализ эмбрионального и личиночного рыбок данио скелетных мышечных волокон из диссоциированных препаратов

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Isolation of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells from Neonatal Mice

Выделение легочной артерии гладкомышечных клеток у новорожденных мышей

Pulmonary hypertension is a significant cause of morbidity and mortality in infants. Historically, there has been significant study of the signaling ...

Isolation of Murine Coronary Vascular Smooth Muscle Cells

Выделение мышиной коронарных сосудов клетках гладкой мускулатуры

While the isolation and culture of vascular smooth muscle cells (VSMCs) from large vessels is well established, we sought to isolate and culture VSMCs ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Изоляция, характеристика и дифференцировка сердца стволовых клеток от сердца взрослого мыши

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...