Name: a neonatal balb/c mouse model of necrotizing enterocolitis
Uploaded: 2021-11-30T14:30:00
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Gli autori ringraziano la Clinical Biological Resource Bank del Guangzhou Women and Children's Medical Center per aver fornito il campione clinico e il Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center per la fornitura di topi. Questa ricerca è stata sostenuta dalla National Natural Science Foundation of China grant 81770510 (R.Z.).

Questa ricerca è stata approvata dal Comitato etico medico del Guangzhou Women and Children's Medical Center (n. 174A01) e dal Comitato etico animale del Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Tutti gli animali sono stati allevati nella stessa stanza in un ambiente specifico privo di agenti patogeni (SPF) e gli esperimenti sono stati condotti in un ambiente convenzionale. I topi utilizzati per l'allevamento avevano 7-8 settimane; i topi per indurre NEC (n = 72) sono stati separati dal...

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	<li>Horbar, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mortality+and+neonatal+morbidity+among+infants+501+to+1500+grams+from+2000+to+2009.">Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009.</a> Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).</li><li>Stoll, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+outcomes+of+extremely+preterm+infants+from+the+NICHD+Neonatal+Research+Network.">Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonatal Research Network.</a> Pediatrics. 126 (3), 443-456 (2010).</li><li>Neu, J., Walker, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotizing+enterocolitis.">Necrotizing enterocolitis.</a> New England Journal of Medicine. 364 (3), 255-264 (2011).</li><li>Sangild, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invited+Review:+The+preterm+pig+as+a+model+in+pediatric+gastroenterology.">Invited Review: The preterm pig as a model in pediatric gastroenterology.</a> Journal of Animal Science. 91 (10), 4713-4729 (2013).</li><li>Cancro, M. P., Sigal, N. H., Klinman, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+an+equivalent+clonotype+among+BALB/c+and+C57BL/6+mice.">Differential expression of an equivalent clonotype among BALB/c and C57BL/6 mice.</a> Journal of Experimental Medicine. 147 (1), 1-12 (1978).</li><li>Kuroda, E., Yamashita, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+enhanced+macrophage-mediated+prostaglandin+E2+production+and+its+suppressive+role+in+Th1+activation+in+Th2-dominant+BALB/c+mice.">Mechanisms of enhanced macrophage-mediated prostaglandin E2 production and its suppressive role in Th1 activation in Th2-dominant BALB/c mice.</a> Journal of Immunology. 170 (2), 757-764 (2003).</li><li>Fornefett, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+clinics,+pathologies+and+immune+responses+in+BALB/c+and+C57BL/6+mice+infected+with+Streptobacillus+moniliformis.">Comparative analysis of clinics, pathologies and immune responses in BALB/c and C57BL/6 mice infected with Streptobacillus moniliformis.</a> Microbes and Infection. 20 (2), 101-110 (2018).</li><li>Rosas, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+background+influences+immune+responses+and+disease+outcome+of+cutaneous+L.+mexicana+infection+in+mice.">Genetic background influences immune responses and disease outcome of cutaneous L. mexicana infection in mice.</a> International Immunology. 17 (10), 1347-1357 (2005).</li><li>Sproat, T., Payne, R. P., Embleton, N. 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A., Bergstrom, J. D., Edmond, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Milk-substitutes+comparable+to+rat's+milk;+their+preparation,+composition+and+impact+on+development+and+metabolism+in+the+artificially+reared+rat.">Milk-substitutes comparable to rat's milk; their preparation, composition and impact on development and metabolism in the artificially reared rat.</a> British Journal of Nutrition. 61 (3), 495-518 (1989).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactoferrin-induced+myeloid-derived+suppressor+cell+therapy+attenuates+pathologic+inflammatory+conditions+in+newborn+mice.">Lactoferrin-induced myeloid-derived suppressor cell therapy attenuates pathologic inflammatory conditions in newborn mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 129 (10), 4261-4275 (2019).</li><li>MohanKumar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+neonatal+model+of+necrotizing+enterocolitis+caused+by+anemia+and+red+blood+cell+transfusions.">A murine neonatal model of necrotizing enterocolitis caused by anemia and red blood cell transfusions.</a> Nature Communications. 10 (1), 3494 (2019).</li><li>He, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transitory+presence+of+myeloid-derived+suppressor+cells+in+neonates+is+critical+for+control+of+inflammation.">Transitory presence of myeloid-derived suppressor cells in neonates is critical for control of inflammation.</a> Nature Medicine. 24 (2), 224-231 (2018).</li><li>Cho, S. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+pathoimmunology+of+necrotizing+enterocolitis+reveals+novel+therapeutic+opportunities.">Characterization of the pathoimmunology of necrotizing enterocolitis reveals novel therapeutic opportunities.</a> Nature Communications. 11 (1), 5794 (2020).</li><li>Halpern, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+development+of+necrotizing+enterocolitis+in+IL-18-deficient+mice.">Decreased development of necrotizing enterocolitis in IL-18-deficient mice.</a> American Journal of Physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 294 (1), 20-26 (2007).</li><li>Wu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAP3K2-regulated+intestinal+stromal+cells+define+a+distinct+stem+cell+niche.">MAP3K2-regulated intestinal stromal cells define a distinct stem cell niche.</a> Nature. 592 (7855), 606-610 (2021).</li><li>Nino, D. F., Sodhi, C. P., Hackam, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotizing+enterocolitis:+new+insights+into+pathogenesis+and+mechanisms.">Necrotizing enterocolitis: new insights into pathogenesis and mechanisms.</a> Nature Reviews. Gastroenterology &amp; Hepatology. 13 (10), 590-600 (2016).</li><li>Chuang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cow's+milk+protein-specific+T-helper+type+I/II+cytokine+responses+in+infants+with+necrotizing+enterocolitis.">Cow's milk protein-specific T-helper type I/II cytokine responses in infants with necrotizing enterocolitis.</a> Pediatric Allergy &amp; Immunology. 20 (1), 45-52 (2009).</li></ol>

Il NEC è l'emergenza del sistema gastrointestinale più comune per i neonati, con un'alta incidenza e mortalità, specialmente nei neonati prematuri1,2,3. Tuttavia, la sua patogenesi non è ancora chiara. Attualmente si ritiene che il danno alla mucosa, l'invasione di agenti patogeni e l'alimentazione enterale siano fattori ad alto rischio per NEC3. Ad oggi, gli animali utilizzati per il modello NEC sono...

L'enterocolite necrotizzante (NEC), la più grave malattia gastrointestinale (GI), si verifica nella maggior parte dei neonati prematuri (>90%), in particolare quelli con peso alla nascita molto basso (VLBW)1. Nei neonati VLBW, l'incidenza della malattia varia dal 10% al 12% e la mortalità dei bambini con diagnosi di NEC è compresa tra il 20% e il 30%2,3. La causa del NEC può essere correlata a lesioni della mucosa, invasione da parte di batteri patogeni e alimentazione intestinale, che può portare a risposte infiammatorie e all'induzione di lesioni intestinali in ospiti sensibili3. La patogenesi del NEC non è chiara. Ricerche pertinenti mostrano che la risposta immunitaria del bambino affetto è anormale e la suscettibilità genetica, la tensione microvascolare e i cambiamenti batterici intestinali possono svolgere un ruolo importante nella malattia3.
Il modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca sulla patogenesi del NEC. Le specie animali utilizzate per i modelli NEC sono maiali, ratti e topi. Tuttavia, a causa del lungo periodo di gestazione, dei cicli di crescita e dei costi elevati, negli ultimi anni i suini non sono stati la prima scelta per i modelli NEC e sono stati sostituiti con ratti o topi4. Poiché ci sono differenze nel background immunitario di diversi ceppi di topo5, diversi studi devono utilizzare diversi ceppi di topi per stabilire modelli animali NEC. I topi BALB/c hanno una caratteristica importante; quando sono infettati o affrontano danni esterni, la polarizzazione delle cellule TH2 durante l'infezione nei topi è significativamente più forte di quella in altri ceppi di topi6,7,8. Le cellule T helper svolgono un ruolo cruciale nella comparsa e nella progressione di NEC, in particolare lo sviluppo di cellule TH23,9,10,11. Pertanto, questo studio ha utilizzato topi BALB / c per stabilire il modello NEC, che potrebbe essere utile per la ricerca sulla malattia NEC sulle cellule T.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >Absolute ethanol</td>
			<td >Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td>
			<td >100092683</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Goat Milk powder</td>
			<td>&#160;Petag&#160;</td>
			<td>71795558417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >HE dye solution</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td>
			<td>G1003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Isoflurane</td>
			<td>RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD.</td>
			<td>R510&#160;&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >LPS</td>
			<td>Sigma-Adrich</td>
			<td>L2880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Medical oxygen</td>
			<td>various</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microscope</td>
			<td>NIKON</td>
			<td>NIKON imaging system (DS-Ri2)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Neutral resin</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraffin</td>
			<td>various</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Premature baby milk powder</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>57430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylene</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD.</td>
			<td>10023418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >1% Hydrochloric acid</td>
			<td>various</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >10% Formalin</td>
			<td>LEAGENE</td>
			<td>DF0110</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a neonatal balb/c mouse model of necrotizing enterocolitis

L'enterocolite necrotizzante (NEC) è la malattia gastrointestinale (GI) più grave che si verifica spesso nei neonati prematuri, in particolare nei neonati con peso alla nascita molto basso, con alta mortalità e patogenesi poco chiara. La causa del NEC può essere correlata ad anomalie del sistema immunitario infiammatorio. Un modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca immunitaria sulla malattia NEC. I modelli animali NEC di solito usano topi neonatali C57BL / 6J; I topi neonatali BALB/c sono usati raramente. Studi correlati hanno dimostrato che quando i topi sono infetti, la differenziazione delle cellule Th2 è predominante nei topi BALB / c rispetto ai topi C57BL / 6J. Gli studi hanno suggerito che la presenza e lo sviluppo di NEC sono associati ad un aumento delle cellule T helper di tipo 2 (Th2) e sono generalmente accompagnati da infezione. Pertanto, questo studio ha utilizzato topi BALB/c neonatali per indurre un modello NEC con caratteristiche cliniche e cambiamenti patologici intestinali simili a quelli osservati nei bambini con NEC. Ulteriori studi sono necessari per determinare se questo modello animale potrebbe essere utilizzato per studiare le risposte delle cellule Th2 in NEC.

Il modello NEC murino BALB/c è stato indotto dall'alimentazione con formula, dall'alimentazione con LPS, dall'ipossia e dalla stimolazione a freddo. Durante il periodo di induzione, i topi sono stati osservati per patologia intestinale, caratteristiche delle feci, cambiamenti di peso corporeo e sopravvivenza giornaliera. Immagini rappresentative dell'intestino tenue durante l'induzione del NEC; i numeri nella foto rappresentano il punteggio di patologia intestinale da 0 (epitelio normale) a 4 (il più grave) (<strong cl...

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A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis

L'enterocolite necrotizzante (NEC) è la malattia gastrointestinale (GI) più grave che si verifica spesso nei neonati prematuri, in particolare nei neonati con peso alla nascita molto basso, con alta mortalità e patogenesi poco chiara. La causa del NEC può essere correlata ad anomalie del sistema immunitario infiammatorio. Un modello animale NEC è uno strumento indispensabile per la ricerca immunitaria sulla malattia NEC. I modelli animali NEC di solito usano topi neonatali C57BL / 6J; I topi neonatali BALB/c sono usati raramente. Studi correlati hanno dimostrato che quando i topi sono infetti, la differenziazione delle cellule Th2 è predominante nei topi BALB / c rispetto ai topi C57BL / 6J. Gli studi hanno suggerito che la presenza e lo sviluppo di NEC sono associati ad un aumento delle cellule T helper di tipo 2 (Th2) e sono generalmente accompagnati da infezione. Pertanto, questo studio ha utilizzato topi BALB/c neonatali per indurre un modello NEC con caratteristiche cliniche e cambiamenti patologici intestinali simili a quelli osservati nei bambini con NEC. Ulteriori studi sono necessari per determinare se questo modello animale potrebbe essere utilizzato per studiare le risposte delle cellule Th2 in NEC.

Un modello murino BALB/c neonatale di enterocolite necrotizzante

Necrotizing enterocolitis (NEC) is the most severe gastrointestinal (GI) disease that often occurs in premature infants, especially very low birth weight ...

Questo studio utilizza topi BALB / c per stabilire il modello NEC, che sarà utile per la ricerca sulla malattia sulle cellule T. Il quinto giorno, i due gruppi non mostrano differenze significative sulle dimensioni del corpo. Tuttavia, il giorno 10 i topi NEC erano significativamente più sottili dei topi di controllo.Il peso dei topi nel gruppo NEC è aumentato lentamente e il tasso di sopravvivenza è gradualmente diminuito durante i cinque giorni di creazione del modello. Il modello NEC potrebbe essere vantaggioso per studiare la polarizzazione delle cellule T. A dimostrare la procedura sarà Yan Tian, un post-laurea del mio laboratorio.Gavage i topi con 20-30 microlitri di LPS e nutrirli con 40-50 microlitri di formula il quinto giorno. Dal quinto giorno in poi, metterli in un dispositivo per ipossia al 5% di ossigeno per 90 secondi e riossigenarli per tre minuti. Quindi, posizionare i topi in un ambiente a quattro gradi Celsius per 15 minuti e trasferirli in un'incubatrice.Osservare da vicino tutti i topi, pesarli ogni giorno, registrare la sopravvivenza dei topi durante il periodo di induzione e registrare se le loro feci sono sanguinolente e appiccicose. Tenendo il tubo gastrico nella mano destra, fissare la testa del mouse con l'indice sulla testa del topo premuto delicatamente all'indietro e verso il basso. Inserire il tubo gastrico dall'angolo sinistro della bocca e spostarlo lentamente di due o tre centimetri al centro della bocca.Spingere da 40 a 50 microlitri di formula o da 20 a 30 microlitri di LPS nel tratto digestivo. Se il topo ha un forte riflesso di vomito e il tubo gastrico entra nella trachea, estrarre delicatamente e lasciare riposare il topo prima di tentare di nuovo il gavage. Immergere il tessuto fresco dell'illum di topo nel 10% di formalina, incorporare i tessuti nella paraffina e tagliarli di quattro sezioni micrometriche.Per deparaffinizzare le sezioni, metterle in xilene. Immergere per cinque minuti con successo in etanolo assoluto, 95% etanolo, 80% etanolo, 70% etanolo e acqua distillata. Quindi, colorare le sezioni con soluzione di ematossilina per cinque minuti e differenziarle in acido cloridrico all'1% e alcool al 70% per cinque secondi.Infine, macchiarli con una soluzione di eosina per un minuto ed esaminare l'istopatologia del tessuto intestinale a 40 volte l'ingrandimento. Le fotomicrografie del punteggio di patologia intestinale da zero a quattro hanno mostrato mucosa intatta e normale, lieve separazione sottomucosa e lamina propria, moderata separazione sottomucosa e lamina propria, grave separazione sottomucosa e lamina propria e scomparsa dei villi intestinali con necrosi intestinale. Il punteggio di patologia intestinale era significativamente più alto nel gruppo NEC rispetto al controllo con un valore P inferiore a 0,001.Lo sgabello è stato valutato da zero con pellet ben formati a tre con feci liquide. Il giorno 10, i punteggi delle feci dei gruppi NEC erano significativamente più alti nel gruppo NEC con un valore P inferiore a 0,001. Il quinto giorno, i due gruppi non hanno mostrato differenze significative nelle dimensioni del corpo.Tuttavia, il giorno 10, i topi nel gruppo NEC erano significativamente più sottili e più piccoli dalla testa alla coda rispetto ai topi del gruppo di controllo. Il peso dei topi nel gruppo NEC è aumentato lentamente e il tasso di sopravvivenza è gradualmente diminuito durante i cinque giorni di creazione del modello. L'area ileocecale resecata del tessuto intestinale da pazienti NEC ha mostrato necrosi del tessuto della mucosa intestinale.In questo studio, i topi del gruppo NEC hanno anche sviluppato emorragia ileocecale e necrosi. Quando si imbavaglia il mouse, assicurarsi che il mouse non abbia difficoltà a evitare di effettuare l'inserimento del tubo gastrico. Gavage i topi con 20-30 microlitri di LPS e nutrirli con 40-50 microlitri di formula il quinto giorno.Dal quinto giorno in poi, mettere poi in un dispositivo ipossia al 5% di ossigeno per 90 secondi e riossigenarli per tre minuti. Questo modello potrebbe essere utile per la ricerca sulla malattia NEC sulle cellule T e potrebbe aiutare a studiare le risposte delle cellule Th2 nel NEC.

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