Name: induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice
Uploaded: 2022-01-19T13:30:00
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Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (82070317, 81700390 a Jibin Lin, 8210021880 a Bingjie Lv e 82000428 a Boyuan Wang) e dal National Key R&D Program of China (2017YFA0208000 a Shaolin He).

Gli studi sugli animali sono stati approvati dal Comitato per la cura e l'utilizzo degli animali dell'Università di Scienza e Tecnologia di Huazhong (Wuhan, Cina).
NOTA: I topi maschi C57BL/6J (8-10 settimane) sono usati come modelli. I topi hanno libero accesso al cibo e all'acqua e vengono allevati in specifiche condizioni prive di agenti patogeni. L'ambiente viene mantenuto a temperatura controllata (22 °C ± 2 °C) e umidità (45%-65%). I topi sono esposti a un ambiente chiaro/buio di 12...

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	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Ibanez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+therapies+for+myocardial+ischemia/reperfusion+injury.">Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> Journal of the American College of Cardiology. 65 (14), 1454-1471 (2015).</li><li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mighty+mouse:+The+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research.">The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li><li>Kim, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+closed-chest+model+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion.">A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3896 (2012).</li><li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+ligation+of+the+left+anterior+descending+artery.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (86), e51329 (2014).</li><li>Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 145-153 (2018).</li><li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice:+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure.">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (94), e52206 (2014).</li><li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+left+anterior+descending+(LAD)+coronary+artery+ligation:+An+improved+and+simplified+model+for+myocardial+infarction.">Murine left anterior descending (LAD) coronary artery ligation: An improved and simplified model for myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (122), e55353 (2017).</li><li>Lugrin, J., Parapanov, R., Krueger, T., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+myocardial+infarction+model+using+permanent+ligation+of+left+anterior+descending+coronary+artery.">Murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59591 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioprotective+effects+of+Puerarin-V+on+isoproterenol-induced+myocardial+infarction+mice+is+associated+with+regulation+of+PPAR-Y/NF-Kappa+B+pathway.">Cardioprotective effects of Puerarin-V on isoproterenol-induced myocardial infarction mice is associated with regulation of PPAR-Y/NF-Kappa B pathway.</a> Molecules. 23 (12), 3322 (2018).</li><li>Vanden Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse:+A+comparison+with+coronary+artery+ligation.">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cryoinjury+model+to+study+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A cryoinjury model to study myocardial infarction in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (151), e59958 (2019).</li><li>Brooks, W. W., Garibaldi, B. A., Conrad, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+injury+in+the+mouse+induced+by+transthoracic+cauterization.">Myocardial injury in the mouse induced by transthoracic cauterization.</a> Laboratory Animal Science. 48 (4), 374-378 (1998).</li><li>Tao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+modeling+and+multimodality+imaging+of+chronic+myocardial+infarction+in+minipigs+induced+by+novel+interventional+embolization+technique.">Preclinical modeling and multimodality imaging of chronic myocardial infarction in minipigs induced by novel interventional embolization technique.</a> EJNMMI Research. 6 (1), 59 (2016).</li><li>Gao, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circulation Research. 107 (12), 1445-1453 (2010).</li><li>Scofield, S. L., Singh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirmation+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion+injury+in+mice+using+surface+pad+electrocardiography.">Confirmation of myocardial ischemia and reperfusion injury in mice using surface pad electrocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54814 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+high-resolution+echocardiography:+First+evidence+on+non-invasive+repeated+measure+of+myocardial+strain,+contractility,+and+mitral+regurgitation+in+the+ischemia-reperfused+murine+heart.">High-frequency high-resolution echocardiography: First evidence on non-invasive repeated measure of myocardial strain, contractility, and mitral regurgitation in the ischemia-reperfused murine heart.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (41), e1781 (2010).</li><li>Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+echocardiography+and+ultrasound+imaging.">Murine echocardiography and ultrasound imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2100 (2010).</li><li>Shibata, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+protects+against+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+AMPK-+and+COX-2-dependent+mechanisms.">Adiponectin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury through AMPK- and COX-2-dependent mechanisms.</a> Nature Medicine. 11 (10), 1096-1103 (2005).</li><li>Anderson, J. L., Morrow, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).</li><li>Frank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+ischemia+reperfusion+injury:+From+basic+science+to+clinical+bedside.">Myocardial ischemia reperfusion injury: From basic science to clinical bedside.</a> Seminars in Cardiothoracic and Vascular Anesthesia. 16 (3), 123-132 (2012).</li><li>Mares, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+the+innate+immune+response+to+myocardial+infarction+in+a+highly+efficient+experimental+animal+model.">Studying the innate immune response to myocardial infarction in a highly efficient experimental animal model.</a> Romanian Journal of Cardiology. 31 (3), 573-585 (2021).</li><li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coronary+arteries+of+the+C57bl/6+mouse+strains:+Implications+for+comparison+with+mutant+models.">The coronary arteries of the C57bl/6 mouse strains: Implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li><li>Zhang, R., Hess, D. T., Reynolds, J. D., Stamler, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+S-nitrosylation+plays+an+essential+role+in+cardioprotection.">Hemoglobin S-nitrosylation plays an essential role in cardioprotection.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (12), 4654-4658 (2016).</li><li>Sorop, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+models+of+coronary+microvascular+dysfunction.">Experimental animal models of coronary microvascular dysfunction.</a> Cardiovascular Research. 116 (4), 756-770 (2020).</li><li>Sicard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Right+coronary+artery+ligation+in+mice:+A+novel+method+to+investigate+right+ventricular+dysfunction+and+biventricular+interaction.">Right coronary artery ligation in mice: A novel method to investigate right ventricular dysfunction and biventricular interaction.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 316 (3), 684-692 (2019).</li><li>Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Fish, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+in+coronary+artery+anatomy+affects+consistency+of+cardiac+damage+after+myocardial+infarction+in+mice.">Variability in coronary artery anatomy affects consistency of cardiac damage after myocardial infarction in mice.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 313 (2), 275-282 (2017).</li><li>Kato, R., Foex, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+protection+by+anesthetic+agents+against+ischemia-reperfusion+injury:+An+update+for+anesthesiologists.">Myocardial protection by anesthetic agents against ischemia-reperfusion injury: An update for anesthesiologists.</a> Canadian Journal of Anaesthesia. 49 (8), 777-791 (2002).</li></ol>

Negli ultimi anni, la creazione di modelli per MI e MIRI nella ricerca clinica e scientifica si è sviluppata rapidamente20,21. Tuttavia, ci sono ancora alcune questioni, come i meccanismi d'azione e come migliorare l'MI/MIRI, che devono essere risolte. Qui viene descritto un protocollo modificato per stabilire un modello murino di MI e MIRI. Diversi punti chiave devono essere considerati attentamente.
Il primo punto chiave è l'intuba...

L'infarto miocardico acuto (IMA) è una malattia cardiovascolare comune in tutto il mondo e comporta un'elevata mortalità1. I progressi nelle tecnologie rendono disponibile una rivascolarizzazione precoce ed efficace per i pazienti con IMA. Dopo questi trattamenti, in alcuni pazienti, può verificarsi un danno da ischemia-riperfusione miocardica (MIRI)2. Pertanto, è di grande importanza comprendere i meccanismi delle azioni e come migliorare l'MI/MIRI. I topi sono ampiamente utilizzati come modelli a causa del loro basso costo, dei tempi di riproduzione rapidi e della facilità di apportare alterazioni genetiche3. Gli studiosi hanno sviluppato diversi metodi per modellare MIRI e MI negli animali 4,5,6,7,8,9. Questa strategia promuove la ricerca, ma i diversi criteri e metodi utilizzati complicano l'interpretazione dei risultati tra i gruppi di ricerca.
Nei topi, l'infarto miocardico è stato indotto dall'isoproterenolo 10, dalla criolesione11,12 o dalla cauterizzazione13. L'infarto miocardico può essere indotto prontamente dall'isoproterenolo, ma il processo fisiopatologico è diverso da quello dell'infarto miocardico clinico. L'infarto miocardico indotto da criolesione ha una scarsa consistenza, provoca un eccessivo danno miocardico intorno all'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) e può facilmente indurre aritmia. L'infarto miocardico indotto dalla cauterizzazione è molto diverso dal processo naturale dell'infarto del miocardio e la reazione infiammatoria nell'area in fiamme è più intensa; Inoltre, l'approccio chirurgico presenta difficoltà tecniche. Inoltre, ci sono alcuni laboratori14 che stanno sviluppando un modello di infarto miocardico in minipig utilizzando il blocco del palloncino o l'embolizzazione o il metodo della trombosi attraverso tecniche interventistiche. Tutte queste metodiche possono causare direttamente l'occlusione delle arterie coronarie, ma la necessità di dispositivi per angiografia coronarica e, soprattutto, le arterie coronarie di topo troppo sottili rende queste operazioni poco pratiche. Per MIRI, le differenze tra i diversi modelli erano piuttosto modeste, come l'uso di respiratori/micromanipolazione o meno 5,6.
Qui viene descritto un metodo semplice e affidabile in grado di indurre l'infarto miocardico e il modello MIRI, adattato dai metodi 4,5,6,7,8,9,15 precedentemente pubblicati. Questo metodo può simulare i processi fisiopatologici mediante il blocco diretto del LAD attraverso la legatura. Inoltre, alleviando la legatura, questo modello può anche simulare il danno da riperfusione. In questo protocollo, viene utilizzato un microscopio da dissezione per la visualizzazione LAD. Quindi, il ricercatore può identificare prontamente il LAD. Successivamente, un'accurata legatura del LAD porta a un'occlusione del sangue e a un'ischemia ventricolare riproducibili e prevedibili. Inoltre, le alterazioni dell'elettrocardiogramma (ECG) possono essere utilizzate per confermare l'ischemia e la riperfusione, oltre ai cambiamenti di colore del LAD osservati al microscopio. Questa strategia porta a una durata della procedura più breve, a un minor rischio di complicanze chirurgiche e a un minor numero di topi sperimentali necessari. Vengono inoltre descritti i metodi per il test della troponina-T, l'ecografia cardiaca e la colorazione del cloruro di trifeniltetrazolio (TTC). Nel complesso, questo protocollo è utile per gli studi sul meccanismo MI/MIR, nonché per la scoperta di farmaci.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9 % sodium chloride solution</td>
			<td>Kelun Industry Group,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde fixing solution</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1101</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>C412</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>H801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>IsoReag,China</td>
			<td>IR-11190</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Canon,Japan</td>
			<td>EOS 80D</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet,French</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elecsys Troponin T hs STAT</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrochemical luminescence immunoanalyzer</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td>Elecsys 2010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans blue</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>E2129</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye scissors</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC2303</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemostatic forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>J31020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High frequency in vivo imaging systems</td>
			<td>Visualsonics,Canada</td>
			<td>Vevo2100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibuprofen</td>
			<td>PerFeMiKer,China</td>
			<td>CLS-12921</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intravenous catheter</td>
			<td>Introcan,Germany</td>
			<td>4254090B</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich,America</td>
			<td>&#160;K2753</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical alcohol</td>
			<td>Huichang ,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microneedle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA2040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic shears</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA1040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA3020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse electrocardiograph</td>
			<td>Techman,China</td>
			<td>BL-420F</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC3202</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>operating floor</td>
			<td>Chico,China</td>
			<td>ZK-HJPT</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 tube</td>
			<td>Huamei,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Merck,America</td>
			<td>1030001</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech,China</td>
			<td>ALC-V8S-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Aomei Industry,China</td>
			<td>SZM0745-STL3-T3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical thermostatic heating pad</td>
			<td>Globalebio, China</td>
			<td>GE0-20W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1017</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts,China</td>
			<td>323004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice

L'infarto miocardico acuto è una malattia cardiovascolare comune con elevata mortalità. Il danno da riperfusione miocardica può contrastare gli effetti benefici del reflusso cardiaco e indurre un danno miocardico secondario. Un modello semplice e riproducibile di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica è un buon strumento per i ricercatori. Qui, viene descritto un metodo personalizzabile per creare un modello di infarto del miocardio (MI) e MIRI mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra (LAD) attraverso la micromanipolazione. Il posizionamento accurato e riproducibile della legatura del LAD aiuta a ottenere risultati coerenti per le lesioni cardiache. Le modifiche del segmento ST possono aiutare a identificare l'accuratezza del modello. Il livello sierico di troponina T cardiaca (cTnT) viene utilizzato per valutare la lesione miocardica, l'ecografia cardiaca viene impiegata per valutare la funzione sistolica miocardica e la colorazione con cloruro di Evans-Blue/trifeniltetrazolio viene utilizzata per misurare le dimensioni dell'infarto. In generale, questo protocollo riduce la durata della procedura, garantisce dimensioni dell'infarto controllabili e migliora la sopravvivenza del topo.

Il flusso di lavoro sperimentale è illustrato nella Figura 1A. Il ricercatore può programmare i nodi temporali in base al disegno sperimentale all'inizio dello studio. La durata della legatura LAD è in base allo scopo della ricerca. Per l'infarto miocardico, la ricerca può ignorare la fase di riperfusione. L'ecografia cardiaca è disponibile in diverse fasi dello studio perché non è invasiva, mentre la colorazione Evans-Blue/TTC può essere eseguita solo quando il topo viene sacrificat...

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Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

Qui descriviamo un metodo semplice e riproducibile che può indurre infarto miocardico o danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Questo studio descrive un metodo personalizzabile per creare un modello di funzione miocardica in Miro mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione. Questo protocollo riduce la durata della procedura, garantisce dimensioni dell'infarto controllabili e migliora la sopravvivenza del topo. Utilizzare un OT rettangolare con un termoforo preriscaldato a 37 gradi Celsius durante la procedura chirurgica.Prima della procedura, disinfettare la scheda con luce ultravioletta e alcol al 70%. Inizia posizionando il mouse sull'OT in posizione supina con una garza sotto la testa per evitare di surriscaldare gli occhi. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi per evitare che si secchino.Utilizzare una crema per la rimozione del pelo sul torace e massaggiare uniformemente con un batuffolo di cotone sterile per un minuto. Pulisci il pelo in eccesso con una garza. Usa lo iodio povidone seguito da alcol al 70% per pulire l'area e copri il torace con una garza.Utilizzare una sutura 4-O sotto gli incisivi superiori e fissarla al punto di ancoraggio per mantenere la bocca leggermente aperta e facilitare l'incannulamento. Tira la coda per mantenere il corpo dritto e fissala all'OT usando del nastro adesivo. Fissare i quattro flettenti con del nastro adesivo e stringerli sui punti di ancoraggio.Non allungare eccessivamente gli arti anteriori per evitare compromissioni respiratorie. Usa le pinze per aprire la mascella e sollevare la lingua. Quindi usa un illuminatore per visualizzare la gola e la glottide.Inserire delicatamente una cannula calibro 22 con un ago tronco smussato attraverso la bocca nella trachea, a circa un centimetro lungo la gola. Usa una mano per tenere la lingua e muovila leggermente verso l'alto con una pinza smussata. Contemporaneamente utilizzare l'altra mano per inserire delicatamente il tubo nella trachea.Fare attenzione a non inserire il tubo nell'esofago. Rimuovere con cautela l'ago. Prima di collegarlo al ventilatore, controllare l'intubazione inserendo il tubo nell'acqua per verificare la formazione di bolle.Collegare il tubo endotracheale a un ventilatore impostato a 120 al minuto e il volume corrente regolato a 250 microlitri. Verificare l'intubazione controllando l'espansione simmetrica bilaterale del torace. Quindi fissare la connessione all'OT con del nastro adesivo per evitare che cada.Posizionare gli elettrodi ECG sulle zampe e collegarli al registratore ECG. Monitorare l'elettrofisiologia cardiaca durante tutta la procedura. Rimuovere la garza sul torace.Disinfettare l'area dell'incisione utilizzando tre cicli di scrub con alcol al 70%. Per ridurre la contaminazione del sito chirurgico, coprire il topo con un telo chirurgico sterile con un foro sul campo operatorio. Dopo aver praticato un'incisione cutanea obliqua con un bisturi, esporre le costole eseguendo una dissezione smussata dei tessuti sottocutanei.Fare attenzione a non ferire i vasi, le costole e i polmoni. Utilizzare applicatori di cotone sterili per fermare l'emorragia. Identifica il terzo spazio intercostale e fai un'incisione di circa sei-otto millimetri.Quindi aprire la cavità toracica eseguendo una dissezione smussata dei tessuti nello spazio intercostale. Fare attenzione a non ferire l'arteria toracica interna. Coprire lo spazio intercostale usando le pinze.Inserire divaricatori fatti in casa pre sterilizzati nella gabbia toracica e tirare indietro per allargare l'incisione a circa sei millimetri di larghezza. Fissare i divaricatori all'OT con elastici. Rimuovere con cautela i tessuti circostanti per esporre completamente il cuore.Staccare delicatamente il pericardio con una pinza curva senza ferire il cuore. Utilizzare un microscopio da dissezione e dirigere una luce focalizzata e appropriata per la visualizzazione LAD. Premere delicatamente il sito sotto la posizione di legatura scelta per ingrandire temporaneamente il LAD, quindi ricontrollare il LAD.Sotto un microscopio da dissezione, usa un ago affusolato per passare un 8-0 legatura di seta sotto il LAD. Assicurarsi che l'ago non sia abbastanza profondo da entrare nel ventricolo sinistro e non troppo poco profondo per evitare di danneggiare il LAD. Legare la legatura con un doppio nodo sciolto.Posizionare un tubo in PE-10 da due a tre millimetri in un anello parallelo all'arteria. Stringere delicatamente l'ansa di legatura fino a quando non si trova intorno all'arteria e al tubo. Quindi fissare l'anello con un nodo scorsoio.Fare attenzione a non danneggiare la parete miocardica con un'eccessiva pressione di serraggio. Una colorazione del pallore nella parete anteriore del ventricolo sinistro dopo la legatura conferma la cessazione del flusso sanguigno nel LAD. Se è necessaria una legatura permanente, procedere come descritto nel manoscritto del testo.Rimuovere i divaricatori dall'incisione. Quindi chiudere temporaneamente la ferita con una pinza bulldog. Assicurarsi che il mouse continui a essere collegato al ventilatore.Al termine del periodo di ischemia, rimuovere la pinza bulldog e inserire i divaricatori per aprire l'incisione ed esporre il cuore e il sito di legatura. Sciogliere il nodo scorsoio e rimuovere il tubo in PE-10. Il cambiamento della colorazione pallida in rosa-rosso conferma il ripristino del flusso sanguigno.Allo stesso tempo, per rilevare la riperfusione, osservare l'ECG per una potenziale dissoluzione dell'elevazione del tratto ST. Lascia l'8-0 legatura in situ se si esegue la successiva colorazione Evans blue e TTC. In caso contrario, rimuovere la sutura in questa fase.Rimuovere i divaricatori e chiudere l'incisione suturando la terza e la quarta costola con una sutura di seta 4-O. Fare attenzione a non ferire il polmone. Premere delicatamente il torace mentre si legano i nodi di sutura per espellere l'aria che potrebbe essere intrappolata nella cavità toracica.Chiudere gli strati muscolari con suture continue di seta 4-O. Le immagini standard del processo sperimentale sono state acquisite dall'intubazione endotracheale, dall'incisione cutanea, dalla toracotomia, dall'identificazione LAD e dalla legatura, fino alla riperfusione. Le immagini ECG rappresentative hanno verificato l'ischemia miocardica e la riperfusione con significativo sopraslivellamento del tratto ST dopo la legatura.E lo scioglimento dell'elevazione ST dopo che il nodo scorsoio è stato sciolto. Prima della toracotomia, è molto importante mantenere aperte le vie aeree e la cosa più importante è assicurarsi che il LAD sia saldamente legato ed evitare danni. Questa procedura sarà seguita da un'ecocardiografia per valutare la funzione cardiaca e da una TTC per valutare il danno miocardico.

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