Name: induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice
Uploaded: 2022-01-19T13:30:00
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この研究は、中国国家自然科学基金会(82070317、81700390はJibin Lin、8210021880はBingjie Lv、82000428はBoyuan Wang)と中国国家重点研究開発プログラム(2017YFA0208000 Shaolin He)の支援を受けた。

動物実験は、華中科技大学(中国・武漢)の動物飼育利用委員会によって承認されています。
注:雄のC57BL / 6Jマウス(8-10週)をモデルとして使用します。マウスは餌と水を自由に入手でき、特定の病原体のない条件で飼育されます。部屋は制御された温度(22°C±2°C)と湿度(45%〜65%)に保たれています。マウスは、同済医科大学(中国、武漢)の動物飼育施設で、この機関が設定し?...

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	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Ibanez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+therapies+for+myocardial+ischemia/reperfusion+injury.">Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> Journal of the American College of Cardiology. 65 (14), 1454-1471 (2015).</li><li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mighty+mouse:+The+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research.">The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li><li>Kim, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+closed-chest+model+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion.">A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3896 (2012).</li><li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+ligation+of+the+left+anterior+descending+artery.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (86), e51329 (2014).</li><li>Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 145-153 (2018).</li><li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice:+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure.">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (94), e52206 (2014).</li><li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+left+anterior+descending+(LAD)+coronary+artery+ligation:+An+improved+and+simplified+model+for+myocardial+infarction.">Murine left anterior descending (LAD) coronary artery ligation: An improved and simplified model for myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (122), e55353 (2017).</li><li>Lugrin, J., Parapanov, R., Krueger, T., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+myocardial+infarction+model+using+permanent+ligation+of+left+anterior+descending+coronary+artery.">Murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59591 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioprotective+effects+of+Puerarin-V+on+isoproterenol-induced+myocardial+infarction+mice+is+associated+with+regulation+of+PPAR-Y/NF-Kappa+B+pathway.">Cardioprotective effects of Puerarin-V on isoproterenol-induced myocardial infarction mice is associated with regulation of PPAR-Y/NF-Kappa B pathway.</a> Molecules. 23 (12), 3322 (2018).</li><li>Vanden Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse:+A+comparison+with+coronary+artery+ligation.">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cryoinjury+model+to+study+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A cryoinjury model to study myocardial infarction in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (151), e59958 (2019).</li><li>Brooks, W. W., Garibaldi, B. A., Conrad, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+injury+in+the+mouse+induced+by+transthoracic+cauterization.">Myocardial injury in the mouse induced by transthoracic cauterization.</a> Laboratory Animal Science. 48 (4), 374-378 (1998).</li><li>Tao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+modeling+and+multimodality+imaging+of+chronic+myocardial+infarction+in+minipigs+induced+by+novel+interventional+embolization+technique.">Preclinical modeling and multimodality imaging of chronic myocardial infarction in minipigs induced by novel interventional embolization technique.</a> EJNMMI Research. 6 (1), 59 (2016).</li><li>Gao, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circulation Research. 107 (12), 1445-1453 (2010).</li><li>Scofield, S. L., Singh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirmation+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion+injury+in+mice+using+surface+pad+electrocardiography.">Confirmation of myocardial ischemia and reperfusion injury in mice using surface pad electrocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54814 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+high-resolution+echocardiography:+First+evidence+on+non-invasive+repeated+measure+of+myocardial+strain,+contractility,+and+mitral+regurgitation+in+the+ischemia-reperfused+murine+heart.">High-frequency high-resolution echocardiography: First evidence on non-invasive repeated measure of myocardial strain, contractility, and mitral regurgitation in the ischemia-reperfused murine heart.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (41), e1781 (2010).</li><li>Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+echocardiography+and+ultrasound+imaging.">Murine echocardiography and ultrasound imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2100 (2010).</li><li>Shibata, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+protects+against+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+AMPK-+and+COX-2-dependent+mechanisms.">Adiponectin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury through AMPK- and COX-2-dependent mechanisms.</a> Nature Medicine. 11 (10), 1096-1103 (2005).</li><li>Anderson, J. L., Morrow, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).</li><li>Frank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+ischemia+reperfusion+injury:+From+basic+science+to+clinical+bedside.">Myocardial ischemia reperfusion injury: From basic science to clinical bedside.</a> Seminars in Cardiothoracic and Vascular Anesthesia. 16 (3), 123-132 (2012).</li><li>Mares, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+the+innate+immune+response+to+myocardial+infarction+in+a+highly+efficient+experimental+animal+model.">Studying the innate immune response to myocardial infarction in a highly efficient experimental animal model.</a> Romanian Journal of Cardiology. 31 (3), 573-585 (2021).</li><li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coronary+arteries+of+the+C57bl/6+mouse+strains:+Implications+for+comparison+with+mutant+models.">The coronary arteries of the C57bl/6 mouse strains: Implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li><li>Zhang, R., Hess, D. T., Reynolds, J. D., Stamler, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+S-nitrosylation+plays+an+essential+role+in+cardioprotection.">Hemoglobin S-nitrosylation plays an essential role in cardioprotection.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (12), 4654-4658 (2016).</li><li>Sorop, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+models+of+coronary+microvascular+dysfunction.">Experimental animal models of coronary microvascular dysfunction.</a> Cardiovascular Research. 116 (4), 756-770 (2020).</li><li>Sicard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Right+coronary+artery+ligation+in+mice:+A+novel+method+to+investigate+right+ventricular+dysfunction+and+biventricular+interaction.">Right coronary artery ligation in mice: A novel method to investigate right ventricular dysfunction and biventricular interaction.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 316 (3), 684-692 (2019).</li><li>Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Fish, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+in+coronary+artery+anatomy+affects+consistency+of+cardiac+damage+after+myocardial+infarction+in+mice.">Variability in coronary artery anatomy affects consistency of cardiac damage after myocardial infarction in mice.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 313 (2), 275-282 (2017).</li><li>Kato, R., Foex, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+protection+by+anesthetic+agents+against+ischemia-reperfusion+injury:+An+update+for+anesthesiologists.">Myocardial protection by anesthetic agents against ischemia-reperfusion injury: An update for anesthesiologists.</a> Canadian Journal of Anaesthesia. 49 (8), 777-791 (2002).</li></ol>

近年、臨床および科学研究におけるMIおよびMIRIのモデルの作成が急速に発展しています20,21。しかし、作用機序やMI/MIRIの改善方法など、解決しなければならない問題がまだいくつか残っています。ここでは、MIおよびMIRIのマウスモデルを確立するための修正プロトコルについて説明する。いくつかの重要なポイントを慎重に検討する必要がありま?...

急性心筋梗塞(AMI)は、世界的に一般的な心血管疾患であり、死亡率が高い1。技術の進歩により、AMI患者は早期かつ効果的な血行再建術を利用できるようになりました。一部の患者では、これらの治療の後、心筋虚血再灌流障害(MIRI)が発生する可能性があります2。したがって、行動のメカニズムとMI / MIRIを改善する方法を理解することは非常に重要です。マウスは、低コストで育種期間が短く、遺伝子改変が容易であることから、モデルとして広く用いられています3。学者は、動物4,5,6,7,8,9のMIRIとMIIをモデル化するためのさまざまな方法を開発しました。この戦略は研究を促進しますが、採用されている基準と方法が異なるため、研究チーム間で結果の解釈が複雑になります。
マウスでは、心筋梗塞はイソプロテレノール10、凍結傷害11,12、または焼灼13によって誘導されている。心筋梗塞はイソプロテレノールによって容易に誘発できますが、病態生理学的プロセスは臨床心筋梗塞とは異なります。 凍結傷害誘発性心筋梗塞は一貫性が悪く、左前下行冠動脈(LAD)の周囲に過度の心筋損傷を誘発し、不整脈を誘発しやすい可能性があります。焼灼誘発性心筋梗塞は、心筋梗塞の自然なプロセスとはかなり異なり、灼熱部位の炎症反応はより激しいです。さらに、外科的アプローチには技術的な問題があります。さらに、バルーンブロッキングまたは塞栓術または介入技術による血栓症法を使用して、ミニブタのMIモデルを開発しているラボ14がいくつかあります。これらの方法はすべて冠動脈閉塞を直接引き起こす可能性がありますが、冠動脈造影装置が必要であり、何よりもマウス冠動脈が細すぎるため、これらの手術は実用的ではありません。MIRIの場合、異なるモデル間の違いは、マスク/マイクロマニピュレーションを使用するかどうかなど、非常に控えめでした5,6。
ここでは、以前に発表された方法4,5,6,7,8,9,15から採用された、MIおよびMIRIモデルを誘導できる簡単で信頼性の高い方法が説明されています。この方法は、結紮によるLADの直接遮断により、病態生理学的プロセスをシミュレートできます。さらに、結紮を緩和することで、このモデルは再灌流損傷をシミュレートすることもできます。このプロトコルでは、解剖顕微鏡がLADの視覚化に使用されます。そうすれば、研究者はLADを容易に特定することができます。その後、LADの正確な結紮は、再現性のある予測可能な閉塞と心室虚血につながります。また、顕微鏡で観察したLADの色変化に加え、虚血や再灌流の確認にも心電図(ECG)の変化を用いることができます。この戦略により、手術期間が短縮され、外科的合併症のリスクが低くなり、必要な実験用マウスの数が少なくなります。トロポニン-T検査、心臓超音波検査、および塩化トリフェニルテトラゾリウム(TTC)染色の方法についても説明します。全体として、このプロトコルはMI/MIRメカニズムの研究や創薬に有用です。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9 % sodium chloride solution</td>
			<td>Kelun Industry Group,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde fixing solution</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1101</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>C412</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>H801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>IsoReag,China</td>
			<td>IR-11190</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Canon,Japan</td>
			<td>EOS 80D</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet,French</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elecsys Troponin T hs STAT</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrochemical luminescence immunoanalyzer</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td>Elecsys 2010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans blue</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>E2129</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye scissors</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC2303</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemostatic forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>J31020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High frequency in vivo imaging systems</td>
			<td>Visualsonics,Canada</td>
			<td>Vevo2100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibuprofen</td>
			<td>PerFeMiKer,China</td>
			<td>CLS-12921</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intravenous catheter</td>
			<td>Introcan,Germany</td>
			<td>4254090B</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich,America</td>
			<td>&#160;K2753</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical alcohol</td>
			<td>Huichang ,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microneedle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA2040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic shears</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA1040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA3020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse electrocardiograph</td>
			<td>Techman,China</td>
			<td>BL-420F</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC3202</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>operating floor</td>
			<td>Chico,China</td>
			<td>ZK-HJPT</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 tube</td>
			<td>Huamei,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Merck,America</td>
			<td>1030001</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech,China</td>
			<td>ALC-V8S-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Aomei Industry,China</td>
			<td>SZM0745-STL3-T3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical thermostatic heating pad</td>
			<td>Globalebio, China</td>
			<td>GE0-20W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1017</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts,China</td>
			<td>323004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice

急性心筋梗塞は、死亡率の高い一般的な心血管疾患です。心筋再灌流障害は、心臓リフローの有益な効果を打ち消し、二次的な心筋障害を誘発する可能性があります。心筋梗塞と心筋虚血再灌流傷害のシンプルで再現性のあるモデルは、研究者にとって優れたツールです。ここでは、マイクロマニピュレーションによる左前下行冠動脈(LAD)の精密結紮により、心筋梗塞(MI)モデルとMIRIを作成するカスタマイズ可能な方法について説明します。LADの正確で再現性のある結紮位置決めは、心臓損傷に対して一貫した結果を得るのに役立ちます。ST セグメントの変更は、モデルの精度を特定するのに役立ちます。心筋トロポニンT(cTnT)の血清レベルを使用して心筋損傷を評価し、心臓超音波を使用して心筋収縮機能を評価し、エバンスブルー/トリフェニルテトラゾリウムクロリド染色を使用して梗塞のサイズを測定します。一般に、このプロトコルは処置の持続期間を短縮し、制御可能な梗塞のサイズを保障し、そしてマウスの生存を改善する。

実験ワークフローを 図1Aに示します。研究者は、研究開始時に実験計画に従って時間ノードをスケジュールできます。LADライゲーションの期間は、研究目的によって異なります。MIの場合、研究は再灌流ステップを無視できます。心臓超音波検査は非侵襲的であるため、研究のさまざまな段階で利用できますが、Evans-Blue/TTC染色はマウスを犠牲にした場合にのみ実行でき...

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Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

ここでは、マイクロマニピュレーションによる左前下行冠動脈の精密結紮により、マウスの心筋梗塞または心筋虚血再灌流障害を誘発できる簡便で再現性のある方法について述べる。

マウスにおける心筋梗塞および心筋虚血再灌流障害の誘発

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

この研究では、マイクロマニピュレーションによる左前下行冠動脈の精密結紮により、Miro で心筋機能モデルを作成するカスタマイズ可能な方法について説明します。このプロトコルは、処置期間を短縮し、制御可能な梗塞サイズを確保し、マウスの生存率を向上させます。外科的処置中、摂氏37度に事前に温められた加熱パッドを備えた長方形のOTを使用してください。手順の前に、紫外線と70%アルコールでボードを消毒します。まず、目が過熱しないように、頭の下にガーゼを敷いて仰臥位でOTにマウスを置きます。眼科用軟膏を目に塗って、乾燥を防ぎます。胸部に毛皮除去クリームを使用し、滅菌綿棒で1分間均一にマッサージします。余分な毛をガーゼで拭きます。ポビドンヨウ素とそれに続く70%アルコールを使用してその領域をきれいにし、胸部をガーゼで覆います。上切歯の下に4-O縫合糸を使用し、アンカーポイントに固定して、口をわずかに開いたままにし、カニューレ挿入を容易にします。テールを引っ張って体をまっすぐに保ち、テープを使用してOTに固定します。4本の手足をテープで固定し、アンカーポイントで締めます。呼吸障害を避けるために、前肢を伸ばしすぎないでください。鉗子を使用して顎を開き、舌を持ち上げます。次に、イルミネーターを使用して喉と声門を視覚化します。鈍い切り下げ針が付いた22ゲージのカニューレを口から喉の約1センチ下の気管にそっと挿入します。片手で舌を持ち、鈍い鉗子で少し上に動かします。同時にもう一方の手を使って、チューブを気管にそっと挿入します。チューブを食道に挿入しないように注意してください。針を慎重に取り外します。人工呼吸器に接続する前に、チューブを水中に入れて気泡が形成されるかどうかで挿管を確認してください。気管内チューブを毎分120に設定し、一回換気量を250マイクロリットルに調整した人工呼吸器に接続します。両側対称の胸部拡張をチェックして、挿管を確認します。次に、OTへの接続をテープで固定して、脱落を防ぎます。前足に心電図電極を置き、心電図レコーダーに接続します。手順全体を通して心臓電気生理学を監視します。胸部のガーゼを取り除きます。70%アルコールで3回のスクラブサイクルを使用して切開部を消毒します。手術部位の汚染を減らすために、手術野に穴を開けた滅菌手術用ドレープでマウスを覆います。メスで斜めの皮膚を切開した後、皮下組織の鈍い解剖を行って肋骨を露出させます。血管、肋骨、肺を傷つけないように注意してください。滅菌綿アプリケーターを使用して出血を止めます。3番目の肋間腔を特定し、約6〜8ミリメートルの切開を行います。次に、肋間腔の組織の鈍い解剖を行うことにより、胸腔を開きます。胸部内動脈を傷つけないように注意してください。鉗子を使用して肋間腔を広げます。滅菌済みの自家製リトラクターを胸郭に挿入し、引き戻して切開部を幅約6ミリメートルに広げます。リトラクターを輪ゴムでOTに取り付けます。周囲の組織を慎重に取り除き、心臓を完全に露出させます。心臓を傷つけることなく、湾曲した鉗子で心膜を静かに引き抜きます。解剖顕微鏡を使用し、LADの可視化に焦点を絞った適切な光を当てます。選択した結紮位置の下の部位を軽く押してLADを一時的に拡大し、LADを再確認します。解剖顕微鏡の下で、先細りの針を使用して8-0を通過させますLADの下の絹の合字。針が左心室に入るのに十分な深さではなく、LADの損傷を避けるために浅すぎないことを確認してください。結紮糸をゆるい二重の結び目で結びます。2〜3ミリメートルのPE-10チューブを動脈に平行なループに入れます。結紮ループが動脈とチューブの周りに来るまで、ゆっくりと締めます。次に、ループをスリップノットで固定します。過度の締め付け圧力で心筋壁を傷つけないように注意してください。結紮後の左心室前壁の蒼白な着色は、LADの血流の停止を確認します。永久結紮が必要な場合は、テキスト原稿に記載されているとおりに進めてください。切開部からリトラクターを取り外します。次に、ブルドッグクランプで傷口を一時的に閉じます。マウスが人工呼吸器に接続され続けていることを確認します。虚血の期間が終わったら、ブルドッグクランプを取り外し、リトラクターを挿入して切開を開き、心臓と結紮部位を露出させます。スリップノットをほどき、PE-10チューブを取り外します。淡い色からピンクレッドへの変化は、血流の回復を確認します。同時に、再灌流を検出するには、ECGを観察してST上昇の溶解の可能性を確認します。8-0のままその後のエバンスブルーおよびTTC染色を行う場合は、その場で結紮します。それ以外の場合は、このステップで縫合糸を取り除きます。リトラクターを取り外し、3番目と4番目の肋骨を4-Oシルク縫合糸で縫合して切開部を閉じます。肺を傷つけないように注意してください。縫合糸の結び目を作りながら胸をそっと押して、胸腔に閉じ込められている可能性のある空気を押し出します。連続した4-Oシルク縫合糸で筋肉層を閉じます。実験プロセスの標準画像は、気管内挿管、皮膚切開、開胸術、LADの同定、結紮から再灌流まで取得されました。代表的な心電図画像は、結紮後に有意なST上昇を伴う心筋虚血および再灌流を検証した。そして、スリップノットを解いた後のSTエレベーションの溶解。開胸術の前に、気道を開いたままにしておくことが非常に重要であり、最も重要なことは、LADがしっかりと結紮され、損傷を受けないようにすることです。この手順の後には、心機能を評価するための心エコー検査と、心筋損傷を評価するためのTTCが続きます。

Research

JoVE Journal

Medicine

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