Name: induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice
Uploaded: 2022-01-19T13:30:00
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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82070317, 81700390 para Jibin Lin, 8210021880 para Bingjie Lv e 82000428 para Boyuan Wang) e o Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China ( 2017YFA0208000 para Shaolin He).

Os estudos em animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Utilização de Animais da Universidade de Ciência e Tecnologia de Huazhong (Wuhan, China).
NOTA: Camundongos C57BL/6J machos (8-10 semanas) são usados como modelos. Os camundongos têm livre acesso a comida e água e são criados em condições específicas livres de patógenos. A sala é mantida sob temperatura controlada (22 °C ± 2 °C) e umidade (45%-65%). Os ratos são expostos a um ambiente claro/escuro de 12 horas no C...

<ol>
	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Ibanez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+therapies+for+myocardial+ischemia/reperfusion+injury.">Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> Journal of the American College of Cardiology. 65 (14), 1454-1471 (2015).</li><li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mighty+mouse:+The+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research.">The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li><li>Kim, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+closed-chest+model+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion.">A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3896 (2012).</li><li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+ligation+of+the+left+anterior+descending+artery.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (86), e51329 (2014).</li><li>Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 145-153 (2018).</li><li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice:+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure.">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (94), e52206 (2014).</li><li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+left+anterior+descending+(LAD)+coronary+artery+ligation:+An+improved+and+simplified+model+for+myocardial+infarction.">Murine left anterior descending (LAD) coronary artery ligation: An improved and simplified model for myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (122), e55353 (2017).</li><li>Lugrin, J., Parapanov, R., Krueger, T., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+myocardial+infarction+model+using+permanent+ligation+of+left+anterior+descending+coronary+artery.">Murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59591 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioprotective+effects+of+Puerarin-V+on+isoproterenol-induced+myocardial+infarction+mice+is+associated+with+regulation+of+PPAR-Y/NF-Kappa+B+pathway.">Cardioprotective effects of Puerarin-V on isoproterenol-induced myocardial infarction mice is associated with regulation of PPAR-Y/NF-Kappa B pathway.</a> Molecules. 23 (12), 3322 (2018).</li><li>Vanden Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse:+A+comparison+with+coronary+artery+ligation.">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cryoinjury+model+to+study+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A cryoinjury model to study myocardial infarction in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (151), e59958 (2019).</li><li>Brooks, W. W., Garibaldi, B. A., Conrad, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+injury+in+the+mouse+induced+by+transthoracic+cauterization.">Myocardial injury in the mouse induced by transthoracic cauterization.</a> Laboratory Animal Science. 48 (4), 374-378 (1998).</li><li>Tao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+modeling+and+multimodality+imaging+of+chronic+myocardial+infarction+in+minipigs+induced+by+novel+interventional+embolization+technique.">Preclinical modeling and multimodality imaging of chronic myocardial infarction in minipigs induced by novel interventional embolization technique.</a> EJNMMI Research. 6 (1), 59 (2016).</li><li>Gao, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circulation Research. 107 (12), 1445-1453 (2010).</li><li>Scofield, S. L., Singh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirmation+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion+injury+in+mice+using+surface+pad+electrocardiography.">Confirmation of myocardial ischemia and reperfusion injury in mice using surface pad electrocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54814 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+high-resolution+echocardiography:+First+evidence+on+non-invasive+repeated+measure+of+myocardial+strain,+contractility,+and+mitral+regurgitation+in+the+ischemia-reperfused+murine+heart.">High-frequency high-resolution echocardiography: First evidence on non-invasive repeated measure of myocardial strain, contractility, and mitral regurgitation in the ischemia-reperfused murine heart.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (41), e1781 (2010).</li><li>Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+echocardiography+and+ultrasound+imaging.">Murine echocardiography and ultrasound imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2100 (2010).</li><li>Shibata, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+protects+against+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+AMPK-+and+COX-2-dependent+mechanisms.">Adiponectin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury through AMPK- and COX-2-dependent mechanisms.</a> Nature Medicine. 11 (10), 1096-1103 (2005).</li><li>Anderson, J. L., Morrow, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).</li><li>Frank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+ischemia+reperfusion+injury:+From+basic+science+to+clinical+bedside.">Myocardial ischemia reperfusion injury: From basic science to clinical bedside.</a> Seminars in Cardiothoracic and Vascular Anesthesia. 16 (3), 123-132 (2012).</li><li>Mares, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+the+innate+immune+response+to+myocardial+infarction+in+a+highly+efficient+experimental+animal+model.">Studying the innate immune response to myocardial infarction in a highly efficient experimental animal model.</a> Romanian Journal of Cardiology. 31 (3), 573-585 (2021).</li><li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coronary+arteries+of+the+C57bl/6+mouse+strains:+Implications+for+comparison+with+mutant+models.">The coronary arteries of the C57bl/6 mouse strains: Implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li><li>Zhang, R., Hess, D. T., Reynolds, J. D., Stamler, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+S-nitrosylation+plays+an+essential+role+in+cardioprotection.">Hemoglobin S-nitrosylation plays an essential role in cardioprotection.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (12), 4654-4658 (2016).</li><li>Sorop, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+models+of+coronary+microvascular+dysfunction.">Experimental animal models of coronary microvascular dysfunction.</a> Cardiovascular Research. 116 (4), 756-770 (2020).</li><li>Sicard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Right+coronary+artery+ligation+in+mice:+A+novel+method+to+investigate+right+ventricular+dysfunction+and+biventricular+interaction.">Right coronary artery ligation in mice: A novel method to investigate right ventricular dysfunction and biventricular interaction.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 316 (3), 684-692 (2019).</li><li>Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Fish, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+in+coronary+artery+anatomy+affects+consistency+of+cardiac+damage+after+myocardial+infarction+in+mice.">Variability in coronary artery anatomy affects consistency of cardiac damage after myocardial infarction in mice.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 313 (2), 275-282 (2017).</li><li>Kato, R., Foex, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+protection+by+anesthetic+agents+against+ischemia-reperfusion+injury:+An+update+for+anesthesiologists.">Myocardial protection by anesthetic agents against ischemia-reperfusion injury: An update for anesthesiologists.</a> Canadian Journal of Anaesthesia. 49 (8), 777-791 (2002).</li></ol>

Nos últimos anos, a criação de modelos para IM e MIRI em pesquisas clínicas e científicas tem se desenvolvido rapidamente20,21. No entanto, ainda existem algumas questões, como os mecanismos de ações e como melhorar o MI/MIRI, que devem ser resolvidas. Aqui, um protocolo modificado para estabelecer um modelo murino de IM e MIRI é descrito. Vários pontos-chave devem ser considerados com cuidado.
O primeiro ponto-chave é a int...

O infarto agudo do miocárdio (IAM) é uma doença cardiovascular comum em todo o mundo e acarreta altamortalidade1. O avanço das tecnologias torna a revascularização precoce e eficaz disponível para pacientes com IAM. Após esses tratamentos, em alguns pacientes, pode ocorrer lesão de isquemia-reperfusão miocárdica (MIRI)2. Assim, é de grande importância compreender os mecanismos de ações e como melhorar o MI/MIRI. Camundongos são amplamente utilizados como modelos devido ao seu baixo custo, rápido tempo de reprodução e facilidade para realizar alteraçõesgenéticas 3. Estudiosos têm desenvolvido diferentes métodos para modelar MIRI e IM em animais 4,5,6,7,8,9. Essa estratégia favorece a pesquisa, mas os diferentes critérios e métodos empregados dificultam a interpretação dos resultados entre as equipes de pesquisa.
Em camundongos, o IM foi induzido por isoproterenol10, criolesão 11,12 ou cauterização13. O IM pode ser induzido prontamente pelo isoproterenol, mas o processo fisiopatológico é diferente daquele do IM clínico. O IM induzido por cauterização é bem diferente do processo natural do infarto do miocárdio, e a reação inflamatória na área queimada é mais intensa; Além disso, a abordagem cirúrgica apresenta dificuldades técnicas. Além disso, existem algunslaboratórios14 desenvolvendo modelo de IM em miniporcos utilizando o método de bloqueio por balão ou embolização ou trombose através de técnica intervencionista. Todos esses métodos podem causar oclusão da artéria coronária diretamente, mas a necessidade de dispositivos de angiografia coronariana e, acima de tudo, das artérias coronárias de camundongo muito finas torna essas operações pouco práticas. Para a MIRI, as diferenças entre os diferentes modelos foram bastante modestas, como usar ou não respiradores/micromanipulação 5,6.
Aqui é descrito um método simples e confiável que pode induzir IM e o modelo MIRI, adaptado de métodos previamente publicados4,5,6,7,8,9,15. Este método pode simular processos fisiopatológicos pelo bloqueio direto da DA através da ligadura. Além disso, ao aliviar a ligadura, esse modelo também pode simular lesão de reperfusão. Neste protocolo, um microscópio dissecante é utilizado para visualização da DAD. Em seguida, o pesquisador pode identificar prontamente a LAD. Posteriormente, a ligadura precisa da DAE leva à oclusão sanguínea reprodutível e previsível e isquemia ventricular. Além disso, alterações eletrocardiográficas (ECG) podem ser usadas para confirmar isquemia e reperfusão, além das mudanças de cor da DA observadas ao microscópio. Essa estratégia leva a uma menor duração do procedimento, menor risco de complicações cirúrgicas e menos camundongos experimentais necessários. Os métodos para o teste de troponina-T, ultrassom cardíaco e coloração de cloreto de trifenil tetrazólio (TTC) também são descritos. Em geral, este protocolo é útil para estudos do mecanismo MI/MIR, bem como para a descoberta de drogas.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9 % sodium chloride solution</td>
			<td>Kelun Industry Group,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde fixing solution</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1101</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>C412</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>H801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>IsoReag,China</td>
			<td>IR-11190</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Canon,Japan</td>
			<td>EOS 80D</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet,French</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elecsys Troponin T hs STAT</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrochemical luminescence immunoanalyzer</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td>Elecsys 2010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans blue</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>E2129</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye scissors</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC2303</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemostatic forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>J31020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High frequency in vivo imaging systems</td>
			<td>Visualsonics,Canada</td>
			<td>Vevo2100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibuprofen</td>
			<td>PerFeMiKer,China</td>
			<td>CLS-12921</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intravenous catheter</td>
			<td>Introcan,Germany</td>
			<td>4254090B</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich,America</td>
			<td>&#160;K2753</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical alcohol</td>
			<td>Huichang ,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microneedle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA2040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic shears</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA1040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA3020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse electrocardiograph</td>
			<td>Techman,China</td>
			<td>BL-420F</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC3202</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>operating floor</td>
			<td>Chico,China</td>
			<td>ZK-HJPT</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 tube</td>
			<td>Huamei,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Merck,America</td>
			<td>1030001</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech,China</td>
			<td>ALC-V8S-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Aomei Industry,China</td>
			<td>SZM0745-STL3-T3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical thermostatic heating pad</td>
			<td>Globalebio, China</td>
			<td>GE0-20W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1017</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts,China</td>
			<td>323004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice

O infarto agudo do miocárdio é uma doença cardiovascular comum e com alta mortalidade. A lesão de reperfusão miocárdica pode neutralizar os efeitos benéficos do refluxo cardíaco e induzir lesão miocárdica secundária. Um modelo simples e reprodutível de infarto do miocárdio e lesão de isquemia-reperfusão miocárdica é uma boa ferramenta para os pesquisadores. Aqui, um método personalizável para criar um modelo de infarto do miocárdio (IM) e MIRI por ligadura de precisão da artéria coronária descendente anterior (DA) por meio de micromanipulação é descrito. O posicionamento preciso e reprodutível da ligadura da DA ajuda a obter resultados consistentes para lesão cardíaca. As alterações no segmento ST podem ajudar a identificar a precisão do modelo. O nível sérico de troponina T cardíaca (cTnT) é usado para avaliar a lesão miocárdica, o ultrassom cardíaco é empregado para avaliar a função sistólica miocárdica e a coloração de Evans-Blue/cloreto de trifenil tetrazólio é usada para medir o tamanho do infarto. Em geral, esse protocolo reduz a duração do procedimento, garante o tamanho controlável do infarto e melhora a sobrevida do camundongo.

O fluxo de trabalho experimental é mostrado na Figura 1A. O pesquisador pode programar os nós de tempo de acordo com o desenho experimental no início do estudo. A duração da ligadura da DAE está de acordo com o objetivo da pesquisa. Para o IM, a pesquisa pode ignorar a etapa de reperfusão. A ultrassonografia cardíaca está disponível em diferentes estágios do estudo porque não é invasiva, enquanto a coloração Evans-Blue/TTC pode ser realizada apenas quando o camundongo é sacri...

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Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Este estudo descreve um método personalizável para criar um modelo de função miocárdica em Miro por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior através de micromanipulação. Esse protocolo reduz a duração do procedimento, garante o tamanho controlável do infarto e melhora a sobrevida do camundongo. Use um OT retangular com uma almofada de aquecimento pré-aquecida a 37 graus Celsius durante todo o procedimento cirúrgico.Antes do procedimento, desinfete a prancha com luz ultravioleta e álcool 70%. Comece colocando o mouse no TO em posição supina com gaze sob a cabeça para evitar superaquecimento dos olhos. Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar que eles sequem.Use um creme de remoção de pelos no tórax e massageie uniformemente com um cotonete estéril por um minuto. Limpe o excesso de pelos com gaze. Use iodopovidona seguido de álcool a 70% para limpar a área e cubra o tórax com gaze.Use uma sutura de 4-O sob os incisivos superiores e fixe-a ao ponto de ancoragem para manter a boca levemente aberta e facilitar a canulação. Puxe a cauda para manter o corpo reto e prenda-a ao TO usando fita adesiva. Fixe os quatro membros com fita adesiva e aperte-os nos pontos de ancoragem.Não estique demais os membros anteriores para evitar comprometimento respiratório. Use pinças para abrir a mandíbula e levantar a língua. Em seguida, use um iluminador para visualizar a garganta e a glote.Insira suavemente uma cânula de calibre 22 com uma agulha truncada romba através da boca na traqueia, cerca de um centímetro abaixo da garganta. Use uma das mãos para segurar a língua e mova-a ligeiramente para cima com pinças rombas. Simultaneamente, use a outra mão para inserir suavemente o tubo na traqueia.Tenha cuidado para não inserir o tubo no esôfago. Retire cuidadosamente a agulha. Antes de se conectar ao ventilador, verifique a intubação colocando o tubo na água para a formação de bolhas.Conecte o tubo endotraqueal a um ventilador regulado para 120 por minuto e o volume corrente ajustado para 250 microlitros. Verificar a intubação verificando a expansibilidade torácica bilateral simétrica. Em seguida, corrija a conexão com o OT com fita adesiva para evitar que ele caia.Coloque eletrodos de ECG nas patas e conecte-os ao gravador de ECG. Monitorar a eletrofisiologia cardíaca durante todo o procedimento. Retire a gaze no tórax.Desinfetar a área da incisão usando três ciclos de esfoliação com álcool a 70%. Para reduzir a contaminação do sítio cirúrgico, cubra o rato com um pano cirúrgico estéril com um orifício sobre o campo cirúrgico. Depois de fazer uma incisão oblíqua da pele com bisturi, exponha as costelas realizando uma dissecção romba dos tecidos subcutâneos.Tenha cuidado para não ferir os vasos, costelas e pulmões. Use aplicadores de algodão estéreis para estancar o sangramento. Identifique o terceiro espaço intercostal e faça uma incisão de cerca de seis a oito milímetros.Em seguida, abra a cavidade torácica realizando a dissecção romba dos tecidos no espaço intercostal. Tenha cuidado para não lesionar a artéria torácica interna. Percorrer o espaço intercostal usando pinças.Insira afastadores caseiros pré-esterilizados na caixa torácica e puxe para trás para espalhar a incisão para aproximadamente seis milímetros de largura. Fixe os afastadores ao TO com elásticos. Remova cuidadosamente os tecidos circundantes para expor o coração completamente.Puxe o pericárdio suavemente com pinças curvas sem ferir o coração. Use um microscópio dissecante e direcione uma luz focalizada e apropriada para visualização da LAD. Pressione suavemente o local abaixo da posição de ligadura escolhida para ampliar temporariamente a LAD e, em seguida, verifique novamente a LAD.Sob um microscópio dissecante, use uma agulha cônica para passar um 8-0 ligadura de seda por baixo da LAD. Certifique-se de que a agulha não é profunda o suficiente para entrar no ventrículo esquerdo e não muito rasa para evitar danificar a LAD. Amarre a ligadura com um nó duplo solto.Coloque um tubo PE-10 de dois a três milímetros em uma alça paralela à artéria. Aperte a alça de ligadura suavemente até que fique ao redor da artéria e da tubulação. Em seguida, prenda o laço com um nó deslizante.Tome cuidado para não danificar a parede miocárdica com pressão de aperto excessiva. A coloração da palidez na parede anterior do ventrículo esquerdo após a ligadura confirma a cessação do fluxo sanguíneo na DA. Se for necessária a ligadura permanente, proceda conforme descrito no texto manuscrito.Retire os afastadores da incisão. Em seguida, feche a ferida temporariamente com uma braçadeira de buldogue. Certifique-se de que o rato continua ligado ao ventilador.Quando o período de isquemia terminar, remova a pinça do buldogue e insira os afastadores para abrir a incisão e expor o coração e o local da ligadura. Desamarre o nó deslizante e remova a tubulação PE-10. A mudança da coloração pálida para rosa-avermelhada confirma a restauração do fluxo sanguíneo.Simultaneamente, para detectar reperfusão, observe o ECG para uma possível dissolução do supradesnivelamento do segmento ST. Deixe o 8-0 ligadura in situ se realizar coloração subsequente de azul de Evans e TTC. Caso contrário, remova a sutura nesta etapa.Retire os afastadores e feche a incisão suturando a terceira e quarta costelas com fio de seda 4-O. Tenha cuidado para não ferir o pulmão. Pressione o tórax suavemente enquanto amarra os nós de sutura para empurrar para fora qualquer ar que possa estar preso na cavidade torácica.Feche as camadas musculares com pontos contínuos de seda de 4-O. As imagens padrão do processo experimental foram adquiridas desde intubação endotraqueal, incisão na pele, toracotomia, identificação da DA e ligadura até a reperfusão. As imagens representativas do ECG verificaram isquemia e reperfusão miocárdica com elevação significativa do segmento ST após a ligadura.E a dissolução da elevação do segmento ST após o nó deslizante foi desatada. Antes da toracotomia, é muito importante manter a via aérea aberta, e o mais importante é certificar-se de que a DAE esteja firmemente ligada e evitar danos. Esse procedimento será seguido de ecocardiograma para avaliação da função cardíaca, bem como de CTT para avaliação da lesão miocárdica.

Research

JoVE Journal

Medicine

Acute Myocardial Infarction in Rats

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With heart failure leading the cause of death in the USA (Hunt), biomedical research is fundamental to advance medical treatments for cardiovascular ...

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The mammalian heart is incapable of significant regeneration following an acute injury such as myocardial infarction1. By contrast, urodele amphibians and ...

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Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

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Minimal Invasive Surgical Procedure of Inducing Myocardial Infarction in Mice

Minimal procedimento cirúrgico invasivo de induzir Infarto do Miocárdio em Ratos

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Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

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A confirmação da Isquemia Miocárdica e reperfusão em ratos usando Pad Superfície Eletrocardiografia

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