Name: induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice
Uploaded: 2022-01-19T13:30:00
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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (82070317, 81700390 a Jibin Lin, 8210021880 a Bingjie Lv y 82000428 a Boyuan Wang) y el Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave de China (2017YFA0208000 a Shaolin He).

Los estudios en animales han sido aprobados por el Comité de Cuidado y Utilización de Animales de la Universidad de Ciencia y Tecnología de Huazhong (Wuhan, China).
NOTA: Se utilizan ratones machos C57BL/6J (8-10 semanas) como modelos. Los ratones tienen libre acceso a alimentos y agua y se crían en condiciones específicas libres de patógenos. La habitación se mantiene bajo temperatura controlada (22 °C ± 2 °C) y humedad (45%-65%). Los ratones son expuestos a un ambiente de luz/oscur...

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	<li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Ibanez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolving+therapies+for+myocardial+ischemia/reperfusion+injury.">Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury.</a> Journal of the American College of Cardiology. 65 (14), 1454-1471 (2015).</li><li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mighty+mouse:+The+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research.">The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li><li>Kim, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+closed-chest+model+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion.">A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3896 (2012).</li><li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+ligation+of+the+left+anterior+descending+artery.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (86), e51329 (2014).</li><li>Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 145-153 (2018).</li><li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice:+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure.">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (94), e52206 (2014).</li><li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+left+anterior+descending+(LAD)+coronary+artery+ligation:+An+improved+and+simplified+model+for+myocardial+infarction.">Murine left anterior descending (LAD) coronary artery ligation: An improved and simplified model for myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (122), e55353 (2017).</li><li>Lugrin, J., Parapanov, R., Krueger, T., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+myocardial+infarction+model+using+permanent+ligation+of+left+anterior+descending+coronary+artery.">Murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59591 (2019).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioprotective+effects+of+Puerarin-V+on+isoproterenol-induced+myocardial+infarction+mice+is+associated+with+regulation+of+PPAR-Y/NF-Kappa+B+pathway.">Cardioprotective effects of Puerarin-V on isoproterenol-induced myocardial infarction mice is associated with regulation of PPAR-Y/NF-Kappa B pathway.</a> Molecules. 23 (12), 3322 (2018).</li><li>Vanden Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse:+A+comparison+with+coronary+artery+ligation.">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: A comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cryoinjury+model+to+study+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A cryoinjury model to study myocardial infarction in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (151), e59958 (2019).</li><li>Brooks, W. W., Garibaldi, B. A., Conrad, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+injury+in+the+mouse+induced+by+transthoracic+cauterization.">Myocardial injury in the mouse induced by transthoracic cauterization.</a> Laboratory Animal Science. 48 (4), 374-378 (1998).</li><li>Tao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+modeling+and+multimodality+imaging+of+chronic+myocardial+infarction+in+minipigs+induced+by+novel+interventional+embolization+technique.">Preclinical modeling and multimodality imaging of chronic myocardial infarction in minipigs induced by novel interventional embolization technique.</a> EJNMMI Research. 6 (1), 59 (2016).</li><li>Gao, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+efficient+model+of+coronary+artery+ligation+and+myocardial+infarction+in+the+mouse.">A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse.</a> Circulation Research. 107 (12), 1445-1453 (2010).</li><li>Scofield, S. L., Singh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confirmation+of+myocardial+ischemia+and+reperfusion+injury+in+mice+using+surface+pad+electrocardiography.">Confirmation of myocardial ischemia and reperfusion injury in mice using surface pad electrocardiography.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54814 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+high-resolution+echocardiography:+First+evidence+on+non-invasive+repeated+measure+of+myocardial+strain,+contractility,+and+mitral+regurgitation+in+the+ischemia-reperfused+murine+heart.">High-frequency high-resolution echocardiography: First evidence on non-invasive repeated measure of myocardial strain, contractility, and mitral regurgitation in the ischemia-reperfused murine heart.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (41), e1781 (2010).</li><li>Pistner, A., Belmonte, S., Coulthard, T., Blaxall, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+echocardiography+and+ultrasound+imaging.">Murine echocardiography and ultrasound imaging.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (42), e2100 (2010).</li><li>Shibata, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adiponectin+protects+against+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+AMPK-+and+COX-2-dependent+mechanisms.">Adiponectin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury through AMPK- and COX-2-dependent mechanisms.</a> Nature Medicine. 11 (10), 1096-1103 (2005).</li><li>Anderson, J. L., Morrow, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> New England Journal of Medicine. 376 (21), 2053-2064 (2017).</li><li>Frank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+ischemia+reperfusion+injury:+From+basic+science+to+clinical+bedside.">Myocardial ischemia reperfusion injury: From basic science to clinical bedside.</a> Seminars in Cardiothoracic and Vascular Anesthesia. 16 (3), 123-132 (2012).</li><li>Mares, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+the+innate+immune+response+to+myocardial+infarction+in+a+highly+efficient+experimental+animal+model.">Studying the innate immune response to myocardial infarction in a highly efficient experimental animal model.</a> Romanian Journal of Cardiology. 31 (3), 573-585 (2021).</li><li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coronary+arteries+of+the+C57bl/6+mouse+strains:+Implications+for+comparison+with+mutant+models.">The coronary arteries of the C57bl/6 mouse strains: Implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li><li>Zhang, R., Hess, D. T., Reynolds, J. D., Stamler, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+S-nitrosylation+plays+an+essential+role+in+cardioprotection.">Hemoglobin S-nitrosylation plays an essential role in cardioprotection.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (12), 4654-4658 (2016).</li><li>Sorop, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+models+of+coronary+microvascular+dysfunction.">Experimental animal models of coronary microvascular dysfunction.</a> Cardiovascular Research. 116 (4), 756-770 (2020).</li><li>Sicard, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Right+coronary+artery+ligation+in+mice:+A+novel+method+to+investigate+right+ventricular+dysfunction+and+biventricular+interaction.">Right coronary artery ligation in mice: A novel method to investigate right ventricular dysfunction and biventricular interaction.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 316 (3), 684-692 (2019).</li><li>Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Fish, K., Hajjar, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variability+in+coronary+artery+anatomy+affects+consistency+of+cardiac+damage+after+myocardial+infarction+in+mice.">Variability in coronary artery anatomy affects consistency of cardiac damage after myocardial infarction in mice.</a> American Journal of Physiology: Heart and Circulatory Physiology. 313 (2), 275-282 (2017).</li><li>Kato, R., Foex, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+protection+by+anesthetic+agents+against+ischemia-reperfusion+injury:+An+update+for+anesthesiologists.">Myocardial protection by anesthetic agents against ischemia-reperfusion injury: An update for anesthesiologists.</a> Canadian Journal of Anaesthesia. 49 (8), 777-791 (2002).</li></ol>

En los últimos años, la creación de modelos para IM y MIRI en investigación clínica y científica se ha desarrollado rápidamente20,21. Sin embargo, todavía hay algunas cuestiones, como los mecanismos de acción y cómo mejorar el IM/MIRI, que deben resolverse. Aquí, se describe un protocolo modificado para establecer un modelo murino de IM y MIRI. Hay varios puntos clave que deben considerarse cuidadosamente.
El primer punto cl...

El infarto agudo de miocardio (IAM) es una enfermedad cardiovascular frecuente en todo el mundo y conlleva una alta mortalidad1. Los avances en las tecnologías hacen que la revascularización temprana y eficaz esté disponible para los pacientes con IAM. Después de estos tratamientos, en algunos pacientes, puede ocurrir una lesión por isquemia-reperfusión miocárdica (IRI)2. Por lo tanto, es de gran importancia comprender los mecanismos de acción y cómo mejorar el IM/MIRI. Los ratones son ampliamente utilizados como modelos debido a su bajo costo, rápido tiempo de reproducción y facilidad para realizar alteraciones genéticas3. Los estudiosos han desarrollado diferentes métodos para modelar MIRI y MI en animales 4,5,6,7,8,9. Esta estrategia promueve la investigación, pero los diferentes criterios y métodos empleados complican la interpretación de los resultados entre los equipos de investigación.
En ratones, el infarto de miocardio ha sido inducido por isoproterenol10, criolesión 11,12 o cauterización13. El infarto de miocardio puede ser inducido fácilmente por el isoproterenol, pero el proceso fisiopatológico es diferente al del infarto de miocardio clínico. El infarto de miocardio inducido por criolesión tiene poca consistencia, provoca un daño miocárdico excesivo alrededor de la arteria coronaria descendente anterior izquierda (DA) y puede inducir fácilmente arritmia. El infarto de miocardio inducido por cauterización es bastante diferente del proceso natural del infarto de miocardio, y la reacción inflamatoria en el área de quemadura es más intensa; Además, el abordaje quirúrgico tiene dificultades técnicas. Por otra parte, hay algunos laboratorios14 que están desarrollando un modelo de infarto de miocardio en minicerdos utilizando el bloqueo con balón o el método de embolización o trombosis mediante técnica intervencionista. Todos estos métodos pueden causar la oclusión de la arteria coronaria directamente, pero la necesidad de dispositivos de angiografía coronaria y, sobre todo, las arterias coronarias de ratón demasiado delgadas hacen que estas operaciones no sean prácticas. Para el MIRI, las diferencias entre los diferentes modelos fueron bastante modestas, como el uso de respiradores/micromanipulación o no 5,6.
Aquí, se describe un método simple y confiable que puede inducir IM y el modelo MIRI, adaptado de los métodos previamente publicados 4,5,6,7,8,9,15. Este método puede simular procesos fisiopatológicos mediante el bloqueo directo de la DA a través de la ligadura. Además, al aliviar la ligadura, este modelo también puede simular una lesión por reperfusión. En este protocolo, se utiliza un microscopio de disección para la visualización de la LAD. De este modo, el investigador puede identificar fácilmente la LAD. Posteriormente, la ligadura precisa de la DA conduce a una oclusión sanguínea e isquemia ventricular reproducibles y predecibles. Además, los cambios en el electrocardiograma (ECG) se pueden utilizar para confirmar la isquemia y la reperfusión, además de los cambios de color de la DA observados al microscopio. Esta estrategia conduce a una duración más corta del procedimiento, un menor riesgo de complicaciones quirúrgicas y la necesidad de menos ratones experimentales. También se describen los métodos para la prueba de troponina-T, la ecografía cardíaca y la tinción con cloruro de trifenil tetrazolio (TTC). En general, este protocolo es útil para estudios del mecanismo MI/MIR, así como para el descubrimiento de fármacos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9 % sodium chloride solution</td>
			<td>Kelun Industry Group,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde fixing solution</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1101</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 silk suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>C412</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 suture</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products,China</td>
			<td>H801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td>IsoReag,China</td>
			<td>IR-11190</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera</td>
			<td>Canon,Japan</td>
			<td>EOS 80D</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Veet,French</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elecsys Troponin T hs STAT</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrochemical luminescence immunoanalyzer</td>
			<td>Roche,Germany</td>
			<td>Elecsys 2010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans blue</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>E2129</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye scissors</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC2303</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemostatic forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>J31020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High frequency in vivo imaging systems</td>
			<td>Visualsonics,Canada</td>
			<td>Vevo2100</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ibuprofen</td>
			<td>PerFeMiKer,China</td>
			<td>CLS-12921</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intravenous catheter</td>
			<td>Introcan,Germany</td>
			<td>4254090B</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Sigma-Aldrich,America</td>
			<td>&#160;K2753</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical alcohol</td>
			<td>Huichang ,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microneedle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA2040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopic shears</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA1040</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgical forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>WA3020</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse electrocardiograph</td>
			<td>Techman,China</td>
			<td>BL-420F</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holders</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments,China</td>
			<td>JC3202</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>operating floor</td>
			<td>Chico,China</td>
			<td>ZK-HJPT</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-10 tube</td>
			<td>Huamei,China</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital</td>
			<td>Merck,America</td>
			<td>1030001</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Ventilator</td>
			<td>Shanghai Alcott Biotech,China</td>
			<td>ALC-V8S-P</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Aomei Industry,China</td>
			<td>SZM0745-STL3-T3</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical thermostatic heating pad</td>
			<td>Globalebio, China</td>
			<td>GE0-20W</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td>Servicebio,China</td>
			<td>G1017</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts,China</td>
			<td>323004</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury in mice

El infarto agudo de miocardio es una enfermedad cardiovascular frecuente con alta mortalidad. La lesión por reperfusión miocárdica puede contrarrestar los efectos beneficiosos del reflujo cardíaco e inducir una lesión miocárdica secundaria. Un modelo simple y reproducible de infarto de miocardio y lesión por isquemia-reperfusión miocárdica es una buena herramienta para los investigadores. Aquí, se describe un método personalizable para crear un modelo de infarto de miocardio (IM) y MIRI mediante ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda (DA) mediante micromanipulación. El posicionamiento preciso y reproducible de la ligadura del LAD ayuda a obtener resultados consistentes para la lesión cardíaca. Los cambios en el segmento ST pueden ayudar a identificar la precisión del modelo. El nivel sérico de troponina T cardíaca (cTnT) se utiliza para evaluar la lesión miocárdica, la ecografía cardíaca se emplea para evaluar la función sistólica miocárdica y la tinción con cloruro de Evans-Blue/trifenil tetrazolio se utiliza para medir el tamaño del infarto. En general, este protocolo reduce la duración del procedimiento, garantiza un tamaño de infarto controlable y mejora la supervivencia de los ratones.

El flujo de trabajo experimental se muestra en la Figura 1A. El investigador puede programar los nodos de tiempo de acuerdo con el diseño experimental al inicio del estudio. La duración de la ligadura de la DA depende del propósito de la investigación. En el caso del IM, la investigación puede ignorar el paso de reperfusión. La ecografía cardíaca está disponible en diferentes etapas del estudio porque no es invasiva, mientras que la tinción de Evans-Blue/TTC solo se puede realizar ...

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Induction of Myocardial Infarction and Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury in Mice

En este trabajo describimos un método sencillo y reproducible que puede inducir infarto de miocardio o lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones mediante ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación.

Inducción de infarto de miocardio y lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones

Acute myocardial infarction is a common cardiovascular disease with high mortality. Myocardial reperfusion injury can counteract the beneficial effects of ...

Este estudio describe un método personalizable para crear un modelo de función miocárdica en Miro mediante la ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación. Este protocolo reduce la duración del procedimiento, garantiza un tamaño de infarto controlable y mejora la supervivencia de los ratones. Use un OT rectangular con una almohadilla térmica precalentada a 37 grados centígrados durante todo el procedimiento quirúrgico.Antes del procedimiento, desinfecte la tabla con luz ultravioleta y alcohol al 70%. Comience colocando el ratón en el OT en posición supina con una gasa debajo de la cabeza para evitar el sobrecalentamiento de los ojos. Aplique ungüento oftálmico en los ojos para evitar que se sequen.Use una crema para quitar el pelo en el tórax y masajee uniformemente con un hisopo de algodón estéril durante un minuto. Limpia el exceso de pelo con una gasa. Use povidona yodada seguida de alcohol al 70% para limpiar el área y cubra el tórax con una gasa.Utilice una sutura 4-O debajo de los incisivos superiores y asegúrela al punto de anclaje para mantener la boca ligeramente abierta y facilitar la canulación. Tira de la cola para mantener el cuerpo recto y asegúralo al OT con cinta adhesiva. Asegure las cuatro extremidades con cinta adhesiva y apriételas en los puntos de anclaje.No estire demasiado las extremidades delanteras para evitar el compromiso respiratorio. Use fórceps para abrir la mandíbula y levantar la lengua. A continuación, utiliza un iluminador para visualizar la garganta y la glotis.Inserte suavemente una cánula de calibre 22 con una aguja truncada roma a través de la boca hasta la tráquea, aproximadamente un centímetro por debajo de la garganta. Use una mano para sostener la lengua y muévala ligeramente hacia arriba con pinzas romas. Al mismo tiempo, use la otra mano para insertar suavemente el tubo en la tráquea.Tenga cuidado de no insertar el tubo en el esófago. Retire la aguja con cuidado. Antes de conectarlo al ventilador, verifique la intubación colocando el tubo en el agua para que se formen burbujas.Conecte el tubo endotraqueal a un ventilador ajustado a 120 por minuto y el volumen corriente ajustado a 250 microlitros. Verifique la intubación comprobando la expansión torácica simétrica bilateral. A continuación, fije la conexión al OT con cinta adhesiva para evitar que se caiga.Coloque electrodos de ECG en las patas y conéctelos a la grabadora de ECG. Monitoree la electrofisiología cardíaca durante todo el procedimiento. Retire la gasa del tórax.Desinfecte el área de la incisión usando tres ciclos de fregado con alcohol al 70%. Para reducir la contaminación del sitio quirúrgico, cubra el ratón con un paño quirúrgico estéril con un orificio sobre el campo quirúrgico. Después de realizar una incisión en la piel oblicua con un bisturí, exponer las costillas realizando una disección roma de los tejidos subcutáneos.Tenga cuidado de no lesionar los vasos, las costillas y los pulmones. Use aplicadores de algodón estériles para detener el sangrado. Identifique el tercer espacio intercostal y haga una incisión de unos seis a ocho milímetros.A continuación, abra la cavidad torácica realizando una disección roma de los tejidos en el espacio intercostal. Tenga cuidado de no lesionar la arteria torácica interna. Amplíe el espacio intercostal con fórceps.Inserte retractores caseros preesterilizados en la caja torácica y tire hacia atrás para extender la incisión a aproximadamente seis milímetros de ancho. Fije los retractores al OT con bandas elásticas. Retire con cuidado los tejidos circundantes para exponer el corazón por completo.Retire el pericardio suavemente con pinzas curvas sin lesionar el corazón. Utilice un microscopio de disección y dirija una luz enfocada y apropiada para la visualización de la LAD. Presione suavemente el sitio debajo de la posición de ligadura elegida para agrandar temporalmente el DA y luego vuelva a verificar el DA.Bajo un microscopio de disección, use una aguja cónica para pasar un 8-0 ligadura de seda debajo del LAD. Asegúrese de que la aguja no sea lo suficientemente profunda como para entrar en el ventrículo izquierdo y no demasiado superficial para evitar dañar la DA. Ata la ligadura con un nudo doble suelto.Coloque un tubo de PE-10 de dos a tres milímetros en un bucle paralelo a la arteria. Apriete suavemente el lazo de la abrazadera hasta que quede alrededor de la arteria y el tubo. A continuación, asegure el lazo con un nudo corredizo.Tenga cuidado de no dañar la pared miocárdica con una presión de tensión excesiva. Una coloración paliálida en la pared anterior del ventrículo izquierdo después de la ligadura confirma el cese del flujo sanguíneo en la DA. Si se requiere ligadura permanente, proceda como se describe en el manuscrito del texto.Retire los retractores de la incisión. A continuación, cierre la herida temporalmente con una pinza de bulldog. Asegúrese de que el mouse siga conectado al ventilador.Cuando termine el período de isquemia, retire la pinza bulldog e inserte los retractores para abrir la incisión y exponer el corazón y el sitio de ligadura. Desate el nudo corredizo y retire el tubo de PE-10. El cambio en la coloración pálida a rojo rosado confirma la restauración del flujo sanguíneo.Al mismo tiempo, para detectar la reperfusión, observe el ECG para detectar una posible disolución de la elevación del ST. Deja el 8-0 ligadura in situ si se realiza una tinción posterior con azul de Evans y TTC. De lo contrario, retire la sutura en este paso.Retire los retractores y cierre la incisión suturando la tercera y cuarta costilla con una sutura de seda 4-O. Tenga cuidado de no lesionar el pulmón. Presione el pecho suavemente mientras ata los nudos de sutura para expulsar el aire que pueda quedar atrapado en la cavidad torácica.Cerrar las capas musculares con suturas continuas de seda 4-O. Las imágenes estándar del proceso experimental se adquirieron desde la intubación endotraqueal, la incisión cutánea, la toracotomía, la identificación de la DA y la ligadura, hasta la reperfusión. Las imágenes representativas del ECG verificaron isquemia miocárdica y reperfusión con elevación significativa del ST después de la ligadura.Y la disolución de la elevación ST después de que se desató el nudo corredizo. Antes de la toracotomía, es muy importante mantener la vía aérea abierta, y lo más importante es asegurarse de que el DAA esté firmemente ligado y evitar daños. A este procedimiento le seguirá una ecocardiografía para evaluar la función cardíaca, así como un TTC para evaluar la lesión miocárdica.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Investigación

Medicina

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