Name: visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging
Uploaded: 2021-11-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

يود المؤلفان أن يشكرا الدكتور فوتيس إليوبولوس ودانيال غرينفيلد من مجموعة إيفانز على مناقشتهما وتدقيقهما لهذه المخطوطة. وبالإضافة إلى ذلك، يود المؤلفون أن ينوه بالدعم المقدم من LEO Pharma. تم إنشاء الشكل 2 باستخدام BioRender.com.

تمت الموافقة على استخدام أنسجة أذن الفئران العارية من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية في مستشفى ماساتشوستس العام (IACUC) ، في حين تمت الموافقة على استخدام أنسجة الجلد البشري من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لمستشفى ماساتشوستس العام (IRB). وفقا لبروتوكولات IACUC ، تم الحصول على الفئران ا?...

<ol>
	<li>Finnin, B., Walters, K. A., Franz, T. J., Benson, H. E., Watkinson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+skin+permeation+methodology.+In+Transdermal+and+topical+drug+delivery:+principles+and+methodology.">In vitro skin permeation methodology. In Transdermal and topical drug delivery: principles and methodology.</a> Transdermal and topical drug delivery: principles and practice. , 85-108 (2012).</li><li>Shin, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+road+to+development+of+an+in+vitro+permeation+test+(IVPT)+model+to+compare+heat+effects+on+transdermal+delivery+systems:+exploratory+studies+with+nicotine+and+fentanyl.">On the road to development of an in vitro permeation test (IVPT) model to compare heat effects on transdermal delivery systems: exploratory studies with nicotine and fentanyl.</a> Pharmaceutical Research. 34 (9), 1817-1830 (2017).</li><li>Hossain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterisation,+and+topical+delivery+of+terbinafine.">Preparation, characterisation, and topical delivery of terbinafine.</a> Pharmaceutics. 11 (10), 548 (2019).</li><li>Santos, L. L., Swofford, N. J., Santiago, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+permeation+test+(IVPT)+for+pharmacokinetic+assessment+of+topical+dermatological+formulations.">In vitro permeation test (IVPT) for pharmacokinetic assessment of topical dermatological formulations.</a> Current Protocols in Pharmacology. 91 (1), 79 (2020).</li><li>Iliopoulos, F., Caspers, P. J., Puppels, G. J., Lane, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Franz+cell+diffusion+testing+andquantitative+confocal+Raman+spectroscopy:+In+vitro-in+vivo+correlation.">Franz cell diffusion testing andquantitative confocal Raman spectroscopy: In vitro-in vivo correlation.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 887 (2020).</li><li>Cordery, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+bioavailability+of+diclofenac+from+locally-acting,+dermatological+formulations.">Topical bioavailability of diclofenac from locally-acting, dermatological formulations.</a> International Journal of Pharmaceutics. 529 (1-2), 55-64 (2017).</li><li>Pensado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stratum+corneum+sampling+to+assess+bioequivalence+between+topicalacyclovir+products.">Stratum corneum sampling to assess bioequivalence between topicalacyclovir products.</a> Pharmaceutical Research. 36 (12), 1-16 (2019).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+delivery+of+niacinamide-in+vivo+studies.">Dermal delivery of niacinamide-in vivo studies.</a> Pharmaceutics. 13 (5), 726 (2021).</li><li>Bodenlenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+flow+microperfusion+as+a+dermal+pharmacokinetic+approach+to+evaluate+topical+bioequivalence.">Open flow microperfusion as a dermal pharmacokinetic approach to evaluate topical bioequivalence.</a> Clinical Pharmacokinetics. 56 (1), 91-98 (2017).</li><li>Eirefelt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dermal+pharmacokinetics+and+pharmacodymanic+effect+of+soft+topical+PDE4+inhibitors:Open+flow+microperfusion+and+skin+biopsies.">Evaluating dermal pharmacokinetics and pharmacodymanic effect of soft topical PDE4 inhibitors:Open flow microperfusion and skin biopsies.</a> Pharmaceutical Research. 37 (12), 1-12 (2020).</li><li>Stagni, G., O'Donnell, D., Liu, Y. J., Kellogg, J. D. L., Shepherd, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iontophoretic+current+and+intradermal+microdialysis+recovery+in+humans.">Iontophoretic current and intradermal microdialysis recovery in humans.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 41 (1), 49-54 (1999).</li><li>Garcia Ortiz, P., Hansen, S. H., Shah, V. P., Menne, T., Benfeldt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+adultatopic+dermatitis+on+topical+drug+penetration:+assessment+by+cutaneous+microdialysis+and+tape+stripping.">Impact of adultatopic dermatitis on topical drug penetration: assessment by cutaneous microdialysis and tape stripping.</a> Acta Dermato-Venereologica. 89 (1), 33-38 (2009).</li><li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis:+Continuous+intermittent+vs+continuous-only+sampling.">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li><li>Kuzma, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+local+bioavailability+of+metronidazole+from+topical+formulations+using+dermal+microdialysis:+Preliminary+study+in+a+Yucatan+mini-pig+model.">Evaluation of local bioavailability of metronidazole from topical formulations using dermal microdialysis: Preliminary study in a Yucatan mini-pig model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105741 (2021).</li><li>Begley, R., Harvey, A., Byer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.Coherent+anti-Stokes+Raman+spectroscopy.">L.Coherent anti-Stokes Raman spectroscopy.</a> Applied Physics Letters. 25 (7), 387-390 (1974).</li><li>Evans, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+imaging+of+tissue+in+vivo+with+video-rate+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (46), 16807-16812 (2005).</li><li>Hill, A. H., Manifold, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+imaging+depth+limit+of+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Tissue imaging depth limit of stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 11 (2), 762-774 (2020).</li><li>Feizpour, A., Marstrand, T., Bastholm, L., Eirefelt, S., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantification+of+pharmacokinetics+in+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy+and+deep+learning.">Label-free quantification of pharmacokinetics in skin with stimulated Raman scattering microscopy and deep learning.</a> Journal of Investigative Dermatology. 141 (2), 395-403 (2021).</li><li>Ghosh, B., Reddy, L. H., Kulkarni, R. V., Khanam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+skin+permeability+of+drugs+in+mice+and+human+cadaver+skin.">Comparison of skin permeability of drugs in mice and human cadaver skin.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 38 (1), 42-45 (2000).</li><li>Nielsen, J. B., Plasencia, I., S&#248;rensen, J. A., Bagatolli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Storage+conditions+of+skin+affect+tissue+structure+and+subsequent+in+vitro+percutaneous+penetration.">Storage conditions of skin affect tissue structure and subsequent in vitro percutaneous penetration.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 24 (2), 93-102 (2011).</li><li>Barbero, A. M., Frasch, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+frozen+human+epidermis+storage+duration+and+cryoprotectant+on+barrier+function+using+two+model+compounds.">Effect of frozen human epidermis storage duration and cryoprotectant on barrier function using two model compounds.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 29 (1), 31-40 (2016).</li><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+various+methods+of+cold+storage+of+skin+on+the+permeation+of+melatonin+and+nimesulide.">The influence of various methods of cold storage of skin on the permeation of melatonin and nimesulide.</a> Journal of Controlled Release. 86 (1), 49-57 (2003).</li><li>Skelly, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+and+AAPS+report+of+the+workshop+on+principles+and+practices+of+in+vitro+percutaneous+penetration+studies:+relevance+to+bioavailability+and+bioequivalence.">FDA and AAPS report of the workshop on principles and practices of in vitro percutaneous penetration studies: relevance to bioavailability and bioequivalence.</a> Pharmaceutical Research. 4 (3), 265-267 (1987).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+for+the+conduct+of+skin+absorption+studies.">Guidance document for the conduct of skin absorption studies.</a> OECD. , (2004).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test+no.+428:+Skin+absorption:+In+vitro+method.">Test no. 428: Skin absorption: In vitro method.</a> OECD. , (2004).</li><li>Saar, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-rate+molecular+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering.">Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering.</a> Science. 330 (6009), 1368-1370 (2010).</li><li>Saar, B. G., Contreras-Rojas, L. R., Xie, X. S., Guy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+drug+delivery+to+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Imaging drug delivery to skin with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Molecular Pharmaceutics. 8 (3), 969-975 (2011).</li><li>Pence, I. J., Kuzma, B. A., Brinkmann, M., Hellwig, T., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-windowsparse+spectral+sampling+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Multi-windowsparse spectral sampling stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6095-6114 (2021).</li><li>Herkenne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+methods+for+the+assessment+of+topical+drug+bioavailability.">In vivo methods for the assessment of topical drug bioavailability.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 87-103 (2008).</li><li>Alfonso-Garc&#305;a, A., Mittal, R., Lee, E. S., Potma, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+with+coherent+Raman+scattering+microscopy:+a+tutorial.">Biological imaging with coherent Raman scattering microscopy: a tutorial.</a> Journal of Biomedical Optics. 19 (7), 071407 (2014).</li><li>Osseiran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+monitoring+of+cancer+cell+subpopulations+in+monolayers,+3D+spheroids,+and+xenografts+using+the+photoconvertible+dye+DiR.">Longitudinal monitoring of cancer cell subpopulations in monolayers, 3D spheroids, and xenografts using the photoconvertible dye DiR.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-10 (2019).</li><li>Evennett, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kohler+illumination:+a+simple+interpretation.">Kohler illumination: a simple interpretation.</a> Proceedings of the Royal Microscopical Society. 28 (4), 189-192 (1983).</li><li>Sanderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+microscopy.">Fundamentals of microscopy.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 10 (2), 76 (2020).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Hunter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matplotlib:+A+2D+graphics+environment.">Matplotlib: A 2D graphics environment.</a> Computing in Science &amp; Engineering. 9 (3), 90-95 (2007).</li><li>Wickham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. , (2016).</li><li>Kim, H., Han, S., Cho, Y. S., Yoon, S. K., Bae, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+R+packages:'Non-Compart'+and+'ncar'+for+noncompartmental+analysis+(NCA).">Development of R packages:'Non-Compart' and 'ncar' for noncompartmental analysis (NCA).</a> Translational and Clinical Pharmacology. 26 (1), 10-15 (2018).</li></ol>

تقييم BA/BE الموضعي هو مجال للبحث يتطلب نهجا متعدد الأوجه حيث لا يمكن لأي طريقة واحدة أن تميز بشكل كامل في الجسم الحي cPK. يقدم هذا البروتوكول منهجية لتقييم BA/BE لمنتج دوائي موضعي استنادا إلى تصوير رامان المتماسك. واحدة من النقاط الأولى التي يمكن تجاهلها هي مدى رقة عينات الجلد ، خاصة بالنسب...

وقد توسعت منهجيات تقييم cPK بعد تطبيق منتج الدواء الموضعي من الدراسات الكلاسيكية لاختبار النفاذية في المختبر (IVPT)1،2،3،4،5 وتجريد الشريط6،7،8 إلى منهجيات إضافية مثل التروية الدقيقة مفتوحة التدفق أو غسيل الكلى المجهري الجلدي9،10،11 ، 12,13,14. من المحتمل أن تكون هناك مواقع محلية مختلفة للعمل العلاجي اعتمادا على المرض محل الاهتمام. وبالتالي ، قد يكون هناك عدد مماثل من المنهجيات لتقييم معدل ومدى وصول واجهة برمجة التطبيقات إلى موقع العمل المحلي المقصود. في حين أن كل منهجية من المنهجيات المذكورة أعلاه لها مزاياها ، فإن العيب الرئيسي هو عدم وجود معلومات cPK على نطاق دقيق (أي عدم القدرة على تصور أين تذهب واجهة برمجة التطبيقات وكيف تتغلغل).
إحدى المنهجيات غير الباضعة التي تهم تقدير BA و BE الموضعية هي CRI ، والتي يمكن تقسيمها إلى طريقتين للتصوير: CARS و SRS microscopy. تتيح طرق رامان المتماسكة هذه تصويرا كيميائيا محددا للجزيئات عبر تأثيرات رامان غير الخطية. في CRI ، يتم تركيز اثنين من قطارات نبض الليزر ومسحها ضوئيا داخل عينة. يتم تعيين الفرق في الطاقة بين ترددات الليزر لاستهداف أوضاع الاهتزاز الخاصة بالهياكل الكيميائية ذات الاهتمام. نظرا لأن عمليات CRI غير خطية ، يتم إنشاء إشارة فقط عند تركيز المجهر ، مما يسمح بالتصوير المقطعي الدوائي ثلاثي الأبعاد للأنسجة. في سياق cPK ، تم استخدام CARS للحصول على معلومات هيكلية للأنسجة ، مثل موقع هياكل الجلد الغنية بالدهون15. في المقابل ، تم استخدام SRS لتحديد التركيز الجزيئي كميا لأن إشارته خطية مع تركيز. بالنسبة لعينات الجلد خارج الجسم الحي ، من المفيد تنفيذ CARS في الاتجاه epi-direction16 و SRS في وضع الإرسال17. لذلك ، فإن عينات الأنسجة الرقيقة ستسمح باكتشاف إشارة SRS وتحديدها كميا.
كنسيج نموذجي ، تقدم أذن الفأر العارية العديد من المزايا مع عيوب طفيفة. إحدى المزايا هي أن الأنسجة هي بالفعل ~ 200-300 ميكرومتر في السمك ولا تتطلب المزيد من إعداد العينات. بالإضافة إلى ذلك ، يتم رؤية العديد من الطبقات الجلدية من خلال التركيز المحوري من خلال مجال رؤية واحد (على سبيل المثال ، الطبقة القرنية ، الغدد الدهنية (SGs) ، الخلايا الشحمية ، والدهون تحت الجلد) 16،18. وهذا يسمح بالتقدير الأولي قبل السريري لمسارات النفاذية الجلدية وتقديرات BA الموضعية قبل الانتقال إلى عينات الجلد البشري. ومع ذلك ، فإن نموذج الماوس العاري يقدم قيودا مثل صعوبة الاستقراء إلى سيناريوهات في الجسم الحي بسبب الاختلافات في بنية الجلد19. في حين أن أذن الفأر العارية هي نموذج ممتاز للحصول على نتائج أولية ، فإن نموذج الجلد البشري هو المعيار الذهبي. على الرغم من وجود العديد من التعليقات حول مدى ملاءمة وقابلية تطبيق الجلد البشري المتجمد لتلخيص حركية نفاذية الجسم الحي بدقة 20،21،22 ، فإن استخدام الجلد البشري المتجمد هو طريقة مقبولة لتقييم حركية نفاذية API في المختبر 23،24،25 . يتصور هذا البروتوكول طبقات الجلد المختلفة في جلد الفأر والإنسان مع تحديد تركيزات API داخل الهياكل الغنية بالدهون والفقيرة بالدهون.
في حين تم استخدام CRI عبر العديد من المجالات لتصور المركبات داخل الأنسجة على وجه التحديد ، كانت هناك جهود محدودة للتحقيق في cPK للمنتجات الدوائية المطبقة موضعيا. لتقييم BA/BE الموضعي للمنتجات الموضعية باستخدام CRI، من الضروري أولا وجود بروتوكول موحد لإجراء مقارنات دقيقة. وقد أظهرت الجهود السابقة باستخدام CRI لتوصيل الأدوية إلى الجلد تباينا داخل البيانات. نظرا لأن هذا تطبيق جديد نسبيا ل CRI ، فإن إنشاء بروتوكول أمر بالغ الأهمية للحصول على نتائج موثوقة18،26،27. يستهدف هذا النهج رقما موجيا محددا واحدا فقط في المنطقة الصامتة بيولوجيا من طيف رامان. ومع ذلك ، فإن معظم واجهات برمجة التطبيقات والمكونات غير النشطة لها تحولات رامان داخل منطقة بصمات الأصابع. وقد شكل هذا في السابق تحديات بسبب الإشارة المتأصلة الناشئة عن الأنسجة في منطقة بصمات الأصابع. وقد أزالت التطورات الحديثة في الليزر والحوسبة هذا الحاجز ، والذي يمكن استخدامه أيضا بالاقتران مع النهج المعروض هنا28. يسمح هذا النهج المعروض هنا بالتحديد الكمي لواجهة برمجة التطبيقات ، والتي لديها تحول رامان في المنطقة الصامتة (2000-2300 سم - 1). هذا لا يقتصر على الخصائص الفيزيائية الكيميائية للدواء ، والتي قد يكون هذا هو الحال بالنسبة لبعض منهجيات مراقبة cPK المذكورة سابقا29.
يجب أن يقلل البروتوكول من التباين من عينة إلى عينة في سمك الجلد لمختلف المستحضرات ، حيث أن عينات الجلد البشري السميك ستنتج الحد الأدنى من الإشارة بعد تطبيق منتج الدواء بسبب تشتت الضوء بواسطة العينة السميكة. الهدف من هذه المخطوطة هو تقديم منهجية لإعداد الأنسجة تضمن معايير التصوير القابلة للتكرار. بالإضافة إلى ذلك ، يتم إعداد نظام CRI كما هو موضح لتقليل مصادر الخطأ المحتملة وكذلك تقليل الإشارة إلى الضوضاء. ومع ذلك ، لن تناقش هذه الورقة المبادئ التوجيهية والمزايا التقنية لمجهر CRI حيث تم تغطية ذلك سابقا30. وأخيرا، يتم استكشاف إجراء تحليل البيانات الشامل للسماح بتفسير النتائج لتحديد نجاح التجربة أو فشلها.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Biohazard Bags</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td>22-044562</td>
			<td>As refered to in text: biohazard bags 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-polyethylene-biohazard-autoclave-bags-without-sterilization-indicator-8/22044562?searchHijack=true&#38;searchTerm= 22044562&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=22044562</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Buffers: Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT21030CV</td>
			<td>As refered to in text: PBS 
			https://www.fishersci.com/shop/products/corning-cellgro-cell-culture-buffers-dulbecco-s-phosphate-buffered-salt-solution-1x-8/MT21030CV?searchHijack=true&#38;searchTerm= 21-030-cv&#38;searchType= RAPID&#38;matchedCatNo=21-030-cv</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpels</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>14-840-00</td>
			<td>As refered to in text: scalpel 
			https://www.fishersci.com/shop/products/exel-international-disposable-scalpels-3/1484000?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Precision 45&#176; Angle Broad Point Tweezers/Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-132</td>
			<td>As refered to in text: forceps 
			https://www.fishersci.com/shop/products/high-precision-45-angle-broad-point-tweezers-forceps/12000132#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science</td>
			<td>06-666</td>
			<td>As refered to in text: task wiper 
			https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/06666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Laboratory Wrapping Film</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>As refered to in text: parafilm 
			https://www.fishersci.com/shop/products/curwood-parafilm-m-laboratory-wrapping-film-4/1337412</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (35 mm x 10 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875711YZ</td>
			<td>As refered to in text: small petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-specialty-6/FB0875711YZ?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td>As refered to in text: large petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/FB0875713A?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>NC9411473</td>
			<td>As refered to in text: scissors 
			https://www.fishersci.com/shop/products/scissors-327/NC9411473?searchHijack=true&#38;searchTerm= RS-5915SC&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=RS-5915SC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser/microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>650/60 nm BrightLine single-band bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - CH2 vibrations (645nm/60nm filter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control box IX2-UCB</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Control Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D700/30m</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - deuterated band 
			https://www.chroma.com/products/parts/d700-30m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeepSee Insight</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Laser 
			https://www.spectra-physics.com/f/insight-x3-tunable-laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Handheld Optical Power and Energy Meter Console</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td>As refered to in text: power meter 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoview Software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope Control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Microscope Slides</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: microscope slides 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/22265446</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation Chamber</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>GM-800</td>
			<td>As refered to in text: incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrating Sphere Photodiode Power Sensor</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>S142C</td>
			<td>As refered to in text: photodiode 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply FV31-PSU</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Power Supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision 4063, 80MHz Dual Channel Function Generator</td>
			<td>BK Precision</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: function generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProScan &#8211; Precision Microscope Automation</td>
			<td>Prior Scientific Instruments</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: stage controller 
			https://www.prior.com/microscope-automation/inverted-microscope-systems/proscan-linear-stage-highest-precision-microscope-automation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SecureSeal Imaging Spacers</td>
			<td>Grace Biolabs</td>
			<td>654004</td>
			<td>As refered to in text: spacer 
			https://gracebio.com/product/secureseal-imaging-spacers-654004/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SRS Detection Kit</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: SRS detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UPLSAPO 20X NA:0.75</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: 20X Objective 
			https://www.olympus-lifescience.com/en/objectives/uplsapo/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid/Drug Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;35 mm Dish, No. 0 Uncoated Coverslip, 14 mm Glass Diameter</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>NC9711297</td>
			<td>As refered to in text: Glass bottom dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/glass-bottom-mircrowell-dish/nc9711297</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Cotton-tipped applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Postive Displacement Pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distriman-positive-displacement-repetitive-pipette/F164001G#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette Tips</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Tips for pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distritip-syringes-6/f164100g?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: FIJI/ImageJ 
			https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jupyter-Lab</td>
			<td>open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: JupyterLab 
			https://jupyter.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Rstudio 
			https://www.rstudio.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging

كانت الحرائك الدوائية الجلدية (cPK) بعد تطبيق التركيبة الموضعية مجالا بحثيا ذا أهمية خاصة للعلماء التنظيميين وتطوير الأدوية لفهم التوافر البيولوجي الموضعي (BA) ميكانيكيا. التقنيات شبه الغازية ، مثل تجريد الشريط ، أو غسيل الكلى المجهري الجلدي ، أو التروية الدقيقة الجلدية مفتوحة التدفق ، كلها تحدد كمية cPK على نطاق كبير. في حين أن هذه التقنيات قد وفرت معرفة واسعة ب cPK ، إلا أن المجتمع يفتقر إلى فهم ميكانيكي لاختراق المكونات الصيدلانية النشطة (API) ونفاذيتها على المستوى الخلوي. 
أحد الأساليب غير الباضعة لمعالجة cPK المجهري هو تصوير رامان المتماسك (CRI) ، والذي يستهدف بشكل انتقائي الاهتزازات الجزيئية الجوهرية دون الحاجة إلى ملصقات خارجية أو تعديل كيميائي. لدى CRI طريقتان رئيسيتان - تشتت رامان المضاد ل Stokes (CARS) وتشتت Raman المحفز (SRS) - اللذان يمكنان من تحديد كمي حساس وانتقائي لواجهات برمجة التطبيقات أو المكونات غير النشطة. يستخدم CARS عادة لاشتقاق معلومات الجلد الهيكلية أو تصور التباين الكيميائي. في المقابل ، يتم استخدام إشارة SRS ، وهي خطية ذات تركيز جزيئي ، لتحديد واجهات برمجة التطبيقات أو المكونات غير النشطة داخل طبقات الجلد. 
على الرغم من أن أنسجة الفئران قد استخدمت عادة ل cPK مع CRI ، إلا أنه يجب في نهاية المطاف تقييم BA الموضعي والتكافؤ الحيوي (BE) في الأنسجة البشرية قبل الموافقة التنظيمية. تقدم هذه الورقة منهجية لإعداد وتصوير الجلد خارج الجسم الحي لاستخدامها في دراسات CRI الحركية الدوائية الكمية في تقييم BA و BE الموضعية. تتيح هذه المنهجية تحديد كمية API الموثوقة والقابلة للتكرار داخل جلد الإنسان والفأر بمرور الوقت. يتم تحديد التركيزات داخل المقصورات الغنية بالدهون والفقيرة بالدهون ، وكذلك تركيز API الكلي بمرور الوقت ؛ وتستخدم هذه لتقديرات بكالوريوس الجزئي والكلي، وربما BE.

يعتبر التصوير ناجحا إذا لم يتحرك النسيج بشكل كبير في الاتجاه المحوري (<10 ميكرومتر) أو الجانبي عند الانتهاء من التجربة (الشكل 4). هذا مؤشر فوري إذا كان قياس SRS لواجهة برمجة التطبيقات ذات الأهمية لا يمثل العمق الأولي ، والذي يكون القياس الكمي خاصا بطبقته. يتم تخفيف ذلك عن طريق ت?...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging

يتم وصف منهجية تصوير رامان المتناثرة المتماسكة لتصور وقياس المركبات الصيدلانية داخل الجلد. تصف هذه الورقة إعداد أنسجة الجلد (الإنسان والفأر) وتطبيق التركيبة الموضعية ، والحصول على الصور لتحديد ملامح التركيز الزماني المكاني ، والتحليل الدوائي الأولي لتقييم توصيل الأدوية الموضعية.

تصور وقياس المركبات الصيدلانية داخل الجلد باستخدام التصوير المتماسك لتشتت رامان

Cutaneous pharmacokinetics (cPK) after topical formulation application has been a research area of particular interest for regulatory and drug development ...

هذه المنهجية مهمة من حيث أنها تسمح بطريقة قابلة للتكرار ودقيقة لتحديد كمية المنتجات الدوائية المطبقة موضعيا باستخدام تصوير رامان المتماسك. توفر منهجيات أخرى معلومات دوائية جلدية ضخمة ، في حين أن هذه المنهجية يمكن أن توفر معلومات دوائية جلدية سائبة ودقيقة مثل مسار تغلغل الدواء. وستسمح مسارات التصور والقياس الكمي والنفاذية بتطوير منتجات دوائية مع وضع مسار محدد في الاعتبار للوصول إلى الموقع المستهدف.سيثبت إعداد الأنسجة أنه الجزء الأكثر تحديا في هذه المنهجية. يجب أن تكون الأنسجة رقيقة بما فيه الكفاية بحيث يمكن للمرء أن يكون قادرا على القراءة من خلال الجلد. لبدء إعداد أنسجة جلد أذن الفأر عارية ، والحصول على الفئران العارية القتل الرحيم وإزالة آذان الفأر باستخدام ملقط ومقص الجراحة المجهرية.ثم ضع أذنا واحدة في طبق بتري كبير بحجم 60 ملم × 15 ملم. بعد ذلك ، اشطف أذن الماوس باستخدام PBS مرتين وجفف الأذن في كل مرة باستخدام ممسحة المهمة. إذا تم استخدامه في غضون 24 ساعة ، ضع الأذن في PBS في طبق صغير بتري 35 ملم × 10 ملم عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية.للاستخدام بعد 24 ساعة من الحصاد ، ضع الأذن في طبق بتري بدون PBS ، ثم قم بتغطية الطبق بالبارافيلم لتخزينه في الفريزر عند درجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر. أثناء العمل تحت الغطاء البيولوجي ، ضع أنسجة الجلد البشري في طبق بتري كبير مع جانب الطبقة القرنية متجها لأسفل بحيث يمكن الوصول إلى الدهون تحت الجلد. ثم استخدم الملقط والمقص المجهري لإزالة الدهون تحت الجلد.بمجرد أن لا يمكن إزالة الدهون تحت الجلد باستخدام المقص ، استخدم مشرطا يمكن التخلص منه من 10 شفرات بزاوية 45 درجة على الجلد لإزالة الدهون المتبقية تحت الجلد مع إبقاء الجلد ثابتا باستخدام الملقط. عندما تتم إزالة الدهون ، قسم جلد الإنسان إلى سنتيمتر واحد في قطعة سنتيمتر واحد. لتصوير الدهون ، ضع الجزء الأمامي من أذن الماوس متجها نحو الجزء السفلي الزجاجي من طبق 35 ملم ، رقم صفر.بالنسبة لجلد الإنسان ، ضع الجلد مع الطبقة القرنية المواجهة لأسفل للسماح بتحديد كمية الدواء من الطبقات السطحية إلى الطبقات العميقة. بمجرد تركيز الأنسجة على القاع الزجاجي ، استخدم قضيب طرف القطن للتأكد من أن الجلد مسطح ولديه اتصال كامل مع سطح انزلاق الغطاء في الطبق السفلي الزجاجي. لمنع أي حركة أثناء التصوير ، ضع غسالة فوق الجلد وتأكد من أن الأنسجة مرئية من خلال الثقب المركزي للغسالة لتحفيز تشتت رامان أو الكشف عن انتقال SRS.ضعي الجرعة المحددة مسبقا من التركيبة على الجلد ، ثم استخدمي إصبعا قفازا لفرك التركيبة في اتجاه عقارب الساعة لمدة 30 ثانية. بعد انقضاء الوقت المخصص لتخلل التركيبة ، قم بإزالة التركيبة الزائدة قبل وضع الجلد مع توجيه جانب التركيبة نحو الطبق السفلي الزجاجي. بعد ذلك ، انتقل إلى الإعداد التجريبي عن طريق تشغيل برنامج التحكم في المجهر أو MC.بالنظر إلى العدسة ، اضبط التركيز البؤري المحوري باستخدام مقبض الضبط للتأكد من أن الأنسجة ضمن نطاق التركيز البؤري. عند الانتهاء، قم بإلغاء حظر كل من المضخة وحزم ستوكس وتأكد من تمكين قنوات ALG1 و ALG2. تأكد من أن الصمام الثنائي الضوئي SRS في موضعه فوق المكثف، ثم انقر فوق التركيز x2 على برنامج MC لتصور الجلد في قناتي CARS وSRS.في الفاصل الزمني متعدد المناطق أو وحدة MATL ، انتقل إلى علامة التبويب عرض وانقر فوق قائمة النقاط المسجلة لإظهار قائمة التصوير. بمجرد تحديد الطبقة القرنية، قم بالتمرير عبر التركيز المحوري أو التركيز Z لتحديد طبقات الأنسجة المحددة. يمكن إضافة أعماق محددة داخل الجلد مثل الطبقة القرنية أو الغدد الدهنية أو الخلايا الشحمية أو الدهون تحت الجلد ، كما هو محدد أثناء التصوير الحي مع تباين مضبوط للدهون.ومع ذلك ، إذا كان سيتم أخذ مكدسات العمق بالكامل ، فيمكن إضافة مواضع XY ، ويمكن تجاهل موضع Z النسبي. في حالة تصوير عمق محدد لكل تقسيم طبقي للجلد ، حدد نقطة التسجيل لإضافتها إلى قائمة انتظار MATL. بالنسبة إلى مكدسات العمق الكاملة، انقر فوق تسجيل نقطة لكل موضع XY مع تحديد العمق في نافذة معلمات الاستحواذ.بعد ذلك ، قم بتعيين عدد التكرارات إلى واحد في وحدة MATL النمطية وانقر فوق جاهز. عندما يتغير سهم "تشغيل" من الرمادي إلى الأسود، اضغط على "تشغيل" لبدء تصوير مكدس الدهون الأولي. بمجرد الانتهاء من دورة التصوير ، قم بحظر كل من المضخة وحزم ستوكس وتغيير الطول الموجي على واجهة المستخدم الرسومية بالليزر إلى الطول الموجي المطلوب بناء على رقم الموجة المستهدفة أو اهتزاز رامان.اضبط مرحلة تأخير الوقت اليدوي مع التأكد من استخدام نفس القوى لتصوير المكون الدهني والصيدلاني النشط أو واجهة برمجة التطبيقات التي تم إنشاؤها مسبقا. بمجرد اختيار العدد الإجمالي لتكرار الدورة، قم بإلغاء حظر شعاع المضخة وتحقق مما إذا كانت الطاقة تتطابق مع الطاقة المطلوبة باستخدام الصمام الثنائي الضوئي قبل الضغط على Play لبدء التصوير التلقائي للنقاط المحددة. بعد ذلك ، قم بإجراء تحليل البيانات لكل تقسيم طبقي للجلد عن طريق استيراد صورة دهنية للغدة الدهنية إلى فيجي وتحديد المربع المسمى قنوات Split لتقسيم الملف إلى قنوات CARS و SRS.لفتح منطقة الاهتمام أو مدير عائد الاستثمار ، انقر فوق تحليل وأدوات ومدير عائد الاستثمار. باستخدام قناة SRS بحيث C يساوي واحدا، قم بإزالة تحديد الغدة الدهنية في الصورة وأضف العلامات إلى مدير عائد الاستثمار بالنقر فوق إضافة T في إدارة عائد الاستثمار. كرر العملية لكل غدة دهنية داخل الصورة.لإخفاء المناطق الغنية بالدهون، حدد كل عائد استثمار ثم انقر فوق المزيد، أو دمج، وإضافة علامات تبويب. لإخفاء المناطق الفقيرة بالدهون ، استخدم أداة المستطيل في قائمة فيجي وارسم مربعا حول الصورة بأكملها. أضف المنطقة إلى إدارة عائد الاستثمار.انقر على عائد الاستثمار المربع المضاف حديثا بالإضافة إلى عائد الاستثمار الذي يحدد جميع المناطق الغنية بالدهون في مدير عائد الاستثمار. ضمن المزيد، حدد XOR لإنشاء قناع للمناطق الفقيرة بالدهون وإضافته إلى مدير عائد الاستثمار. قم بتسلسل الصور بترتيب رقمي من خلال الانتقال إلى الصورة والمكدسات والأدوات وعلامات التبويب المتسلسلة بالترتيب.بدلا من ذلك ، قم باستيراد الصور عن طريق تحميل واحدة إلى فيجي ثم تحديد خيار يسمى تجميع الملفات ذات الأسماء المتشابهة في صفحة الإعداد. أثناء تنشيط الصورة المتسلسلة ، انتقل إلى مدير عائد الاستثمار لتحديد المناطق الغنية بالدهون وانقر فوق علامة التبويب المزيد قبل تحديد القياس المتعدد ، ثم انتظر حتى تظهر نافذة النتائج. من نافذة النتائج، قم بتصدير البيانات إلى جدول بيانات وأضف عمودا بعنوان المنطقة لإضافة مناطق غنية بالدهون إلى كل صف من صفوف البيانات.أضف الدهون الفقيرة إلى المناطق التي كانت خارج الدهون. لتصور البيانات، احفظ جدول البيانات واستورده إلى حزمة R، ggplot2. ثم ارسم البيانات كدالة لرقم الصورة مقابل متوسط الكثافة لتقدير بيانات وقت التركيز.قم بتشغيل التحليل غير المجزأ أو NCA في RStudio على بيانات وقت الكثافة المستوردة من جدول البيانات مع استدعاء طبقة واحدة. عند الانتهاء من ذلك ، قم برسم ومقارنة مقاييس Jmax و AUCflux-all بصريا. بالإضافة إلى ذلك ، قم بإجراء مقارنات إحصائية عبر الظروف التجريبية.يصور التحليل التمثيلي الطبقة القرنية ، والغدد الدهنية ، والخلايا الشحمية ، والدهون تحت الجلد من جلد أذن الفأر العاري ، والطبقة القرنية ، والأدمة الحليمية ، والغدة الدهنية من جلد الإنسان. في جلد أذن الفأر العاري ، لوحظت حركة الأنسجة المحدودة للغدد الدهنية بنفس عمق أنسجة الغدد في وقت تطبيق التركيبة وبعد 120 دقيقة من التطبيق. أظهرت حركة الأنسجة الكبيرة في الجلد غدد دهنية بالكاد مرئية بعد 120 دقيقة من تطبيق الدواء ، مما يدل على عدم كفاءة البروتوكول الأصلي.في العديد من الدراسات ، أظهرت ملامح الكثافة مقابل الوقت تركيزات أولية عالية ، تليها تركيزات متناقصة ، مما يشير إلى عدم وجود امتصاص آخر للدواء في الأنسجة. من ناحية أخرى ، أشارت بعض الدراسات إلى ارتفاع في الشدة التي انخفضت لاحقا خلال الفترة التجريبية ، مما يدل على أن التدفق إلى الأنسجة لم يصل إلى الحد الأقصى قبل التصوير. وأشار تحليل NCA لملامح وقت التركيز لتركيبتين لنفس واجهة برمجة التطبيقات إلى أن الإيثوكسي - إيثوكسي إيثانول يوفر نفاذية API موسعة مقارنة بتركيبة الجل بغض النظر عن طبقة الجلد.أظهر تحليل التعرض الكلي بين نفس التركيبات ملاحظات مماثلة في الطبقات العميقة من الجلد. يعد تحضير جلد الإنسان ووضع الجلد بشكل صحيح على الطبق السفلي الزجاجي بعد تطبيق الدواء أمرا بالغ الأهمية لنجاح التجربة. وتبين الحلول الواضحة هنا مدى ملاءمة هذه المنهجية.وسيشمل المزيد من الأبحاث تركيبات مسوقة مثل الكريمات لفهم كيفية تأثير التركيبة على اختراق واجهة برمجة التطبيقات ونفاذيتها.

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

دقيقة وبسيطة قياس الموالية للالتهابات سايتوكاين 1β ايل باستخدام تحفيز الدم الجامعة الفحص

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

الكمية التصور والكشف عن سرطان الجلد باستخدام التصوير الحراري الديناميكي

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

MALDI Imaging Mass Spectrometry of Neuropeptides in Parkinson's Disease

MALDI الطيف الكتلي التصوير من نيوروببتيد في مرض باركنسون

MALDI imaging mass spectrometry (IMS) is a powerful approach that facilitates the spatial analysis of molecular species in biological tissue samples2 ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

كيرينكوف التلألؤ التصوير من الأنسجة الدهنية بين الكتفين براون

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

البوفيدون اليود إعداد المستقيم في وقت البروستاتا إبرة الخزعة هو وسيلة بسيطة وقابلة للتكرار للحد من مخاطر العدوى الإجرائي

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

التصوير نيون المشتركة القريبة من تحت الحمراء والتصوير المقطعي مايكرو لتصور مباشرة الشلل Thromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

استخدام متعدد المفلورة الأحماض الصفراوية و<em&gt; في فيفو</em&gt; التصوير بالرنين المغناطيسي لقياس الصفراء النقل حمض

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

حمل إصابة نقص التروية ضخه في الجلد الأذن ماوس لحيوي داخلي Multiphoton التصوير من الاستجابات المناعية

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

التصور الكمي من التسلل الكريات البيض في نموذج الفئران من التهاب عضلة القلب مداهم من قبل ورقة ضوء المجهري

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

التقييم السريع لسمية المركبات الكيميائية باستخدام أجنة سمك الحمار الوحشي

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...