Name: visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging
Uploaded: 2021-11-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke Dr. Fotis Iliopoulos og Daniel Greenfield fra Evans' Gruppe for deres diskussion og korrekturlæsning af dette manuskript. Derudover vil forfatterne gerne kvittere for støtten fra LEO Pharma. Figur 2 blev oprettet med BioRender.com.

Brugen af nøgent museørevæv blev godkendt af Massachusetts General Hospital Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), mens brugen af humant hudvæv blev godkendt af Massachusetts General Hospital Institutional Review Board (IRB). Ifølge IACUC-protokoller blev der opnået nyligt aflivede mus fra samarbejdspartnere med nøgne muskolonier. Humant væv blev indkøbt fra elektive abdominoplastikprocedurer på Massachusetts General Hospital via en godkendt protokol. Derudover blev specifikke vævstyper bortset f...

<ol>
	<li>Finnin, B., Walters, K. A., Franz, T. J., Benson, H. E., Watkinson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+skin+permeation+methodology.+In+Transdermal+and+topical+drug+delivery:+principles+and+methodology.">In vitro skin permeation methodology. In Transdermal and topical drug delivery: principles and methodology.</a> Transdermal and topical drug delivery: principles and practice. , 85-108 (2012).</li><li>Shin, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+road+to+development+of+an+in+vitro+permeation+test+(IVPT)+model+to+compare+heat+effects+on+transdermal+delivery+systems:+exploratory+studies+with+nicotine+and+fentanyl.">On the road to development of an in vitro permeation test (IVPT) model to compare heat effects on transdermal delivery systems: exploratory studies with nicotine and fentanyl.</a> Pharmaceutical Research. 34 (9), 1817-1830 (2017).</li><li>Hossain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterisation,+and+topical+delivery+of+terbinafine.">Preparation, characterisation, and topical delivery of terbinafine.</a> Pharmaceutics. 11 (10), 548 (2019).</li><li>Santos, L. L., Swofford, N. J., Santiago, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+permeation+test+(IVPT)+for+pharmacokinetic+assessment+of+topical+dermatological+formulations.">In vitro permeation test (IVPT) for pharmacokinetic assessment of topical dermatological formulations.</a> Current Protocols in Pharmacology. 91 (1), 79 (2020).</li><li>Iliopoulos, F., Caspers, P. J., Puppels, G. J., Lane, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Franz+cell+diffusion+testing+andquantitative+confocal+Raman+spectroscopy:+In+vitro-in+vivo+correlation.">Franz cell diffusion testing andquantitative confocal Raman spectroscopy: In vitro-in vivo correlation.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 887 (2020).</li><li>Cordery, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+bioavailability+of+diclofenac+from+locally-acting,+dermatological+formulations.">Topical bioavailability of diclofenac from locally-acting, dermatological formulations.</a> International Journal of Pharmaceutics. 529 (1-2), 55-64 (2017).</li><li>Pensado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stratum+corneum+sampling+to+assess+bioequivalence+between+topicalacyclovir+products.">Stratum corneum sampling to assess bioequivalence between topicalacyclovir products.</a> Pharmaceutical Research. 36 (12), 1-16 (2019).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+delivery+of+niacinamide-in+vivo+studies.">Dermal delivery of niacinamide-in vivo studies.</a> Pharmaceutics. 13 (5), 726 (2021).</li><li>Bodenlenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+flow+microperfusion+as+a+dermal+pharmacokinetic+approach+to+evaluate+topical+bioequivalence.">Open flow microperfusion as a dermal pharmacokinetic approach to evaluate topical bioequivalence.</a> Clinical Pharmacokinetics. 56 (1), 91-98 (2017).</li><li>Eirefelt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dermal+pharmacokinetics+and+pharmacodymanic+effect+of+soft+topical+PDE4+inhibitors:Open+flow+microperfusion+and+skin+biopsies.">Evaluating dermal pharmacokinetics and pharmacodymanic effect of soft topical PDE4 inhibitors:Open flow microperfusion and skin biopsies.</a> Pharmaceutical Research. 37 (12), 1-12 (2020).</li><li>Stagni, G., O'Donnell, D., Liu, Y. J., Kellogg, J. D. L., Shepherd, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iontophoretic+current+and+intradermal+microdialysis+recovery+in+humans.">Iontophoretic current and intradermal microdialysis recovery in humans.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 41 (1), 49-54 (1999).</li><li>Garcia Ortiz, P., Hansen, S. H., Shah, V. P., Menne, T., Benfeldt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+adultatopic+dermatitis+on+topical+drug+penetration:+assessment+by+cutaneous+microdialysis+and+tape+stripping.">Impact of adultatopic dermatitis on topical drug penetration: assessment by cutaneous microdialysis and tape stripping.</a> Acta Dermato-Venereologica. 89 (1), 33-38 (2009).</li><li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis:+Continuous+intermittent+vs+continuous-only+sampling.">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li><li>Kuzma, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+local+bioavailability+of+metronidazole+from+topical+formulations+using+dermal+microdialysis:+Preliminary+study+in+a+Yucatan+mini-pig+model.">Evaluation of local bioavailability of metronidazole from topical formulations using dermal microdialysis: Preliminary study in a Yucatan mini-pig model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105741 (2021).</li><li>Begley, R., Harvey, A., Byer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.Coherent+anti-Stokes+Raman+spectroscopy.">L.Coherent anti-Stokes Raman spectroscopy.</a> Applied Physics Letters. 25 (7), 387-390 (1974).</li><li>Evans, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+imaging+of+tissue+in+vivo+with+video-rate+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (46), 16807-16812 (2005).</li><li>Hill, A. H., Manifold, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+imaging+depth+limit+of+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Tissue imaging depth limit of stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 11 (2), 762-774 (2020).</li><li>Feizpour, A., Marstrand, T., Bastholm, L., Eirefelt, S., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantification+of+pharmacokinetics+in+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy+and+deep+learning.">Label-free quantification of pharmacokinetics in skin with stimulated Raman scattering microscopy and deep learning.</a> Journal of Investigative Dermatology. 141 (2), 395-403 (2021).</li><li>Ghosh, B., Reddy, L. H., Kulkarni, R. V., Khanam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+skin+permeability+of+drugs+in+mice+and+human+cadaver+skin.">Comparison of skin permeability of drugs in mice and human cadaver skin.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 38 (1), 42-45 (2000).</li><li>Nielsen, J. B., Plasencia, I., S&#248;rensen, J. A., Bagatolli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Storage+conditions+of+skin+affect+tissue+structure+and+subsequent+in+vitro+percutaneous+penetration.">Storage conditions of skin affect tissue structure and subsequent in vitro percutaneous penetration.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 24 (2), 93-102 (2011).</li><li>Barbero, A. M., Frasch, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+frozen+human+epidermis+storage+duration+and+cryoprotectant+on+barrier+function+using+two+model+compounds.">Effect of frozen human epidermis storage duration and cryoprotectant on barrier function using two model compounds.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 29 (1), 31-40 (2016).</li><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+various+methods+of+cold+storage+of+skin+on+the+permeation+of+melatonin+and+nimesulide.">The influence of various methods of cold storage of skin on the permeation of melatonin and nimesulide.</a> Journal of Controlled Release. 86 (1), 49-57 (2003).</li><li>Skelly, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+and+AAPS+report+of+the+workshop+on+principles+and+practices+of+in+vitro+percutaneous+penetration+studies:+relevance+to+bioavailability+and+bioequivalence.">FDA and AAPS report of the workshop on principles and practices of in vitro percutaneous penetration studies: relevance to bioavailability and bioequivalence.</a> Pharmaceutical Research. 4 (3), 265-267 (1987).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+for+the+conduct+of+skin+absorption+studies.">Guidance document for the conduct of skin absorption studies.</a> OECD. , (2004).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test+no.+428:+Skin+absorption:+In+vitro+method.">Test no. 428: Skin absorption: In vitro method.</a> OECD. , (2004).</li><li>Saar, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-rate+molecular+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering.">Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering.</a> Science. 330 (6009), 1368-1370 (2010).</li><li>Saar, B. G., Contreras-Rojas, L. R., Xie, X. S., Guy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+drug+delivery+to+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Imaging drug delivery to skin with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Molecular Pharmaceutics. 8 (3), 969-975 (2011).</li><li>Pence, I. J., Kuzma, B. A., Brinkmann, M., Hellwig, T., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-windowsparse+spectral+sampling+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Multi-windowsparse spectral sampling stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6095-6114 (2021).</li><li>Herkenne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+methods+for+the+assessment+of+topical+drug+bioavailability.">In vivo methods for the assessment of topical drug bioavailability.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 87-103 (2008).</li><li>Alfonso-Garc&#305;a, A., Mittal, R., Lee, E. S., Potma, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+with+coherent+Raman+scattering+microscopy:+a+tutorial.">Biological imaging with coherent Raman scattering microscopy: a tutorial.</a> Journal of Biomedical Optics. 19 (7), 071407 (2014).</li><li>Osseiran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+monitoring+of+cancer+cell+subpopulations+in+monolayers,+3D+spheroids,+and+xenografts+using+the+photoconvertible+dye+DiR.">Longitudinal monitoring of cancer cell subpopulations in monolayers, 3D spheroids, and xenografts using the photoconvertible dye DiR.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-10 (2019).</li><li>Evennett, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kohler+illumination:+a+simple+interpretation.">Kohler illumination: a simple interpretation.</a> Proceedings of the Royal Microscopical Society. 28 (4), 189-192 (1983).</li><li>Sanderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+microscopy.">Fundamentals of microscopy.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 10 (2), 76 (2020).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Hunter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matplotlib:+A+2D+graphics+environment.">Matplotlib: A 2D graphics environment.</a> Computing in Science &amp; Engineering. 9 (3), 90-95 (2007).</li><li>Wickham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. , (2016).</li><li>Kim, H., Han, S., Cho, Y. S., Yoon, S. K., Bae, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+R+packages:'Non-Compart'+and+'ncar'+for+noncompartmental+analysis+(NCA).">Development of R packages:'Non-Compart' and 'ncar' for noncompartmental analysis (NCA).</a> Translational and Clinical Pharmacology. 26 (1), 10-15 (2018).</li></ol>

Evalueringen af aktuel BA / BE er et forskningsområde, der kræver en mangesidet tilgang, da ingen enkelt metode fuldt ud kan karakterisere in vivo cPK. Denne protokol præsenterer en metode til evaluering af et topisk lægemiddels BA / BE baseret på sammenhængende Raman-billeddannelse. Et af de første punkter, der kan overses, er, hvor tynde hudprøverne skal være, især til kvantitativ transmission SRS-billeddannelse. Hvis huden er for tyk (dvs. lys kan ikke let passere igennem), er der lidt elle...

Metoder til vurdering af cPK efter anvendelse af topisk lægemiddelprodukt er udvidet fra klassiske in vitro-permeationstest (IVPT) undersøgelser 1,2,3,4,5 og tape-stripping 6,7,8 til yderligere metoder såsom open-flow mikroperfusion eller dermal mikrodialyse 9,10,11, 12,13,14. Der er potentielt forskellige lokale steder med terapeutisk virkning afhængigt af sygdommen af interesse. Der kan derfor være et tilsvarende antal metoder til at vurdere, hvor hurtigt og i hvilket omfang en API kommer til det tilsigtede lokale handlingssted. Mens hver af de ovennævnte metoder har sine fordele, er den største ulempe manglen på cPK-information i mikroskala (dvs. manglende evne til at visualisere, hvor API'en går, og hvordan den gennemsyrer).
En ikke-invasiv metode af interesse for at estimere topisk BA og BE er CRI, som kan opdeles i to billeddannelsesmetoder: CARS og SRS-mikroskopi. Disse sammenhængende Raman-metoder muliggør kemisk specifik billeddannelse af molekyler via ikke-lineære Raman-effekter. I CRI fokuseres og scannes to laserpulstog i en prøve; forskellen i energi mellem laserfrekvenserne er indstillet til at målrette vibrationstilstande, der er specifikke for de kemiske strukturer af interesse. Da CRI-processer er ikke-lineære, genereres der kun et signal ved mikroskopfokus, hvilket muliggør tredimensionel farmakokinetisk tomografisk billeddannelse af vævet. I forbindelse med cPK er CARS blevet brugt til at opnå vævsstrukturel information, såsom placeringen af lipidrige hudstrukturer15. I modsætning hertil er SRS blevet brugt til at kvantificere molekylær koncentration, da dets signal er lineært med koncentration. For ex vivo hudprøver er det fordelagtigt at udføre CARS i epi-retning16 og SRS i transmissionstilstand17. Derfor vil vævsprøver, der er tynde, muliggøre SRS-signaldetektion og kvantificering.
Som modelvæv giver det nøgne museøre flere fordele med mindre ulemper. En fordel er, at vævet allerede er ~ 200-300 μm i tykkelse og ikke kræver yderligere prøveforberedelse. Derudover ses flere hudstratifikationer ved aksialt fokusering gennem et synsfelt (f.eks. Stratum corneum, talgkirtler (SG'er), adipocytter og subkutant fedt)16,18. Dette giver mulighed for foreløbig præklinisk estimering af kutane permeationsveje og topiske BA-estimater, inden de flyttes til humane hudprøver. Den nøgne musemodel præsenterer imidlertid begrænsninger såsom vanskeligheder med ekstrapolering til in vivo-scenarier på grund af forskelle i hudstruktur19. Mens det nøgne museøre er en fremragende model til at opnå foreløbige resultater, er den menneskelige hudmodel guldstandarden. Selv om der har været forskellige kommentarer til egnetheden og anvendeligheden af frossen menneskelig hud til nøjagtigt at rekapitulere in vivo-permeationskinetik 20,21,22, er brugen af frossen menneskelig hud en accepteret metode til evaluering af in vitro API-permeationskinetik 23,24,25 . Denne protokol visualiserer forskellige hudlag i mus og menneskelig hud, mens den kvantificerer API-koncentrationer inden for lipidrige og lipidfattige strukturer.
Mens CRI er blevet brugt på tværs af adskillige felter til specifikt at visualisere forbindelser i væv, har der været begrænset indsats for at undersøge cPK af topisk anvendte lægemiddelprodukter. For at evaluere den aktuelle BA / BE af aktuelle produkter ved hjælp af CRI er det nødvendigt først at have en standardiseret protokol på plads for at foretage nøjagtige sammenligninger. Tidligere bestræbelser på at bruge CRI til lægemiddellevering til huden har vist variabilitet inden for dataene. Da dette er en relativt ny anvendelse af CRI, er etablering af en protokol afgørende for at opnå pålidelige resultater 18,26,27. Denne tilgang er kun rettet mod et specifikt bølgetal i det biologiske tavse område af Raman-spektret. Imidlertid har de fleste API'er og inaktive ingredienser Raman-skift inden for fingeraftryksområdet. Dette har tidligere givet udfordringer på grund af det iboende signal, der stammer fra vævet i fingeraftryksområdet. Nylige laser- og beregningsmæssige fremskridt har fjernet denne barriere, som også kan bruges i kombination med den tilgang, der præsenteres her28. Denne tilgang, der præsenteres her, giver mulighed for kvantificering af en API, som har et Raman-skift i det tavse område (2.000-2.300 cm-1). Dette er ikke begrænset til lægemidlets fysiokemiske egenskaber, hvilket kan være tilfældet for nogle tidligere nævnte cPK-overvågningsmetoder29.
Protokollen skal reducere variationen mellem prøver og prøver i hudtykkelsen for forskellige præparater, da tykke humane hudprøver vil producere minimalt signal efter påføring af lægemiddelprodukt på grund af lysspredning af den tykke prøve. Et mål med dette manuskript er at præsentere en vævsforberedelsesmetode, der sikrer reproducerbare billeddannelsesstandarder. Derudover er CRI-systemet opsat som beskrevet for at reducere potentielle fejlkilder samt minimere signal-til-støj. Dette dokument vil imidlertid ikke diskutere de vejledende principper og tekniske fordele ved CRI-mikroskopet, da dette tidligere er blevet dækket30. Endelig undersøges den omfattende dataanalyseprocedure for at muliggøre fortolkning af resultaterne for at bestemme et eksperiments succes eller fiasko.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Biohazard Bags</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td>22-044562</td>
			<td>As refered to in text: biohazard bags 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-polyethylene-biohazard-autoclave-bags-without-sterilization-indicator-8/22044562?searchHijack=true&#38;searchTerm= 22044562&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=22044562</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Buffers: Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT21030CV</td>
			<td>As refered to in text: PBS 
			https://www.fishersci.com/shop/products/corning-cellgro-cell-culture-buffers-dulbecco-s-phosphate-buffered-salt-solution-1x-8/MT21030CV?searchHijack=true&#38;searchTerm= 21-030-cv&#38;searchType= RAPID&#38;matchedCatNo=21-030-cv</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpels</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>14-840-00</td>
			<td>As refered to in text: scalpel 
			https://www.fishersci.com/shop/products/exel-international-disposable-scalpels-3/1484000?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Precision 45&#176; Angle Broad Point Tweezers/Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-132</td>
			<td>As refered to in text: forceps 
			https://www.fishersci.com/shop/products/high-precision-45-angle-broad-point-tweezers-forceps/12000132#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science</td>
			<td>06-666</td>
			<td>As refered to in text: task wiper 
			https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/06666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Laboratory Wrapping Film</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>As refered to in text: parafilm 
			https://www.fishersci.com/shop/products/curwood-parafilm-m-laboratory-wrapping-film-4/1337412</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (35 mm x 10 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875711YZ</td>
			<td>As refered to in text: small petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-specialty-6/FB0875711YZ?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td>As refered to in text: large petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/FB0875713A?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>NC9411473</td>
			<td>As refered to in text: scissors 
			https://www.fishersci.com/shop/products/scissors-327/NC9411473?searchHijack=true&#38;searchTerm= RS-5915SC&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=RS-5915SC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser/microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>650/60 nm BrightLine single-band bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - CH2 vibrations (645nm/60nm filter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control box IX2-UCB</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Control Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D700/30m</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - deuterated band 
			https://www.chroma.com/products/parts/d700-30m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeepSee Insight</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Laser 
			https://www.spectra-physics.com/f/insight-x3-tunable-laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Handheld Optical Power and Energy Meter Console</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td>As refered to in text: power meter 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoview Software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope Control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Microscope Slides</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: microscope slides 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/22265446</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation Chamber</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>GM-800</td>
			<td>As refered to in text: incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrating Sphere Photodiode Power Sensor</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>S142C</td>
			<td>As refered to in text: photodiode 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply FV31-PSU</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Power Supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision 4063, 80MHz Dual Channel Function Generator</td>
			<td>BK Precision</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: function generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProScan &#8211; Precision Microscope Automation</td>
			<td>Prior Scientific Instruments</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: stage controller 
			https://www.prior.com/microscope-automation/inverted-microscope-systems/proscan-linear-stage-highest-precision-microscope-automation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SecureSeal Imaging Spacers</td>
			<td>Grace Biolabs</td>
			<td>654004</td>
			<td>As refered to in text: spacer 
			https://gracebio.com/product/secureseal-imaging-spacers-654004/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SRS Detection Kit</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: SRS detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UPLSAPO 20X NA:0.75</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: 20X Objective 
			https://www.olympus-lifescience.com/en/objectives/uplsapo/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid/Drug Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;35 mm Dish, No. 0 Uncoated Coverslip, 14 mm Glass Diameter</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>NC9711297</td>
			<td>As refered to in text: Glass bottom dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/glass-bottom-mircrowell-dish/nc9711297</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Cotton-tipped applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Postive Displacement Pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distriman-positive-displacement-repetitive-pipette/F164001G#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette Tips</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Tips for pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distritip-syringes-6/f164100g?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: FIJI/ImageJ 
			https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jupyter-Lab</td>
			<td>open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: JupyterLab 
			https://jupyter.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Rstudio 
			https://www.rstudio.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging

Kutan farmakokinetik (cPK) efter anvendelse af topisk formulering har været et forskningsområde af særlig interesse for forskere inden for regulering og lægemiddeludvikling til mekanisk at forstå topisk biotilgængelighed (BA). Semi-invasive teknikker, såsom tape-stripping, dermal mikrodialyse eller dermal open-flow mikroperfusion, kvantificerer alle makroskala cPK. Mens disse teknikker har givet stor cPK-viden, mangler samfundet en mekanistisk forståelse af aktiv farmaceutisk ingrediens (API) penetration og gennemtrængning på cellulært niveau. 
En ikke-invasiv tilgang til at håndtere mikroskala cPK er sammenhængende Raman scattering imaging (CRI), som selektivt målretter mod iboende molekylære vibrationer uden behov for ydre etiketter eller kemisk modifikation. CRI har to hovedmetoder - sammenhængende anti-Stokes Raman scattering (CARS) og stimuleret Raman scattering (SRS) - der muliggør følsom og selektiv kvantificering af API'er eller inaktive ingredienser. CARS bruges typisk til at udlede strukturel hudinformation eller visualisere kemisk kontrast. I modsætning hertil bruges SRS-signalet, som er lineært med molekylær koncentration, til at kvantificere API'er eller inaktive ingredienser inden for hudstratifikationer. 
Selvom musevæv almindeligvis er blevet brugt til cPK med CRI, skal topisk BA og bioækvivalens (BE) i sidste ende vurderes i humant væv inden lovgivningsmæssig godkendelse. Dette papir præsenterer en metode til at forberede og afbilde ex vivo-hud , der skal anvendes i kvantitative farmakokinetiske CRI-undersøgelser i evalueringen af topisk BA og BE. Denne metode muliggør pålidelig og reproducerbar API-kvantificering inden for hud til mennesker og mus over tid. Koncentrationerne inden for lipidrige og lipidfattige rum samt den samlede API-koncentration over tid kvantificeres; disse anvendes til estimater af mikro- og makroskala BA og potentielt BE.

Billeddannelse betragtes som vellykket, hvis vævet ikke har bevæget sig signifikant i enten aksial (<10 μm) eller lateral retning efter afslutningen af eksperimentet (figur 4). Dette er en umiddelbar indikation, hvis SRS-målingen for den pågældende API-api ikke er repræsentativ for den oprindelige dybde, for hvilken kvantificeringen er lagspecifik. Dette afbødes ved at afbilde z-stacks for hver XY-position af interesse, hvor afvejningerne er den tidsmæssige opløsning. Hvis frossen ...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging

En sammenhængende Raman scattering imaging metode til at visualisere og kvantificere farmaceutiske forbindelser i huden er beskrevet. Dette papir beskriver hudvævsforberedelse (human og mus) og topisk formuleringsapplikation, billedoptagelse for at kvantificere spatiotemporale koncentrationsprofiler og foreløbig farmakokinetisk analyse for at vurdere topisk lægemiddellevering.

Visualisering og kvantificering af farmaceutiske forbindelser i huden ved hjælp af sammenhængende Raman Scattering Imaging

Cutaneous pharmacokinetics (cPK) after topical formulation application has been a research area of particular interest for regulatory and drug development ...

Denne metode er signifikant, fordi den giver mulighed for reproducerbar og nøjagtig metode til at kvantificere topisk anvendte lægemiddelprodukter ved hjælp af sammenhængende Raman-billeddannelse. Andre metoder giver omfangsrige kutane farmakokinetiske oplysninger, mens denne metode kan give både kutan farmakokinetisk information i bulk og mikroskala, såsom permeationsvejen for et lægemiddel. Visualiserings- og kvantificerings- og permeationsveje vil gøre det muligt at udvikle lægemiddelprodukter med en bestemt vej i tankerne for at nå målstedet.Vævsforberedelse vil vise sig at være den mest udfordrende del af denne metode. Vævet skal være tilstrækkeligt tyndt, så man kan læse gennem huden. For at begynde forberedelsen af et nøgent ørehindenvæv med musen skal du erhverve euthaniserede nøgne mus og fjerne musens ører ved hjælp af tang og mikrokirurgisk saks.Anbring derefter det ene øre i en stor petriskål i størrelse 60 millimeter ved 15 millimeter. Skyl derefter museøret med PBS to gange og dup øret tørt hver gang med opgaveviskeren. Hvis det bruges inden for 24 timer, skal du placere øret i PBS i en lille, 35 millimeter ved 10 millimeter petriskål ved to til otte grader Celsius.For at bruge efter 24 timers høst skal du placere øret i en petriskål uden PBS og derefter dække skålen med parafilm til opbevaring i en fryser ved minus 20 grader Celsius. Mens du arbejder under den biologiske hætte, skal du placere det menneskelige hudvæv i en stor petriskål med stratum corneum-siden nedad, så det subkutane fedt er tilgængeligt. Brug derefter tang og mikrokirurgisk saks til at fjerne det subkutane fedt.Når subkutant fedt ikke længere kan fjernes med saksen, skal du bruge en 10-bladet engangsskalpel i en 45 graders vinkel på huden for at fjerne det resterende subkutane fedt, mens du holder huden stille med tang. Når fedtet fjernes, skal du dele den menneskelige hud i en centimeter med en centimeter stykker. Til lipidbilleddannelse skal du placere den forreste del af museøret, der vender mod glasbunden af en 35 millimeter, nummer nul skål.For den menneskelige hud skal du placere huden med stratum corneum vendt nedad for at muliggøre lægemiddelkvantificering fra det overfladiske til de dybere lag. Når vævet er centreret på glasbunden, skal du bruge en applikator til bomuldsspids for at sikre, at huden er flad og har fuldstændig kontakt med dækfladen på glasbundsfadet. For at forhindre enhver bevægelse under billeddannelse skal du placere en skive oven på huden og sikre, at vævet er synligt gennem skivens midterhul til stimuleret Raman Scattering eller SRS-transmissionsdetektion.Pipette den forudbestemte dosis af formuleringen på huden, og brug derefter en behandsket finger til at gnide formuleringen med uret i 30 sekunder. Når den tildelte tid for formuleringen til at gennemsyre er gået, skal du fjerne den overskydende formulering, før du placerer huden med formuleringssiden vendt mod glasbundsfadet. Fortsæt derefter til den eksperimentelle opsætning ved at tænde mikroskopkontrollen eller MC-softwaren.Når du kigger gennem okularet, skal du justere det aksiale fokus med justeringsknappen for at sikre, at vævet er i fokus. Når du er færdig, skal du fjerne blokeringen af både pumpen og Stokes-strålerne og bekræfte, at ALG1- og ALG2-kanalerne er aktiveret. Sørg for, at SRS-fotodioden er på plads over kondensatoren, og klik derefter på Fokus x2 på MC-softwaren for at visualisere huden i CARS- og SRS-kanalerne.I Modulet Multi-Area Time Lapse eller MATL skal du gå til fanen Vis og klikke på listen over registrerede punkter for at få billedlisten vist. Når stratum corneum er identificeret, skal du rulle gennem det aksiale fokus eller Z-fokus for at identificere specifikke vævsstratifikationer. Specifikke dybder kan tilføjes i huden, såsom stratum corneum, talgkirtler, adipocytter eller subkutant fedt, som bestemt under levende billeddannelse med lipid-tunet kontrast.Men hvis der skal tages hele dybdestakke, kan XY-positioner tilføjes, og den relative Z-position kan ignoreres. I tilfælde af billeddannelse af specifik dybde for hver hudstratificering skal du vælge Registerpunkt for at føje det til MATL-køen. For stakke med fuld dybde skal du klikke på Registrer punkt for hver XY-position med dybdevalg i vinduet Anskaffelsesparametre.Indstil derefter antallet af gentagelser til en i MATL-modulet, og klik på Klar. Når pilen Afspil skifter fra grå til sort, skal du trykke på Afspil for at begynde at afbilde den foreløbige lipidstak. Når billeddannelsescyklussen er afsluttet, skal du blokere både pumpen og Stokes-strålerne og ændre bølgelængden på den lasergrafiske brugergrænseflade til den ønskede bølgelængde baseret på det målrettede bølgenummer eller Raman-vibrationen.Juster den manuelle tidsforsinkelsesfase, samtidig med at det sikres, at de samme beføjelser bruges til at afbilde lipidet og den aktive farmaceutiske ingrediens eller API, der er etableret a priori. Når det samlede antal cyklusgentagelser er valgt, skal du fjerne blokeringen af pumpestrålen og kontrollere, om effekten svarer til den ønskede effekt ved hjælp af fotodioden, før du trykker på Afspil for at starte automatisk billeddannelse af sætpunkterne. Udfør derefter dataanalyse for hver hudstratificering ved at importere et talgkirtellipidbillede til Fiji og markere afkrydsningsfeltet mærket Split-kanaler for at opdele filen i CARS- og SRS-kanalerne.For at åbne Region of Interest eller ROI Manager skal du klikke på Analyser, Værktøjer og ROI Manager. Brug SRS-kanalen, så C er lig med en, fjern markeringen af talgtkirtlen i billedet og føj markeringerne til ROI Manager ved at klikke på Tilføj T i ROI Manager. Gentag processen for hver talgkirtel i billedet.Hvis du vil maskere de lipidrige områder, skal du markere hvert investeringsafkast og derefter klikke på fanerne Mere, ELLER Kombiner og Tilføj. For at maskere de lipidfattige områder skal du bruge rektangelværktøjet i Fiji-menuen og tegne en firkant rundt om hele billedet. Føj området til ROI Manager.Klik på det nyligt tilføjede firkantede ROI ud over ROI, der vælger alle lipidrige regioner i ROI Manager. Under Mere skal du vælge XOR for at generere en maske af de lipidfattige områder og føje den til ROI Manager. Sammenkæd billederne i numerisk rækkefølge ved at gå til Fanerne Billede, Stakke, Værktøjer og Sammenkæd i rækkefølge.Alternativt kan du importere billederne ved at indlæse et i Fiji og derefter vælge en indstilling kaldet Gruppefiler med lignende navne på installationssiden. Mens det sammenkædede billede er aktivt, skal du gå til ROI Manager for at vælge de lipidrige områder og klikke på fanen Mere, før du vælger Flere mål, og derefter vente på, at vinduet Resultater vises. I vinduet Resultater skal du eksportere dataene til et regneark og tilføje en kolonne med titlen Region for at føje lipidrige områder til hver række data.Tilsæt lipidfattig til regioner, der var uden for lipiderne. For at visualisere dataene skal du gemme og importere regnearket til R-pakken, ggplot2. Plot derefter dataene som en funktion af billednummeret versus middelintensiteten for at estimere koncentrationstidsdataene.Kør ikke-opdelt analyse eller NCA i RStudio på de intensitetstidsdata, der importeres fra regnearket, med opfordringen til et lag. Når du er færdig, skal du plotte og visuelt sammenligne Jmax og AUCflux-all metrics. Derudover skal du udføre statistiske sammenligninger på tværs af eksperimentelle forhold.Den repræsentative analyse viser stratum corneum, talgkirtler, adipocytter, subkutant fedt fra den nøgne museøreskind og stratum corneum, papillær dermis og en talgkirtel fra den menneskelige hud. I nøgen museøreskind blev den begrænsede vævsbevægelse af talgkirtler observeret med samme vævsdybde af kirtlerne på tidspunktet for formuleringspåføring og 120 minutter efter påføring. Den betydelige vævsbevægelse i huden viste knap synlige talgkirtler efter 120 minutters lægemiddelpåføring, hvilket demonstrerede ineffektiviteten af den oprindelige protokol.I flere undersøgelser viste intensiteten versus tidsprofilerne høje indledende koncentrationer efterfulgt af faldende koncentrationer, hvilket indikerer ingen yderligere absorption af lægemidlet i vævet. På den anden side viste nogle undersøgelser en stigning i intensiteterne, som senere faldt i løbet af den eksperimentelle varighed, hvilket viste, at fluxen ind i vævet ikke havde nået et maksimum før billeddannelse. NCA-analyse af koncentrationstidsprofiler for to formuleringer for den samme aktive stoffers aktive stoffer viste, at ethoxyethoxyethanolen tilvejebragte en udvidet API-permeation sammenlignet med gelformuleringens, uanset hudlaget.Den samlede eksponeringsanalyse mellem de samme formuleringer viste lignende observationer i de dybere lag af huden. Forberedelsen af menneskelig hud og korrekt hudplacering på glasbundsskålen efter påføring af lægemidler er afgørende for eksperimentets succes. De klare løsninger her viste egnetheden af denne metode.Yderligere forskning vil involvere markedsførte formuleringer såsom cremer for at forstå, hvordan formuleringen påvirker API-penetration og gennemtrængning.

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

MALDI Imaging Mass Spectrometry of Neuropeptides in Parkinson's Disease

MALDI Imaging massespektrometri af neuropeptider i Parkinsons sygdom

MALDI imaging mass spectrometry (IMS) is a powerful approach that facilitates the spatial analysis of molecular species in biological tissue samples2 ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Luminescence Imaging af interscapular brunt fedtvæv

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

Povidoniod Rektal Forberedelse på tidspunktet for prostata Needle Biopsi er en enkel og reproducerbare Midler til at reducere risikoen for Proces- infektion

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Kombineret Nær-infrarød Fluorescent Imaging og Micro-computertomografi for Direkte Visualisering Cerebral tromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Brug Multi-fluorerede galdesyrer og<em&gt; In vivo</em&gt; Magnetic Resonance Imaging til måling Bile Acid Transport

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induktion Iskæmi-reperfusionsskade i mus Øre Skin for Intravital multifotonexcitation Imaging af immunrespons

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kvantitativ visualisering af leukocytinfiltrat i en murin model af Fulminant Myocarditis ved lysarkmikroskopi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Hurtig evaluering af kemiske forbindelsers Toksicitet ved hjælp af Zebrafish-embryoner

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...