Name: visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging
Uploaded: 2021-11-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

De auteurs willen Dr. Fotis Iliopoulos en Daniel Greenfield van de Evans' Group bedanken voor hun bespreking en proeflezing van dit manuscript. Daarnaast willen de auteurs de steun van LEO Pharma bedanken. Figuur 2 is gemaakt met BioRender.com.

Het gebruik van naakt muisoorweefsel werd goedgekeurd door het Massachusetts General Hospital Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), terwijl het gebruik van menselijk huidweefsel werd goedgekeurd door de Massachusetts General Hospital Institutional Review Board (IRB). Volgens IACUC-protocollen werden vers geëuthanaseerde muizen verkregen van medewerkers met naakte muizenkolonies. Menselijk weefsel werd verkregen uit electieve abdominoplastiekprocedures in het Massachusetts General Hospital via een goedgeke...

<ol>
	<li>Finnin, B., Walters, K. A., Franz, T. J., Benson, H. E., Watkinson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+skin+permeation+methodology.+In+Transdermal+and+topical+drug+delivery:+principles+and+methodology.">In vitro skin permeation methodology. In Transdermal and topical drug delivery: principles and methodology.</a> Transdermal and topical drug delivery: principles and practice. , 85-108 (2012).</li><li>Shin, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+road+to+development+of+an+in+vitro+permeation+test+(IVPT)+model+to+compare+heat+effects+on+transdermal+delivery+systems:+exploratory+studies+with+nicotine+and+fentanyl.">On the road to development of an in vitro permeation test (IVPT) model to compare heat effects on transdermal delivery systems: exploratory studies with nicotine and fentanyl.</a> Pharmaceutical Research. 34 (9), 1817-1830 (2017).</li><li>Hossain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterisation,+and+topical+delivery+of+terbinafine.">Preparation, characterisation, and topical delivery of terbinafine.</a> Pharmaceutics. 11 (10), 548 (2019).</li><li>Santos, L. L., Swofford, N. J., Santiago, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+permeation+test+(IVPT)+for+pharmacokinetic+assessment+of+topical+dermatological+formulations.">In vitro permeation test (IVPT) for pharmacokinetic assessment of topical dermatological formulations.</a> Current Protocols in Pharmacology. 91 (1), 79 (2020).</li><li>Iliopoulos, F., Caspers, P. J., Puppels, G. J., Lane, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Franz+cell+diffusion+testing+andquantitative+confocal+Raman+spectroscopy:+In+vitro-in+vivo+correlation.">Franz cell diffusion testing andquantitative confocal Raman spectroscopy: In vitro-in vivo correlation.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 887 (2020).</li><li>Cordery, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+bioavailability+of+diclofenac+from+locally-acting,+dermatological+formulations.">Topical bioavailability of diclofenac from locally-acting, dermatological formulations.</a> International Journal of Pharmaceutics. 529 (1-2), 55-64 (2017).</li><li>Pensado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stratum+corneum+sampling+to+assess+bioequivalence+between+topicalacyclovir+products.">Stratum corneum sampling to assess bioequivalence between topicalacyclovir products.</a> Pharmaceutical Research. 36 (12), 1-16 (2019).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+delivery+of+niacinamide-in+vivo+studies.">Dermal delivery of niacinamide-in vivo studies.</a> Pharmaceutics. 13 (5), 726 (2021).</li><li>Bodenlenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+flow+microperfusion+as+a+dermal+pharmacokinetic+approach+to+evaluate+topical+bioequivalence.">Open flow microperfusion as a dermal pharmacokinetic approach to evaluate topical bioequivalence.</a> Clinical Pharmacokinetics. 56 (1), 91-98 (2017).</li><li>Eirefelt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dermal+pharmacokinetics+and+pharmacodymanic+effect+of+soft+topical+PDE4+inhibitors:Open+flow+microperfusion+and+skin+biopsies.">Evaluating dermal pharmacokinetics and pharmacodymanic effect of soft topical PDE4 inhibitors:Open flow microperfusion and skin biopsies.</a> Pharmaceutical Research. 37 (12), 1-12 (2020).</li><li>Stagni, G., O'Donnell, D., Liu, Y. J., Kellogg, J. D. L., Shepherd, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iontophoretic+current+and+intradermal+microdialysis+recovery+in+humans.">Iontophoretic current and intradermal microdialysis recovery in humans.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 41 (1), 49-54 (1999).</li><li>Garcia Ortiz, P., Hansen, S. H., Shah, V. P., Menne, T., Benfeldt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+adultatopic+dermatitis+on+topical+drug+penetration:+assessment+by+cutaneous+microdialysis+and+tape+stripping.">Impact of adultatopic dermatitis on topical drug penetration: assessment by cutaneous microdialysis and tape stripping.</a> Acta Dermato-Venereologica. 89 (1), 33-38 (2009).</li><li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis:+Continuous+intermittent+vs+continuous-only+sampling.">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li><li>Kuzma, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+local+bioavailability+of+metronidazole+from+topical+formulations+using+dermal+microdialysis:+Preliminary+study+in+a+Yucatan+mini-pig+model.">Evaluation of local bioavailability of metronidazole from topical formulations using dermal microdialysis: Preliminary study in a Yucatan mini-pig model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105741 (2021).</li><li>Begley, R., Harvey, A., Byer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.Coherent+anti-Stokes+Raman+spectroscopy.">L.Coherent anti-Stokes Raman spectroscopy.</a> Applied Physics Letters. 25 (7), 387-390 (1974).</li><li>Evans, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+imaging+of+tissue+in+vivo+with+video-rate+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (46), 16807-16812 (2005).</li><li>Hill, A. H., Manifold, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+imaging+depth+limit+of+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Tissue imaging depth limit of stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 11 (2), 762-774 (2020).</li><li>Feizpour, A., Marstrand, T., Bastholm, L., Eirefelt, S., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantification+of+pharmacokinetics+in+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy+and+deep+learning.">Label-free quantification of pharmacokinetics in skin with stimulated Raman scattering microscopy and deep learning.</a> Journal of Investigative Dermatology. 141 (2), 395-403 (2021).</li><li>Ghosh, B., Reddy, L. H., Kulkarni, R. V., Khanam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+skin+permeability+of+drugs+in+mice+and+human+cadaver+skin.">Comparison of skin permeability of drugs in mice and human cadaver skin.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 38 (1), 42-45 (2000).</li><li>Nielsen, J. B., Plasencia, I., S&#248;rensen, J. A., Bagatolli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Storage+conditions+of+skin+affect+tissue+structure+and+subsequent+in+vitro+percutaneous+penetration.">Storage conditions of skin affect tissue structure and subsequent in vitro percutaneous penetration.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 24 (2), 93-102 (2011).</li><li>Barbero, A. M., Frasch, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+frozen+human+epidermis+storage+duration+and+cryoprotectant+on+barrier+function+using+two+model+compounds.">Effect of frozen human epidermis storage duration and cryoprotectant on barrier function using two model compounds.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 29 (1), 31-40 (2016).</li><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+various+methods+of+cold+storage+of+skin+on+the+permeation+of+melatonin+and+nimesulide.">The influence of various methods of cold storage of skin on the permeation of melatonin and nimesulide.</a> Journal of Controlled Release. 86 (1), 49-57 (2003).</li><li>Skelly, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+and+AAPS+report+of+the+workshop+on+principles+and+practices+of+in+vitro+percutaneous+penetration+studies:+relevance+to+bioavailability+and+bioequivalence.">FDA and AAPS report of the workshop on principles and practices of in vitro percutaneous penetration studies: relevance to bioavailability and bioequivalence.</a> Pharmaceutical Research. 4 (3), 265-267 (1987).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+for+the+conduct+of+skin+absorption+studies.">Guidance document for the conduct of skin absorption studies.</a> OECD. , (2004).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test+no.+428:+Skin+absorption:+In+vitro+method.">Test no. 428: Skin absorption: In vitro method.</a> OECD. , (2004).</li><li>Saar, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-rate+molecular+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering.">Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering.</a> Science. 330 (6009), 1368-1370 (2010).</li><li>Saar, B. G., Contreras-Rojas, L. R., Xie, X. S., Guy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+drug+delivery+to+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Imaging drug delivery to skin with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Molecular Pharmaceutics. 8 (3), 969-975 (2011).</li><li>Pence, I. J., Kuzma, B. A., Brinkmann, M., Hellwig, T., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-windowsparse+spectral+sampling+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Multi-windowsparse spectral sampling stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6095-6114 (2021).</li><li>Herkenne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+methods+for+the+assessment+of+topical+drug+bioavailability.">In vivo methods for the assessment of topical drug bioavailability.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 87-103 (2008).</li><li>Alfonso-Garc&#305;a, A., Mittal, R., Lee, E. S., Potma, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+with+coherent+Raman+scattering+microscopy:+a+tutorial.">Biological imaging with coherent Raman scattering microscopy: a tutorial.</a> Journal of Biomedical Optics. 19 (7), 071407 (2014).</li><li>Osseiran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+monitoring+of+cancer+cell+subpopulations+in+monolayers,+3D+spheroids,+and+xenografts+using+the+photoconvertible+dye+DiR.">Longitudinal monitoring of cancer cell subpopulations in monolayers, 3D spheroids, and xenografts using the photoconvertible dye DiR.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-10 (2019).</li><li>Evennett, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kohler+illumination:+a+simple+interpretation.">Kohler illumination: a simple interpretation.</a> Proceedings of the Royal Microscopical Society. 28 (4), 189-192 (1983).</li><li>Sanderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+microscopy.">Fundamentals of microscopy.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 10 (2), 76 (2020).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Hunter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matplotlib:+A+2D+graphics+environment.">Matplotlib: A 2D graphics environment.</a> Computing in Science &amp; Engineering. 9 (3), 90-95 (2007).</li><li>Wickham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. , (2016).</li><li>Kim, H., Han, S., Cho, Y. S., Yoon, S. K., Bae, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+R+packages:'Non-Compart'+and+'ncar'+for+noncompartmental+analysis+(NCA).">Development of R packages:'Non-Compart' and 'ncar' for noncompartmental analysis (NCA).</a> Translational and Clinical Pharmacology. 26 (1), 10-15 (2018).</li></ol>

De evaluatie van topische BA/BE is een onderzoeksgebied dat een veelzijdige aanpak vereist, aangezien geen enkele methode in vivo cPK volledig kan karakteriseren. Dit protocol presenteert een methodologie voor de evaluatie van de BA/BE van een topisch geneesmiddel op basis van coherente Raman-beeldvorming. Een van de eerste punten die over het hoofd kan worden gezien, is hoe dun de huidmonsters moeten zijn, vooral voor kwantitatieve transmissie SRS-beeldvorming. Als de huid te dik is (d.w.z. dat licht e...

Methodologieën om cPK te beoordelen na toepassing van topische geneesmiddelen zijn uitgebreid van klassieke in vitro permeatietests (IVPT)studies 1,2,3,4,5 en tape-stripping 6,7,8 tot aanvullende methodologieën zoals open-flow microperfusie of dermale microdialyse 9,10,11, 12,13,14. Er zijn mogelijk verschillende lokale plaatsen van therapeutische actie, afhankelijk van de ziekte van belang. Daarom kan er een overeenkomstig aantal methodologieën zijn om de snelheid en mate te beoordelen waarmee een API op de beoogde lokale actielocatie terechtkomt. Hoewel elk van de bovengenoemde methodologieën zijn voordelen heeft, is het grootste nadeel het gebrek aan cPK-informatie op microschaal (d.w.z. het onvermogen om te visualiseren waar de API naartoe gaat en hoe deze doordringt).
Een niet-invasieve methodologie die van belang is om topische BA en BE te schatten, is CRI, die kan worden onderverdeeld in twee beeldvormingsmodaliteiten: CARS en SRS-microscopie. Deze coherente Raman-methoden maken chemisch specifieke beeldvorming van moleculen mogelijk via niet-lineaire Raman-effecten. In CRI worden twee laserpulstreinen scherpgesteld en gescand in een monster; het verschil in energie tussen de laserfrequenties is ingesteld op trillingsmodi die specifiek zijn voor de chemische structuren van belang. Omdat CRI-processen niet-lineair zijn, wordt een signaal alleen gegenereerd bij de microscoopfocus, waardoor driedimensionale farmacokinetische tomografische beeldvorming van het weefsel mogelijk is. In de context van cPK is CARS gebruikt om weefselstructurele informatie te verkrijgen, zoals de locatie van lipiderijke huidstructuren15. SRS daarentegen is gebruikt om de moleculaire concentratie te kwantificeren, omdat het signaal lineair is met de concentratie. Voor ex vivo huidmonsters is het voordelig om CARS uit te voeren in de epi-richting16 en SRS in transmissiemodus17. Daarom zullen weefselmonsters die dun zijn, SRS-signaaldetectie en kwantificering mogelijk maken.
Als modelweefsel biedt het naakte muisoor verschillende voordelen met kleine nadelen. Een voordeel is dat het weefsel al ~ 200-300 μm dik is en geen verdere monstervoorbereiding vereist. Bovendien worden verschillende huidstratificaties gezien door axiaal te focussen door één gezichtsveld (bijv. stratum corneum, talgklieren (SG's), adipocyten en onderhuids vet)16,18. Dit maakt een voorlopige preklinische schatting van cutane permeatieroutes en actuele BA-schattingen mogelijk voordat naar menselijke huidmonsters wordt verplaatst. Het naaktmuismodel vertoont echter beperkingen zoals moeilijkheden bij extrapolatie naar in vivo scenario's als gevolg van verschillen in huidstructuur19. Hoewel het naakte muisoor een uitstekend model is om voorlopige resultaten te verkrijgen, is het menselijke huidmodel de gouden standaard. Hoewel er verschillende commentaren zijn geweest over de geschiktheid en toepasbaarheid van bevroren menselijke huid om in vivo permeatiekinetiek nauwkeurig samen te vatten 20,21,22, is het gebruik van bevroren menselijke huid een geaccepteerde methode voor de evaluatie van in vitro API-permeatiekinetiek 23,24,25 . Dit protocol visualiseert verschillende huidlagen in de muis- en menselijke huid en kwantificeert API-concentraties binnen lipiderijke en lipidearme structuren.
Hoewel CRI op tal van gebieden is gebruikt om specifiek verbindingen in weefsels te visualiseren, zijn er beperkte inspanningen geweest om de cPK van topisch aangebrachte geneesmiddelen te onderzoeken. Om de actuele BA / BE van actuele producten met behulp van CRI te evalueren, is het noodzakelijk om eerst een gestandaardiseerd protocol te hebben om nauwkeurige vergelijkingen te maken. Eerdere inspanningen met behulp van CRI voor medicijnafgifte aan de huid hebben variabiliteit binnen de gegevens aangetoond. Aangezien dit een relatief nieuwe toepassing van CRI is, is het opstellen van een protocol van cruciaal belang om betrouwbare resultaten te verkrijgen 18,26,27. Deze benadering richt zich slechts op één specifiek golfgetal in het biologische stille gebied van het Raman-spectrum. De meeste API's en inactieve ingrediënten hebben echter Raman-verschuivingen binnen het vingerafdrukgebied. Dit heeft eerder uitdagingen opgeleverd vanwege het inherente signaal dat afkomstig is van het weefsel in het vingerafdrukgebied. Recente laser- en computationele ontwikkelingen hebben deze barrière verwijderd, die ook kan worden gebruikt in combinatie met de hier gepresenteerde aanpak28. Deze hier gepresenteerde aanpak maakt de kwantificering van een API mogelijk, die een Raman-verschuiving heeft in het stille gebied (2.000-2.300 cm-1). Dit is niet beperkt tot de fysiochemische eigenschappen van het geneesmiddel, wat het geval zou kunnen zijn voor sommige eerder genoemde cPK-monitoringmethoden29.
Het protocol moet de variabiliteit van monster tot monster in huiddikte voor verschillende preparaten verminderen, omdat dikke menselijke huidmonsters een minimaal signaal produceren na het aanbrengen van het geneesmiddel als gevolg van lichtverstrooiing door het dikke monster. Een doel van dit manuscript is om een weefselvoorbereidingsmethodologie te presenteren die reproduceerbare beeldvormingsstandaarden garandeert. Bovendien is het CRI-systeem ingesteld zoals beschreven om potentiële foutbronnen te verminderen en signaal-ruis te minimaliseren. Dit artikel zal echter niet ingaan op de leidende principes en technische verdiensten van de CRI-microscoop, omdat dit eerder is behandeld30. Ten slotte wordt de uitgebreide data-analyseprocedure onderzocht om interpretatie van de resultaten mogelijk te maken om het succes of falen van een experiment te bepalen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Biohazard Bags</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td>22-044562</td>
			<td>As refered to in text: biohazard bags 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-polyethylene-biohazard-autoclave-bags-without-sterilization-indicator-8/22044562?searchHijack=true&#38;searchTerm= 22044562&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=22044562</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Buffers: Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT21030CV</td>
			<td>As refered to in text: PBS 
			https://www.fishersci.com/shop/products/corning-cellgro-cell-culture-buffers-dulbecco-s-phosphate-buffered-salt-solution-1x-8/MT21030CV?searchHijack=true&#38;searchTerm= 21-030-cv&#38;searchType= RAPID&#38;matchedCatNo=21-030-cv</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpels</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>14-840-00</td>
			<td>As refered to in text: scalpel 
			https://www.fishersci.com/shop/products/exel-international-disposable-scalpels-3/1484000?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Precision 45&#176; Angle Broad Point Tweezers/Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-132</td>
			<td>As refered to in text: forceps 
			https://www.fishersci.com/shop/products/high-precision-45-angle-broad-point-tweezers-forceps/12000132#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science</td>
			<td>06-666</td>
			<td>As refered to in text: task wiper 
			https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/06666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Laboratory Wrapping Film</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>As refered to in text: parafilm 
			https://www.fishersci.com/shop/products/curwood-parafilm-m-laboratory-wrapping-film-4/1337412</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (35 mm x 10 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875711YZ</td>
			<td>As refered to in text: small petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-specialty-6/FB0875711YZ?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td>As refered to in text: large petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/FB0875713A?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>NC9411473</td>
			<td>As refered to in text: scissors 
			https://www.fishersci.com/shop/products/scissors-327/NC9411473?searchHijack=true&#38;searchTerm= RS-5915SC&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=RS-5915SC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser/microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>650/60 nm BrightLine single-band bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - CH2 vibrations (645nm/60nm filter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control box IX2-UCB</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Control Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D700/30m</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - deuterated band 
			https://www.chroma.com/products/parts/d700-30m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeepSee Insight</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Laser 
			https://www.spectra-physics.com/f/insight-x3-tunable-laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Handheld Optical Power and Energy Meter Console</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td>As refered to in text: power meter 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoview Software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope Control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Microscope Slides</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: microscope slides 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/22265446</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation Chamber</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>GM-800</td>
			<td>As refered to in text: incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrating Sphere Photodiode Power Sensor</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>S142C</td>
			<td>As refered to in text: photodiode 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply FV31-PSU</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Power Supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision 4063, 80MHz Dual Channel Function Generator</td>
			<td>BK Precision</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: function generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProScan &#8211; Precision Microscope Automation</td>
			<td>Prior Scientific Instruments</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: stage controller 
			https://www.prior.com/microscope-automation/inverted-microscope-systems/proscan-linear-stage-highest-precision-microscope-automation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SecureSeal Imaging Spacers</td>
			<td>Grace Biolabs</td>
			<td>654004</td>
			<td>As refered to in text: spacer 
			https://gracebio.com/product/secureseal-imaging-spacers-654004/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SRS Detection Kit</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: SRS detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UPLSAPO 20X NA:0.75</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: 20X Objective 
			https://www.olympus-lifescience.com/en/objectives/uplsapo/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid/Drug Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;35 mm Dish, No. 0 Uncoated Coverslip, 14 mm Glass Diameter</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>NC9711297</td>
			<td>As refered to in text: Glass bottom dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/glass-bottom-mircrowell-dish/nc9711297</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Cotton-tipped applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Postive Displacement Pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distriman-positive-displacement-repetitive-pipette/F164001G#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette Tips</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Tips for pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distritip-syringes-6/f164100g?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: FIJI/ImageJ 
			https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jupyter-Lab</td>
			<td>open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: JupyterLab 
			https://jupyter.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Rstudio 
			https://www.rstudio.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging

Cutane farmacokinetiek (cPK) na topische formuleringstoepassing is een onderzoeksgebied van bijzonder belang geweest voor wetenschappers op het gebied van regelgeving en geneesmiddelenontwikkeling om de actuele biologische beschikbaarheid (BA) mechanistisch te begrijpen. Semi-invasieve technieken, zoals tape-stripping, dermale microdialyse of dermale open-flow microperfusie, kwantificeren allemaal macroschaal cPK. Hoewel deze technieken enorme cPK-kennis hebben opgeleverd, mist de gemeenschap een mechanistisch begrip van de penetratie en permeatie van actieve farmaceutische ingrediënten (API) op cellulair niveau. 
Een niet-invasieve benadering om cPK op microschaal aan te pakken, is coherente Raman-verstrooiingsbeeldvorming (CRI), die selectief intrinsieke moleculaire trillingen target zonder de noodzaak van extrinsieke labels of chemische modificatie. CRI heeft twee hoofdmethoden - coherente anti-Stokes Raman-verstrooiing (CARS) en gestimuleerde Raman-verstrooiing (SRS) - die gevoelige en selectieve kwantificering van API's of inactieve ingrediënten mogelijk maken. CARS wordt meestal gebruikt om structurele huidinformatie af te leiden of chemisch contrast te visualiseren. Daarentegen wordt het SRS-signaal, dat lineair is met moleculaire concentratie, gebruikt om API's of inactieve ingrediënten binnen huidstratificaties te kwantificeren. 
Hoewel muisweefsel vaak is gebruikt voor cPK met CRI, moeten topische BA en bio-equivalentie (BE) uiteindelijk in menselijk weefsel worden beoordeeld voordat de regelgevende goedkeuring plaatsvindt. Dit artikel presenteert een methodologie voor het voorbereiden en in beeld brengen van ex vivo huid voor gebruik in kwantitatieve farmacokinetische CRI-studies bij de evaluatie van topische BA en BE. Deze methodologie maakt betrouwbare en reproduceerbare API-kwantificering mogelijk in de menselijke en muishuid in de loop van de tijd. De concentraties in lipidenrijke en lipidearme compartimenten, evenals de totale API-concentratie in de loop van de tijd worden gekwantificeerd; deze worden gebruikt voor schattingen van BA op micro- en macroschaal en, mogelijk, BE.

Beeldvorming wordt als succesvol beschouwd als het weefsel na voltooiing van het experiment niet significant in axiale (<10 μm) of laterale richting is bewogen (figuur 4). Dit is een directe indicatie als de SRS-meting voor de API van belang niet representatief is voor de initiële diepte, waarvoor de kwantificering laagspecifiek is. Dit wordt verzacht door z-stacks in beeld te brengen voor elke XY-positie van belang, waarbij de afweging de temporele resolutie is. Als in deze onderzoeken be...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging

Een coherente Raman scattering imaging methodologie om farmaceutische verbindingen in de huid te visualiseren en te kwantificeren wordt beschreven. Dit artikel beschrijft huidweefselpreparaat (mens en muis) en topische formuleringstoepassing, beeldacquisitie om spatiotemporale concentratieprofielen te kwantificeren en voorlopige farmacokinetische analyse om de toediening van topische geneesmiddelen te beoordelen.

Visualiseren en kwantificeren van farmaceutische verbindingen in de huid met behulp van Coherent Raman Scattering Imaging

Cutaneous pharmacokinetics (cPK) after topical formulation application has been a research area of particular interest for regulatory and drug development ...

Deze methodologie is belangrijk omdat het een reproduceerbare en nauwkeurige methode mogelijk maakt om topisch aangebrachte geneesmiddelen te kwantificeren met behulp van coherente Raman-beeldvorming. Andere methodologieën bieden omvangrijke cutane farmacokinetische informatie, terwijl deze methodologie zowel bulk- als microschaal cutane farmacokinetische informatie kan bieden, zoals de route van permeatie van een geneesmiddel. De visualisatie- en kwantificerings- en permeatieroutes zullen de ontwikkeling van geneesmiddelen met een specifieke route in gedachten mogelijk maken om de doellocatie te bereiken.Weefselvoorbereiding zal het meest uitdagende deel van deze methodologie blijken te zijn. Het weefsel moet voldoende dun zijn zodat men door de huid heen kan lezen. Om te beginnen met de voorbereiding van een naakte muis oorhuidweefsel, verwerf geëuthanaseerde naaktmuizen en verwijder de oren van de muis met behulp van een tang en een microchirurgische schaar.Leg dan één oor in een grote petrischaal van 60 millimeter bij 15 millimeter. Spoel vervolgens het muizenoor twee keer met PBS en dep het oor elke keer droog met de taakwisser. Bij gebruik binnen 24 uur plaatst u het oor in PBS in een kleine petrischaal van 35 millimeter bij 10 millimeter bij twee tot acht graden Celsius.Om na 24 uur oogsten te gebruiken, plaatst u het oor in een petrischaaltje zonder PBS en bedekt u het gerecht vervolgens met parafilm om in een vriezer bij min 20 graden Celsius te bewaren. Terwijl u onder de biologische motorkap werkt, plaatst u het menselijke huidweefsel in een grote petrischaal met de onderkant van het corneum naar beneden gericht, zodat het onderhuidse vet toegankelijk is. Gebruik dan een tang en een microchirurgische schaar om het onderhuidse vet te verwijderen.Zodra onderhuids vet niet langer met de schaar kan worden verwijderd, gebruikt u een wegwerp scalpel met 10 messen in een hoek van 45 graden ten opzichte van de huid om het resterende onderhuidse vet te verwijderen terwijl u de huid stilhoudt met een tang. Wanneer het vet wordt verwijderd, verdeelt u de menselijke huid in stukjes van één centimeter bij één centimeter. Voor lipidebeeldvorming plaatst u het voorste deel van het muizenoor naar de glazen bodem van een 35 millimeter, nummer nul schaal.Plaats voor de menselijke huid de huid met het stratum corneum naar beneden gericht om medicijnkwantificering van de oppervlakkige naar de diepere lagen mogelijk te maken. Zodra het weefsel op de glazen bodem is gecentreerd, gebruikt u een wattenstaafje-applicator om ervoor te zorgen dat de huid plat is en volledig contact heeft met het afdekvlak van de glazen bodemschaal. Om beweging tijdens het beeldvormen te voorkomen, plaatst u een wasmachine op de huid en zorgt u ervoor dat het weefsel zichtbaar is door het middelste gat van de wasmachine voor gestimuleerde Raman-verstrooiing of SRS-transmissiedetectie.Pipetteer de vooraf bepaalde dosis van de formulering op de huid en gebruik vervolgens een gehandschoende vinger om de formulering gedurende 30 seconden met de klok mee te wrijven. Nadat de toegewezen tijd voor de formulering om door te dringen is verstreken, verwijdert u de overtollige formulering voordat u de huid plaatst met de formuleringszijde naar de glazen bodemschaal gericht. Ga vervolgens verder met de experimentele installatie door de Microscope Control- of MC-software in te schakelen.Kijk door het oculair en pas de axiale focus aan met de instelknop om ervoor te zorgen dat het weefsel scherp is. Als u klaar bent, deblokkeert u zowel de pomp- als de Stokes-balken en bevestigt u dat ALG1- en ALG2-kanalen zijn ingeschakeld. Zorg ervoor dat de SRS-fotodiode zich boven de condensor bevindt en klik vervolgens op Focus x2 op de MC-software om de skin in de CARS- en SRS-kanalen te visualiseren.Ga in de module Multi-Area Time Lapse of MATL naar het tabblad Weergave en klik op de lijst met geregistreerde punten om de afbeeldingslijst te laten verschijnen. Zodra het stratum corneum is geïdentificeerd, bladert u door de axiale focus of Z-focus om specifieke weefselstratificaties te identificeren. Specifieke diepten kunnen in de huid worden toegevoegd, zoals stratum corneum, talgklieren, adipocyten of onderhuids vet, zoals bepaald tijdens live beeldvorming met lipidengetuned contrast.Als echter hele dieptestapels moeten worden genomen, kunnen XY-posities worden toegevoegd en kan de relatieve Z-positie worden genegeerd. In het geval van een beeldspecifieke diepte voor elke huidstratificatie, selecteert u het registratiepunt om het toe te voegen aan de MATL-wachtrij. Voor stapels met volledige diepte klikt u op Punt registreren voor elke XY-positie met diepteselectie in het venster Acquisitieparameters.Stel vervolgens het aantal herhalingen in op één in de MATL-module en klik op Gereed. Wanneer de afspeelpijl verandert van grijs naar zwart, drukt u op Afspelen om te beginnen met het afbeelden van de voorlopige lipidenstapel. Zodra de beeldvormingscyclus is voltooid, blokkeert u zowel de pomp- als stokes-stralen en wijzigt u de golflengte op de lasergrafische gebruikersinterface in de gewenste golflengte op basis van het beoogde golfgetal of Raman-trilling.Pas de handmatige tijdvertragingsfase aan en zorg ervoor dat dezelfde krachten worden gebruikt om het lipide en actieve farmaceutische ingrediënt of API in beeld te brengen die a priori zijn vastgesteld. Zodra het totale aantal cyclusherhalingen is gekozen, deblokkeert u de pompstraal en controleert u of het vermogen overeenkomt met het gewenste vermogen met behulp van de fotodiode voordat u op Play drukt om te beginnen met het automatisch afbeelden van de instelpunten. Voer vervolgens gegevensanalyse uit voor elke huidstratificatie door een talgklierlipidenbeeld in Fiji te importeren en het vakje gesplitste kanalen aan te vinken om het bestand te splitsen in de CARS- en SRS-kanalen.Om de region of interest of ROI Manager te openen, klikt u op Analyze, Tools en ROI Manager. Gebruik het SRS-kanaal zodanig dat C gelijk is aan één, verwijder de selectieknop van de talgklier in de afbeelding en voeg de markeringen toe aan de ROI Manager door te klikken op Add T in de ROI Manager. Herhaal het proces voor elke talgklier in het beeld.Als u de lipidenrijke gebieden wilt maskeren, selecteert u elke ROI en klikt u vervolgens op de tabbladen Meer, OF Combineren en Toevoegen. Als u de lipidearme gebieden wilt maskeren, gebruikt u het gereedschap Rechthoek in het menu Fiji en tekent u een vierkant rond de hele afbeelding. Voeg de regio toe aan de ROI Manager.Klik op de nieuw toegevoegde vierkante ROI naast de ROI die alle lipiderijke regio's in de ROI Manager selecteert. Selecteer onder Meer de optie XOR om een masker van de lipidearme regio's te genereren en toe te voegen aan de ROI Manager. Voeg de afbeeldingen in numerieke volgorde samen door naar afbeelding, stapels, gereedschappen en samengevoegde tabbladen in volgorde te gaan.U kunt de afbeeldingen ook importeren door er een in Fiji te laden en vervolgens een optie te selecteren met de naam Groepsbestanden met vergelijkbare namen op de opstartpagina. Terwijl u de aaneengeschakelde afbeelding actief hebt, gaat u naar de ROI-manager om de lipidenrijke gebieden te selecteren en klikt u op het tabblad Meer voordat u Meerdere metingen selecteert en wacht u vervolgens tot het venster Resultaten verschijnt. Exporteer de gegevens in het venster Resultaten naar een spreadsheet en voeg een kolom met de titel Regio toe om lipidenrijke gebieden toe te voegen aan elke rij met gegevens.Voeg lipidearm toe aan regio's die buiten de lipiden lagen. Om de gegevens te visualiseren, slaat u de spreadsheet op en importeert u deze in het R-pakket ggplot2. Plot vervolgens de gegevens als een functie van het beeldgetal versus de gemiddelde intensiteit om de concentratie-tijdgegevens te schatten.Voer niet-compartimentele analyse of NCA uit in RStudio op de intensiteitstijdgegevens die uit de spreadsheet zijn geïmporteerd met de aanroep voor één laag. Als u klaar bent, plot en vergelijkt u Jmax- en AUCflux-all-statistieken. Voer bovendien statistische vergelijkingen uit tussen experimentele omstandigheden.De representatieve analyse toont stratum corneum, talgklieren, adipocyten, onderhuids vet van de naakte muisoorhuid en stratum corneum, papillaire dermis en een talgklier van de menselijke huid. Bij naakte muisoorhuid werd de beperkte weefselbeweging van talgklieren waargenomen met dezelfde weefseldiepte van de klieren op het moment van formuleringstoepassing en 120 minuten na het aanbrengen. De aanzienlijke weefselbeweging in de huid vertoonde nauwelijks zichtbare talgklieren na 120 minuten toediening van het geneesmiddel, wat de inefficiëntie van het oorspronkelijke protocol aantoont.In verschillende studies vertoonden de intensiteit versus tijdprofielen hoge aanvangsconcentraties, gevolgd door afnemende concentraties, wat wijst op geen verdere absorptie van het geneesmiddel in het weefsel. Aan de andere kant wezen sommige studies op een stijging van de intensiteiten die later afnamen gedurende de experimentele duur, wat aantoonde dat de flux in het weefsel vóór de beeldvorming geen maximum had bereikt. NCA-analyse van concentratietijdprofielen van twee formuleringen voor dezelfde API gaf aan dat de ethoxy-ethoxyethanol uitgebreide API-permeatie bood in vergelijking met die van de gelformulering, ongeacht de huidlaag.De totale blootstellingsanalyse tussen dezelfde formuleringen vertoonde vergelijkbare waarnemingen in de diepere lagen van de huid. De voorbereiding van de menselijke huid en de juiste plaatsing van de huid op de glazen bodemschaal na het aanbrengen van het medicijn zijn van cruciaal belang voor het succes van het experiment. De duidelijke oplossingen hier toonden de geschiktheid van deze methodologie aan.Verder onderzoek zal betrekking hebben op op de markt gebrachte formuleringen zoals crèmes om te begrijpen hoe de formulering api-penetratie en permeatie beïnvloedt.

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Nauwkeurige en eenvoudige meting van de pro-inflammatoire cytokine IL-1β met behulp van een volbloed stimulatie Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Kwantitatieve Visualisatie en detectie van huidkanker Met behulp van Dynamic Thermal Imaging

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

MALDI Imaging Mass Spectrometry of Neuropeptides in Parkinson's Disease

MALDI massaspectrometrie Imaging van neuropeptiden bij de ziekte van Parkinson

MALDI imaging mass spectrometry (IMS) is a powerful approach that facilitates the spatial analysis of molecular species in biological tissue samples2 ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov luminescentiebeeldvorming van interscapular Brown VetWeefsel

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

Povidonjood rectale Voorbereiding op het moment van prostaatnaaldbiopten is een eenvoudige en reproduceerbare middelen om het risico van infectie te verminderen Procedurele

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Gecombineerde nabij-infrarood Fluorescent Imaging en Micro-computertomografie voor het direct visualiseren Cerebral Thromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

De Multi-gefluoreerde galzuren en<em&gt; In Vivo</em&gt; Magnetic Resonance Imaging te meten Bile Acid Transport

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induceren van ischemie-reperfusie schade in de Mouse Ear Skin voor intravitale Multiphoton Imaging van immuunresponsen

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kwantitatieve visualisatie van leukocytinfectiet in een muizenmodel van Fulminant-myocarditis door middel van lichte microscopie

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Snelle evaluatie van de toxiciteit van chemische verbindingen met behulp van zebravis embryo's

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...