Name: visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging
Uploaded: 2021-11-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Forfatterne vil takke Dr. Fotis Iliopoulos og Daniel Greenfield fra Evans' Group for deres diskusjon og korrekturlesing av dette manuskriptet. I tillegg ønsker forfatterne å anerkjenne støtte fra LEO Pharma. Figur 2 ble opprettet med BioRender.com.

Bruken av naken mus ørevev ble godkjent av Massachusetts General Hospital Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC), mens bruken av menneskelig hudvev ble godkjent av Massachusetts General Hospital Institutional Review Board (IRB). I henhold til IACUC-protokoller ble ny euthanized mus hentet fra samarbeidspartnere med nakne muskolonier. Humant vev ble anskaffet fra valgfrie abdominoplastikkprosedyrer ved Massachusetts General Hospital via en godkjent protokoll. I tillegg ble spesifikke vevstyper annet enn bukh...

<ol>
	<li>Finnin, B., Walters, K. A., Franz, T. J., Benson, H. E., Watkinson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+skin+permeation+methodology.+In+Transdermal+and+topical+drug+delivery:+principles+and+methodology.">In vitro skin permeation methodology. In Transdermal and topical drug delivery: principles and methodology.</a> Transdermal and topical drug delivery: principles and practice. , 85-108 (2012).</li><li>Shin, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+road+to+development+of+an+in+vitro+permeation+test+(IVPT)+model+to+compare+heat+effects+on+transdermal+delivery+systems:+exploratory+studies+with+nicotine+and+fentanyl.">On the road to development of an in vitro permeation test (IVPT) model to compare heat effects on transdermal delivery systems: exploratory studies with nicotine and fentanyl.</a> Pharmaceutical Research. 34 (9), 1817-1830 (2017).</li><li>Hossain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterisation,+and+topical+delivery+of+terbinafine.">Preparation, characterisation, and topical delivery of terbinafine.</a> Pharmaceutics. 11 (10), 548 (2019).</li><li>Santos, L. L., Swofford, N. J., Santiago, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+permeation+test+(IVPT)+for+pharmacokinetic+assessment+of+topical+dermatological+formulations.">In vitro permeation test (IVPT) for pharmacokinetic assessment of topical dermatological formulations.</a> Current Protocols in Pharmacology. 91 (1), 79 (2020).</li><li>Iliopoulos, F., Caspers, P. J., Puppels, G. J., Lane, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Franz+cell+diffusion+testing+andquantitative+confocal+Raman+spectroscopy:+In+vitro-in+vivo+correlation.">Franz cell diffusion testing andquantitative confocal Raman spectroscopy: In vitro-in vivo correlation.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 887 (2020).</li><li>Cordery, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+bioavailability+of+diclofenac+from+locally-acting,+dermatological+formulations.">Topical bioavailability of diclofenac from locally-acting, dermatological formulations.</a> International Journal of Pharmaceutics. 529 (1-2), 55-64 (2017).</li><li>Pensado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stratum+corneum+sampling+to+assess+bioequivalence+between+topicalacyclovir+products.">Stratum corneum sampling to assess bioequivalence between topicalacyclovir products.</a> Pharmaceutical Research. 36 (12), 1-16 (2019).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+delivery+of+niacinamide-in+vivo+studies.">Dermal delivery of niacinamide-in vivo studies.</a> Pharmaceutics. 13 (5), 726 (2021).</li><li>Bodenlenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+flow+microperfusion+as+a+dermal+pharmacokinetic+approach+to+evaluate+topical+bioequivalence.">Open flow microperfusion as a dermal pharmacokinetic approach to evaluate topical bioequivalence.</a> Clinical Pharmacokinetics. 56 (1), 91-98 (2017).</li><li>Eirefelt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dermal+pharmacokinetics+and+pharmacodymanic+effect+of+soft+topical+PDE4+inhibitors:Open+flow+microperfusion+and+skin+biopsies.">Evaluating dermal pharmacokinetics and pharmacodymanic effect of soft topical PDE4 inhibitors:Open flow microperfusion and skin biopsies.</a> Pharmaceutical Research. 37 (12), 1-12 (2020).</li><li>Stagni, G., O'Donnell, D., Liu, Y. J., Kellogg, J. D. L., Shepherd, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iontophoretic+current+and+intradermal+microdialysis+recovery+in+humans.">Iontophoretic current and intradermal microdialysis recovery in humans.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 41 (1), 49-54 (1999).</li><li>Garcia Ortiz, P., Hansen, S. H., Shah, V. P., Menne, T., Benfeldt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+adultatopic+dermatitis+on+topical+drug+penetration:+assessment+by+cutaneous+microdialysis+and+tape+stripping.">Impact of adultatopic dermatitis on topical drug penetration: assessment by cutaneous microdialysis and tape stripping.</a> Acta Dermato-Venereologica. 89 (1), 33-38 (2009).</li><li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis:+Continuous+intermittent+vs+continuous-only+sampling.">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li><li>Kuzma, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+local+bioavailability+of+metronidazole+from+topical+formulations+using+dermal+microdialysis:+Preliminary+study+in+a+Yucatan+mini-pig+model.">Evaluation of local bioavailability of metronidazole from topical formulations using dermal microdialysis: Preliminary study in a Yucatan mini-pig model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105741 (2021).</li><li>Begley, R., Harvey, A., Byer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.Coherent+anti-Stokes+Raman+spectroscopy.">L.Coherent anti-Stokes Raman spectroscopy.</a> Applied Physics Letters. 25 (7), 387-390 (1974).</li><li>Evans, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+imaging+of+tissue+in+vivo+with+video-rate+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (46), 16807-16812 (2005).</li><li>Hill, A. H., Manifold, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+imaging+depth+limit+of+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Tissue imaging depth limit of stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 11 (2), 762-774 (2020).</li><li>Feizpour, A., Marstrand, T., Bastholm, L., Eirefelt, S., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantification+of+pharmacokinetics+in+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy+and+deep+learning.">Label-free quantification of pharmacokinetics in skin with stimulated Raman scattering microscopy and deep learning.</a> Journal of Investigative Dermatology. 141 (2), 395-403 (2021).</li><li>Ghosh, B., Reddy, L. H., Kulkarni, R. V., Khanam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+skin+permeability+of+drugs+in+mice+and+human+cadaver+skin.">Comparison of skin permeability of drugs in mice and human cadaver skin.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 38 (1), 42-45 (2000).</li><li>Nielsen, J. B., Plasencia, I., S&#248;rensen, J. A., Bagatolli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Storage+conditions+of+skin+affect+tissue+structure+and+subsequent+in+vitro+percutaneous+penetration.">Storage conditions of skin affect tissue structure and subsequent in vitro percutaneous penetration.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 24 (2), 93-102 (2011).</li><li>Barbero, A. M., Frasch, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+frozen+human+epidermis+storage+duration+and+cryoprotectant+on+barrier+function+using+two+model+compounds.">Effect of frozen human epidermis storage duration and cryoprotectant on barrier function using two model compounds.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 29 (1), 31-40 (2016).</li><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+various+methods+of+cold+storage+of+skin+on+the+permeation+of+melatonin+and+nimesulide.">The influence of various methods of cold storage of skin on the permeation of melatonin and nimesulide.</a> Journal of Controlled Release. 86 (1), 49-57 (2003).</li><li>Skelly, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+and+AAPS+report+of+the+workshop+on+principles+and+practices+of+in+vitro+percutaneous+penetration+studies:+relevance+to+bioavailability+and+bioequivalence.">FDA and AAPS report of the workshop on principles and practices of in vitro percutaneous penetration studies: relevance to bioavailability and bioequivalence.</a> Pharmaceutical Research. 4 (3), 265-267 (1987).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+for+the+conduct+of+skin+absorption+studies.">Guidance document for the conduct of skin absorption studies.</a> OECD. , (2004).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test+no.+428:+Skin+absorption:+In+vitro+method.">Test no. 428: Skin absorption: In vitro method.</a> OECD. , (2004).</li><li>Saar, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-rate+molecular+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering.">Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering.</a> Science. 330 (6009), 1368-1370 (2010).</li><li>Saar, B. G., Contreras-Rojas, L. R., Xie, X. S., Guy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+drug+delivery+to+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Imaging drug delivery to skin with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Molecular Pharmaceutics. 8 (3), 969-975 (2011).</li><li>Pence, I. J., Kuzma, B. A., Brinkmann, M., Hellwig, T., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-windowsparse+spectral+sampling+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Multi-windowsparse spectral sampling stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6095-6114 (2021).</li><li>Herkenne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+methods+for+the+assessment+of+topical+drug+bioavailability.">In vivo methods for the assessment of topical drug bioavailability.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 87-103 (2008).</li><li>Alfonso-Garc&#305;a, A., Mittal, R., Lee, E. S., Potma, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+with+coherent+Raman+scattering+microscopy:+a+tutorial.">Biological imaging with coherent Raman scattering microscopy: a tutorial.</a> Journal of Biomedical Optics. 19 (7), 071407 (2014).</li><li>Osseiran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+monitoring+of+cancer+cell+subpopulations+in+monolayers,+3D+spheroids,+and+xenografts+using+the+photoconvertible+dye+DiR.">Longitudinal monitoring of cancer cell subpopulations in monolayers, 3D spheroids, and xenografts using the photoconvertible dye DiR.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-10 (2019).</li><li>Evennett, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kohler+illumination:+a+simple+interpretation.">Kohler illumination: a simple interpretation.</a> Proceedings of the Royal Microscopical Society. 28 (4), 189-192 (1983).</li><li>Sanderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+microscopy.">Fundamentals of microscopy.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 10 (2), 76 (2020).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Hunter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matplotlib:+A+2D+graphics+environment.">Matplotlib: A 2D graphics environment.</a> Computing in Science &amp; Engineering. 9 (3), 90-95 (2007).</li><li>Wickham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. , (2016).</li><li>Kim, H., Han, S., Cho, Y. S., Yoon, S. K., Bae, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+R+packages:'Non-Compart'+and+'ncar'+for+noncompartmental+analysis+(NCA).">Development of R packages:'Non-Compart' and 'ncar' for noncompartmental analysis (NCA).</a> Translational and Clinical Pharmacology. 26 (1), 10-15 (2018).</li></ol>

Evalueringen av aktuell BA/BE er et forskningsområde som krever en mangefasettert tilnærming, da ingen enkelt metode fullt ut kan karakterisere in vivo cPK. Denne protokollen presenterer en metodikk for evaluering av et aktuelt legemiddelprodukts BA/BE basert på sammenhengende Raman-avbildning. Et av de første punktene som kan overses er hvor tynne hudprøvene må være, spesielt for kvantitativ overføring SRS-avbildning. Hvis huden er for tykk (dvs. lys kan ikke lett passere gjennom), er det lite ...

Metoder for å vurdere cPK etter aktuell legemiddelproduktapplikasjon har utvidet seg fra klassiske in vitro permeation testing (IVPT) studier 1,2,3,4,5 og tape-stripping 6,7,8 til ytterligere metoder som åpen-flow mikroperfusjon eller dermal mikrodialyse 9,10,11, 12,13,14. Det er potensielt forskjellige lokale steder for terapeutisk virkning avhengig av sykdommen av interesse. Derfor kan det være et tilsvarende antall metoder for å vurdere hastigheten og i hvilken grad en API kommer til det tiltenkte lokale handlingsstedet. Mens hver av de nevnte metodene har sine fordeler, er den største ulempen mangelen på mikroskala cPK-informasjon (dvs. manglende evne til å visualisere hvor API-en går og hvordan den gjennomsyrer).
En ikke-invasiv metodikk av interesse for å estimere aktuell BA og BE er CRI, som kan deles inn i to bildemodaliteter: CARS og SRS mikroskopi. Disse sammenhengende Raman-metodene muliggjør kjemisk spesifikk avbildning av molekyler via ikke-lineære Raman-effekter. I CRI er to laserpulstog fokusert og skannet i en prøve; Forskjellen i energi mellom laserfrekvensene er satt til å målrette vibrasjonsmoduser som er spesifikke for de kjemiske strukturene av interesse. Siden CRI-prosesser er ikke-lineære, genereres det bare et signal ved mikroskopfokuset, noe som gir mulighet for tredimensjonal farmakokinetisk tomografisk bildebehandling av vevet. I forbindelse med cPK har CARS blitt brukt til å innhente vevsstrukturinformasjon, for eksempel plasseringen av lipidrike hudstrukturer15. I motsetning har SRS blitt brukt til å kvantifisere molekylær konsentrasjon da signalet er lineært med konsentrasjon. For ex vivo hudprøver er det fordelaktig å utføre BILER i epi-retning16 og SRS i overføringsmodus17. Derfor vil vevsprøver som er tynne tillate SRS-signaldeteksjon og kvantifisering.
Som modellvev presenterer det nakne museøret flere fordeler med mindre ulemper. En fordel er at vevet allerede er ~ 200-300 μm i tykkelse og krever ikke ytterligere prøvepreparering. I tillegg ses flere hudstratifikasjoner ved aksialt å fokusere gjennom ett synsfelt (f.eks. stratum corneum, talgkjertler (SGs), adipocytter og subkutant fett)16,18. Dette muliggjør foreløpig preklinisk estimering av kutane permeasjonsveier og aktuelle BA-estimater før du går over til menneskelige hudprøver. Imidlertid presenterer den nakne musemodellen begrensninger som vanskeligheter med ekstrapolering til in vivo-scenarier på grunn av forskjeller i hudstruktur19. Mens nakenmusøret er en utmerket modell for å oppnå foreløpige resultater, er den menneskelige hudmodellen gullstandarden. Selv om det har vært forskjellige kommentarer om egnetheten og anvendbarheten av frossen menneskelig hud for å nøyaktig rekapitulere in vivo permeation kinetikk 20,21,22, er bruk av frossen menneskelig hud en akseptert metode for evaluering av in vitro API permeation kinetikk 23,24,25 . Denne protokollen visualiserer ulike hudlag i mus og menneskelig hud mens den kvantifiserer API-konsentrasjoner i lipidrike og lipidfattige strukturer.
Mens CRI har blitt brukt på tvers av en rekke felt for å spesifikt visualisere forbindelser i vev, har det vært begrenset innsats for å undersøke cPK av topisk anvendte narkotikaprodukter. For å evaluere den aktuelle BA/BE av aktuelle produkter ved hjelp av CRI, er det nødvendig å først ha en standardisert protokoll på plass for å gjøre nøyaktige sammenligninger. Tidligere forsøk på å bruke CRI for legemiddellevering til huden har vist variasjon i dataene. Siden dette er en relativt ny anvendelse av CRI, er det viktig å etablere en protokoll for å oppnå pålitelige resultater 18,26,27. Denne tilnærmingen retter seg bare mot ett spesifikt bølgenummer i den biologiske stille regionen i Raman-spekteret. Imidlertid har de fleste API-er og inaktive ingredienser Raman-skift innenfor fingeravtrykksregionen. Dette har tidligere skapt utfordringer på grunn av det iboende signalet som oppstår fra vevet i fingeravtrykksregionen. Nylige laser- og beregningsmessige fremskritt har fjernet denne barrieren, som også kan brukes i kombinasjon med tilnærmingen som presenteres her28. Denne tilnærmingen som presenteres her tillater kvantifisering av en API, som har et Raman-skifte i det stille området (2000-2300 cm-1). Dette er ikke begrenset til stoffets fysiokjemiske egenskaper, noe som kan være tilfelle for noen tidligere nevnte cPK-overvåkingsmetoder29.
Protokollen må redusere variasjon i prøve-til-prøve-variasjon i hudtykkelsen for ulike preparater, da tykke menneskelige hudprøver vil gi minimalt signal etter påføring av legemiddelprodukter på grunn av lysspredning av den tykke prøven. Et mål med dette manuskriptet er å presentere en vevsforberedelsesmetodikk som sikrer reproduserbare bildestandarder. I tillegg er CRI-systemet satt opp som beskrevet for å redusere potensielle feilkilder samt minimere signal-til-støy. Dette dokumentet vil imidlertid ikke diskutere de veiledende prinsippene og tekniske fordelene ved CRI-mikroskopet, da dette tidligere har blitt dekket30. Til slutt utforskes den omfattende dataanalyseprosedyren for å muliggjøre tolkning av resultatene for å bestemme et eksperiments suksess eller fiasko.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Biohazard Bags</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td>22-044562</td>
			<td>As refered to in text: biohazard bags 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-polyethylene-biohazard-autoclave-bags-without-sterilization-indicator-8/22044562?searchHijack=true&#38;searchTerm= 22044562&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=22044562</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Buffers: Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT21030CV</td>
			<td>As refered to in text: PBS 
			https://www.fishersci.com/shop/products/corning-cellgro-cell-culture-buffers-dulbecco-s-phosphate-buffered-salt-solution-1x-8/MT21030CV?searchHijack=true&#38;searchTerm= 21-030-cv&#38;searchType= RAPID&#38;matchedCatNo=21-030-cv</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpels</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>14-840-00</td>
			<td>As refered to in text: scalpel 
			https://www.fishersci.com/shop/products/exel-international-disposable-scalpels-3/1484000?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Precision 45&#176; Angle Broad Point Tweezers/Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-132</td>
			<td>As refered to in text: forceps 
			https://www.fishersci.com/shop/products/high-precision-45-angle-broad-point-tweezers-forceps/12000132#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science</td>
			<td>06-666</td>
			<td>As refered to in text: task wiper 
			https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/06666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Laboratory Wrapping Film</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>As refered to in text: parafilm 
			https://www.fishersci.com/shop/products/curwood-parafilm-m-laboratory-wrapping-film-4/1337412</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (35 mm x 10 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875711YZ</td>
			<td>As refered to in text: small petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-specialty-6/FB0875711YZ?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td>As refered to in text: large petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/FB0875713A?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>NC9411473</td>
			<td>As refered to in text: scissors 
			https://www.fishersci.com/shop/products/scissors-327/NC9411473?searchHijack=true&#38;searchTerm= RS-5915SC&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=RS-5915SC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser/microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>650/60 nm BrightLine single-band bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - CH2 vibrations (645nm/60nm filter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control box IX2-UCB</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Control Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D700/30m</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - deuterated band 
			https://www.chroma.com/products/parts/d700-30m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeepSee Insight</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Laser 
			https://www.spectra-physics.com/f/insight-x3-tunable-laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Handheld Optical Power and Energy Meter Console</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td>As refered to in text: power meter 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoview Software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope Control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Microscope Slides</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: microscope slides 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/22265446</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation Chamber</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>GM-800</td>
			<td>As refered to in text: incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrating Sphere Photodiode Power Sensor</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>S142C</td>
			<td>As refered to in text: photodiode 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply FV31-PSU</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Power Supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision 4063, 80MHz Dual Channel Function Generator</td>
			<td>BK Precision</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: function generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProScan &#8211; Precision Microscope Automation</td>
			<td>Prior Scientific Instruments</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: stage controller 
			https://www.prior.com/microscope-automation/inverted-microscope-systems/proscan-linear-stage-highest-precision-microscope-automation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SecureSeal Imaging Spacers</td>
			<td>Grace Biolabs</td>
			<td>654004</td>
			<td>As refered to in text: spacer 
			https://gracebio.com/product/secureseal-imaging-spacers-654004/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SRS Detection Kit</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: SRS detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UPLSAPO 20X NA:0.75</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: 20X Objective 
			https://www.olympus-lifescience.com/en/objectives/uplsapo/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid/Drug Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;35 mm Dish, No. 0 Uncoated Coverslip, 14 mm Glass Diameter</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>NC9711297</td>
			<td>As refered to in text: Glass bottom dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/glass-bottom-mircrowell-dish/nc9711297</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Cotton-tipped applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Postive Displacement Pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distriman-positive-displacement-repetitive-pipette/F164001G#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette Tips</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Tips for pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distritip-syringes-6/f164100g?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: FIJI/ImageJ 
			https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jupyter-Lab</td>
			<td>open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: JupyterLab 
			https://jupyter.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Rstudio 
			https://www.rstudio.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging

Kutan farmakokinetikk (cPK) etter aktuell formuleringsapplikasjon har vært et forskningsområde av særlig interesse for regulatoriske og narkotikautviklingsforskere for mekanistisk å forstå aktuell biotilgjengelighet (BA). Semi-invasive teknikker, for eksempel tape-stripping, dermal mikrodialyse, eller dermal åpen-flow mikroperfusjon, alle kvantifisere makroskala cPK. Selv om disse teknikkene har gitt enorm cPK-kunnskap, mangler samfunnet en mekanistisk forståelse av aktiv farmasøytisk ingrediens (API) penetrasjon og permeasjon på cellenivå. 
En ikke-invasiv tilnærming for å adressere mikroskala cPK er sammenhengende Raman-spredningsavbildning (CRI), som selektivt retter seg mot iboende molekylære vibrasjoner uten behov for ekstrinsiske etiketter eller kjemisk modifikasjon. CRI har to hovedmetoder - sammenhengende anti-Stokes Raman spredning (CARS) og stimulert Raman spredning (SRS) - som muliggjør sensitiv og selektiv kvantifisering av API-er eller inaktive ingredienser. CARS brukes vanligvis til å utlede strukturell hudinformasjon eller visualisere kjemisk kontrast. I motsetning til dette brukes SRS-signalet, som er lineært med molekylær konsentrasjon, til å kvantifisere API-er eller inaktive ingredienser i hudstratifikasjoner. 
Selv om musevev ofte har blitt brukt til cPK med CRI, må aktuell BA og bioequivalens (BE) til slutt vurderes i humant vev før forskriftsmessig godkjenning. Denne artikkelen presenterer en metodikk for å forberede og bilde ex vivo hud som skal brukes i kvantitative farmakokinetiske CRI-studier i evalueringen av aktuell BA og BE. Denne metodikken muliggjør pålitelig og reproduserbar API-kvantifisering innen menneske- og musehud over tid. Konsentrasjonene i lipidrike og lipidfattige rom, samt total API-konsentrasjon over tid kvantifiseres; Disse brukes til estimater av mikro- og makroskala BA og potensielt BE.

Avbildning anses som vellykket hvis vevet ikke har beveget seg betydelig i verken aksial (<10 μm) eller lateral retning etter at eksperimentet er fullført (figur 4). Dette er en umiddelbar indikasjon hvis SRS-målingen for API av interesse ikke er representativ for den opprinnelige dybden, for hvilken kvantifisering er lagspesifikk. Dette reduseres ved å avbilde z-stabler for hver XY interesseposisjon, med avveiningen som den tidsmessige oppløsningen. Hvis frossen hud brukes i disse stud...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging

En sammenhengende Raman spredning avbildningsmetodikk for å visualisere og kvantifisere farmasøytiske forbindelser i huden er beskrevet. Dette dokumentet beskriver hudvevsforberedelse (menneske og mus) og aktuell formuleringsapplikasjon, bildeanskaffelse for å kvantifisere romlige konsentrasjonsprofiler og foreløpig farmakokinetisk analyse for å vurdere aktuell legemiddellevering.

Visualisere og kvantifisere farmasøytiske forbindelser i huden ved hjelp av sammenhengende Raman Scattering Imaging

Cutaneous pharmacokinetics (cPK) after topical formulation application has been a research area of particular interest for regulatory and drug development ...

Denne metoden er viktig ved at den gir mulighet for reproduserbar og nøyaktig metode for å kvantifisere topisk anvendte legemiddelprodukter ved hjelp av sammenhengende Raman-avbildning. Andre metoder gir klumpete kutan farmakokinetisk informasjon, mens denne metoden kan gi både bulk og mikroskala kutan farmakokinetisk informasjon som permeasjonsvei for et stoff. Visualiserings- og kvantifiserings- og permeasjonsveiene vil tillate utvikling av narkotikaprodukter med en bestemt vei i tankene for å nå målstedet.Vevsforberedelse vil vise seg å være den mest utfordrende delen av denne metoden. Vevet skal være tilstrekkelig tynt slik at man kan lese gjennom huden. For å begynne forberedelsen av et nakent museørehudvev, skaff deg euthanized nakne mus og fjern musens ører ved hjelp av tang og mikrokirurgisk saks.Legg deretter ett øre i en stor Petri-tallerken på størrelse 60 millimeter med 15 millimeter. Skyll deretter museøret med PBS to ganger og klapp øret tørt hver gang med oppgaveviskeren. Hvis det brukes innen 24 timer, plasser øret i PBS i en liten, 35 millimeter med 10 millimeter Petri-tallerken ved to til åtte grader Celsius.For å bruke etter 24 timers høsting, legg øret i en Petri-tallerken uten PBS, dekk deretter parabolen med parafilm for å lagre i en fryser ved minus 20 grader Celsius. Mens du arbeider under den biologiske hetten, plasser det menneskelige hudvevet i en stor Petri-tallerken med stratum corneum-siden vendt ned slik at det subkutane fettet er tilgjengelig. Bruk deretter tang og mikrokirurgisk saks for å fjerne det subkutane fettet.Når subkutant fett ikke lenger kan fjernes med saksen, bruk en 10 blad engangs skalpell i en 45-graders vinkel mot huden for å fjerne det gjenværende subkutane fettet mens du holder huden stille med tang. Når fettet er fjernet, del den menneskelige huden i en centimeter med en centimeter stykker. For lipidavbildning plasserer du den fremre delen av museøret vendt mot glassbunnen på en 35 millimeter, nummer null tallerken.For den menneskelige huden, plasser huden med stratum corneum vendt ned for å tillate narkotika kvantifisering fra overfladisk til dypere lag. Når vevet er sentrert på glassbunnen, bruk en bomullsspissapplikator for å sikre at huden er flat og har full kontakt med dekselets glideflate på glassbunnsfatet. For å forhindre bevegelse under avbildning, plasser en vaskemaskin på toppen av huden og sørg for at vevet er synlig gjennom senterhullet på skiven for stimulert Raman-spredning eller SRS-overføringsdeteksjon.Pipette den forhåndsbestemte dosen av formuleringen på huden, og bruk deretter en hanskefinger til å gni formuleringen med klokken i 30 sekunder. Etter at den tildelte tiden for formuleringen til permeat har gått, fjern overflødig formulering før du plasserer huden med formuleringssiden vendt mot glassbunnsfatet. Deretter går du videre til det eksperimentelle oppsettet ved å slå på mikroskopkontrollen eller MC-programvaren.Når du ser gjennom okularet, justerer du aksialfokuset med justeringsknappen for å sikre at vevet er i fokus. Når du er ferdig, fjerner du blokkeringen av både pumpen og Stokes-bjelkene og bekrefter at ALG1- og ALG2-kanaler er aktivert. Kontroller at SRS-fotodioden er på plass over kondensatoren, og klikk deretter fokus x2 på MC-programvaren for å visualisere huden i CARS- og SRS-kanalene.Gå til Visning-fanen i intervall- eller MATL-modulen for flere områder, og klikk på listen Registrert punkt for å vise bildelisten. Når stratum corneum er identifisert, bla gjennom aksial fokus eller Z-fokus for å identifisere spesifikke vev stratifikasjoner. Spesifikke dybder kan legges i huden som stratum corneum, talgkjertler, adipocytter eller subkutant fett, som bestemt under levende avbildning med lipidjustert kontrast.Hvis imidlertid hele dybdestakker skal tas, kan XY-posisjoner legges til, og den relative Z-plasseringen kan ignoreres. Når det gjelder bildebehandling av spesifikk dybde for hver hudstratifisering, velger du registerpunktet for å legge det til i MATL-køen. Hvis du vil ha fullstendige dybdestakker, klikker du Registrer punkt for hver XY-posisjon med dybdevalg i vinduet Anskaffelsesparametere.Deretter setter du antall repetisjoner til en i MATL-modulen og klikker På klar. Når Spill av-pilen endres fra grått til svart, trykker du Spill av for å begynne å bilde av den foreløpige lipidstakken. Når bildesyklusen er fullført, blokkerer du både pumpen og Stokes-bjelkene og endrer bølgelengden på det laser grafiske brukergrensesnittet til ønsket bølgelengde basert på det målrettede bølgenummeret eller Raman-vibrasjonen.Juster det manuelle tidsforsinkelsesstadiet samtidig som du sikrer at de samme kreftene brukes til å avbilde lipiden og den aktive farmasøytiske ingrediensen eller API-en som er etablert a priori. Når det totale antallet syklusgjen gjentakelser er valgt, fjerner du blokkeringen av pumpestrålen og kontrollerer om strømmen samsvarer med ønsket effekt ved hjelp av fotodioden før du trykker på Spill av for å starte automatisert bildebehandling av de innstilte punktene. Deretter utfører du dataanalyse for hver hudstratifisering ved å importere et talgkjertel lipidbilde til Fiji og merke av i boksen merket Split-kanaler for å dele filen i CARS- og SRS-kanalene.Hvis du vil åpne Region of Interest eller ROI Manager, klikker du på Analyser, Verktøy og ROI Manager. Bruk SRS-kanalen slik at C er lik en, de-marquee talgkjertelen i bildet og legg markeringene til ROI Manager ved å klikke på Legg til T i ROI Manager. Gjenta prosessen for hver talgkjertel i bildet.Hvis du vil maskere ut lipidrike områder, merker du hver avkastning og klikker mer, ELLER kombiner og legg til kategorier. Hvis du vil maskere ut lipidfattige områder, bruker du rektangelverktøyet på Fiji-menyen og tegner en firkant rundt hele bildet. Legg til området i ROI Manager.Klikk på den nylig tilføyde firkantede avkastningen i tillegg til avkastningen som velger alle lipidrike regioner i ROI Manager. Under Mer velger du XOR for å generere en maske av lipidfattige områder og legge den til i ROI Manager. Kjede sammen bildene i numerisk rekkefølge ved å gå til Bilde, Stabler, Verktøy og sette sammen faner i rekkefølge.Alternativt kan du importere bildene ved å laste inn en i Fiji og deretter velge et alternativ som heter Gruppefiler med lignende navn på oppsettsiden. Mens du har det sammenkoblede bildet aktivt, går du til ROI Manager for å velge lipidrike områder og klikker kategorien Mer før du velger Multimål, og deretter venter du til resultatvinduet vises. Fra Resultater-vinduet eksporterer du dataene til et regneark og legger til en kolonne med tittelen Region for å legge til lipidrike områder i hver datarad.Legg lipid dårlig til regioner som var utenfor lipidene. Hvis du vil visualisere dataene, lagrer og importerer du regnearket til R-pakken, ggplot2. Deretter tegner du inn dataene som en funksjon av bildenummeret i forhold til gjennomsnittsintensiteten for å beregne konsentrasjonstidsdataene.Kjør ikke-avdelingsanalyse eller Kystverket i RStudio på intensitetstidsdataene som importeres fra regnearket med kallet for ett lag. Når du er ferdig, kan du plotte og visuelt sammenligne Jmax- og AUCflux-all-beregninger. I tillegg utfører du statistiske sammenligninger på tvers av eksperimentelle forhold.Den representative analysen skildrer stratum corneum, talgkjertler, adipocytter, subkutant fett fra den nakne museørehuden og stratum corneum, papillær dermis og en talgkjertel fra den menneskelige huden. I naken mus ørehud ble den begrensede vevsbevegelsen av talgkjertler observert med samme vevsdybde i kjertlene på tidspunktet for formuleringsapplikasjonen og 120 minutter etter påføring. Den betydelige vevsbevegelsen i huden viste knapt synlige talgkjertler etter 120 minutters legemiddelpåføring, noe som demonstrerer ineffektiviteten til den opprinnelige protokollen.I flere studier viste intensiteten versus tidsprofilene høye innledende konsentrasjoner, etterfulgt av avtagende konsentrasjoner, noe som indikerer ingen ytterligere absorpsjon av stoffet i vevet. På den annen side indikerte noen studier en økning i intensitetene som senere gikk ned i løpet av den eksperimentelle varigheten, noe som viste at fluksen i vevet ikke hadde nådd maksimalt før avbildning. NCA-analyse av konsentrasjonstidsprofiler av to formuleringer for samme API indikerte at ethoxy-ethoxyetanol ga utvidet API-permeasjon sammenlignet med gelformuleringen uavhengig av hudlaget.Den totale eksponeringsanalysen mellom de samme formuleringene viste lignende observasjoner i de dypere lagene i huden. Tilberedning av menneskelig hud og riktig hudplassering på glassbunnsfatet etter påføring av stoff er avgjørende for eksperimentets suksess. De klare løsningene her demonstrerte egnetheten til denne metodikken.Videre forskning vil innebære markedsførte formuleringer som kremer for å forstå hvordan formuleringen påvirker API-penetrasjon og permeasjon.

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

MALDI Imaging Mass Spectrometry of Neuropeptides in Parkinson's Disease

MALDI Imaging massespektrometri av nevropeptider i Parkinsons sykdom

MALDI imaging mass spectrometry (IMS) is a powerful approach that facilitates the spatial analysis of molecular species in biological tissue samples2 ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Cerenkov Luminescence Imaging av interscapular brunt fettvev

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

Povidone Jod Rektal Forberedelse på tidspunktene Prostata Needle Biopsi er en enkel og reproduserbar virkemiddel for å redusere risikoen for prosedyre Infeksjon

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Kombinert Nær-infrarød Fluorescent Imaging og Micro-computertomografi for Direkte Visualisering Cerebral tromboemboli

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Bruke Multi-fluorerte gallesyrer og<em&gt; I Vivo</em&gt; Magnetic Resonance Imaging måle gallesyretransport

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Induserende iskemi-reperfusjon Injury i Mouse Ear Skin for intra multiphoton avbildning av immunrespons

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Kvantitativ visualisering av leukocytinfiltrat i en murin modell av Fulminant myokarditt ved lysarkmikroskopi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Rask evaluering av toksisitet av kjemiske forbindelser bruke sebrafisk embryo

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...