Name: visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging
Uploaded: 2021-11-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Yazarlar, Evans Grubu'ndan Dr. Fotis Iliopoulos ve Daniel Greenfield'a bu makaleyi tartışmaları ve düzeltmeleri için teşekkür eder. Buna ek olarak, yazarlar LEO Pharma'nın desteğini kabul etmek istiyor. Şekil 2 , BioRender.com ile oluşturulmuştur.

Çıplak fare kulak dokusunun kullanımı Massachusetts Genel Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanırken, insan derisi dokusunun kullanımı Massachusetts Genel Hastanesi Kurumsal İnceleme Kurulu (IRB) tarafından onaylanmıştır. IACUC protokollerine göre, taze ötenazi fareleri, çıplak fare kolonileri olan işbirlikçilerden elde edildi. İnsan dokusu, onaylanmış bir protokol aracılığıyla Massachusetts Genel Hastanesi'ndeki elektif abdominoplasti prosedürler...

<ol>
	<li>Finnin, B., Walters, K. A., Franz, T. J., Benson, H. E., Watkinson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+skin+permeation+methodology.+In+Transdermal+and+topical+drug+delivery:+principles+and+methodology.">In vitro skin permeation methodology. In Transdermal and topical drug delivery: principles and methodology.</a> Transdermal and topical drug delivery: principles and practice. , 85-108 (2012).</li><li>Shin, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+road+to+development+of+an+in+vitro+permeation+test+(IVPT)+model+to+compare+heat+effects+on+transdermal+delivery+systems:+exploratory+studies+with+nicotine+and+fentanyl.">On the road to development of an in vitro permeation test (IVPT) model to compare heat effects on transdermal delivery systems: exploratory studies with nicotine and fentanyl.</a> Pharmaceutical Research. 34 (9), 1817-1830 (2017).</li><li>Hossain, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation,+characterisation,+and+topical+delivery+of+terbinafine.">Preparation, characterisation, and topical delivery of terbinafine.</a> Pharmaceutics. 11 (10), 548 (2019).</li><li>Santos, L. L., Swofford, N. J., Santiago, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+permeation+test+(IVPT)+for+pharmacokinetic+assessment+of+topical+dermatological+formulations.">In vitro permeation test (IVPT) for pharmacokinetic assessment of topical dermatological formulations.</a> Current Protocols in Pharmacology. 91 (1), 79 (2020).</li><li>Iliopoulos, F., Caspers, P. J., Puppels, G. J., Lane, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Franz+cell+diffusion+testing+andquantitative+confocal+Raman+spectroscopy:+In+vitro-in+vivo+correlation.">Franz cell diffusion testing andquantitative confocal Raman spectroscopy: In vitro-in vivo correlation.</a> Pharmaceutics. 12 (9), 887 (2020).</li><li>Cordery, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+bioavailability+of+diclofenac+from+locally-acting,+dermatological+formulations.">Topical bioavailability of diclofenac from locally-acting, dermatological formulations.</a> International Journal of Pharmaceutics. 529 (1-2), 55-64 (2017).</li><li>Pensado, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stratum+corneum+sampling+to+assess+bioequivalence+between+topicalacyclovir+products.">Stratum corneum sampling to assess bioequivalence between topicalacyclovir products.</a> Pharmaceutical Research. 36 (12), 1-16 (2019).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dermal+delivery+of+niacinamide-in+vivo+studies.">Dermal delivery of niacinamide-in vivo studies.</a> Pharmaceutics. 13 (5), 726 (2021).</li><li>Bodenlenz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+flow+microperfusion+as+a+dermal+pharmacokinetic+approach+to+evaluate+topical+bioequivalence.">Open flow microperfusion as a dermal pharmacokinetic approach to evaluate topical bioequivalence.</a> Clinical Pharmacokinetics. 56 (1), 91-98 (2017).</li><li>Eirefelt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+dermal+pharmacokinetics+and+pharmacodymanic+effect+of+soft+topical+PDE4+inhibitors:Open+flow+microperfusion+and+skin+biopsies.">Evaluating dermal pharmacokinetics and pharmacodymanic effect of soft topical PDE4 inhibitors:Open flow microperfusion and skin biopsies.</a> Pharmaceutical Research. 37 (12), 1-12 (2020).</li><li>Stagni, G., O'Donnell, D., Liu, Y. J., Kellogg, J. D. L., Shepherd, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iontophoretic+current+and+intradermal+microdialysis+recovery+in+humans.">Iontophoretic current and intradermal microdialysis recovery in humans.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 41 (1), 49-54 (1999).</li><li>Garcia Ortiz, P., Hansen, S. H., Shah, V. P., Menne, T., Benfeldt, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+adultatopic+dermatitis+on+topical+drug+penetration:+assessment+by+cutaneous+microdialysis+and+tape+stripping.">Impact of adultatopic dermatitis on topical drug penetration: assessment by cutaneous microdialysis and tape stripping.</a> Acta Dermato-Venereologica. 89 (1), 33-38 (2009).</li><li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis:+Continuous+intermittent+vs+continuous-only+sampling.">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li><li>Kuzma, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+local+bioavailability+of+metronidazole+from+topical+formulations+using+dermal+microdialysis:+Preliminary+study+in+a+Yucatan+mini-pig+model.">Evaluation of local bioavailability of metronidazole from topical formulations using dermal microdialysis: Preliminary study in a Yucatan mini-pig model.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105741 (2021).</li><li>Begley, R., Harvey, A., Byer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L.Coherent+anti-Stokes+Raman+spectroscopy.">L.Coherent anti-Stokes Raman spectroscopy.</a> Applied Physics Letters. 25 (7), 387-390 (1974).</li><li>Evans, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+imaging+of+tissue+in+vivo+with+video-rate+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering+microscopy.">Chemical imaging of tissue in vivo with video-rate coherent anti-Stokes Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (46), 16807-16812 (2005).</li><li>Hill, A. H., Manifold, B., Fu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+imaging+depth+limit+of+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Tissue imaging depth limit of stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 11 (2), 762-774 (2020).</li><li>Feizpour, A., Marstrand, T., Bastholm, L., Eirefelt, S., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+quantification+of+pharmacokinetics+in+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy+and+deep+learning.">Label-free quantification of pharmacokinetics in skin with stimulated Raman scattering microscopy and deep learning.</a> Journal of Investigative Dermatology. 141 (2), 395-403 (2021).</li><li>Ghosh, B., Reddy, L. H., Kulkarni, R. V., Khanam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+skin+permeability+of+drugs+in+mice+and+human+cadaver+skin.">Comparison of skin permeability of drugs in mice and human cadaver skin.</a> Indian Journal of Experimental Biology. 38 (1), 42-45 (2000).</li><li>Nielsen, J. B., Plasencia, I., S&#248;rensen, J. A., Bagatolli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Storage+conditions+of+skin+affect+tissue+structure+and+subsequent+in+vitro+percutaneous+penetration.">Storage conditions of skin affect tissue structure and subsequent in vitro percutaneous penetration.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 24 (2), 93-102 (2011).</li><li>Barbero, A. M., Frasch, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+frozen+human+epidermis+storage+duration+and+cryoprotectant+on+barrier+function+using+two+model+compounds.">Effect of frozen human epidermis storage duration and cryoprotectant on barrier function using two model compounds.</a> Skin Pharmacology and Physiology. 29 (1), 31-40 (2016).</li><li>Babu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+various+methods+of+cold+storage+of+skin+on+the+permeation+of+melatonin+and+nimesulide.">The influence of various methods of cold storage of skin on the permeation of melatonin and nimesulide.</a> Journal of Controlled Release. 86 (1), 49-57 (2003).</li><li>Skelly, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+and+AAPS+report+of+the+workshop+on+principles+and+practices+of+in+vitro+percutaneous+penetration+studies:+relevance+to+bioavailability+and+bioequivalence.">FDA and AAPS report of the workshop on principles and practices of in vitro percutaneous penetration studies: relevance to bioavailability and bioequivalence.</a> Pharmaceutical Research. 4 (3), 265-267 (1987).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidance+document+for+the+conduct+of+skin+absorption+studies.">Guidance document for the conduct of skin absorption studies.</a> OECD. , (2004).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test+no.+428:+Skin+absorption:+In+vitro+method.">Test no. 428: Skin absorption: In vitro method.</a> OECD. , (2004).</li><li>Saar, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Video-rate+molecular+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering.">Video-rate molecular imaging in vivo with stimulated Raman scattering.</a> Science. 330 (6009), 1368-1370 (2010).</li><li>Saar, B. G., Contreras-Rojas, L. R., Xie, X. S., Guy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+drug+delivery+to+skin+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Imaging drug delivery to skin with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Molecular Pharmaceutics. 8 (3), 969-975 (2011).</li><li>Pence, I. J., Kuzma, B. A., Brinkmann, M., Hellwig, T., Evans, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-windowsparse+spectral+sampling+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Multi-windowsparse spectral sampling stimulated Raman scattering microscopy.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6095-6114 (2021).</li><li>Herkenne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+methods+for+the+assessment+of+topical+drug+bioavailability.">In vivo methods for the assessment of topical drug bioavailability.</a> Pharmaceutical Research. 25 (1), 87-103 (2008).</li><li>Alfonso-Garc&#305;a, A., Mittal, R., Lee, E. S., Potma, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+with+coherent+Raman+scattering+microscopy:+a+tutorial.">Biological imaging with coherent Raman scattering microscopy: a tutorial.</a> Journal of Biomedical Optics. 19 (7), 071407 (2014).</li><li>Osseiran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+monitoring+of+cancer+cell+subpopulations+in+monolayers,+3D+spheroids,+and+xenografts+using+the+photoconvertible+dye+DiR.">Longitudinal monitoring of cancer cell subpopulations in monolayers, 3D spheroids, and xenografts using the photoconvertible dye DiR.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1-10 (2019).</li><li>Evennett, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kohler+illumination:+a+simple+interpretation.">Kohler illumination: a simple interpretation.</a> Proceedings of the Royal Microscopical Society. 28 (4), 189-192 (1983).</li><li>Sanderson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+microscopy.">Fundamentals of microscopy.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 10 (2), 76 (2020).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Hunter, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matplotlib:+A+2D+graphics+environment.">Matplotlib: A 2D graphics environment.</a> Computing in Science &amp; Engineering. 9 (3), 90-95 (2007).</li><li>Wickham, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis. , (2016).</li><li>Kim, H., Han, S., Cho, Y. S., Yoon, S. K., Bae, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+R+packages:'Non-Compart'+and+'ncar'+for+noncompartmental+analysis+(NCA).">Development of R packages:'Non-Compart' and 'ncar' for noncompartmental analysis (NCA).</a> Translational and Clinical Pharmacology. 26 (1), 10-15 (2018).</li></ol>

Topikal BA / BE'nin değerlendirilmesi, tek bir yöntemin in vivo cPK'yi tam olarak karakterize edemeyeceği için çok yönlü bir yaklaşım gerektiren bir araştırma alanıdır. Bu protokol, tutarlı Raman görüntülemesine dayanan topikal bir ilaç ürününün BA / BE'sinin değerlendirilmesi için bir metodoloji sunmaktadır. Göz ardı edilebilecek ilk noktalardan biri, özellikle kantitatif iletim SRS görüntüleme için cilt örneklerinin ne kadar ince olması gerektiğidir. Cilt çok kalınsa (y...

Topikal ilaç ürünü uygulamasından sonra cPK'yi değerlendirmek için kullanılan metodolojiler, klasik in vitro permeasyon testi (IVPT) çalışmaları 1,2,3,4,5 ve bant sıyırma 6,7,8'den açık akışlı mikroperfüzyon veya dermal mikrodiyaliz 9,10,11 gibi ek metodolojilere genişlemiştir. 12,13,14. İlgilenilen hastalığa bağlı olarak potansiyel olarak çeşitli lokal terapötik etki bölgeleri vardır. Bu nedenle, bir API'nin amaçlanan yerel eylem alanına ulaşma oranını ve kapsamını değerlendirmek için karşılık gelen sayıda metodoloji olabilir. Yukarıda belirtilen metodolojilerin her birinin avantajları olsa da, en büyük dezavantaj mikro ölçekli cPK bilgisinin eksikliğidir (yani, API'nin nereye gittiğini ve nasıl yayıldığını görselleştirememe).
Topikal BA ve BE'yi tahmin etmek için ilgi çekici bir noninvaziv metodoloji, iki görüntüleme yöntemine ayrılabilen CRI'dır: CARS ve SRS mikroskopisi. Bu tutarlı Raman yöntemleri, doğrusal olmayan Raman etkileri yoluyla moleküllerin kimyasal olarak spesifik görüntülenmesini sağlar. CRI'da, iki lazer darbe treni bir numune içinde odaklanır ve taranır; lazer frekansları arasındaki enerji farkı, ilgilenilen kimyasal yapılara özgü titreşim modlarını hedeflemek üzere ayarlanmıştır. CRI süreçleri doğrusal olmadığından, sadece mikroskop odağında bir sinyal üretilir ve dokunun üç boyutlu farmakokinetik tomografik görüntülenmesine izin verir. cPK bağlamında, CARS, lipit bakımından zengin cilt yapılarının yeri gibi doku yapısal bilgilerini elde etmek için kullanılmıştır15. Buna karşılık, SRS, sinyali konsantrasyonla doğrusal olduğu için moleküler konsantrasyonu ölçmek için kullanılmıştır. Ex vivo cilt örnekleri için, CARS'ı epi-yön16'da ve SRS'yi şanzıman modu17'de gerçekleştirmek avantajlıdır. Bu nedenle, ince doku örnekleri SRS sinyalinin algılanmasına ve miktarının belirlenmesine izin verecektir.
Bir model doku olarak, çıplak fare kulağı, küçük dezavantajları olan çeşitli avantajlar sunar. Bir avantajı, dokunun zaten ~ 200-300 μm kalınlığında olması ve daha fazla numune hazırlığı gerektirmemesidir. Ek olarak, bir görüş alanına eksenel olarak odaklanarak çeşitli cilt tabakalaşmaları görülür (örneğin, stratum korneum, yağ bezleri (SG'ler), adipositler ve deri altı yağ)16,18. Bu, insan derisi örneklerine geçmeden önce kutanöz permeasyon yollarının ve topikal BA tahminlerinin klinik öncesi ön tahminine izin verir. Bununla birlikte, çıplak fare modeli, cilt yapısındaki farklılıklar nedeniyle in vivo senaryolara ekstrapolasyonda zorluk gibi sınırlamalar sunar19. Çıplak fare kulağı ön sonuçlar elde etmek için mükemmel bir model olsa da, insan derisi modeli altın standarttır. Donmuş insan derisinin in vivo geçirgenlik kinetiği 20,21,22'yi doğru bir şekilde özetlemeye uygunluğu ve uygulanabilirliği hakkında çeşitli yorumlar yapılmış olmasına rağmen, donmuş insan derisinin kullanımı in vitro API geçirgenlik kinetiğinin değerlendirilmesi için kabul edilmiş bir yöntemdir23,24,25 . Bu protokol, fare ve insan derisindeki çeşitli cilt katmanlarını görselleştirirken, lipit bakımından zengin ve lipit bakımından fakir yapılardaki API konsantrasyonlarını ölçer.
CRI, dokulardaki bileşikleri spesifik olarak görselleştirmek için çok sayıda alanda kullanılmış olsa da, topikal olarak uygulanan ilaç ürünlerinin cPK'sini araştıran sınırlı çabalar olmuştur. CRI kullanarak topikal ürünlerin topikal BA / BE'sini değerlendirmek için, önce doğru karşılaştırmalar yapmak için standartlaştırılmış bir protokole sahip olmak gerekir. Cilde ilaç dağıtımı için CRI kullanan önceki çabalar, veriler içinde değişkenlik göstermiştir. Bu nispeten yeni bir CRI uygulaması olduğundan, bir protokol oluşturmak güvenilir sonuçlar elde etmek için kritik öneme sahiptir 18,26,27. Bu yaklaşım, Raman spektrumunun biyolojik sessiz bölgesinde yalnızca belirli bir dalga sayısını hedefler. Ancak, çoğu API ve etkin olmayan bileşenlerin parmak izi bölgesinde Raman kaymaları vardır. Bu daha önce parmak izi bölgesindeki dokudan kaynaklanan doğal sinyal nedeniyle zorluklar yaratmıştı. Son lazer ve hesaplamalı gelişmeler, burada sunulan yaklaşımla birlikte de kullanılabilen bu engeli ortadan kaldırmıştır28. Burada sunulan bu yaklaşım, sessiz bölgede (2.000-2.300 cm-1) Raman kayması olan bir API'nin nicelleştirilmesine izin verir. Bu, ilacın fizyokimyasal özellikleri ile sınırlı değildir, bu da daha önce bahsedilen bazı cPK izleme metodolojileri için geçerli olabilir29.
Protokol, çeşitli preparatlar için cilt kalınlığındaki numuneden numuneye değişkenliği azaltmalıdır, çünkü kalın insan derisi örnekleri, kalın numune tarafından ışık saçılması nedeniyle ilaç ürünü uygulamasından sonra minimum sinyal üretecektir. Bu makalenin amacı, tekrarlanabilir görüntüleme standartlarını sağlayan bir doku hazırlama metodolojisi sunmaktır. Ek olarak, CRI sistemi, potansiyel hata kaynaklarını azaltmak ve sinyal-gürültü sinyalini en aza indirmek için açıklandığı gibi kurulur. Bununla birlikte, bu makale CRI mikroskobunun yol gösterici ilkelerini ve teknik değerlerini tartışmayacaktır, çünkü bu daha önce30 ele alınmıştır. Son olarak, bir deneyin başarısını veya başarısızlığını belirlemek için sonuçların yorumlanmasına izin vermek için kapsamlı veri analizi prosedürü araştırılmıştır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tissue Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autoclavable Biohazard Bags</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td>22-044562</td>
			<td>As refered to in text: biohazard bags 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-polyethylene-biohazard-autoclave-bags-without-sterilization-indicator-8/22044562?searchHijack=true&#38;searchTerm= 22044562&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=22044562</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Buffers: Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Salt Solution 1x</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MT21030CV</td>
			<td>As refered to in text: PBS 
			https://www.fishersci.com/shop/products/corning-cellgro-cell-culture-buffers-dulbecco-s-phosphate-buffered-salt-solution-1x-8/MT21030CV?searchHijack=true&#38;searchTerm= 21-030-cv&#38;searchType= RAPID&#38;matchedCatNo=21-030-cv</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Scalpels</td>
			<td>Exel International</td>
			<td>14-840-00</td>
			<td>As refered to in text: scalpel 
			https://www.fishersci.com/shop/products/exel-international-disposable-scalpels-3/1484000?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Precision 45&#176; Angle Broad Point Tweezers/Forceps</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-000-132</td>
			<td>As refered to in text: forceps 
			https://www.fishersci.com/shop/products/high-precision-45-angle-broad-point-tweezers-forceps/12000132#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply</td>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science</td>
			<td>06-666</td>
			<td>As refered to in text: task wiper 
			https://www.fishersci.com/shop/products/kimberly-clark-kimtech-science-kimwipes-delicate-task-wipers-7/06666</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M Laboratory Wrapping Film</td>
			<td>Bemis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td>As refered to in text: parafilm 
			https://www.fishersci.com/shop/products/curwood-parafilm-m-laboratory-wrapping-film-4/1337412</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (35 mm x 10 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875711YZ</td>
			<td>As refered to in text: small petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-specialty-6/FB0875711YZ?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td>As refered to in text: large petri dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-petri-dishes-clear-lid-12/FB0875713A?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>NC9411473</td>
			<td>As refered to in text: scissors 
			https://www.fishersci.com/shop/products/scissors-327/NC9411473?searchHijack=true&#38;searchTerm= RS-5915SC&#38;searchType=RAPID&#38; matchedCatNo=RS-5915SC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser/microscope</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>650/60 nm BrightLine single-band bandpass filter</td>
			<td>Semrock</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - CH2 vibrations (645nm/60nm filter)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Control box IX2-UCB</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Control Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D700/30m</td>
			<td>Chroma</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: CARS filter - deuterated band 
			https://www.chroma.com/products/parts/d700-30m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DeepSee Insight</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Laser 
			https://www.spectra-physics.com/f/insight-x3-tunable-laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Handheld Optical Power and Energy Meter Console</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>PM100D</td>
			<td>As refered to in text: power meter 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoview Software</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope Control software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Frosted Microscope Slides</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: microscope slides 
			https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-frosted-microscope-slides-4/22265446</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV1000</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubation Chamber</td>
			<td>Tokai Hit</td>
			<td>GM-800</td>
			<td>As refered to in text: incubation chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Integrating Sphere Photodiode Power Sensor</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>S142C</td>
			<td>As refered to in text: photodiode 
			https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=3341</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply FV31-PSU</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Power Supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision 4063, 80MHz Dual Channel Function Generator</td>
			<td>BK Precision</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: function generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProScan &#8211; Precision Microscope Automation</td>
			<td>Prior Scientific Instruments</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: stage controller 
			https://www.prior.com/microscope-automation/inverted-microscope-systems/proscan-linear-stage-highest-precision-microscope-automation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SecureSeal Imaging Spacers</td>
			<td>Grace Biolabs</td>
			<td>654004</td>
			<td>As refered to in text: spacer 
			https://gracebio.com/product/secureseal-imaging-spacers-654004/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SRS Detection Kit</td>
			<td>APE</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: SRS detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UPLSAPO 20X NA:0.75</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: 20X Objective 
			https://www.olympus-lifescience.com/en/objectives/uplsapo/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipid/Drug Imaging</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;35 mm Dish, No. 0 Uncoated Coverslip, 14 mm Glass Diameter</td>
			<td>MatTek Corporation</td>
			<td>NC9711297</td>
			<td>As refered to in text: Glass bottom dish 
			https://www.fishersci.com/shop/products/glass-bottom-mircrowell-dish/nc9711297</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Cotton-tipped applicator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Postive Displacement Pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distriman-positive-displacement-repetitive-pipette/F164001G#?keyword=</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distriman Postive Displacement Pipette Tips</td>
			<td>Gilson</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Tips for pipette 
			https://www.fishersci.com/shop/products/gilson-distritip-syringes-6/f164100g?keyword=true</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data Analysis</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: FIJI/ImageJ 
			https://imagej.net/software/fiji/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jupyter-Lab</td>
			<td>open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: JupyterLab 
			https://jupyter.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rstudio</td>
			<td>Open-source</td>
			<td></td>
			<td>As refered to in text: Rstudio 
			https://www.rstudio.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing and quantifying pharmaceutical compounds within skin using coherent raman scattering imaging

Topikal formülasyon uygulamasından sonra kutanöz farmakokinetiği (cPK), düzenleyici ve ilaç geliştirme bilim adamlarının topikal biyoyararlanımı (BA) mekanik olarak anlamaları için özel bir ilgi alanı olmuştur. Bant sıyırma, dermal mikrodiyaliz veya dermal açık akışlı mikroperfüzyon gibi yarı invaziv tekniklerin tümü makro ölçekli cPK'yi ölçer. Bu teknikler geniş cPK bilgisi sağlamış olsa da, topluluk aktif farmasötik bileşen (API) penetrasyonu ve hücresel düzeyde geçirgenlik konusunda mekanik bir anlayıştan yoksundur. 
Mikro ölçekli cPK'yi ele almak için invaziv olmayan bir yaklaşım, dışsal etiketlere veya kimyasal modifikasyona gerek kalmadan içsel moleküler titreşimleri seçici olarak hedefleyen tutarlı Raman saçılma görüntülemesidir (CRI). CRI, API'lerin veya aktif olmayan bileşenlerin hassas ve seçici bir şekilde ölçülmesini sağlayan iki ana yönteme sahiptir - tutarlı anti-Stokes Raman saçılması (CARS) ve uyarılmış Raman saçılması (SRS). CARS tipik olarak yapısal cilt bilgilerini türetmek veya kimyasal kontrastı görselleştirmek için kullanılır. Buna karşılık, moleküler konsantrasyonla doğrusal olan SRS sinyali, cilt tabakalaşmalarındaki API'leri veya aktif olmayan bileşenleri ölçmek için kullanılır. 
CRI ile cPK için fare dokusu yaygın olarak kullanılmasına rağmen, topikal BA ve biyoeşdeğerlik (BE), düzenleyici onaydan önce insan dokusunda değerlendirilmelidir. Bu yazıda topikal BA ve BE'nin değerlendirilmesinde kantitatif farmakokinetik KRİ çalışmalarında kullanılacak ex vivo deri hazırlama ve görüntüleme metodolojisi sunulmaktadır. Bu metodoloji, zaman içinde insan ve fare derisinde güvenilir ve tekrarlanabilir API ölçümü sağlar. Lipid bakımından zengin ve lipid bakımından fakir bölmelerdeki konsantrasyonlar ve zaman içindeki toplam API konsantrasyonu ölçülür; bunlar mikro ve makro ölçekli BA ve potansiyel olarak BE tahminleri için kullanılır.

Deneyin tamamlanmasından sonra doku eksenel (<10 μm) veya lateral yönde anlamlı bir şekilde hareket etmemişse görüntüleme başarılı kabul edilir (Şekil 4). Bu, ilgilenilen API için SRS ölçümünün, nicelemenin katmana özgü olduğu başlangıç derinliğini temsil etmediğinin hemen bir göstergesidir. Bu, ilgilenilen her XY pozisyonu için z-yığınlarının görüntülenmesiyle hafifletilir ve takas zamansal çözünürlüktür. Bu çalışmalarda donmuş cilt kullanılı...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging at JoVE.com

Visualizing and Quantifying Pharmaceutical Compounds within Skin using Coherent Raman Scattering Imaging

Cilt içindeki farmasötik bileşikleri görselleştirmek ve ölçmek için tutarlı bir Raman saçılma görüntüleme metodolojisi açıklanmaktadır. Bu yazıda deri dokusu hazırlığı (insan ve fare) ve topikal formülasyon uygulaması, uzaysal zamansal konsantrasyon profillerini ölçmek için görüntü elde etme ve topikal ilaç dağıtımını değerlendirmek için ön farmakokinetik analiz açıklanmaktadır.

Tutarlı Raman Saçılma Görüntüleme Kullanarak Ciltteki Farmasötik Bileşiklerin Görselleştirilmesi ve Ölçülmesi

Cutaneous pharmacokinetics (cPK) after topical formulation application has been a research area of particular interest for regulatory and drug development ...

Bu metodoloji, tutarlı Raman görüntülemeyi kullanarak topikal olarak uygulanan ilaç ürünlerini ölçmek için tekrarlanabilir ve doğru bir yönteme izin vermesi bakımından önemlidir. Diğer metodolojiler hacimli kutanöz farmakokinetik bilgi sağlarken, bu metodoloji bir ilacın geçirgenlik yolu gibi hem toplu hem de mikro ölçekli kutanöz farmakokinetik bilgiler sağlayabilir. Görselleştirme, nicelleştirme ve geçirgenlik yolları, hedef bölgeye ulaşmak için belirli bir yol göz önünde bulundurularak ilaç ürünlerinin geliştirilmesine izin verecektir.Doku hazırlama bu metodolojinin en zorlu kısmı olduğunu kanıtlayacaktır. Doku yeterince ince olmalıdır, böylece cilt içinden okuyabilmelidir. Çıplak bir fare kulak derisi dokusunun hazırlanmasına başlamak için, ötenazi çıplak fareler alın ve forseps ve mikrocerrahi makas kullanarak farenin kulaklarını çıkarın.Sonra bir kulağı 60 milimetre x 15 milimetre büyüklüğünde büyük bir Petri kabına yerleştirin. Ardından, fare kulağını PBS ile iki kez durulayın ve görev sileceği ile her seferinde kulağı kurutun. 24 saat içinde kullanılırsa, kulağı PBS'ye iki ila sekiz santigrat derecede küçük, 35 milimetre x 10 milimetre Petri kabına yerleştirin.Hasattan 24 saat sonra kullanmak için, kulağı PBS'siz bir Petri kabına yerleştirin, ardından kabı eksi 20 santigrat derecede bir dondurucuda saklamak için parafilmle örtün. Biyolojik kaputun altında çalışırken, insan derisi dokusunu, stratum korneum tarafı aşağıya bakacak şekilde büyük bir Petri kabına yerleştirin, böylece deri altı yağına erişilebilir. Daha sonra deri altı yağını çıkarmak için forseps ve mikrocerrahi makas kullanın.Subkutan yağ artık makasla çıkarılamadığında, cildi hala forsepslerle tutarken kalan deri altı yağını çıkarmak için cilde 45 derecelik bir açıyla 10 bıçaklı tek kullanımlık bir neşter kullanın. Yağ alındığında, insan derisini bir santimetre parça halinde bir santimetreye bölün. Lipid görüntüleme için, fare kulağının ön kısmını 35 milimetrelik, sıfır numaralı bir kabın cam tabanına bakacak şekilde yerleştirin.İnsan derisi için, yüzeyselden daha derin katmanlara ilaç miktarının belirlenmesine izin vermek için cildi stratum korneum aşağı bakacak şekilde yerleştirin. Doku cam tabana ortalandıktan sonra, cildin düz olduğundan ve cam alt kabın kapak kayma yüzeyi ile tam temas ettiğinden emin olmak için bir pamuk ucu aplikatörü kullanın. Görüntüleme sırasında herhangi bir hareketi önlemek için, cildin üstüne bir yıkayıcı yerleştirin ve Uyarılmış Raman Saçılması veya SRS iletim algılaması için dokunun yıkayıcının orta deliğinden görülebildiğinden emin olun.Formülasyonun önceden belirlenmiş dozunu cilde pipetleyin, ardından formülü 30 saniye boyunca saat yönünde ovalamak için eldivenli bir parmak kullanın. Formülasyonun nüfuz etmesi için ayrılan süre geçtikten sonra, cildi formülasyon tarafı cam alt kaba bakacak şekilde yerleştirmeden önce fazla formülasyondan çıkarın. Ardından, Mikroskop Kontrolü veya MC yazılımını açarak deney düzeneğine geçin.Göz merceğinden bakarak, dokunun odak içinde olduğundan emin olmak için ayar düğmesiyle eksenel odağı ayarlayın. İşiniz bittiğinde, hem pompanın hem de Stokes kirişlerinin blokajını kaldırın ve ALG1 ve ALG2 kanallarının etkinleştirildiğini onaylayın. SRS fotodiyotunun kondenserin üzerinde konumda olduğundan emin olun, ardından cildi CARS ve SRS kanallarında görselleştirmek için MC yazılımında Focus x2'ye tıklayın.Çok Alanlı Zaman Atlamalı veya MATL modülünde, Görünüm sekmesine gidin ve görüntüleme listesinin görünmesi için Kayıtlı Nokta Listesi'ne tıklayın. Stratum korneum tanımlandıktan sonra, spesifik doku tabakalaşmalarını tanımlamak için eksenel odak veya Z-odağı arasında kaydırın. Lipid ayarlı kontrast ile canlı görüntüleme sırasında belirlendiği gibi, stratum korneum, yağ bezleri, adipositler veya deri altı yağ gibi deriye spesifik derinlikler eklenebilir.Bununla birlikte, tüm derinlik yığınları alınacaksa, XY konumları eklenebilir ve göreli Z konumu yok sayılabilir. Her cilt tabakalaşması için belirli bir derinliğin görüntülenmesi durumunda, MATL kuyruğuna eklemek için Kayıt Noktası'nı seçin. Tam derinlik yığınları için, Alma Parametreleri penceresinde Derinlik Seçimi ile Her XY Konumu için Kayıt Noktası'nı tıklatın.Ardından, MATL modülünde yineleme sayısını bire ayarlayın ve Hazır'ı tıklatın. Oynat oku griden siyaha dönüştüğünde, ön lipit yığınını görüntülemeye başlamak için Oynat'a basın. Görüntüleme döngüsü tamamlandıktan sonra, hem pompayı hem de Stokes ışınlarını bloke edin ve lazer grafik kullanıcı arayüzündeki dalga boyunu, hedeflenen dalga sayısına veya Raman titreşimine bağlı olarak istenen dalga boyuna değiştirin.Manuel zaman gecikme aşamasını ayarlarken, a priori olarak oluşturulan lipit ve aktif farmasötik bileşeni veya API'yi görüntülemek için aynı güçlerin kullanılmasını sağlayın. Toplam döngü tekrarı sayısı seçildikten sonra, pompa ışınının engelini kaldırın ve ayar noktalarının otomatik olarak görüntülenmesine başlamak için Oynat düğmesine basmadan önce fotodiyotu kullanarak gücün istenen güçle eşleşip eşleşmediğini kontrol edin. Ardından, bir yağ bezi lipit görüntüsünü Fiji'ye aktararak ve dosyayı CARS ve SRS kanallarına bölmek için Bölünmüş kanallar etiketli kutuyu işaretleyerek her cilt tabakalaşması için veri analizi gerçekleştirin.İlgi Alanı veya YG Yöneticisi'ni açmak için Analiz, Araçlar ve YG Yöneticisi'ne tıklayın. SRS kanalını C'nin bire eşit olacağı şekilde kullanarak, görüntüdeki yağ bezinin işaretini kaldırın ve YG Yöneticisi'nde T Ekle'yi tıklatarak YG Yöneticisi'ne işaretleri ekleyin. İşlemi görüntüdeki her yağ bezi için tekrarlayın.Lipid açısından zengin bölgeleri maskelemek için, her YG'yi seçin ve ardından Daha Fazla, VEYA Birleştir ve Sekmeler ekle'yi tıklatın. Lipid açısından zayıf bölgeleri maskelemek için Fiji menüsündeki Dikdörtgen Aracı'nı kullanın ve tüm görüntünün etrafına bir kare çizin. Bölgeyi YG Yöneticisi'ne ekleyin.YG Yöneticisi'nde lipit açısından zengin tüm bölgeleri seçen YG'ye ek olarak yeni eklenen kare YG'ye tıklayın. Diğer altında, lipit açısından zayıf bölgelerin maskesini oluşturmak ve YG Yöneticisi'ne eklemek için XOR'u seçin. Görüntü, Yığınlar, Araçlar'a giderek görüntüleri sayısal sırada birleştirin ve sekmeleri sırayla birleştirin.Alternatif olarak, görüntüleri Fiji'ye yükleyerek ve ardından kurulum sayfasında Benzer adlara sahip dosyaları gruplandır adlı bir seçenek belirleyerek içe aktarın. Birleştirilmiş görüntü etkinken, lipit açısından zengin bölgeleri seçmek için YG Yöneticisi'ne gidin ve Çoklu Ölçüm'ü seçmeden önce Diğer sekmesini tıklayın, ardından Sonuçlar penceresinin görünmesini bekleyin. Sonuçlar penceresinden, verileri bir elektronik tabloya dışa aktarın ve her veri satırına lipit bakımından zengin bölgeler eklemek için Bölge başlıklı bir sütun ekleyin.Lipitlerin dışındaki bölgelere zayıf lipid ekleyin. Verileri görselleştirmek için elektronik tabloyu kaydedin ve ggplot2 R paketine aktarın. Ardından, konsantrasyon-zaman verilerini tahmin etmek için verileri görüntü numarasının bir fonksiyonu olarak ortalama yoğunluğa karşı çizin.RStudio'da bölümlere ayırmayan analizi veya NCA'yı, elektronik tablodan içe aktarılan yoğunluk süresi verilerinde tek katman çağrısıyla çalıştırın. İşiniz bittiğinde, Jmax ve AUCflux-all metriklerini çizin ve görsel olarak karşılaştırın. Ek olarak, deneysel koşullar arasında istatistiksel karşılaştırmalar yapın.Temsili analiz, stratum korneum, yağ bezleri, adipositler, çıplak fare kulak derisinden deri altı yağları ve stratum korneum, papiller dermis ve insan derisinden yağ bezini göstermektedir. Çıplak fare kulak derisinde yağ bezlerinin sınırlı doku hareketi, formülasyon uygulaması sırasında ve uygulamadan 120 dakika sonra bezlerin aynı doku derinliği ile gözlenmiştir. Derideki önemli doku hareketi, 120 dakikalık ilaç uygulamasından sonra zar zor görülebilen yağ bezleri gösterdi ve orijinal protokolün verimsizliğini gösterdi.Çeşitli çalışmalarda, zamana karşı yoğunluk profilleri yüksek başlangıç konsantrasyonları gösterdi, ardından konsantrasyonları azaltarak ilacın dokuya daha fazla emilmediğini gösterdi. Öte yandan, bazı çalışmalar, daha sonra deneysel süre boyunca azalan yoğunluklarda bir artış olduğunu ve dokuya akışın görüntülemeden önce maksimuma ulaşmadığını göstermiştir. Aynı API için iki formülasyonun konsantrasyon-zaman profillerinin NCA analizi, etoksi-etoksietanolün, cilt tabakasından bağımsız olarak jel formülasyonuna kıyasla genişletilmiş API geçirgenliği sağladığını göstermiştir.Aynı formülasyonlar arasındaki toplam maruz kalma analizi, cildin daha derin katmanlarında benzer gözlemler sergiledi. İlaç uygulamasından sonra insan derisinin hazırlanması ve cam alt kabın üzerine uygun cilt yerleştirilmesi, deneyin başarısı için kritik öneme sahiptir. Buradaki açık çözümler bu metodolojinin uygunluğunu göstermiştir.Daha fazla araştırma, formülasyonun API penetrasyonunu ve geçirgenliğini nasıl etkilediğini anlamak için kremler gibi pazarlanan formülasyonları içerecektir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Kantitatif Görselleştirme ve Dinamik Termal Görüntüleme Deri Kanseri Tespiti

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

MALDI Imaging Mass Spectrometry of Neuropeptides in Parkinson's Disease

Parkinson Hastalığında nöropeptitler MALDI Görüntüleme Kütle Spektrometresi

MALDI imaging mass spectrometry (IMS) is a powerful approach that facilitates the spatial analysis of molecular species in biological tissue samples2 ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Interskapular kahverengi adipoz dokuda arasında Çerenkov Lüminesans Görüntüleme

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Povidone Iodine Rectal Preparation at Time of Prostate Needle Biopsy is a Simple and Reproducible Means to Reduce Risk of Procedural Infection

Prostat İğne Biyopsisi Zamanında at Povidon İyot Rektal Hazırlama Usul Enfeksiyon Riskini Azaltmak için basit ve tekrarlanabilir araçlar olduğunu

Single institution and population-based studies highlight that infectious complications following transrectal ultrasound guided prostate needle biopsy ...

Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Doğrudan Serebral emboli görselleştirme için Kombine Yakın kızılötesi Floresan Görüntüleme ve Mikro bilgisayarlı Tomografi

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma<em&gt; İn Vivo</em&gt; Manyetik Rezonans Görüntüleme Tedbir Safra Asit Ulaşım

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Bir Fulminan Miyokardit Modelinde Işık Yeri Mikroskopisi İle Lökosit İnfiltrasyonunun Nicel Görselleştirilmesi

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...