Name: maintaining laboratory cultures of gryllus bimaculatus, a versatile orthopteran model for insect agriculture and invertebrate physiology
Uploaded: 2022-06-08T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology at JoVE.com

Financiering voor dit project werd mogelijk gemaakt door interne subsidies van de Universiteit van Wisconsin-Madison. Oprechte dank aan Kevin Bachhuber van Bachhuber Consulting Inc. voor toegang tot zijn ongepubliceerde gids voor commerciële cricketopfok en aan Michael Bartlett Smith voor zijn hulp bij het verfijnen en oplossen van problemen met deze methoden.

1. Voorbereiding van het ovipositiesubstraat
OPMERKING: Kokosvezel is een ideaal ovipositiesubstraat voor G. bimaculatus. Voor gedetailleerde methoden voor het scheiden van kokos van samengeperste kokossteen en een opmerking over ademhalingsveiligheid, zie aanvullende materialen stap 1.1.
<ol><li>Was de handen met water en zeep.</li>
	<li>Tarra een schone container op een balans en weeg een massa droge kokosvezel ongeveer zo groot als een menselijke...

<ol>
	<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+on+the+fly:+a+primer+on+the+Drosophila+model+system.">Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li><li>Merkel, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+temperature+and+food+quality+on+the+larval+development+of+Gryllus+bimaculatus+(Orthoptera,+Gryllidae).">The effects of temperature and food quality on the larval development of Gryllus bimaculatus (Orthoptera, Gryllidae).</a> Oecologia. 30 (2), 129-140 (1977).</li><li>Bateman, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mate+preference+for+novel+partners+in+the+cricket+Gryllus+bimaculatus.">Mate preference for novel partners in the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Ecological Entomology. 23 (4), 473-475 (1998).</li><li>Mito, T., Noji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+two-spotted+cricket+Gryllus+bimaculatus:+An+emerging+model+for+developmental+and+regeneration+studies.">The two-spotted cricket Gryllus bimaculatus: An emerging model for developmental and regeneration studies.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Ylla, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cricket+genomes:+the+genomes+of+future+food.">Cricket genomes: the genomes of future food.</a> BioRxiv. , (2020).</li><li>Halloran, A., Roos, N., Hanboonsong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cricket+farming+as+a+livelihood+strategy+in+Thailand.">Cricket farming as a livelihood strategy in Thailand.</a> Geographical Journal. 183 (1), 112-124 (2017).</li><li>Wade, M., Hoelle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+edible+insect+industrialization:+scales+of+production+and+implications+for+sustainability.">A review of edible insect industrialization: scales of production and implications for sustainability.</a> Environmental Research Letters. 15, 123013 (2020).</li><li>. Studies on the influence of different diets and rearing conditions on the development and growth of the two-spotted cricket Gryllus bimaculatus de Greer Available from: <a target="_blank" href="https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf">https://epub.uni-bayreuth.de/310/1/Diss.pdf</a> (2011)</li><li>Ngonga, C. A., Gor, C. O., Okuto, E. A., Ayieko, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+performance+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus+production+reared+under+improvised+cage+system+for+increased+returns+and+food+security.">Growth performance of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus production reared under improvised cage system for increased returns and food security.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7, 301-310 (2021).</li><li>Behrens, W., Hoffmann, K. -. H., Kempa, S., G&#228;&#223;ler, S., Merkel-Wallner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+diurnal+thermoperiods+and+quickly+oscillating+temperatures+on+the+development+and+reproduction+of+crickets,+Gryllus+bimaculatus.">Effects of diurnal thermoperiods and quickly oscillating temperatures on the development and reproduction of crickets, Gryllus bimaculatus.</a> Oecologia. 59 (2-3), 279-287 (1983).</li><li>Collavo, A., Paoletti, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Housecricket+smallscale+farming.">Housecricket smallscale farming.</a> Ecological implications of minilivestock. Potential of insects, rodents, frogs and snails. , (2005).</li><li>Simmons, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competition+between+larvae+of+the+field+cricket,+Gryllus+bimaculatus+(Orthoptera:+Gryllidae)+and+its+effects+on+some+life-history+components+of+fitness.">Competition between larvae of the field cricket, Gryllus bimaculatus (Orthoptera: Gryllidae) and its effects on some life-history components of fitness.</a> Journal of Animal Ecology. 56, 1015-1027 (1987).</li><li>Sorjonen, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+plant-based+by-product+diets+for+the+mass-rearing+of+Acheta+domesticus+and+Gryllus+bimaculatus.">The plant-based by-product diets for the mass-rearing of Acheta domesticus and Gryllus bimaculatus.</a> PLOS ONE. 14 (6), 0218830 (2019).</li><li>Maciel-Vergara, G., Jensen, A. B., Lecocq, A., Eilenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+in+edible+insect+rearing+systems.">Diseases in edible insect rearing systems.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 7 (5), 1-18 (2021).</li><li>Alexander, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggressiveness,+territoriality,+and+sexual+behavior+in+field+crickets+(Orthoptera:+Gryllidae).">Aggressiveness, territoriality, and sexual behavior in field crickets (Orthoptera: Gryllidae).</a> Behaviour. , 130-223 (1961).</li><li>Pet food, fish bait, and animal feed. USDA APHIS Available from: <a target="_blank" href="https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed">https://www.aphis.usda.gov/aphis/ourfocus/planhealth/import-information/permits/plant-pests/sa_animalfeed/ct_petfood_fishbait_animalfeed</a> (2022)</li><li>Donoughe, S., Extavour, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+development+of+the+cricket+Gryllus+bimaculatus.">Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus.</a> Developmental Biology. 411 (1), 140-156 (2016).</li><li>Dobermann, D., Michaelson, L., Field, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+an+initial+high-quality+feeding+regime+on+the+survival+of+Gryllus+bimaculatus+(black+cricket)+on+bio-waste.">The effect of an initial high-quality feeding regime on the survival of Gryllus bimaculatus (black cricket) on bio-waste.</a> Journal of Insects as Food and Feed. 5 (2), 1-8 (2018).</li><li>Lundy, M. E., Parrella, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crickets+are+not+a+free+lunch:+Protein+capture+from+scalable+organic+side-streams+via+high-density+populations+of+Acheta+domesticus.">Crickets are not a free lunch: Protein capture from scalable organic side-streams via high-density populations of Acheta domesticus.</a> PLOS ONE. 10, 0118785 (2015).</li><li>Mazaya, G., Karseno, K., Yanto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antimicrobial+and+phytochemical+activity+of+coconut+shell+extracts.">Antimicrobial and phytochemical activity of coconut shell extracts.</a> Turkish Journal of Agriculture - Food Science and Technology. 8 (5), 1090-1097 (2020).</li></ol>

De eenvoud van deze benadering van cricketopfok kan een reeks onderzoeksgebieden ten goede komen en vertegenwoordigt een generieke sjabloon voor succesvolle cricketteelt, gemakkelijk aan te passen aan een verscheidenheid aan experimentele behoeften. In vergelijking met verschillende andere studies van G. bimaculatus is de individuele volwassen lichaamsgrootte kleiner en de rijping langzamer14, wat we toeschrijven aan suboptimale opfoktemperatuur die ons door omstandigheden wordt opgelegd....

Zoals getypeerd door het iconische insect, de fruitvlieg Drosophila melanogaster, biedt het gebruik van insecten als laboratoriummodelorganismen duidelijke voordelen voor studies in genetica, toxicologie en fysiologie1. Het kleine formaat van insecten vermindert de ruimte die nodig is voor culturen en de hoeveelheid voer en verbruiksmaterialen die nodig zijn. Veel insecten planten zich snel voort, waardoor ze bij uitstek geschikt zijn voor het creëren van gespecialiseerde genetische lijnen en studies die de evaluatie van meerdere opeenvolgende generaties vereisen.
Veel studies richten zich op holometabool insecten zoals Drosophila, die volledige metamorfose en verpopping vertonen. Er zijn echter andere modellen beschikbaar, waaronder Gryllus bimaculatus (De Geer), de twee-gevlekte veldkrekel. G. bimaculatus is een paurometaboleus insect dat tussen de 7 en 11 nimfachtige instars ondergaat voordat het geslachtsrijp wordt2. Deze krekel vertoont een breed scala aan gedragingen met betrekking tot seksuele selectie, waaronder stridulatie, territoriale vertoningen en mate-guarding3. Onvolgroeide krekels zijn anders dan de larven van holometabool insectensoorten omdat ze, net als veel paurometaboleuze juvenielen, verloren en beschadigde ledematen kunnen regenereren tijdens ecdysis4. Daarnaast werd in 2021 het volledig gesequencede genoom van G. bimaculatus gepubliceerd5. Deze kenmerken maken deze krekels aantrekkelijk als doelwit voor fundamenteel onderzoek.
Twee-gevlekte veldkrekels worden op grote schaal gekweekt voor menselijk voedsel en veevoer. De schaal van deze operaties is vaak veel groter dan voor laboratoriumonderzoek 6,7. Ondanks het verschil in schaal overlappen de uitdagingen waarmee onderzoekers worden geconfronteerd sterk met die van commerciële cricketboeren. Deze overwegingen komen samen in de context van laboratoriumonderzoek gericht op het verbeteren van de productie van eetbare insecten. Naarmate de eetbare insectenindustrie blijft evolueren en groeien, is het optimaliseren van voerinputs en talloze andere aspecten van de productie een primair doel8. Laboratoriumstudies die gemeten verbeteringen in de efficiëntie van het fokken, overleven of generatietijd in deze krekels aantonen, hebben het potentieel om de winstgevendheid van cricketlandbouwactiviteiten op lange termijn te helpen verhogen.
Gestandaardiseerde opfokprotocollen maken een nauwere vergelijking mogelijk tussen studies die de optimalisatie van de opfok onderzoeken. Tot op heden zijn er weinig diepgaande protocollen voor het fokken van G. bimaculatus in het laboratorium gepubliceerd. Een ideaal protocol zou de omstandigheden weerspiegelen die worden aangetroffen in de echte cricketlandbouwactiviteiten, met behoud van de strikt gecontroleerde omstandigheden die nodig zijn om veranderingen in groeiprestaties als gevolg van experimentele behandelingen nauwkeurig te meten en risicobeperkende strategieën te benadrukken. De methoden die in dit artikel worden beschreven, zijn ontwikkeld op basis van gepubliceerde protocollen, technieken en apparaten die worden gebruikt om een verscheidenheid aan krekelsoorten te kweken op een breed scala aan laboratorium- en commerciële productieschalen 2,9,10,11,12. Deze methoden worden ook geïnformeerd door verschillende niet-peer-reviewed bronnen, waaronder ongepubliceerde technische bulletins en persoonlijke communicatie met commerciële cricketboeren in Noord-Amerika. Dit protocol is ontwikkeld met de bedoeling om de oprichting van laboratoriumculturen van G. bimaculatus te vergemakkelijken, specifiek voor gebruik in proeven met betrekking tot insectenteelt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>31-qt (29.3 L) Snap-lid tote bin with lid</td>
			<td>HOMZ</td>
			<td>3430CLBL</td>
			<td>Used to house breeding stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-tier/12-tray Grow Light Stand</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>NC1938548</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50-gal (189.27L) tote bin with lid</td>
			<td>Sterilite</td>
			<td>#14796603</td>
			<td>Used as secondary containment when handling crickets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL polypropylene graduated cylinder</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>S95171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5-qt (7.1 L) snap-lid tote bin with lid</td>
			<td>HOMZ</td>
			<td>3410CLBL</td>
			<td>Used to house exprimental stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accuris 500 g x 0.01 g Balance</td>
			<td>Manufactured by Accuris, a subsidieary of Benchmark Scientific</td>
			<td>W3300-500</td>
			<td>Purchased from Dot Scientific through University of Wisconsin system purchasing service &#34;ShopUW+&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ace Premier 1 Inch Flat Chip Brush</td>
			<td>Ace Hardware&#160;</td>
			<td>#1803261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bel-Art SP Scienceware deionized water wash bottle</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>03-421-160&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bright aluminum window screen&#160;</td>
			<td>Phifer</td>
			<td>UNSPSC# 11162108</td>
			<td>Mesh size 18 x 16&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear Disposable Plastic Portion Cups 5.5 oz w/ lids</td>
			<td>Wal-Mart</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deionized water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diablo 4-4/8&#34; x 13 TPI Ultra Fine Finish Bi-Metal Jigsaw Blade</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>#313114935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Egg Filler Flats-Paper, 12 x 12&#34;</td>
			<td>Uline</td>
			<td>S-5189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lid 100 x 15mm</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>FB0875714</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Petri Dishes with Clear Lid 60 x 15mm</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>FB0875713A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Georgia-Pacific Envision Brown Paper Towels</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>#205675843</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Infinity Tough Guy high performance hot-melt glue sticks</td>
			<td>Infinity Bond</td>
			<td>Infinity IM-Tough-Guy-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mazuri Cricket Diet</td>
			<td>Land O&#39; Lakes International</td>
			<td>SKU#&#160; 3002219-105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stanley TimeIt Twin 2-outlet Grounded Mechanical 24 Hour Timer</td>
			<td>Wal-Mart</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vermont Organics Reclamation Soil 11 lb Coir Block</td>
			<td>Home Depot</td>
			<td>#300679904</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

maintaining laboratory cultures of gryllus bimaculatus, a versatile orthopteran model for insect agriculture and invertebrate physiology

Gryllus bimaculatus (De Geer) is een grote krekel verspreid over Afrika en Zuid-Eurazië, waar het vaak in het wild wordt geoogst als menselijk voedsel. Buiten zijn oorspronkelijke verspreidingsgebied is het kweken van G. bimaculatus haalbaar vanwege de plasticiteit in de voeding, de snelle voortplantingscyclus, het ontbreken van de vereiste diapause, de tolerantie voor het fokken met hoge dichtheid en de robuustheid tegen ziekteverwekkers. G. bimaculatus kan dus een veelzijdig model zijn voor studies van insectenfysiologie, gedrag, embryologie of genetica.
Culturele parameters, zoals bezettingsdichtheid, refugia binnen de kooi, fotoperiode, temperatuur, relatieve vochtigheid en dieet, hebben allemaal invloed op de groei, het gedrag en de genexpressie van cricket en moeten worden gestandaardiseerd. In de ontluikende literatuur over het kweken van insecten voor menselijke consumptie, worden deze krekels vaak gebruikt om kandidaat-voederbijmengingen afgeleid van gewasresten, voedselverwerkende bijproducten en andere goedkope afvalstromen te evalueren.
Ter ondersteuning van lopende experimenten ter evaluatie van de groeiprestaties en voedingskwaliteit van G. bimaculatus als reactie op variabele voedersubstraten, is een uitgebreide set standaardprotocollen voor fokken, onderhoud, hantering, meting en euthanasie in het laboratorium ontwikkeld en hier gepresenteerd. Een industriestandaard krekelvoer is qua voedingswaarde adequaat en functioneel geschikt gebleken voor het langdurig onderhoud van krekelkbroedbestanden, evenals voor gebruik als experimenteel controlevoer. Het fokken van deze krekels met een dichtheid van 0,005 krekels / cm3 in met schermen bedekte polyethyleenkooien van 29,3 L bij een gemiddelde temperatuur van 27 ° C op een fotoperiode van 12 licht (L) / 12 donker (D), met bevochtigde kokosvezel die zowel als hydratatiebron als ovipositiemedium dient, heeft met succes gezonde krekels gedurende een periode van 2 jaar volgehouden. Volgens deze methoden leverden krekels in een gecontroleerd experiment een gemiddelde massa op van 0,724 g 0,190 g bij de oogst, met 89% overleving en 68,2% seksuele rijping tussen de kous (22 dagen) en de oogst (65 dagen).

Gegevens die aantonen dat cricket succesvol is opgefokt van uitkomen tot 65 dagen oud, werden verzameld tijdens een voerproef van september 2021. Krekels werden gekweekt uit eieren volgens stap 1.1.1-2.6.1 van deze protocollen, en zes replicaskooien werden gevuld met 24 willekeurige 22 dagen oude (derde instar) krekels na stap 2.7 hierboven. Krekels werden vervolgens gekweekt in omgevingsomstandigheden; als gevolg van een defecte luchtbehandelingseenheid van de faciliteit was de gemiddelde kamertemperatuur echter 25 ± 1...

Watch this Scientific Journal Video about Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology at JoVE.com

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

Dit artikel schetst basismethoden om belangrijke factoren zoals dichtheid, voerbeschikbaarheid, hydratatiebron en omgevingscontroles te standaardiseren voor het langdurig kweken van laboratoriumculturen van de eetbare krekel, Gryllus bimaculatus.

Het onderhouden van laboratoriumculturen van Gryllus bimaculatus, een veelzijdig orthopteraanmodel voor insectenlandbouw en ongewervelde fysiologie

Gryllus bimaculatus (De Geer)&#160;is a large-bodied cricket distributed throughout Africa and Southern Eurasia where it is often wild-harvested as human ...

Deze technieken tonen praktische en beproefde methoden voor het fokken van Gryllus bimaculatus, een belangrijke mini-diersoort die wordt gekweekt voor diervoeder en menselijk voedsel en een steeds belangrijker alternatief modelorganisme. Deze laboratoriummethoden voor de cultuur van Gryllus bimaculatus zijn afgeleid van technieken die gebruikelijk zijn in de Noord-Amerikaanse cricketlandbouwindustrie en vertegenwoordigen een facsimile op laboratoriumschaal van cricketlandbouwactiviteiten. Om te beginnen, teert een schone container op een balans en weeg een massa droge kokosvezel ongeveer zo groot als een menselijke vuist.Plaats vervolgens kokos in een afsluitbare, schone container, die ruimte biedt aan uitbreiding tot zes keer het oorspronkelijke volume. Breek met schone handen voorzichtig klonten kokos uit het stuk dat uit het grotere blok is verwijderd. Meet vervolgens met behulp van een gegradueerde cilinder van 250 milliliter het juiste volume gedeïoniseerd water om een vijf-op-één verhouding per massa van vijf delen water op één deel droge kokos te bereiken en voeg het gemeten gedeïoniseerde water langzaam toe, waarbij alle kokosdeeltjes gelijkmatig worden gehydrateerd.Macer daarna handmatig klonten om een gelijkmatige hydratatie te garanderen en hertel de container waarin de kokos eerder werd gewogen. Weeg 75 gram bevochtigde kokos af en breng deze over in een petrischaaltje van 100 millimeter bij 15 millimeter met een schone, plastic lepel om ervoor te zorgen dat de kokos gelijkmatig over de bodem van de schaal wordt verdeeld en dat er geen klonten zijn. Label vervolgens de zijkant van de petrischaal met laboratoriumtape met een gelabelde aanduiding van de geboortekolonie en de datum van de eierverzamelingsgebeurtenis.Meet nog eens 45 milliliter gedeïoniseerd water in een gegradueerde cilinder en voeg gelijkmatig water toe over het oppervlak van de verpakte kokos in de petrischaal om een gelijkmatige hydratatie te garanderen. Zodra de petrischaal is verpakt, sluit u de resterende bevochtigde kokos af in een luchtdicht vat voor opslag bij min 20 graden Celsius. Plaats het gehydrateerde ovipositiesubstraat in kooien met de gewenste ouderlijke voorraden krekels zo ver mogelijk van het voer en documenteer de datum en tijd.Plaats vervolgens een kleine, autoclaveerbare afvalcontainer op het werkoppervlak. Plaats vervolgens een schone, lege plastic kooi van 29,3 liter op de bank naast de prullenbak. Plaats nog een kooi van 29,3 liter met daarin de moederkrekelvoorraden en ovipositiesubstraat aan de andere kant van de afvalcontainer van de lege kooi.Verwijder na 24 uur het ovipositiesubstraat uit de ouderkrekelkooi en plaats het boven het autoclaveerbare afvalvat. Inspecteer de bovenkant van het ovipositiesubstraat op deeltjes frass of voer die de krekels mogelijk op het oppervlak van de kokos hebben geschopt. Verwijder vervolgens kokosverontreinigingen in het afvalvat met een schone Scoopula of plastic lepel en plaats de plastic lepel in de afvalcontainer.Plaats vervolgens het gereinigde ovipositiesubstraat in de schone kooi van 29,3 liter. Plaats daarna de kooi in een couveuse die is ingesteld op 27 graden Celsius bij 60% relatieve vochtigheid op een donkere fotoperiode van 12 uur en 12 uur licht. Breng de kooi met het fokbestand terug naar de oorspronkelijke locatie en verwijder alle items van het werkoppervlak.Plaats vervolgens de afvalcontainer in een vriezer in de faciliteit die is gewijd aan de opslag van items die mogelijk zijn verontreinigd met krekeleieren. Ontsmet vervolgens het werkoppervlak met 10% bleekoplossing en laat het 60 seconden zitten. Veeg het werkoppervlak droog met een schone papieren handdoek.Gooi na het openen van de vriezer het keukenpapier in de afvalcontainer. Selecteer twee ongebruikte commerciële eierdoosflats van 30,8 centimeter bij 30,8 centimeter. En snijd deze met een gebruiksmes of sterke schaar in zes afzonderlijke stroken van 10,1 centimeter breed van gelijke grootte.Borstel vervolgens de afgesneden randen met de handen af om bungelende kartondeeltjes te verwijderen. Plaats vervolgens de zes afzonderlijke stukken karton van 10,1 centimeter bij 30,8 centimeter verticaal in de bodem van de kooi, waarbij de langere as van de doos de smallere horizontale as van een kooi van 29,3 liter overspant. Leg een zevende stuk karton plat over de bovenkant van de zes rechtopstaande stukken.Na het selecteren van drie stukken ruwe, bruine papieren handdoek ongeveer 25 centimeter bij 25 centimeter, vouw je elk in tweeën. Plaats er vervolgens twee zodanig dat ze de bovenkant van de proximale kant van de kartonstructuur bedekken en plaats er een over de kartonstapel aan de distale kant. Verplaats op dag 11 na de ovipositie het ovipositiesubstraat naar de proximale rechterhoek van de kooi.Wanneer een luik wordt waargenomen, mist u de papieren handdoeken die over de bovenkant van de dozen zijn geplaatst, totdat ze bevochtigd zijn, maar niet actief water afgeven. Veeg vervolgens beide zijden van een petrideksel van 100 millimeter grondig af met 70% ethanol en laat het drogen. Schep vervolgens 50 gram van het voer in een blender met één portie van 60 watt en frees gedurende één minuut op 10.000 tpm.Nadat u een gram van het voer hebt gemeten, schudt u het op het petrischaaldeksel in de kooi. Gebruik het schone uiteinde van een lepel of Scoopula en verdeel het voer zo gelijkmatig mogelijk over de bodem van het gerecht. Vervang daarna het voer om de twee dagen.Gooi het oude voer weg in de autoclaveerbare afvalcontainer. Monitor voor schimmelgroei op voer. En als het voer wit of groenachtig begint te lijken, gooit u de petrischaal weg en voert u onmiddellijk.Gebruik 14 dagen na de ovipositie een penseel van 2,54 centimeter om krekels te verwijderen die zich vastklampen aan het natale kokossubstraat door alle krekels van het kokosoppervlak en de zijkanten van de petrischaal in de kooi te borstelen. Plaats vervolgens het verwijderde ovipositiesubstraat in de autoclaveerbare afvalrecipiënt en bewaar het in de vriezer totdat het autoclaveert. Vervang vervolgens het natale substraat door een verse kokosschaal voor hydratatie.Gebruik een gedeïoniseerde waterwasfles en voeg water toe totdat het oppervlak van de kokos glinstert, maar niet poolt. Krekels werden opgeslagen uit een populatie met een gemiddelde massa van 21 milligram. Aan het einde van het experiment was de gemiddelde massa van alle gecombineerde juveniele en volwassen krekels 0,724 gram.Op de leeftijd van 65 dagen, toen het experiment eindigde, waren 30 volwassen mannen aanwezig en de gemiddelde massa was 0,721 gram, terwijl voor de 58 volwassen vrouwtjes de gemiddelde massa 0,841 gram was. Het overleven tussen de bezetting en de oogst was 89% en werd wekelijks gemeten aan de hand van de totale tellingen van alle individuele krekels in alle kooien. Op dag 65 had ongeveer 68% van alle krekels de volwassen instar bereikt.Vermijd de vorming van waterdruppels op de bodem van de behuizing bij het besproeien of vernevelen. Het plaatsen van papieren handdoek over refugia zorgt voor een vochtigheidsgradiënt en absorbeert waterdruppels van verneveling. Deze procedure dient als een sjabloon voor onderzoekers op veel gebieden van de levenswetenschappen om Gryllus bimaculatus als een modelorganisme op te voeden.Tot op heden zijn er weinig formele protocollen voor het fokken van Gryllus bimaculatus of een ander paurometaboleus modelorganisme gepubliceerd. Het codificeren en standaardiseren van kweekmethoden voor insecten die in de insectenteelt worden gebruikt, zal het beter mogelijk maken om resultaten tussen onderzoeksgroepen te vergelijken.

Research

JoVE Journal

Biology

Maintaining Laboratory Cultures of Gryllus bimaculatus, a Versatile Orthopteran Model for Insect Agriculture and Invertebrate Physiology

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

An Experimental and Bioinformatics Protocol for RNA-seq Analyses of Photoperiodic Diapause in the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus

Een experimentele en Bioinformatica Protocol voor RNA-seq Analyses van Fotoperiodische diapause in de Aziatische tijgermug,<em&gt; Aedes albopictus</em

Photoperiodic diapause is an important adaptation that allows individuals to escape harsh seasonal environments via a series of physiological changes, ...

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Physiological Recordings and RNA Sequencing of the Gustatory Appendages of the Yellow-fever Mosquito Aedes aegypti

Fysiologische Recordings en RNA Sequencing van de Smaak Appendages van de Gele-koorts Mosquito<em&gt; Aedes aegypti</em

Electrophysiological recording of action potentials from sensory neurons of mosquitoes provides investigators a glimpse into the chemical perception of ...

Transient Expression and Cellular Localization of Recombinant Proteins in Cultured Insect Cells

Transiënte expressie en cellulaire lokalisatie van recombinante eiwitten in gekweekte insectencellen

Heterologous protein expression systems are used for the production of recombinant proteins, the interpretation of cellular trafficking/localization, and ...

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

Methods for the Extraction of Endosymbionts from the Whitefly Bemisia tabaci

Methoden voor de extractie van endosymbionten uit de Whitefly<em&gt; Bemisia tabaci</em

Bacterial symbionts form an intimate relationship with their hosts and confer advantages to the hosts in most cases. Genomic information is critical to ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Behoud van Aedes aegypti muggen geïnfecteerd met Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimentele Protocol voor het gebruik van Drosophila als een ongewervelde modelsysteem voor toxiciteitstests in het laboratorium

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

A Versatile Model of Hard Tick Infestation on Laboratory Rabbits

Een veelzijdig Model van harde teek besmetting op laboratorium konijnen

The use of live animals in tick research is crucial for a variety of experimental purposes including the maintenance of hard tick colonies in the ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

Massaspectrometrieanalyse om alomtegenwoordigheid van EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) te identificeren

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

Een eenvoudige droge sectiemethode voor het verkrijgen van hele zaad-sized hars sectie en de toepassingen ervan

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Preparing Irradiated and Marked Male Aedes aegypti Mosquitoes for Release in an Operational Sterile Insect Technique Program

Bestraalde en gemarkeerde mannelijke Aedes aegypti-muggen voorbereiden voor vrijlating in een operationeel steriel insectentechniekprogramma

The control of such human diseases as dengue, Zika, and chikungunya relies on the control of their vector, the Aedes aegypti mosquito, because there is no ...