Name: induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice
Uploaded: 2021-12-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מעניקים DK125011, AI1502110, ו- DK124132, פרס STARs מערכת אוניברסיטת טקסס (Y.C.), וקרן מלגת ג'יימס ו. מקלפלין מהסניף הרפואי של אוניברסיטת טקסס בגלווסטון (W.Y.). איור 1 נוצר עם BioRender.com.

כל ההליכים בבעלי חיים בוצעו על פי ועדת הסניף הרפואי של אוניברסיטת טקסס על השימוש והטיפול בבעלי החיים. עכברי TCR TG CBir1 סופקו על ידי ד"ר צ'ארלס אלסון מאוניברסיטת אלבמה בברמינגהאם. CBir1 TCR Tg עכברים יכולים להיות נקבה או זכר אבל צריך להיות ב 8-12 שבועות. עכברים על רקע C57BL/6 הושגו ממעבדת ג'קסון...

<ol>
	<li>Kaplan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+IBD:+From+2015+to+2025.">The global burden of IBD: From 2015 to 2025.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (12), 720-727 (2015).</li><li>Ananthakrishnan, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+IBD.">Epidemiology and risk factors for IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (4), 205-217 (2015).</li><li>Yang, W., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota-derived+metabolites+in+the+regulation+of+host+immune+responses+and+immune-related+inflammatory+diseases.">Gut microbiota-derived metabolites in the regulation of host immune responses and immune-related inflammatory diseases.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 18 (4), 866-877 (2021).</li><li>Pickard, J. M., Zeng, M. Y., Caruso, R., N&#250;&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gut microbiota: Role in pathogen colonization, immune responses, and inflammatory disease. 279 (1), 70-89 (2017).</li><li>Russler-Germain, E. V., Rengarajan, S., Hsieh, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+regulatory+T-cell+responses+to+intestinal+microbiota.">Antigen-specific regulatory T-cell responses to intestinal microbiota.</a> Mucosal Immunology. 10 (6), 1375-1386 (2017).</li><li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+metabolite+butyrate+differentially+regulates+Th1+and+Th17+cells'+differentiation+and+function+in+induction+of+colitis.">Microbiota metabolite butyrate differentially regulates Th1 and Th17 cells' differentiation and function in induction of colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 25 (9), 1450-1461 (2019).</li><li>Cong, Y., Weaver, C. T., Lazenby, A., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial-reactive+T+regulatory+cells+inhibit+pathogenic+immune+responses+to+the+enteric+flora.">Bacterial-reactive T regulatory cells inhibit pathogenic immune responses to the enteric flora.</a> Journal of Immunology. 169 (11), 6112-6119 (2002).</li><li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+flagellin+is+a+dominant+antigen+in+Crohn+disease.">Bacterial flagellin is a dominant antigen in Crohn disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 113 (9), 1296-1306 (2004).</li><li>Targan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+CBir1+flagellin+define+a+unique+response+that+is+associated+independently+with+complicated+Crohn's+disease.">Antibodies to CBir1 flagellin define a unique response that is associated independently with complicated Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 128 (7), 2020-2028 (2005).</li><li>Mombaerts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAG-1-deficient+mice+have+no+mature+B+and+T+lymphocytes.">RAG-1-deficient mice have no mature B and T lymphocytes.</a> Cell. 68 (5), 869-877 (1992).</li><li>Charan, J., Kantharia, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+calculate+sample+size+in+animal+studies.">How to calculate sample size in animal studies.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).</li><li>Kwizera, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+trypan+blue+stain+in+the+TC20+automated+cell+counter+as+a+point-of-care+for+the+enumeration+of+viable+cryptococcal+cells+in+cerebrospinal+fluid.">Evaluation of trypan blue stain in the TC20 automated cell counter as a point-of-care for the enumeration of viable cryptococcal cells in cerebrospinal fluid.</a> Medical Mycology. 56 (5), 559-564 (2018).</li><li>Boyman, O., L&#233;tourneau, S., Krieg, C., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+proliferation+and+survival+of+na&#239;ve+and+memory+T+cells.">Homeostatic proliferation and survival of na&#239;ve and memory T cells.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2088-2094 (2009).</li><li>Chai, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells,+derived+from+na&#239;ve+CD4+CD25-+T+cells+by+in+vitro+Foxp3+gene+transfer,+can+induce+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells, derived from na&#239;ve CD4+CD25- T cells by in vitro Foxp3 gene transfer, can induce transplantation tolerance.</a> Transplantation. 79 (10), 1310-1316 (2005).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Erben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+histomorphological+evaluation+of+intestinal+inflammation+in+mouse+models.">A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 7 (8), 4557-4576 (2014).</li><li>Tuijnman, W. B., Van Wichen, D. F., Schuurman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution+of+human+IgG+Fc+receptors+CD16,+CD32+and+CD64:+An+immunohistochemical+study.">Tissue distribution of human IgG Fc receptors CD16, CD32 and CD64: An immunohistochemical study.</a> APMIS. 101 (4), 319-329 (1993).</li><li>Yang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Intestinal microbiota-derived short-chain fatty acids regulation of immune cell IL-22 production and gut immunity. 11 (1), 4457 (2020).</li><li>Reinoso Webb, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+to+t+cell-induced+colitis+in+mice.+Role+of+the+Intestinal+Microbiota.">Differential susceptibility to t cell-induced colitis in mice. Role of the Intestinal Microbiota.</a> Inflammatory Bowel Disease. 24 (2), 361-379 (2018).</li><li>Bamias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+intestinal+lymphocyte+activation+and+Th1+cytokine+production+by+antibiotic+therapy+in+a+murine+model+of+Crohn's+disease.">Down-regulation of intestinal lymphocyte activation and Th1 cytokine production by antibiotic therapy in a murine model of Crohn's disease.</a> Journal of Immunology. 169 (9), 5308-5314 (2002).</li><li>Steinbach, E. C., Gipson, G. R., Sheikh, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+murine+intestinal+inflammation+by+adoptive+transfer+of+effector+CD4++CD45RB+high+T+cells+into+immunodeficient+mice.">Induction of murine intestinal inflammation by adoptive transfer of effector CD4+ CD45RB high T cells into immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52533 (2015).</li><li>Atale, N., Gupta, S., Yadav, U. C., Rani, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-death+assessment+by+fluorescent+and+nonfluorescent+cytosolic+and+nuclear+staining+techniques.">Cell-death assessment by fluorescent and nonfluorescent cytosolic and nuclear staining techniques.</a> Journal of Microscopy. 255 (1), 7-19 (2014).</li><li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+IBD.">The gut microbiota in IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li><li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+promote+Th1+cell+IL-10+production+to+maintain+intestinal+homeostasis.">Microbiota-derived short-chain fatty acids promote Th1 cell IL-10 production to maintain intestinal homeostasis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3555 (2018).</li><li>Feng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+cells+induce+colitis+and+promote+Th1+cell+responses+through+IL-17+induction+of+innate+IL-12+and+IL-23+production.">Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production.</a> Journal of Immunology. 186 (11), 6313-6318 (2011).</li><li>Chiaranunt, P., Tometich, J. T., Ji, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> T Cell Proliferation and Colitis Are Initiated by Defined Intestinal Microbes. 201 (1), 243-250 (2018).</li><li>Feng, T., Cao, A. T., Weaver, C. T., Elson, C. O., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-12+converts+Foxp3++regulatory+T+cells+to+interferon-&#947;-producing+Foxp3++T+cells+that+inhibit+colitis.">Interleukin-12 converts Foxp3+ regulatory T cells to interferon-&#947;-producing Foxp3+ T cells that inhibit colitis.</a> Gastroenterology. 140 (7), 2031-2043 (2011).</li></ol>

למרות כל צעד חיוני עבור רבייה של מודל קוליטיס זה, ישנם מספר צעדים קריטיים. הנמען Rag-/- עכברים צריכים לקבל נאותה naϊve CD4 + תאי T כדי לגרום לדלקת מעיים. השתמשנו בטחול לבידוד של תאי CD4 + T נאיביים במקום MLNs. כי התשואה של תאי CD4+ T נאיביים ב- MLNs נמוכה בהרבה מאשר בטחול. CD62L מתבטא ...

מחלות מעי דלקתיות (IBD), בעיקר כולל מחלת קרוהן (CD) וקוליטיס כיבית (UC), מאופיינות בדלקת כרונית, חוזרת ונשנית של מערכת העיכול, המשפיעה על מיליונים ברחבי העולם1. מספר גורמים היו מעורבים בהתפתחות ובפתוגנזה של מחלת המעי הרגיז, כולל רגישות גנטית, מיקרוביוטה במעיים, תגובות חיסוניות, תזונה ואורח חיים2. עם זאת, המנגנון המדויק של IBD עדיין לא מובן לחלוטין.
אחד האינטרסים הספציפיים הוא האינטראקציה בין מיקרוביוטה במעיים ותגובות חיסוניות מארחות בוויסות דלקת מעיים3. מיקרוביוטה במעיים מספקת סדרה של מולקולות ואנטיגנים אימונוסטימולטוריים, שיכולים להפעיל תגובות חיסוניות4. בעוד שהאיזון בין תאי T משפיעים לתאי T תקינים (Tregs) הוא קריטי בשמירה על הומאוסטזיס מעיים, תגובת תאי רירית המעיים המוגזמת CD4+ T לאנטיגנים של מיקרוביוטה במעיים תורמת לדלקת מעיים 5,6,7. כאנטיגן מיקרוביוטה מעיים אימונודומיננטי, CBir1 flagellin היה קשור לפתוגנזה של CD8,9 אנושי. יתר על כן, העברה של תאי TCR מהונדסים CBir1 TCR (Tg) T גורמת לדלקת מעיים בעכברים לקויים במערכת החיסון6, הדומה מאוד ל- IBD האנושי, המציין כי מודל העברת תאי T זה מסייע לחקור את המנגנונים של מחלת המעי הרגיז האנושית.
עבודה זו מתארת את הפרוטוקול המפורט של גרימת קוליטיס ב Rag1-/- עכברים על ידי העברה מאמצת של CBir1 TCR Tg naϊve CD4 + תאי T והערכה של חומרת המחלה. חוץ מזה, התוצאות הצפויות מוצגות, ואת השלבים הקריטיים של ההליך ופתרון בעיות נדונים, אשר יסייע לחוקרים לחקור את המנגנונים של פתוגנזה של דלקת מעיים ולבדוק את התרופות הפוטנציאליות לטיפול במחלת המעי הרגיז.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m vacuum-driven disposable bottle top filter</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>SCGPS05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-&#181;m strainer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mL Transfer Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD16/32</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD25-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>102030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD3-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 Magnetic Particles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4-BV421</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD62L-PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>104408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Foxp3-PE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-5773-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IFN&#947;-FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IL-17A-PE/Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>TC20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C tube</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Separation Magnet</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociator Machine</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (0.5 M, PH 8.0)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S11550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>LSD Fortessa</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Lamp</td>
			<td>CoverShield</td>
			<td>BR40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E) Stain Kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab245880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>I24222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxQ 6000 Incubated/Refrigerated Stackable Shakers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SHKE6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A687-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol-12-myristate 13-acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Cytiva HyClone</td>
			<td>SH3002702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Arial Fusion</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Automatic Processor</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>STP120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Embedding/Processing Cassette</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>22048142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>True-Nuclear Transcription Factor Buffer Set (including Perm Buffer)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>424401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice

עם העלייה בשכיחות, מחלות מעי דלקתיות (IBD), שהן מחלות כרוניות המשפיעות על מערכת העיכול, מטילות נטל בריאותי וכלכלי ניכר על יחידים וחברה. לכן, זה קריטי לחקור את המנגנונים שבבסיס הפתוגנזה ופיתוח של IBD. כאן מתואר מודל קוליטיס של העברת תאי T ספציפיים למיקרוביוטה במעיים אנטיגן. CBir1 flagellin הוכר כאנטיגן חיידקי המעיים האימונודומיננטי בקוליטיס ניסיוני וחולים עם מחלת קרוהן. CBir1 TCR מהונדס naϊve CD4+ תאי T, ספציפיים ל- CBir1 flagellin, יכולים לגרום לקוליטיס כרונית לאחר העברה מאמצת לעכברים Rag1-/- לקויי מערכת החיסון. חומרת המחלה מוערכת על ידי היסטופתולוגיה. הפנוטיפים של תאי CD4+ T בלמינה פרופריה המעי הגס נקבעים גם הם. מודל זה דומה מאוד להתפתחות של מחלת המעי הרגיז, המספקת מודל מורין אידיאלי לחקירת המנגנונים המניעים את הפתוגנזה של מחלת המעי הרגיז ובדיקת התרופות הפוטנציאליות לטיפול במחלת המעי הרגיז.

כ 5 x 106 CBir1 TCR TCR Tg naϊve CD4 + T תאים לטחול היו מבודדים מעכבר CBir1 TCR TG בוגר. העברה של CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ תאי T המושרה קוליטיס כרונית בנמען Rag1-/- עכברים. לאחר העברת תאים, סימנים קליניים היו במעקב כדי להעריך את ההתקדמות של דלקת מעיים, כולל ירידה במשקל, עקביות הצואה, ויציבה כפופה. כצ...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

בפרוטוקול זה מתואר מודל קוליטיס אימוץ של תאי T ספציפיים למיקרוביוטה במעיים. תאי CD4+ T מבודדים מעכברים מהונדסים CBir1 TCR. אלה הם ספציפיים עבור מיקרוביוטה המעי immunodominant אנטיגן CBir1 flagellin, אשר מועבר לתוך המטופל Rag1-/- עכברים, המוביל דלקת מעיים.

אינדוקציה של דלקת מעיים על ידי העברה מאמצת של CBir1 TCR תאי CD4 + TCR מהונדסים לעכברים חיסוניים

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

מחלות מעי דלקתיות, או מחלת המעי הרגיז, מטילות נטל בריאותי וכלכלי ניכר על יחידים ועל החברה. מודל קוליטיס זה מועיל ללמוד את המנגנונים של IBD ולהעריך את הטיפולים עבור IBD. זה immunodominant Cbir flagellin T-cell ספציפי העברת קוליטיס מודל מספק תובנות כיצד חיידקי המעיים אנטיגן גורם תגובות תאי T כדי לגרום קוליטיס.לאחר המתת חסד העכבר, לעשות כ סנטימטר אחד חתך הבטן השמאלית ולמשוך את העור מן רקמת שריר הבטן. לאחר מכן, לבצע חתך של כשלושה סנטימטרים ברקמת שריר הבטן. לאחר מכן, להסיר את הטחול עם מספריים סטריליים מלקחיים.מניחים את הטחול בצלחת תרבית המכילה חמישה מיליליטר של חוצץ כביסה מקורר מראש. טוחנים את הטחול עם המשטח המחוספס של שתי מגלשות זכוכית סטריליות. העבר את ההשעיה התא לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר על ידי העברתו דרך מסננת תא 100 מיקרומטר.שוטפים את מגלשות הזכוכית ואת צלחת התרבות עם חמישה מיליליטרים של חיץ כביסה מקורר מראש, ולהעביר את חיץ הכביסה לתוך הצינור. צנטריפוגה ההשעיה התא, להשליך את supernatant, ו resuspend התאים עם חמישה מיליליטרים של טריס אמוניום כלוריד תמוגה מראש חיץ לטחול. יש לדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.הוסף 10 מיליליטר של חוצץ כביסה מקורר מראש לצינור. לאחר מכן, צנטריפוגה השעיית התא, להשליך את supernatant, ו respend התאים עם 10 מיליליטר של חיץ בידוד מקורר מראש. כדי לספור את התאים, ערבבו 10 מיקרוליטרים כל אחד מהשעיית התא וכחול טריפאן ביסודיות, וטענו 10 מיקרוליטרים לשקופית.לאחר מכן, הכנס את השקופית למונה התאים האוטומטי כדי להשיג את מספר התא הניתן לקיום. צנטריפוגה ההשעיה התא הנותרת ולהשליך את כל supernatant. מערבולת חלקיקים מגנטיים CD4 נגד עכבר, להוסיף ישירות 50 microliters של החלקיקים לכל 10 מיליון תאים, ולערבב עם כדורי תאים ביסודיות.לדגור על התערובת במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס. העבר את השעיית חלקיקי התא לתוך צינור איסוף סטרילי. הוסף 3.5 מיליליטר של חיץ בידוד מקורר מראש לתוך הצינור.מניחים את הצינור על מגנט הפרדת התא במשך שמונה דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, בזהירות לשאוף את supernatant עם פיפטה העברת שלושה מיליליטר. הסר את הצינור ממגנט הפרדת התאים.לאחר מכן, resuspend התאים עם 3.5 מיליליטר של חיץ בידוד מקורר מראש ומניחים את הצינור על המגנט במשך ארבע דקות בטמפרטורת החדר. שאפו בזהירות את הסופר-נרטיב עם פיפטה של 3 מיליליטר. לבסוף, הקדישו מחדש את התאים למיליליטר אחד של מאגר FACS מקורר מראש.כדי להעביר את התאים לעכברי הנמען, הזן מחדש את תאי ה- TCR הטרנסגניים-נאיביים-CD4-נאיבית של Cbir1 ל-5 מיליון תאים למיליליטר ב- 1x PBS. מחממים את העכברים תחת מנורת חום ומרסנים את העכברים באמצעות מרסן עכברים. תוך ורידי להזריק 200 מיקרוליטרים של ההשעיה התא לתוך הווריד האחורי של העכברים.לאחר המתת חסד העכבר, לעשות כ חתך עור קו אמצע גחון סנטימטר אחד. משוך את העור הרחק מרקמת שריר הבטן. לאחר מכן, לעשות חתך של שלושה סנטימטרים ברקמת שריר הבטן.לאחר מכן, לזהות את coecum ולהסיר את המעי הגס כולו עם מספריים סטריליים מלקחיים. הרטיבו את המעי הגס עם PBS מקורר מראש בצלחת תרבות. יש לחרוט את המעי הגס לאורכו ולשטוף אותו ב-PBS מקורר מראש.חותכים 1/3 של המעי הגס אורך. מניחים את רצועת המעי הגס במגבת נייר כשהצד הלומנלי פונה כלפי מעלה. בצע גלגול שוויצרי באמצעות קיסם.מניחים את המעי הגס השוויצרי לתוך קלטת, ולשים את הקלטת ב 10% פורמלין חוצץ במשך 24 שעות. מייבשים ומטביעים את המעי הגס בפרפין עם מעבד אוטומטי. לאחר מכן, לחתוך מקטעי רקמת חמישה מיקרומטר על מיקרוטום.הר את הרקמה על שקופיות ולבצע הכתמת המטוקסילין ואאוזין. עכברי נוקאאוט סמרטוט החלו לרדת במשקל כשלושה שבועות לאחר העברת התא, ומשקלם הגיע סביב 80 עד 85% ממשקלם המקורי שישה שבועות לאחר העברת התא. עכברי נמען הראו אורך המעי הגס הקצר שישה שבועות לאחר העברת התא.עכברי הנמען הדגימו יותר חדירת תאים במעיים למינה פרופריה ארבעה שבועות לאחר העברת התאים. הם הראו אובדן תאי גביע והיפרפלזיה של תאי אפיתל במעיים חמישה שבועות לאחר העברת התאים, כמו גם שחיקת הרירית וחדירת תאים דלקתיים בתת-הקוקוסה של המעי הגס שישה שבועות לאחר העברת התאים. הציונים ההיסטופתולוגיים עלו משמעותית מארבעה לשישה שבועות.בו זמנית, לא הייתה דלקת בעכברים נוקאאוט Rag מקבל PBS לבד. באמצעות הליך זה, רמות ציטוקינים המעי הגס יכול להיקבע על ידי ELISA ו qPCR.

Research

JoVE Journal

Medicine

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

הערכה תפקודית של תנועתיות מעיים ודלקת דופן מעי במכרסמים: ניתוח בדגם סטנדרטי של מניפולצית מעיים

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

כינון ניאו איילט בכבד של עכברים סוכרתיים על ידי העברת גני Helper תלוי adenoviral וקטור בתיווך

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

אינדוקציה של קרצינומה של תאי מעבר שלפוחית ​​השתן פולשנית בMUC1 עכברים הטרנסגניים חיסוניים אנושיים שלמים: מודל לפיתוח חיסוני

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

העכברי אנדוסקופיה ל<em&gt; בVivo</em&gt; ריפוי Multimodal הדמיה של היווצרות הסרטן וההערכה של מעיים פצע ודלקת

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

מרה Duct קשירת בעכברים: אינדוקציה של דלקת כבד פגיעה ופיברוזיס ידי חסימתית cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

TH17 דגם דלקת של לוע תחתון פטרת בעכברים immunodeficient

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

אבקת ניקוי ו nebulized תרסיס שאיפת תרופות ביצוע עכברים באמצעות מערכת חשיפת אף בלבד

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

בתיווך פלורסצנטיות טומוגרפיה זיהוי, כימות הקשורות מקרופאג דלקת מעיים מאתר

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

אינדוקציה של תסמונת נפרוטית בעכברים על ידי הזרקת Retrobulbar של דוקסורוביצין ומניעה של שימור נפח על ידי שחרור מתמשכת Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...