Name: induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice
Uploaded: 2021-12-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

この研究は、米国国立衛生研究所の助成金DK125011、AI150210、DK124132、テキサス大学システムSTARs賞(Y.C)、テキサス大学ガルベストン医療支部(W.Y.)のJames W. McLaughlin Fellowship Fundによって部分的に支援されました。図 1 は、BioRender.com を使用して作成されました。

すべての動物の処置は、テキサス大学医学部の動物の使用と世話に関する委員会に従って実施された。CBir1 TCR Tgマウスは、アラバマ大学バーミンガム校のチャールズ・エルソン博士によって提供された。CBir1 TCR Tgマウスは、雌または雄であり得るが、8〜12週でなければならない。C57BL/6バックグラウンドのRag1-/-マウスをジャクソン研究所から入手した10。Rag...

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	<li>Kaplan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+IBD:+From+2015+to+2025.">The global burden of IBD: From 2015 to 2025.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (12), 720-727 (2015).</li><li>Ananthakrishnan, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+IBD.">Epidemiology and risk factors for IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (4), 205-217 (2015).</li><li>Yang, W., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota-derived+metabolites+in+the+regulation+of+host+immune+responses+and+immune-related+inflammatory+diseases.">Gut microbiota-derived metabolites in the regulation of host immune responses and immune-related inflammatory diseases.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 18 (4), 866-877 (2021).</li><li>Pickard, J. M., Zeng, M. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+regulatory+T-cell+responses+to+intestinal+microbiota.">Antigen-specific regulatory T-cell responses to intestinal microbiota.</a> Mucosal Immunology. 10 (6), 1375-1386 (2017).</li><li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+metabolite+butyrate+differentially+regulates+Th1+and+Th17+cells'+differentiation+and+function+in+induction+of+colitis.">Microbiota metabolite butyrate differentially regulates Th1 and Th17 cells' differentiation and function in induction of colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 25 (9), 1450-1461 (2019).</li><li>Cong, Y., Weaver, C. T., Lazenby, A., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial-reactive+T+regulatory+cells+inhibit+pathogenic+immune+responses+to+the+enteric+flora.">Bacterial-reactive T regulatory cells inhibit pathogenic immune responses to the enteric flora.</a> Journal of Immunology. 169 (11), 6112-6119 (2002).</li><li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+flagellin+is+a+dominant+antigen+in+Crohn+disease.">Bacterial flagellin is a dominant antigen in Crohn disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 113 (9), 1296-1306 (2004).</li><li>Targan, S. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells,+derived+from+na&#239;ve+CD4+CD25-+T+cells+by+in+vitro+Foxp3+gene+transfer,+can+induce+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells, derived from na&#239;ve CD4+CD25- T cells by in vitro Foxp3 gene transfer, can induce transplantation tolerance.</a> Transplantation. 79 (10), 1310-1316 (2005).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Erben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+histomorphological+evaluation+of+intestinal+inflammation+in+mouse+models.">A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 7 (8), 4557-4576 (2014).</li><li>Tuijnman, W. B., Van Wichen, D. F., Schuurman, H. 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Role of the Intestinal Microbiota.</a> Inflammatory Bowel Disease. 24 (2), 361-379 (2018).</li><li>Bamias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+intestinal+lymphocyte+activation+and+Th1+cytokine+production+by+antibiotic+therapy+in+a+murine+model+of+Crohn's+disease.">Down-regulation of intestinal lymphocyte activation and Th1 cytokine production by antibiotic therapy in a murine model of Crohn's disease.</a> Journal of Immunology. 169 (9), 5308-5314 (2002).</li><li>Steinbach, E. C., Gipson, G. R., Sheikh, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+murine+intestinal+inflammation+by+adoptive+transfer+of+effector+CD4++CD45RB+high+T+cells+into+immunodeficient+mice.">Induction of murine intestinal inflammation by adoptive transfer of effector CD4+ CD45RB high T cells into immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52533 (2015).</li><li>Atale, N., Gupta, S., Yadav, U. C., Rani, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-death+assessment+by+fluorescent+and+nonfluorescent+cytosolic+and+nuclear+staining+techniques.">Cell-death assessment by fluorescent and nonfluorescent cytosolic and nuclear staining techniques.</a> Journal of Microscopy. 255 (1), 7-19 (2014).</li><li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+IBD.">The gut microbiota in IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li><li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+promote+Th1+cell+IL-10+production+to+maintain+intestinal+homeostasis.">Microbiota-derived short-chain fatty acids promote Th1 cell IL-10 production to maintain intestinal homeostasis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3555 (2018).</li><li>Feng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+cells+induce+colitis+and+promote+Th1+cell+responses+through+IL-17+induction+of+innate+IL-12+and+IL-23+production.">Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production.</a> Journal of Immunology. 186 (11), 6313-6318 (2011).</li><li>Chiaranunt, P., Tometich, J. T., Ji, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> T Cell Proliferation and Colitis Are Initiated by Defined Intestinal Microbes. 201 (1), 243-250 (2018).</li><li>Feng, T., Cao, A. T., Weaver, C. T., Elson, C. O., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-12+converts+Foxp3++regulatory+T+cells+to+interferon-&#947;-producing+Foxp3++T+cells+that+inhibit+colitis.">Interleukin-12 converts Foxp3+ regulatory T cells to interferon-&#947;-producing Foxp3+ T cells that inhibit colitis.</a> Gastroenterology. 140 (7), 2031-2043 (2011).</li></ol>

この大腸炎モデルの再現性にはすべてのステップが不可欠ですが、いくつかの重要なステップがあります。レシピエントRag-/-マウスは、腸の炎症を誘発するために十分な生存可能なnaϊve CD4+ T細胞を投与されるべきである。我々は、MLNの代わりにナイーブCD4+ T細胞の単離のために脾臓を使用した。MLNsにおけるナイーブCD4+ T細胞の収量は、脾臓よりもはる...

主にクローン病(CD)や潰瘍性大腸炎(UC)を含む炎症性腸疾患(IBD)は、胃腸管の慢性的な再発寛解型炎症を特徴とし、世界中の何百万人もの人々に影響を及ぼしています1。IBDの発症と病因には、遺伝的感受性、腸内微生物叢、免疫応答、食事、ライフスタイルなど、いくつかの要因が関与しています2。しかしながら、IBDの正確なメカニズムはまだ完全には理解されていない。
特に興味深いのは、腸の炎症を調節する際の腸内微生物叢と宿主免疫応答との相互作用です3。腸内微生物叢は一連の免疫刺激分子と抗原を提供し、免疫応答を活性化することができます4。エフェクターT細胞と制御性T細胞(Tregs)のバランスは腸の恒常性を維持する上で重要ですが、腸内微生物叢抗原に対する過剰な腸粘膜CD4+ T細胞応答は腸の炎症に寄与します5,6,7。免疫優性腸内微生物叢抗原として、CBir1フラジェリンはヒトCD8,9の病因に関連している。さらに、CBir1 TCRトランスジェニック(Tg)T細胞の転写は、ヒトIBDによく似た免疫欠損マウス6において腸の炎症を誘発し、このT細胞導入モデルがヒトIBDのメカニズムの調査に役立つことを示している。
この研究は、CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T細胞の養子移入によってRag1-/-マウスに大腸炎を誘導し、疾患の重症度を評価する詳細なプロトコールを記載している。さらに、予想される結果が示され、手順とトラブルシューティングの重要なステップが議論され、研究者が腸の炎症の病因のメカニズムを調査し、IBDを治療するための潜在的な薬物をテストするのに役立ちます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m vacuum-driven disposable bottle top filter</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>SCGPS05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-&#181;m strainer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mL Transfer Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD16/32</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD25-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>102030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD3-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 Magnetic Particles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4-BV421</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD62L-PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>104408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Foxp3-PE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-5773-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IFN&#947;-FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IL-17A-PE/Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>TC20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C tube</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Separation Magnet</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociator Machine</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (0.5 M, PH 8.0)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S11550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>LSD Fortessa</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Lamp</td>
			<td>CoverShield</td>
			<td>BR40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E) Stain Kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab245880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>I24222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxQ 6000 Incubated/Refrigerated Stackable Shakers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SHKE6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A687-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol-12-myristate 13-acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Cytiva HyClone</td>
			<td>SH3002702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Arial Fusion</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Automatic Processor</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>STP120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Embedding/Processing Cassette</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>22048142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>True-Nuclear Transcription Factor Buffer Set (including Perm Buffer)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>424401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice

発生率の増加に伴い、胃腸管に影響を及ぼす慢性疾患である炎症性腸疾患(IBD)は、個人および社会にかなりの健康および財政的負担を課す。したがって、IBDの病因および発症の根底にあるメカニズムを調査することが重要である。ここでは、腸内微生物叢抗原特異的T細胞導入大腸炎モデルについて説明する。CBir1フラジェリンは、実験的大腸炎およびクローン病患者において免疫優性腸内細菌抗原として認識されている。CBir1フラジェリンに特異的なCBir1 TCRトランスジェニックnaϊve CD4+ T細胞は、免疫欠損Rag1-/-マウスへの養子移入後に慢性大腸炎を誘導し得る。疾患の重症度は、組織病理学によって評価される。結腸粘膜固有層におけるCD4+ T細胞表現型も決定される。このモデルはIBDの開発によく似ており、IBDの病因を駆動するメカニズムを調査し、IBDを治療するための潜在的な薬物を試験するための理想的なマウスモデルを提供する。

脾臓当たり約5 x 106 CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T細胞を、成体CBir1 TCR Tgマウスから単離した。CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T細胞の転写は、レシピエントRag1-/-マウスにおいて慢性大腸炎を誘導した。細胞移動後、臨床徴候をモニターして、体重減少、便の一貫性、および直感した姿勢を含む腸の炎症の進行を評価した。予想通り、マウスは細胞移植後3週間頃に体重が減り始...

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Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

このプロトコールでは、腸内微生物叢抗原特異的T細胞養子移入大腸炎モデルが記載されている。CD4+ T細胞は、CBir1 TCRトランスジェニックマウスから単離される。これらは免疫優性腸内微生物叢抗原CBir1フラジェリンに特異的であり、これはレシピエントRag1-/-マウスに移され、腸の炎症を引き起こす。

免疫不全マウスへのCBir1 TCRトランスジェニックCD4+ T細胞の養子移入による腸管炎症の誘導

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

炎症性腸疾患、またはIBDは、個人および社会にかなりの健康および財政的負担を課す。この大腸炎モデルは、IBDのメカニズムを研究し、IBDの治療を評価するのに役立ちます。この免疫優性Cbir flagellin T細胞特異的養子移入大腸炎モデルは、腸内細菌抗原がT細胞応答を誘導して大腸炎を誘導する方法についての洞察を提供する。マウスを安楽死させた後、左腹部約1センチの切開を行い、皮膚を腹筋組織から引き離す。その後、腹筋組織に約3センチの切開を行います。次に、滅菌ハサミと鉗子で脾臓を取り除きます。5ミリリットルの予め冷却された洗浄緩衝液を含む培養皿に脾臓を置く。2つの滅菌スライドガラスの粗い表面で脾臓を粉砕する。細胞懸濁液を100マイクロメートルのセルストレーナーに通すことによって50ミリリットルの遠沈管に移す。スライドガラスおよび培養皿を5ミリリットルの予備冷却洗浄緩衝液ですすぎ、洗浄緩衝液をチューブに移す。細胞懸濁液を遠心分離し、上清を捨て、脾臓あたり5ミリリットルの予め加温したトリスアンモニウムクロリド溶解緩衝液で細胞を再懸濁した。室温で10分間インキュベートする。10ミリリットルの予冷洗浄バッファーをチューブに加える。次いで、細胞懸濁液を遠心分離し、上清を捨て、10ミリリットルの予備冷却単離緩衝液で細胞を再懸濁した。細胞を計数するには、細胞懸濁液とトリパンブルーのそれぞれ10マイクロリットルを徹底的に混合し、10マイクロリットルをスライドにロードする。次に、自動セルカウンターにスライドを挿入し、生細胞数を取得します。残りの細胞懸濁液を遠心分離し、すべての上清を廃棄する。抗マウスCD4磁性粒子を渦巻き、1000万個の細胞あたり50マイクロリットルの粒子を直接加え、細胞ペレットと十分に混合する。混合物を摂氏4度で30分間インキュベートする。細胞粒子懸濁液を滅菌収集チューブに移す。3.5ミリリットルの予冷却分離バッファーをチューブに加えます。チューブを細胞分離磁石の上に置き、室温で8分間置きます。その後、3ミリリットルのトランスファーピペットで上清を慎重に吸引除去する。細胞分離磁石からチューブを取り外します。次いで、細胞を3.5ミリリットルの予備冷却単離緩衝液で再懸濁し、チューブを磁石上に室温で4分間置いた。上清を3ミリリットルのピペットで慎重に吸引する。最後に、細胞を1ミリリットルの予備冷却FACS緩衝液に再懸濁する。レシピエントマウスに細胞を移すために、Cbir1 TCR遺伝子導入ナイーブCD4陽性T細胞を1x PBS中の1ミリリットル当たり500万個の細胞に再懸濁する。ヒートランプの下でマウスを温め、マウス拘束器を使用してマウスを拘束する。200マイクロリットルの細胞懸濁液をマウスの尾静脈に静脈内注射する。マウスを安楽死させた後、約1センチメートルの腹側正中線皮膚切開を行う。腹筋組織から皮膚を引き離す。次に、腹筋組織に3センチメートルの切開を行う。次に、コエカムを同定し、滅菌ハサミおよび鉗子で結腸全体を除去する。培養皿中で予め冷却したPBSで結腸を濡らす。結腸を縦に切開し、予め冷却したPBSですすいでください。結腸の1/3を縦に切ります。コロンストリップをペーパータオルに入れ、内腔側を上向きにします。つまようじを使用してスイスローリングを実行します。結腸スイスをカセットに入れ、カセットを10%緩衝ホルマリンに24時間入れた。脱水し、パラフィンは、自動プロセッサで結腸を埋め込む。次いで、ミクロトーム上の5マイクロメートルの組織切片を切断する。組織をスライドにマウントし、ヘマトキシリンおよびエオジン染色を行う。Ragノックアウトマウスは、細胞移植後3週間で体重が減り始め、細胞移植後6週間で元の体重の約80〜85%に達しました。レシピエントマウスは、細胞移入後6週間の短い結腸長を示した。レシピエントマウスは、細胞移入後4週間で腸管固有層におけるより多くの細胞浸潤を実証した。彼らは、細胞移入後5週間の杯細胞喪失および腸上皮細胞過形成、ならびに細胞移入後6週間の結腸の粘膜下における粘膜びらんおよび炎症性細胞浸潤を示した。病理組織学的スコアは4週間から6週間に大幅に増加した。同時に、PBSのみを投与されたRagノックアウトマウスに炎症はなかった。この手順を用いて、結腸サイトカインレベルは、ELISAおよびqPCRによって決定することができた。

Research

JoVE Journal

Medicine

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

げっ歯類における腸運動と腸壁の炎症の機能評価：腸管操作の標準化されたモデルで分析

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

ヘルパー依存型アデノウイルスベクターによる遺伝子導入による糖尿病マウスの肝臓におけるネオ·膵島形成

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

免疫不全マウスの皮下および肝内ヒト肝細胞癌異種移植片の生成

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

免疫無傷のヒトMUC1トランスジェニックマウスにおける侵襲移行細胞膀胱癌の誘導：免疫療法の開発のためのモデル

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

マウス内視鏡検査のため<em&gt;インビボ</em&gt;発がんと腸の評価のマルチモーダルイメージング創傷治癒および炎症

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

マウスにおける胆管結紮：閉塞性胆汁うっ滞による炎症性肝障害と線維症の誘発

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

免疫不全マウスにおける口腔咽頭カンジダ症のTh17細胞炎症モデル

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

乾燥粉末および医薬品の霧状エアロゾルを吸入すると、鼻のみの露光装置を用いてマウスに配信します

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

検出とマクロファージによるマウス腸管炎症の定量化のための蛍光を介したトモグラフィー

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

ドキソルビシンの球後注射と徐放性アプロチニンによるボリューム保持の予防によるマウスのネフローゼ症候群の誘導

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...