Name: induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice
Uploaded: 2021-12-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

이 작품은 국립 보건원 보조금 DK125011, AI150210, DK124132, 텍사스 시스템 STARs 상 (Y.C.), 그리고 갤버스턴 (W.Y.)의 텍사스 대학 의료 지부에서 제임스 W. 맥러플린 펠로우십 기금에 의해 부분적으로 지원되었다. 그림 1은 BioRender.com 함께 만들어졌습니다.

모든 동물 절차는 동물의 사용 및 관리에 대한 텍사스 대학 의료 지부의위원회에 따라 수행되었다. CBir1 TCR Tg 마우스는 버밍엄에 있는 알라바마 대학의 찰스 엘슨 박사에 의해 제공되었습니다. CBir1 TCR Tg 마우스는 여성 또는 남성일 수 있지만 8-12 주에 있어야 합니다. C57BL/6 배경에 있는 Rag1/-- 마우스는 잭슨 연구소10으로부터 수득되었다. Rag1/- 마우?...

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	<li>Kaplan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+IBD:+From+2015+to+2025.">The global burden of IBD: From 2015 to 2025.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (12), 720-727 (2015).</li><li>Ananthakrishnan, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+IBD.">Epidemiology and risk factors for IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (4), 205-217 (2015).</li><li>Yang, W., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota-derived+metabolites+in+the+regulation+of+host+immune+responses+and+immune-related+inflammatory+diseases.">Gut microbiota-derived metabolites in the regulation of host immune responses and immune-related inflammatory diseases.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 18 (4), 866-877 (2021).</li><li>Pickard, J. M., Zeng, M. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+regulatory+T-cell+responses+to+intestinal+microbiota.">Antigen-specific regulatory T-cell responses to intestinal microbiota.</a> Mucosal Immunology. 10 (6), 1375-1386 (2017).</li><li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+metabolite+butyrate+differentially+regulates+Th1+and+Th17+cells'+differentiation+and+function+in+induction+of+colitis.">Microbiota metabolite butyrate differentially regulates Th1 and Th17 cells' differentiation and function in induction of colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 25 (9), 1450-1461 (2019).</li><li>Cong, Y., Weaver, C. T., Lazenby, A., Elson, C. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+CBir1+flagellin+define+a+unique+response+that+is+associated+independently+with+complicated+Crohn's+disease.">Antibodies to CBir1 flagellin define a unique response that is associated independently with complicated Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 128 (7), 2020-2028 (2005).</li><li>Mombaerts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAG-1-deficient+mice+have+no+mature+B+and+T+lymphocytes.">RAG-1-deficient mice have no mature B and T lymphocytes.</a> Cell. 68 (5), 869-877 (1992).</li><li>Charan, J., Kantharia, N. 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G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells,+derived+from+na&#239;ve+CD4+CD25-+T+cells+by+in+vitro+Foxp3+gene+transfer,+can+induce+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells, derived from na&#239;ve CD4+CD25- T cells by in vitro Foxp3 gene transfer, can induce transplantation tolerance.</a> Transplantation. 79 (10), 1310-1316 (2005).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Erben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+histomorphological+evaluation+of+intestinal+inflammation+in+mouse+models.">A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 7 (8), 4557-4576 (2014).</li><li>Tuijnman, W. B., Van Wichen, D. F., Schuurman, H. 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Role of the Intestinal Microbiota.</a> Inflammatory Bowel Disease. 24 (2), 361-379 (2018).</li><li>Bamias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+intestinal+lymphocyte+activation+and+Th1+cytokine+production+by+antibiotic+therapy+in+a+murine+model+of+Crohn's+disease.">Down-regulation of intestinal lymphocyte activation and Th1 cytokine production by antibiotic therapy in a murine model of Crohn's disease.</a> Journal of Immunology. 169 (9), 5308-5314 (2002).</li><li>Steinbach, E. C., Gipson, G. R., Sheikh, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+murine+intestinal+inflammation+by+adoptive+transfer+of+effector+CD4++CD45RB+high+T+cells+into+immunodeficient+mice.">Induction of murine intestinal inflammation by adoptive transfer of effector CD4+ CD45RB high T cells into immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52533 (2015).</li><li>Atale, N., Gupta, S., Yadav, U. C., Rani, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-death+assessment+by+fluorescent+and+nonfluorescent+cytosolic+and+nuclear+staining+techniques.">Cell-death assessment by fluorescent and nonfluorescent cytosolic and nuclear staining techniques.</a> Journal of Microscopy. 255 (1), 7-19 (2014).</li><li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+IBD.">The gut microbiota in IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li><li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+promote+Th1+cell+IL-10+production+to+maintain+intestinal+homeostasis.">Microbiota-derived short-chain fatty acids promote Th1 cell IL-10 production to maintain intestinal homeostasis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3555 (2018).</li><li>Feng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+cells+induce+colitis+and+promote+Th1+cell+responses+through+IL-17+induction+of+innate+IL-12+and+IL-23+production.">Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production.</a> Journal of Immunology. 186 (11), 6313-6318 (2011).</li><li>Chiaranunt, P., Tometich, J. T., Ji, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> T Cell Proliferation and Colitis Are Initiated by Defined Intestinal Microbes. 201 (1), 243-250 (2018).</li><li>Feng, T., Cao, A. T., Weaver, C. T., Elson, C. O., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-12+converts+Foxp3++regulatory+T+cells+to+interferon-&#947;-producing+Foxp3++T+cells+that+inhibit+colitis.">Interleukin-12 converts Foxp3+ regulatory T cells to interferon-&#947;-producing Foxp3+ T cells that inhibit colitis.</a> Gastroenterology. 140 (7), 2031-2043 (2011).</li></ol>

모든 단계는이 대장염 모델의 재현성에 필수적이지만 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 수령인 Rag/- 마우스는 장 염증을 유도하기 위하여 CD4+ T 세포에 적당한 실행 가능한 naϊve 수신해야 합니다. 우리는 MLN 대신 순진한 CD4 + T 세포의 격리를 위해 비장을 사용했습니다. MLN에서 순진한 CD4 + T 세포의 수율은 비장보다 훨씬 낮기 때문입니다. CD62L은 순진한 T 세포...

크론병(CD) 및 궤양성 대장염(UC)을 중심으로 염증성 장질환(IBD)은 위장관의 만성 재발 염증을 특징으로 하며 전 세계 수백만 명에게 영향을 미치고 있습니다1. 유전 감수성, 창자 미생물, 면역 반응, 규정식 및 생활양식2를 포함하여 IBD의 발달 그리고 병신에 몇몇 요인이 연루되었습니다. 그러나 IBD의 정확한 메커니즘은 아직 완전히 이해되지 않습니다.
특정 관심사 중 하나는 장 내 염증 조절에 있어 장 내 미생물군유상과 호스트 면역 반응 사이의 상호 작용입니다3. 장내 미생물은 면역 반응을 활성화할 수 있는 일련의 면역 자극 분자 및 항원을 제공합니다4. 이펙터 T 세포와 조절 T 세포 사이의 균형 (Tregs) 장 항상성을 유지에 중요 한 동안, 창 자 microbiota 항 원에 과도 한 장 점막 CD4+ T 세포 응답 장 염증에 기여 5,6,7. 면역 지배적 인 창 자 microbiota 항원으로, CBir1 flagellin 인간 CD8,9의 발병기와 관련 되어 있다. 더욱이, CBir1 TCR 형질전환(Tg) T 세포의 전달은 면역 결핍 마우스6에서 장 염증을 유도하며, 인간 IBD와 밀접하게 닮은 이 T 세포 전달 모델이 인간 IBD의 메커니즘을 조사하는 데 도움이 된다는 것을 나타낸다.
이 작품은 CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T 세포의 입양 전송에 의해 Rag1/-마우스에서 대장염을 유도하고 질병 심각도를 평가하는 상세한 프로토콜을 설명합니다. 게다가, 예상된 결과가 표시되고, 절차 및 문제 해결의 중요한 단계는 연구원이 장 염증의 병인의 기계장치를 조사하고 IBD 취급을 위한 잠재적인 약을 시험하는 것을 도울 것입니다 토론됩니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m vacuum-driven disposable bottle top filter</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>SCGPS05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-&#181;m strainer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mL Transfer Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD16/32</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD25-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>102030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD3-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 Magnetic Particles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4-BV421</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD62L-PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>104408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Foxp3-PE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-5773-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IFN&#947;-FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IL-17A-PE/Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>TC20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C tube</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Separation Magnet</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociator Machine</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (0.5 M, PH 8.0)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S11550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>LSD Fortessa</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Lamp</td>
			<td>CoverShield</td>
			<td>BR40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E) Stain Kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab245880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>I24222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxQ 6000 Incubated/Refrigerated Stackable Shakers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SHKE6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A687-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol-12-myristate 13-acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Cytiva HyClone</td>
			<td>SH3002702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Arial Fusion</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Automatic Processor</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>STP120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Embedding/Processing Cassette</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>22048142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>True-Nuclear Transcription Factor Buffer Set (including Perm Buffer)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>424401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice

부각의 증가와 함께, 염증성 장 질환 (IBD), 위 장관에 영향을 미치는 만성 질환은 개인과 사회에 상당한 건강 및 재정적 부담을 부과. 따라서 IBD의 발병 기제 및 개발의 근간을 조사하는 것이 중요합니다. 여기서, 장내 미생물-항원 특이적 T 세포 전달 대장염 모델이 기재되어 있다. CBir1 flagellin 실험 대장염및 크론병 환자에서 면역 지배적 인 장 세균 항원으로 인식되었습니다. CBir1 TCR 형질 전환기 naϊve CD4+ T 세포, CBir1 플래그렐린에 특정, 면역 결핍 Rag1/-- 마우스로 입양 전송 후 만성 대장염을 유도할 수 있다. 질병 엄격은 조직 병리학에 의해 평가됩니다. 대장 라미나 프로프리아의 CD4+ T 세포 표현형도 결정된다. 이 모델은 IBD의 발병을 유도하는 메커니즘을 조사하고 IBD 를 치료하기위한 잠재적 인 약물을 테스트하기위한 이상적인 뮤린 모델을 제공하는 IBD의 개발과 유사합니다.

약 5 x 106 CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T 세포는 성인 CBir1 TCR Tg 마우스로부터 분리되었다. CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T 세포의 전송은 수신자 Rag1/-- 마우스에서 만성 대장염을 유도. 세포 전달 후, 임상 징후는 체중 감소, 대변 일관성 및 구부러진 자세를 포함하여 장 염증의 진행을 평가하기 위해 모니터링되었습니다. 예상대로, 마우스는 세포 전달 후 약 3 주 동안 무게를 잃기...

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Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

본 프로토콜에서, 장내 미생물-항원 특이적 T 세포 입양 상반염 모델이 기재된다. CD4+ T 세포는 CBir1 TCR 형질전환 마우스로부터 분리된다. 이들은 면역 지배적인 창자 microbiota 항원 CBir1 flagellin를 위해 특정합니다, 수신자 Rag1/-- 마우스로 전송되는, 장 염증으로 이끌어 내는.

CBir1 TCR 형질 전환 CD4+ T 세포의 입양 전달에 의한 장 염증유도

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

염증성 장 질환, 또는 IBD, 개인과 사회에 상당한 건강 및 재정적 부담을 부과. 이 대장염 모델은 IBD의 메커니즘을 연구하고 IBD에 대한 치료를 평가하는 데 도움이됩니다. 이 면역 지배적 인 Cbir flagellin T 세포 특정 입양 대장염 모델은 장내 박테리아 항원항염이 대장염을 유도하기 위해 T 세포 반응을 유도하는 방법에 대한 통찰력을 제공합니다.마우스를 안락사한 후, 복부 절개를 거의 1센티미터 남기고 복부 근육 조직에서 피부를 끌어당깁니다. 그런 다음 복부 근육 조직에서 약 3 센티미터 절개를하십시오. 다음으로 멸균 가위와 집게로 비장을 제거합니다.미리 냉각된 세척 버퍼 5밀리리터가 포함된 문화 접시에 비장을 놓습니다. 두 개의 멸균 유리 슬라이드의 거친 표면으로 비장을 갈아. 세포 현탁액을 100 마이크로미터 세포 여과기를 통과하여 50밀리리터 원심분리기 튜브로 전달합니다.유리 슬라이드와 문화 접시를 5밀리리터의 미리 냉각된 세척 버퍼로 헹군 다음 세척 버퍼를 튜브로 옮킨다. 세포 현탁액을 원심분리하고, 상체를 버리고, 비장 당 미리 따뜻진 트리스 암모늄 염화 용해 버퍼의 5 밀리리터로 세포를 다시 분리한다. 실온에서 10분 동안 배양하세요.튜브에 미리 냉각된 세척 버퍼 10밀리리터를 추가합니다. 그런 다음, 세포 현탁액을 원심분리하고, 상체를 버리고, 미리 냉각된 절연 버퍼의 10 밀리리터로 세포를 다시 분리한다. 세포를 계산하려면 각 셀 서스펜션과 Trypan blue 10 마이크로리터를 혼합하고 10 마이크로리터를 슬라이드에 로드합니다.그런 다음, 슬라이드를 자동화된 셀 카운터에 삽입하여 실행 가능한 셀 번호를 얻습니다. 나머지 셀 현탁액을 원심분리하고 모든 상피를 폐기합니다. 항 마우스 CD4 자기 입자를 소용돌이, 직접 1,000만 세포 당 입자의 50 마이크로 리터를 추가하고, 철저하게 세포 펠릿과 혼합.4섭씨에서 30분간 혼합물을 배양합니다. 세포 입자 현탁액을 멸균 수집 튜브로 옮기십시오. 3.5 밀리리터의 미리 냉각된 절연 버퍼를 튜브에 넣습니다.실온에서 8분간 세포 분리 자석에 튜브를 놓습니다. 그런 다음, 조심스럽게 3 밀리리터 전송 파이펫으로 상체를 흡인. 세포 분리 자석에서 튜브를 제거합니다.그런 다음, 미리 냉각된 격리 버퍼의 3.5 밀리리터로 세포를 다시 중단하고 실온에서 4 분 동안 자석에 튜브를 놓습니다. 3 밀리리터 파이펫으로 슈퍼네티를 조심스럽게 흡인합니다. 마지막으로 미리 냉각된 FACS 버퍼의 1밀리리터에서 셀을 다시 일시 중지합니다.수용인 마우스로 세포를 전송하기 위해 Cbir1 TCR 형질전환-순진한 CD4 양성 T 세포를 1x PBS에서 밀리리터당 5백만 개의 세포로 재보선한다. 열 램프 아래 마우스를 따뜻하게하고 마우스 억제기를 사용하여 마우스를 억제합니다. 정맥 내 200 마이크로 리터를 쥐의 꼬리 정맥에 주입.마우스를 안락사한 후 약 1센티미터의 복부 중간선 피부 절개를 합니다. 복부 근육 조직에서 피부를 당깁니다. 그런 다음 복부 근육 조직에서 3 센티미터 절개를하십시오.다음으로, coecum을 식별하고 멸균 가위와 집게로 전체 결장제거합니다. 문화 접시에 미리 냉각 된 PBS로 결장 젖습니다. 결장을 세로로 절개하고 미리 냉각된 PBS로 헹구십시오.콜론의 1/3을 세로로 잘라냅니다. 콜론 스트립을 종이 타월에 놓고 루멘탈 측이 위쪽으로 향합니다. 이쑤시개를 사용하여 스위스 롤링을 수행합니다.결장 스위스를 카세트에 넣고 카세트를 10% 버퍼링한 포르말린에 24시간 동안 넣습니다. 자동 프로세서로 결장탈수및 파라핀을 내장합니다. 그런 다음 마이크로 톤에 5 마이크로 미터 조직 섹션을 잘라냅니다.슬라이드에 조직을 마운트하고 헤마톡시린과 에신 염색을 수행합니다. 래그 녹아웃 마우스는 세포 전후 3주 전후에 체중을 감량하기 시작했고, 체중은 6주 후 전형후 원래 체중의 약 80~85%에 이르렀습니다. 수신자 마우스는 짧은 결장 길이 6 주 후 세포 전송을 보였다.수령마우스는 장 내 라미나 프로프리아에서 더 많은 세포 침투를 입증4 주 후 세포 전달. 그(것)들은 결장의 부막에 있는 점막 침식 및 선동적인 세포 침투뿐만 아니라 세포 전후 5주 후 엽상 세포 증식 및 장 상피 세포 증식을 보여주었습니다. 조직 병리학 점수는 4 주에서 6 주까지 크게 증가했습니다.동시에, 혼자 PBS를 수신하는 래그 녹아웃 마우스에 염증이 없었다. 이 절차를 사용하여, 대장 사이토카인 수준은 ELISA와 qPCR에 의해 결정될 수 있었습니다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

장 조작의 표준화 된 모델의 분석 : 쥐의 장 운동성 및 내장 벽의 염증의 기능 평가

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

연구

의학

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

도우미에 의존 Adenoviral 벡터로 인한 유전자의 전송에 의한 당뇨 쥐의 간에서 네오 - 작은 섬 형성

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

면역 결핍 마우스의 피하 및 간내 인간의 간세포 암 이종 이식의 생성

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

면역 본래대로 사람 MUC1 유전자 변형 마우스의 침략 과도 셀 방광 암의 유도 : 면역 요법 개발을위한 모델

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

에 대한 쥐의 내시경<em&gt; 생체</em&gt; 발암 및 소장의 평가의 멀티 모달 이미징 상처 치유 및 염증

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

마우스의 담관 결찰 : 폐쇄성 담즙에 의한 염증성 간 손상과 섬유화의 유도

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

면역 결핍 마우스의 구인두 칸디다증의 Th17 염증 모델

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

건조 분말과 제약의 분무 에어로졸 흡입은 코 전용 노출 시스템을 사용하여 마우스 배달

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

검색 및 대 식 세포 관련 Murine 창 자 염증의 정량화에 대 한 단층 형광 중재

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

독 소 루비의 Retrobulbar 주입 및 예방의 지속적인된 출시 Aprotinin 여 볼륨 유지에 의해 쥐에서 신 증후군의 유도

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...