Name: induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice
Uploaded: 2021-12-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

Detta arbete stöddes delvis av National Institutes of Health grants DK125011, AI150210 och DK124132, University of Texas System STARs award (Y.C.) och James W. McLaughlin Fellowship Fund från University of Texas Medical Branch i Galveston (W.Y.). Figur 1 skapades med BioRender.com.

Alla djurprocedurer utfördes enligt University of Texas Medical Branch's Committee on the Use and Care of the animals. CBir1 TCR Tg möss tillhandahölls av Dr. Charles Elson vid University of Alabama i Birmingham. CBir1 TCR Tg möss kan vara kvinnliga eller manliga men bör vara vid 8-12 veckor. Rag1-/- möss på C57BL/6 bakgrund erhölls från Jackson Laboratory10. Rag1-/- möss måste vara köns- och åldersmatchade, och antingen hane eller kvinna kan a...

<ol>
	<li>Kaplan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+IBD:+From+2015+to+2025.">The global burden of IBD: From 2015 to 2025.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (12), 720-727 (2015).</li><li>Ananthakrishnan, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+IBD.">Epidemiology and risk factors for IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (4), 205-217 (2015).</li><li>Yang, W., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota-derived+metabolites+in+the+regulation+of+host+immune+responses+and+immune-related+inflammatory+diseases.">Gut microbiota-derived metabolites in the regulation of host immune responses and immune-related inflammatory diseases.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 18 (4), 866-877 (2021).</li><li>Pickard, J. M., Zeng, M. Y., Caruso, R., N&#250;&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gut microbiota: Role in pathogen colonization, immune responses, and inflammatory disease. 279 (1), 70-89 (2017).</li><li>Russler-Germain, E. V., Rengarajan, S., Hsieh, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+regulatory+T-cell+responses+to+intestinal+microbiota.">Antigen-specific regulatory T-cell responses to intestinal microbiota.</a> Mucosal Immunology. 10 (6), 1375-1386 (2017).</li><li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+metabolite+butyrate+differentially+regulates+Th1+and+Th17+cells'+differentiation+and+function+in+induction+of+colitis.">Microbiota metabolite butyrate differentially regulates Th1 and Th17 cells' differentiation and function in induction of colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 25 (9), 1450-1461 (2019).</li><li>Cong, Y., Weaver, C. T., Lazenby, A., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial-reactive+T+regulatory+cells+inhibit+pathogenic+immune+responses+to+the+enteric+flora.">Bacterial-reactive T regulatory cells inhibit pathogenic immune responses to the enteric flora.</a> Journal of Immunology. 169 (11), 6112-6119 (2002).</li><li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+flagellin+is+a+dominant+antigen+in+Crohn+disease.">Bacterial flagellin is a dominant antigen in Crohn disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 113 (9), 1296-1306 (2004).</li><li>Targan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+CBir1+flagellin+define+a+unique+response+that+is+associated+independently+with+complicated+Crohn's+disease.">Antibodies to CBir1 flagellin define a unique response that is associated independently with complicated Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 128 (7), 2020-2028 (2005).</li><li>Mombaerts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAG-1-deficient+mice+have+no+mature+B+and+T+lymphocytes.">RAG-1-deficient mice have no mature B and T lymphocytes.</a> Cell. 68 (5), 869-877 (1992).</li><li>Charan, J., Kantharia, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+calculate+sample+size+in+animal+studies.">How to calculate sample size in animal studies.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).</li><li>Kwizera, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+trypan+blue+stain+in+the+TC20+automated+cell+counter+as+a+point-of-care+for+the+enumeration+of+viable+cryptococcal+cells+in+cerebrospinal+fluid.">Evaluation of trypan blue stain in the TC20 automated cell counter as a point-of-care for the enumeration of viable cryptococcal cells in cerebrospinal fluid.</a> Medical Mycology. 56 (5), 559-564 (2018).</li><li>Boyman, O., L&#233;tourneau, S., Krieg, C., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+proliferation+and+survival+of+na&#239;ve+and+memory+T+cells.">Homeostatic proliferation and survival of na&#239;ve and memory T cells.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2088-2094 (2009).</li><li>Chai, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells,+derived+from+na&#239;ve+CD4+CD25-+T+cells+by+in+vitro+Foxp3+gene+transfer,+can+induce+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells, derived from na&#239;ve CD4+CD25- T cells by in vitro Foxp3 gene transfer, can induce transplantation tolerance.</a> Transplantation. 79 (10), 1310-1316 (2005).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Erben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+histomorphological+evaluation+of+intestinal+inflammation+in+mouse+models.">A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 7 (8), 4557-4576 (2014).</li><li>Tuijnman, W. B., Van Wichen, D. F., Schuurman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution+of+human+IgG+Fc+receptors+CD16,+CD32+and+CD64:+An+immunohistochemical+study.">Tissue distribution of human IgG Fc receptors CD16, CD32 and CD64: An immunohistochemical study.</a> APMIS. 101 (4), 319-329 (1993).</li><li>Yang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Intestinal microbiota-derived short-chain fatty acids regulation of immune cell IL-22 production and gut immunity. 11 (1), 4457 (2020).</li><li>Reinoso Webb, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+to+t+cell-induced+colitis+in+mice.+Role+of+the+Intestinal+Microbiota.">Differential susceptibility to t cell-induced colitis in mice. Role of the Intestinal Microbiota.</a> Inflammatory Bowel Disease. 24 (2), 361-379 (2018).</li><li>Bamias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+intestinal+lymphocyte+activation+and+Th1+cytokine+production+by+antibiotic+therapy+in+a+murine+model+of+Crohn's+disease.">Down-regulation of intestinal lymphocyte activation and Th1 cytokine production by antibiotic therapy in a murine model of Crohn's disease.</a> Journal of Immunology. 169 (9), 5308-5314 (2002).</li><li>Steinbach, E. C., Gipson, G. R., Sheikh, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+murine+intestinal+inflammation+by+adoptive+transfer+of+effector+CD4++CD45RB+high+T+cells+into+immunodeficient+mice.">Induction of murine intestinal inflammation by adoptive transfer of effector CD4+ CD45RB high T cells into immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52533 (2015).</li><li>Atale, N., Gupta, S., Yadav, U. C., Rani, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-death+assessment+by+fluorescent+and+nonfluorescent+cytosolic+and+nuclear+staining+techniques.">Cell-death assessment by fluorescent and nonfluorescent cytosolic and nuclear staining techniques.</a> Journal of Microscopy. 255 (1), 7-19 (2014).</li><li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+IBD.">The gut microbiota in IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li><li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+promote+Th1+cell+IL-10+production+to+maintain+intestinal+homeostasis.">Microbiota-derived short-chain fatty acids promote Th1 cell IL-10 production to maintain intestinal homeostasis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3555 (2018).</li><li>Feng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+cells+induce+colitis+and+promote+Th1+cell+responses+through+IL-17+induction+of+innate+IL-12+and+IL-23+production.">Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production.</a> Journal of Immunology. 186 (11), 6313-6318 (2011).</li><li>Chiaranunt, P., Tometich, J. T., Ji, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> T Cell Proliferation and Colitis Are Initiated by Defined Intestinal Microbes. 201 (1), 243-250 (2018).</li><li>Feng, T., Cao, A. T., Weaver, C. T., Elson, C. O., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-12+converts+Foxp3++regulatory+T+cells+to+interferon-&#947;-producing+Foxp3++T+cells+that+inhibit+colitis.">Interleukin-12 converts Foxp3+ regulatory T cells to interferon-&#947;-producing Foxp3+ T cells that inhibit colitis.</a> Gastroenterology. 140 (7), 2031-2043 (2011).</li></ol>

Även om varje steg är viktigt för reproducerbarheten av denna kolitmodell, finns det flera kritiska steg. Mottagaren Rag-/- möss bör få tillräckliga livskraftiga naϊve CD4 + T-celler för att inducera tarminflammation. Vi använde mjältar för isolering av naiva CD4 + T-celler istället för MLN. Eftersom utbytet av naiva CD4 + T-celler i MLN är mycket lägre än i mjältar. CD62L uttrycks starkt i naiva T-celler, och CD44 och CD25 är aktiveringsmarkörerna ...

Inflammatoriska tarmsjukdomar (IBD), främst inklusive Crohns sjukdom (CD) och ulcerös kolit (UC), kännetecknas av kronisk, skovvis förlöpande inflammation i mag-tarmkanalen, som påverkar miljontals över hela världen1. Flera faktorer har varit inblandade i utvecklingen och patogenesen vid IBD, inklusive genetisk känslighet, tarmfloran, immunsvar, kost och livsstil2. Den exakta mekanismen för IBD är dock fortfarande inte helt förstådd.
Ett av de särskilda intressena är interaktionen mellan tarmfloran och värd immunsvar vid reglering av tarminflammation3. Tarmfloran ger en serie immunstimulerande molekyler och antigener, som kan aktivera immunsvar4. Medan balansen mellan effektor T-celler och regulatoriska T-celler (Tregs) är avgörande för att upprätthålla intestinal homeostas, bidrar det överdrivna intestinala mukosala CD4 + T-cellssvaret på tarmmikrobiotaantigener till tarminflammation5,6,7. Som immunodominant tarm microbiota antigen, CBir1 flagellin har varit relaterade till patogenesen vid mänskliga CD8,9. Dessutom inducerar överföring av CBir1 TCR transgena (Tg) T-celler intestinal inflammation i immunbrist möss6, som liknar den mänskliga IBD, vilket indikerar att denna T-cellöverföringsmodell hjälper till att undersöka mekanismerna hos mänsklig IBD.
Detta arbete beskriver det detaljerade protokollet för att inducera kolit i Rag1-/- möss genom adoptiv överföring av CBir1 TCR Tg nave CD4 + T celler och bedöma sjukdomen allvarlighetsgrad. Dessutom visas de förväntade resultaten, och de kritiska stegen i förfarandet och felsökningen diskuteras, vilket kommer att hjälpa forskare att undersöka mekanismerna för patogenes vid tarminflammation och testa de potentiella läkemedlen för behandling av IBD.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m vacuum-driven disposable bottle top filter</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>SCGPS05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-&#181;m strainer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mL Transfer Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD16/32</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD25-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>102030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD3-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 Magnetic Particles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4-BV421</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD62L-PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>104408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Foxp3-PE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-5773-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IFN&#947;-FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IL-17A-PE/Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>TC20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C tube</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Separation Magnet</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociator Machine</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (0.5 M, PH 8.0)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S11550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>LSD Fortessa</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Lamp</td>
			<td>CoverShield</td>
			<td>BR40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E) Stain Kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab245880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>I24222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxQ 6000 Incubated/Refrigerated Stackable Shakers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SHKE6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A687-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol-12-myristate 13-acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Cytiva HyClone</td>
			<td>SH3002702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Arial Fusion</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Automatic Processor</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>STP120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Embedding/Processing Cassette</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>22048142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>True-Nuclear Transcription Factor Buffer Set (including Perm Buffer)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>424401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice

Med ökningen av incidensen medför inflammatoriska tarmsjukdomar (IBD), som är kroniska sjukdomar som påverkar mag-tarmkanalen, en betydande hälso- och ekonomisk börda för individer och samhälle. Därför är det viktigt att undersöka mekanismerna bakom patogenesen och utvecklingen av IBD. Här beskrivs en gut microbiota antigen-specifika T cell överföring kolit modell. CBir1 flagellin har erkänts som immunodominant gut bakteriell antigen i experimentell kolit och patienter med Crohns sjukdom. CBir1 TCR transgena nave CD4 + T-celler, specifika för CBir1 flagellin, kan inducera kronisk kolit efter adoptivöverföring till immunbrist Rag1-/- möss. Sjukdomen allvarlighetsgrad bedöms av histopatologi. CD4 + T cell fenotyper i colonic lamina propria bestäms också. Denna modell liknar nära utvecklingen av IBD, som ger en idealisk murin modell för att undersöka mekanismerna som driver patogenesen vid IBD och testa de potentiella läkemedlen för behandling av IBD.

Cirka 5 x 106 CBir1 TCR Tg nave CD4 + T celler per mjälte isolerades från en vuxen CBir1 TCR Tg mus. Överföring av CBir1 TCR Tg nave CD4 + T-celler inducerad kronisk kolit hos mottagare Rag1-/- möss. Efter cellöverföring övervakades kliniska tecken för att utvärdera utvecklingen av intestinal inflammation, inklusive viktminskning, avföring konsistens och hunched hållning. Som förväntat började möss gå ner i vikt cirka tre veckor efter cellöverföring,...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

I detta protokoll beskrivs en gut microbiota antigen-specifika T cell adoptiv överföring kolit modell. CD4+ T-celler är isolerade från CBir1 TCR transgena möss. Dessa är specifika för ett immunodominant tarmmikrobiotaantigen CBir1 flagellin, som överförs till mottagaren Rag1-/- möss, vilket leder till tarminflammation.

Induktion av tarminflammation genom adoptivöverföring av CBir1 TCR Transgena CD4 + T-celler till immunodeficient möss

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

Inflammatorisk tarmsjukdom, eller IBD, medför en betydande hälso- och ekonomisk börda för individer och samhället. Denna kolit modell är till hjälp för att studera mekanismerna i IBD och utvärdera behandlingarna för IBD. Denna immunodominanta Cbir flagellin T-cellsspecifika adoptivöverföring kolit modell ger insikter om hur tarmbakterier antigen inducerar T-cells svar för att inducera kolit.Efter avlivning av musen, gör ett ungefär en centimeter vänster buksnitt och dra huden bort från bukmuskelvävnaden. Gör sedan ett cirka tre centimeter snitt i bukmuskelvävnaden. Ta sedan bort mjälten med steril sax och tång.Placera mjälten i en odlingsskål som innehåller fem milliliter förkyld tvättbuffert. Slipa mjälten med den grova ytan av två sterila glasrutschbanor. Överför cellupphängningen till ett 50-milliliter centrifugrör genom att passera den genom en 100 mikrometer cellsil.Skölj glasglasglasen och odlingsfatet med fem milliliter förkyld tvättbuffert och överför tvättbufferten i röret. Centrifugera cellfjädringen, kassera supernatanten och återanvända cellerna med fem milliliter förvarnad Tris ammoniumkloridlysbuffert per mjälte. Inkubera i 10 minuter vid rumstemperatur.Tillsätt 10 ml förkyld tvättbuffert i röret. Centrifugera sedan cellfjädringen, kassera supernatanten och återanvända cellerna med 10 ml förkyld isoleringsbuffert. För att räkna cellerna, blanda 10 mikroliter vardera av cellfjädring och Trypan blå noggrant och ladda 10 mikroliter på en bild.Sätt sedan in bilden i den automatiska cellräknaren för att få det livskraftiga cellnumret. Centrifugera den återstående cellfjädringen och kassera all supernatant. Virvel anti-mus CD4 magnetiska partiklar, tillsätt direkt 50 mikroliter av partiklarna per 10 miljoner celler, och blanda med cellpellets noggrant.Inkubera blandningen i 30 minuter vid fyra grader Celsius. Överför cellpartikelupphängningen till ett sterilt uppsamlingsrör. Tillsätt 3,5 ml förkyld isoleringsbuffert i röret.Placera röret på cellseparationsmagneten i åtta minuter vid rumstemperatur. Aspirera sedan försiktigt av supernatanten med en tre milliliter överföringspipett. Ta bort röret från cellseparationsmagneten.Återanvänd sedan cellerna med 3,5 ml förkyld isoleringsbuffert och placera röret på magneten i fyra minuter vid rumstemperatur. Aspirera försiktigt supernatanten med en tre milliliter pipett. Slutligen återanvänd cellerna i en milliliter förkyld FACS-buffert.För att överföra cellerna till mottagarmössen, återanvänd Cbir1 TCR transgena-naiva CD4-positiva T-celler till 5 miljoner celler per milliliter i 1x PBS. Värm mössen under en värmelampa och håll fast mössen med en mushållare. Injicera intravenöst 200 mikroliter av cellupphängningen i mössens svansven.Efter avlivning av musen, gör ett cirka en centimeter ventralt mittlinje hudsnitt. Dra bort huden från bukmuskelvävnaden. Gör sedan ett tre centimeter snitt i bukmuskelvävnaden.Identifiera sedan coecum och ta bort hela tjocktarmen med steril sax och tång. Blöt tjocktarmen med förkyld PBS i en odlingsfat. Incise tjocktarmen på längden och skölj den med förkyld PBS.Skär 1/3 av tjocktarmen längsgående. Placera kolonremsan i en pappershandduk med lumensidan vänd uppåt. Utför schweizisk rullning med en tandpetare.Placera kolon schweizarna i en kassett och lägg kassetten i 10% buffrad formalin i 24 timmar. Dehydrera och paraffin-bädda in tjocktarmen med en automatiserad processor. Skär sedan fem-mikrometer vävnadssektioner på en mikrotom.Montera vävnaden på diabilder och utför hematoxylin- och eosinfärgning. Rag knockout möss började gå ner i vikt cirka tre veckor efter cell överföring, och deras vikt nådde cirka 80 till 85% av deras ursprungliga vikt sex veckor efter cell överföring. Mottagar möss visade kort kolon längd sex veckor post-cell överföring.De mottagande mössen visat mer cell infiltration i intestinala lamina propria fyra veckor post-cell överföring. De visade bägare cell förlust och intestinala epitelial cellen hyperplasi fem veckor post-cell överföring, liksom slemhinnan erosion och inflammatoriska cell infiltration i submucosa av kolon sex veckor post-cell överföring. Histopatologiska poäng ökade avsevärt från fyra till sex veckor.Samtidigt fanns det ingen inflammation i Rag knockout möss som får PBS ensam. Med hjälp av denna procedur kan colonic cytokin nivåer bestämmas av ELISA och qPCR.

Research

JoVE Journal

Medicine

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Funktionell bedömning av intestinal motilitet och tarmväggen Inflammation i Gnagare: Analyser i en standardiserad modell av intestinal manipulation

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

Neo-Islet Bildning i Lever från diabetiska möss genom Helper-beroende adenovirusvektor genöverföring

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

Generering av subkutan och Intrahepatisk Human hepatocellulär cancer implanterad i möss med immunbrist

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

Induktion av invasiva Transitional Cell blåskarcinom i immuna intakt human MUC1 transgena möss: En modell för immunterapi utveckling

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murin Endoskopi för<em&gt; In Vivo</em&gt; Multimodal avbildning av Carcinogenesis och Bedömning av intestinala sårläkning och inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Bile Duct Tion hos möss: Induktion av inflammatoriska leverskada och fibros av obstruktiv Kolestas

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

Th17 Inflammation Modell av orofaryngeal candidiasis i möss med immunbrist

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Pulver och nebuliserad Aerosol Inandning av läkemedel levereras till möss med användning av en näsa endast Exponeringssystem

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

Fluorescens-medierad tomografi för påvisande och kvantifiering av makrofag-relaterade murina tarminflammation

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Induktion av nefrotiskt syndrom hos möss av retrobulbär injektion av Doxorubicin och förebyggande av volym lagring genom frisättningen Aprotinin

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...