Name: induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice
Uploaded: 2021-12-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

Bu çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından DK125011, AI150210 ve DK124132, Texas Üniversitesi Sistem STARs ödülü (Y.C.) ve Galveston Teksas Üniversitesi Tıp Şubesi'nden James W. McLaughlin Burs Fonu (W.Y.) tarafından desteklendi. Şekil 1 BioRender.com ile oluşturulmuştur.

Tüm hayvan prosedürleri Teksas Üniversitesi Tıp Şubesi'nin Hayvanların Kullanımı ve Bakımı Komitesi'ne göre gerçekleştirildi. CBir1 TCR Tg fareleri Birmingham'daki Alabama Üniversitesi'nden Dr. Charles Elson tarafından sağlandı. CBir1 TCR Tg fareleri dişi veya erkek olabilir, ancak 8-12 haftada olmalıdır. C57BL/6 arka planındaki Rag1-/- fareler Jackson Laboratuvarı10'dan elde edildi. Rag1-/- fareler cinsiyet ve yaşla eşleşmelidir ve...

<ol>
	<li>Kaplan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+IBD:+From+2015+to+2025.">The global burden of IBD: From 2015 to 2025.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (12), 720-727 (2015).</li><li>Ananthakrishnan, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+risk+factors+for+IBD.">Epidemiology and risk factors for IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 12 (4), 205-217 (2015).</li><li>Yang, W., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gut+microbiota-derived+metabolites+in+the+regulation+of+host+immune+responses+and+immune-related+inflammatory+diseases.">Gut microbiota-derived metabolites in the regulation of host immune responses and immune-related inflammatory diseases.</a> Cellular &amp; Molecular Immunology. 18 (4), 866-877 (2021).</li><li>Pickard, J. M., Zeng, M. Y., Caruso, R., N&#250;&#241;ez, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Gut microbiota: Role in pathogen colonization, immune responses, and inflammatory disease. 279 (1), 70-89 (2017).</li><li>Russler-Germain, E. V., Rengarajan, S., Hsieh, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antigen-specific+regulatory+T-cell+responses+to+intestinal+microbiota.">Antigen-specific regulatory T-cell responses to intestinal microbiota.</a> Mucosal Immunology. 10 (6), 1375-1386 (2017).</li><li>Chen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+metabolite+butyrate+differentially+regulates+Th1+and+Th17+cells'+differentiation+and+function+in+induction+of+colitis.">Microbiota metabolite butyrate differentially regulates Th1 and Th17 cells' differentiation and function in induction of colitis.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 25 (9), 1450-1461 (2019).</li><li>Cong, Y., Weaver, C. T., Lazenby, A., Elson, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial-reactive+T+regulatory+cells+inhibit+pathogenic+immune+responses+to+the+enteric+flora.">Bacterial-reactive T regulatory cells inhibit pathogenic immune responses to the enteric flora.</a> Journal of Immunology. 169 (11), 6112-6119 (2002).</li><li>Lodes, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+flagellin+is+a+dominant+antigen+in+Crohn+disease.">Bacterial flagellin is a dominant antigen in Crohn disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 113 (9), 1296-1306 (2004).</li><li>Targan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibodies+to+CBir1+flagellin+define+a+unique+response+that+is+associated+independently+with+complicated+Crohn's+disease.">Antibodies to CBir1 flagellin define a unique response that is associated independently with complicated Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 128 (7), 2020-2028 (2005).</li><li>Mombaerts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAG-1-deficient+mice+have+no+mature+B+and+T+lymphocytes.">RAG-1-deficient mice have no mature B and T lymphocytes.</a> Cell. 68 (5), 869-877 (1992).</li><li>Charan, J., Kantharia, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+calculate+sample+size+in+animal+studies.">How to calculate sample size in animal studies.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).</li><li>Kwizera, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+trypan+blue+stain+in+the+TC20+automated+cell+counter+as+a+point-of-care+for+the+enumeration+of+viable+cryptococcal+cells+in+cerebrospinal+fluid.">Evaluation of trypan blue stain in the TC20 automated cell counter as a point-of-care for the enumeration of viable cryptococcal cells in cerebrospinal fluid.</a> Medical Mycology. 56 (5), 559-564 (2018).</li><li>Boyman, O., L&#233;tourneau, S., Krieg, C., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostatic+proliferation+and+survival+of+na&#239;ve+and+memory+T+cells.">Homeostatic proliferation and survival of na&#239;ve and memory T cells.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2088-2094 (2009).</li><li>Chai, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+T+cells,+derived+from+na&#239;ve+CD4+CD25-+T+cells+by+in+vitro+Foxp3+gene+transfer,+can+induce+transplantation+tolerance.">Regulatory T cells, derived from na&#239;ve CD4+CD25- T cells by in vitro Foxp3 gene transfer, can induce transplantation tolerance.</a> Transplantation. 79 (10), 1310-1316 (2005).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Swiss-rolling+technique+for+intestinal+tissue+preparation+for+immunohistochemical+and+immunofluorescent+analyses.">Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), e54161 (2016).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).</li><li>Erben, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+histomorphological+evaluation+of+intestinal+inflammation+in+mouse+models.">A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 7 (8), 4557-4576 (2014).</li><li>Tuijnman, W. B., Van Wichen, D. F., Schuurman, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+distribution+of+human+IgG+Fc+receptors+CD16,+CD32+and+CD64:+An+immunohistochemical+study.">Tissue distribution of human IgG Fc receptors CD16, CD32 and CD64: An immunohistochemical study.</a> APMIS. 101 (4), 319-329 (1993).</li><li>Yang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Intestinal microbiota-derived short-chain fatty acids regulation of immune cell IL-22 production and gut immunity. 11 (1), 4457 (2020).</li><li>Reinoso Webb, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+to+t+cell-induced+colitis+in+mice.+Role+of+the+Intestinal+Microbiota.">Differential susceptibility to t cell-induced colitis in mice. Role of the Intestinal Microbiota.</a> Inflammatory Bowel Disease. 24 (2), 361-379 (2018).</li><li>Bamias, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Down-regulation+of+intestinal+lymphocyte+activation+and+Th1+cytokine+production+by+antibiotic+therapy+in+a+murine+model+of+Crohn's+disease.">Down-regulation of intestinal lymphocyte activation and Th1 cytokine production by antibiotic therapy in a murine model of Crohn's disease.</a> Journal of Immunology. 169 (9), 5308-5314 (2002).</li><li>Steinbach, E. C., Gipson, G. R., Sheikh, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+murine+intestinal+inflammation+by+adoptive+transfer+of+effector+CD4++CD45RB+high+T+cells+into+immunodeficient+mice.">Induction of murine intestinal inflammation by adoptive transfer of effector CD4+ CD45RB high T cells into immunodeficient mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), e52533 (2015).</li><li>Atale, N., Gupta, S., Yadav, U. C., Rani, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-death+assessment+by+fluorescent+and+nonfluorescent+cytosolic+and+nuclear+staining+techniques.">Cell-death assessment by fluorescent and nonfluorescent cytosolic and nuclear staining techniques.</a> Journal of Microscopy. 255 (1), 7-19 (2014).</li><li>Manichanh, C., Borruel, N., Casellas, F., Guarner, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+gut+microbiota+in+IBD.">The gut microbiota in IBD.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 9 (10), 599-608 (2012).</li><li>Sun, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-derived+short-chain+fatty+acids+promote+Th1+cell+IL-10+production+to+maintain+intestinal+homeostasis.">Microbiota-derived short-chain fatty acids promote Th1 cell IL-10 production to maintain intestinal homeostasis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3555 (2018).</li><li>Feng, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th17+cells+induce+colitis+and+promote+Th1+cell+responses+through+IL-17+induction+of+innate+IL-12+and+IL-23+production.">Th17 cells induce colitis and promote Th1 cell responses through IL-17 induction of innate IL-12 and IL-23 production.</a> Journal of Immunology. 186 (11), 6313-6318 (2011).</li><li>Chiaranunt, P., Tometich, J. T., Ji, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> T Cell Proliferation and Colitis Are Initiated by Defined Intestinal Microbes. 201 (1), 243-250 (2018).</li><li>Feng, T., Cao, A. T., Weaver, C. T., Elson, C. O., Cong, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-12+converts+Foxp3++regulatory+T+cells+to+interferon-&#947;-producing+Foxp3++T+cells+that+inhibit+colitis.">Interleukin-12 converts Foxp3+ regulatory T cells to interferon-&#947;-producing Foxp3+ T cells that inhibit colitis.</a> Gastroenterology. 140 (7), 2031-2043 (2011).</li></ol>

Bu kolit modelinin tekrarlanabilirliği için her adım şart olsa da, birkaç kritik adım vardır. Alıcı Rag-/- fareler bağırsak iltihabını teşvik etmek için CD4 + T hücreleri naϊve yeterli uygulanabilir almalıdır. MLN'ler yerine naif CD4+ T hücrelerinin izolasyonu için dalak kullandık. Çünkü MLN'lerde naif CD4+ T hücrelerinin verimi dalaklara göre çok daha düşüktür. CD62L naif T hücrelerinde yüksek oranda ifade edilir ve CD44 ve CD25 T hü...

Özellikle Crohn hastalığı (CD) ve ülseratif kolit (UC) dahil olmak üzere enflamatuar bağırsak hastalıkları (IBD), gastrointestinal sistemin kronik, nükseden-remitting iltihabı ile karakterizedir ve dünya çapında milyonlarca 1. Genetik duyarlılık, bağırsak mikrobiyotası, immün yanıtlar, diyet ve yaşam tarzı2 dahil olmak üzere IBD'nin gelişiminde ve patogenezinde çeşitli faktörler söze dahil edilmiştir2. Ancak, IBD'nin tam mekanizması hala tam olarak anlaşılamamıştır.
Özel ilgi alanlardan biri bağırsak mikrobiyotası ve konak immün yanıtları arasındaki etkileşim bağırsak iltihabını düzenlemede3. Bağırsak mikrobiyotası, immün yanıtları aktive edebilecek bir dizi immünostimülatuvar molekül ve antijen sağlar4. Efektör T hücreleri ile düzenleyici T hücreleri (Tregs) arasındaki denge bağırsak homeostazını korumada kritik öneme sahipken, bağırsak mikrobiyota antijenlerine aşırı bağırsak mukozal CD4+ T hücre yanıtı bağırsak iltihabına katkıda bulunur5,6,7. İmmünodominant gut mikrobiyota antijeni olarak, CBir1 flagellin insan CD8,9 patogenez ile ilişkili olmuştur. Ayrıca, CBir1 TCR transgenik (Tg) T hücrelerinin transferi, bağışıklık eksikliği olan farelerde bağırsak iltihabına neden olur6, insan IBD'sine çok benzer, bu da bu T hücre transfer modelinin insan IBD'nin mekanizmalarını araştırmaya yardımcı olduğunu gösterir.
Bu çalışma, CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T hücrelerinin benimsenerek ve hastalık şiddetini değerlendirerek Rag1-/- farelerde kolit indüklemenin ayrıntılı protokolünü açıklamaktadır. Ayrıca, beklenen sonuçlar gösterilir ve araştırmacıların bağırsak iltihabı patogenezinin mekanizmalarını araştırmalarına ve IBD tedavisi için potansiyel ilaçları test etmelerine yardımcı olacak prosedürün ve sorun gidermenin kritik adımları tartışılmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m vacuum-driven disposable bottle top filter</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>SCGPS05RE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100-&#181;m strainer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-mL Transfer Pipette</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>13-711-9CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD16/32</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>101302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD25-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>102030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD3-Percp/Cy5.5</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100327</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 Magnetic Particles</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>551539</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4-BV421</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD62L-PE</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>104408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Foxp3-PE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-5773-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IFN&#947;-FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse IL-17A-PE/Cy7</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506922</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>Bio-rad</td>
			<td>TC20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP1600-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C tube</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-093-237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Separation Magnet</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5138</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociator Machine</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-096-427</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA (0.5 M, PH 8.0)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>S11550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>LSD Fortessa</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Lamp</td>
			<td>CoverShield</td>
			<td>BR40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin (H&#38;E) Stain Kit</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab245880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>329412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>I24222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Live/dead Fixable Near-IR Dead Cell Stain kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>L10119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaxQ 6000 Incubated/Refrigerated Stackable Shakers</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>SHKE6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A687-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percoll</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol-12-myristate 13-acetate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Cytiva HyClone</td>
			<td>SH3002702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Arial Fusion</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Automatic Processor</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>STP120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Embedding/Processing Cassette</td>
			<td>Fisher Healthcare</td>
			<td>22048142</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>BP154-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>True-Nuclear Transcription Factor Buffer Set (including Perm Buffer)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>424401</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

induction of intestinal inflammation by adoptive transfer of cbir1 tcr transgenic cd4+ t cells to immunodeficient mice

Görülme sıklığının artmasıyla gastrointestinal sistemi etkileyen kronik hastalıklar olan inflamatuar bağırsak hastalıkları (IBD), bireylere ve topluma önemli bir sağlık ve finansal yük getirmektedir. Bu nedenle, patogenezin ve IBD gelişiminin altında kalan mekanizmaların araştırılması kritik öneme sahiptir. Burada bağırsak mikrobiyota antijenine özgü T hücre transferi kolit modeli tanımlanmıştır. CBir1 flagellin, deneysel kolitte ve Crohn hastalığı olan hastalarda immünomisinant bağırsak bakteriyel antijeni olarak kabul edilmiştir. CBir1 flagellin'e özgü CBir1 transgenik naϊve CD4+ T hücreleri, bağışıklık eksikliği olan Rag1/- farelere evlat edindikten sonra kronik kolite neden olabilir. Hastalığın şiddeti histopatoloji ile değerlendirilir. Kolonik lamina propriasındaki CD4+ T hücre fenotipleri de belirlenir. Bu model, IBD patogenezini yönlendiren mekanizmaları araştırmak ve IBD'yi tedavi etmek için potansiyel ilaçları test etmek için ideal bir murine modeli sağlayan IBD'nin geliştirilmesine yakından benzemektedir.

Dalak başına yaklaşık 5 x 106 CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T hücreleri yetişkin bir CBir1 TCR Tg fareden izole edildi. CBir1 TCR Tg naϊve CD4+ T hücrelerinin transferi, alıcı Rag1/- farelerde kronik kolit indüklendi. Hücre transferlerinden sonra, kilo kaybı, dışkı kıvamı ve kambur duruş da dahil olmak üzere bağırsak iltihabının ilerlemesini değerlendirmek için klinik belirtiler izlendi. Beklendiği gibi, fareler hücre transferi sonrası yaklaşı...

Watch this Scientific Journal Video about Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice at JoVE.com

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

Bu protokolde bağırsak mikrobiyota antijenine özgü T hücreli benimseyen transfer kolit modeli tanımlanmıştır. CD4+ T hücreleri CBir1 TCR transgenik farelerden izole edilmiştir. Bunlar, alıcı Rag1/- farelere aktarılan ve bağırsak iltihabına yol açan immünodominant bağırsak mikrobiyota antijeni CBir1 flagellin için özeldir.

CBir1 TCR Transgenik CD4+ T Hücrelerinin İmmün Yetmezlikçi Farelere Benimsenen Transferi ile Bağırsak İltihabının İndüksiyonu

With the increase of incidence, inflammatory bowel diseases (IBD), which are chronic diseases affecting the gastrointestinal tract, impose a considerable ...

İnflamatuvar bağırsak hastalığı veya IBD, bireylere ve topluma önemli bir sağlık ve finansal yük getirmektedir. Bu kolit modeli, IBD mekanizmalarını incelemek ve IBD tedavilerini değerlendirmek için faydalıdır. Bu immünodominant Cbir flagellin T hücreye özgü adoptif transfer kolit modeli, bağırsak bakteri antijenlerinin kolit indükleyen T hücreli yanıtları nasıl indüklet olduğuna dair içgörüler sağlar.Fareyi ötenazi yaptıktan sonra, yaklaşık bir santimetrelik bir sol karın kesiği yapın ve cildi karın kas dokusundan çekin. Daha sonra karın kas dokusunda yaklaşık üç santimetrelik bir kesi yapın. Daha sonra, dalağını steril makas ve asalarla çıkarın.Dalağını beş mililitre önceden soğutulmuş yıkama tamponu içeren bir kültür kabına yerleştirin. Dalağını iki steril cam kaydırağın pürüzlü yüzeyiyle öğütün. Hücre süspansiyonunu 100 mikrometrelik hücre süzgecinden geçirerek 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.Cam kaydırakları ve kültür çanağı beş mililitre önceden soğutulmuş yıkama tamponu ile durulayın ve yıkama tamponunu tüpe aktarın. Hücre süspansiyonu santrifüj, süpernatan atmak ve dalak başına beş mililitre önceden ısıtılmış Tris amonyum klorür lizis tamponu ile hücreleri yeniden dirilt. Oda sıcaklığında 10 dakika kuluçkaya yatır.Tüpe 10 mililitre önceden soğutulmuş yıkama tamponu ekleyin. Ardından, hücre süspansiyonu santrifüj, üstnatan atmak ve önceden soğutulmuş izolasyon tampon 10 mililitre ile hücreleri yeniden dirilt. Hücreleri saymak için, hücre süspansiyonunun ve Trypan mavisinin her birini 10 mikrolitreyi iyice karıştırın ve bir slayta 10 mikrolitre yükleyin.Ardından, uygulanabilir hücre numarasını elde etmek için slaydı otomatik hücre sayacına yerleştirin. Kalan hücre süspansiyonu santrifüj ve tüm süpernatant atın. Fare karşıtı CD4 manyetik parçacıklarını girdaplayın, doğrudan 10 milyon hücre başına 50 mikrolitre parçacık ekleyin ve hücre peletleriyle iyice karıştırın.Karışımı dört santigrat derecede 30 dakika kuluçkaya bırakın. Hücre partikül süspansiyonu steril bir toplama tüpüne aktarın. Tüpe 3,5 mililitre önceden soğutulmuş izolasyon tamponu ekleyin.Tüpü oda sıcaklığında sekiz dakika boyunca hücre ayırma mıknatısı üzerine yerleştirin. Daha sonra, üç mililitrelik bir transfer pipet ile süpernatantı dikkatlice emiş edin. Tüpü hücre ayırma mıknatısından çıkarın.Daha sonra, hücreleri 3,5 mililitre önceden soğutulmuş izolasyon tamponu ile yeniden depolayın ve tüpü oda sıcaklığında dört dakika boyunca mıknatısın üzerine yerleştirin. Süpernatantı üç mililitre pipetle dikkatlice aspire edin. Son olarak, hücreleri önceden soğutulmuş bir mililitre önceden soğutulmuş FACS arabelleğine yeniden koyun.Hücreleri alıcı farelere aktarmak için, Cbir1 TCR transgenik-naif CD4 pozitif T hücrelerini 1x PBS'de mililitre başına 5 milyon hücreye yeniden kullanın. Fareleri bir ısı lambası altında ısıtın ve fareyi bir fare kısıtlayıcı kullanarak kısıtlayın. Hücre süspansiyonunun 200 mikrolitresini farelerin kuyruk damarına intravenöz olarak enjekte edin.Fareyi ötenazi ettikten sonra, yaklaşık bir santimetrelik ventral orta çizgi cilt kesiği yapın. Cildi karın kas dokusundan uzaklaştırın. Daha sonra karın kas dokusunda üç santimetrelik bir kesi yapın.Daha sonra, koekumu tanımlayın ve tüm kolonu steril makas ve asalarla çıkarın. Kolonu önceden soğutulmuş PBS ile bir kültür tabağında ıslatın. Kolonu uzunlamasına inzivaya ayırın ve önceden soğutulmuş PBS ile durulayın.Kolonun 1/3'ü uzunlamasına kesin. Kolon şeridini, lümen tarafı yukarı bakacak şekilde bir kağıt havluya yerleştirin. Kürdan kullanarak İsviçre'de yuvarlanma gerçekleştirin.Kolon İsviçre'yi bir kasete yerleştirin ve kaseti 24 saat boyunca% 10 tamponlu formalin içine koyun. Otomatik bir işlemci ile kolonu susuz ve parafinle gömün. Daha sonra, bir mikrotom üzerinde beş mikrometre doku bölümlerini kesin.Dokuyu slaytlara monte edin ve hematoksilin ve eozin lekeleme gerçekleştirin. Rag nakavt fareleri hücre sonrası transferden yaklaşık üç hafta sonra kilo vermeye başladı ve kiloları hücre transferden altı hafta sonra orijinal ağırlıklarının yaklaşık% 80 ila 85'ine ulaştı. Alıcı fareler hücre nakli sonrası altı hafta kısa kolon uzunluğu gösterdi.Alıcı fareler, hücre sonrası transferden dört hafta sonra bağırsak lamina propriasında daha fazla hücre infiltrasyon gösterdi. Goblet hücre kaybı ve bağırsak epitel hücre hiperplazisi beş hafta hücre sonrası transfer, ayrıca kolon altı hücre transferi altı hafta submukozosunda mukozal erozyon ve inflamatuar hücre infiltrasyon gösterdi. Histopatolojik skorlar önemli ölçüde dört haftadan altı haftaya yükseldi.Aynı zamanda, sadece PBS alan Rag nakavt farelerinde iltihap yoktu. Bu prosedür kullanılarak, kolonik sitokin düzeyleri ELISA ve qPCR tarafından belirlenebilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Induction of Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of CBir1 TCR Transgenic CD4+ T Cells to Immunodeficient Mice

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Inflammation of the gastrointestinal tract is a common reason for a variety of human diseases. Animal research models are critical in investigating the ...

Neo-Islet Formation in Liver of Diabetic Mice by Helper-dependent Adenoviral Vector-Mediated Gene Transfer

Helper bağımlı adenoviral vektör-Gen Transferi ile Diyabetik Sıçanların Karaciğerinde Neo-Islet Oluşumu

Type 1 diabetes is caused by T cell-mediated autoimmune destruction of insulin-producing cells in the pancreas. Until now insulin replacement is still the ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Induction of Invasive Transitional Cell Bladder Carcinoma in Immune Intact Human MUC1 Transgenic Mice:  A Model for Immunotherapy Development

Bağışıklık Sağlam İnsan MUC1 Transgenik Farelerde İnvaziv Geçici Hücre Mesane Karsinomu indüksiyon: immünoterapi Kalkınma İçin Bir Model

A preclinical model of invasive bladder cancer was developed in human mucin 1 (MUC1) transgenic (MUC1.Tg) mice for the purpose of evaluating immunotherapy ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murin için Endoskop<em&gt; In Vivo</em&gt; Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Kuru Toz ve Eczacılık Nebulize Aerosol Soluma bir Burun sadece Pozlama Sistemi Kullanarak Fare teslim

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Fluorescence-mediated Tomography for the Detection and Quantification of Macrophage-related Murine Intestinal Inflammation

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Murine models of disease are indispensable to scientific research. However, many diagnostic tools such as endoscopy or tomographic imaging are not ...

Induction of Nephrotic Syndrome in Mice by Retrobulbar Injection of Doxorubicin and Prevention of Volume Retention by Sustained Release Aprotinin

Doksorubisin Retrobulbar enjeksiyon ve Önleme Birimi kalıcılık tarafından sürekli yayın Aprotinin farelerde Nefrotik sendromda indüksiyon

Nephrotic syndrome is the most extreme manifestation of proteinuric kidney disease and characterized by heavy proteinuria, hypoalbuminemia, and edema due ...