Name: registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy
Uploaded: 2021-12-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

تم إجراء دراسات التألق لهذا العمل بدعم مالي من منحة مؤسسة العلوم الروسية (المشروع رقم 19-15-00329). تم تطوير هذه الطريقة بتمويل من مهمة حكومية لمركز FRC قازان العلمي التابع ل RAS АААА-А18-118022790083-9. تم تطوير البحث باستخدام معدات مركز البحوث الفيدرالي "مركز قازان العلمي التابع ل RAS". يود المؤلفان أن يشكرا الدكتور فيكتور إيلين على قراءته النقدية لهذه المخطوطة.

أجريت التجارب على المستحضرات العصبية العضلية المعزولة للرافع أوريس لونغوس (m. LAL) من الفئران BALB / C (20-23 جم ، 2-3 أشهر)41. تم تنفيذ الإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية لاستخدام المختبر في جامعة قازان الفيدرالية وجامعة قازان الطبية ، وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرع?...

يتم تقديم طريقة تحميل صبغة حساسة Ca2 + في النهايات العصبية للفأر من خلال الجذع العصبي ولتسجيل عابر سريع للكالسيوم باستخدام المجهر البؤري في هذه المقالة. نتيجة لتنفيذ طريقة التحميل هذه ، كان لدى معظم نقاط الاشتباك العصبي الموجودة بالقرب من جذع العصب مستوى كاف من التألق لتمكين تسجيل دخ?...

تعد مشكلة قياس موجات الكالسيوم السريعة في الخلايا القابلة للإثارة واحدة من أهم الجوانب وأكثرها تحديا لدراسة انتقال الإشارة في الجهاز العصبي المركزي والمحيطي. تلعب أيونات الكالسيوم دورا مهما في تحفيز إطلاق الناقل العصبي ، واللدونة المشبكية ، وتعديل نشاط البروتينات المختلفة داخل الخلايا1،2،3،4،5. دراسة إشارات الكالسيوم مهمة أيضا لإيجاد طرق لعلاج الأمراض العصبية التنكسية6. لقياس التغيرات في مستويات الكالسيوم ، يشيع استخدام الأصباغ الحساسة للكالسيوم الفلورسنت ، ويتم تحليل التغيرات في مستوى التألق7،8،9.
يمكن تحقيق تحميل أصباغ الكالسيوم في الخلايا بطرق مختلفة. في الغالب ، يتم استخدام الأصباغ الخلوية10,11. ومع ذلك ، في مثل هذه الحالة ، ليس من الصعب فقط التحكم في تركيز الصبغة داخل الخلية ، ولكن من الصعب أيضا تحديد الخلايا المستهدفة للتحميل. هذه الطريقة غير قابلة للتطبيق لدراسة النهايات العصبية الطرفية لأن الصبغة تدخل الخلايا ما بعد المشبكي. بدلا من ذلك ، تكون الأصباغ الخلوية غير المقصودة أكثر ملاءمة لمثل هذه المستحضرات. في هذه الحالة ، يتم تسليم الأصباغ إلى الخلايا عن طريق الحقن المجهري أو من خلال ماصة التصحيح12،13،14. هناك أيضا طريقة للتحميل من خلال جذع الأعصاب. الطريقة الأخيرة هي الأنسب لمستحضرات الوصلة العصبية العضلية15،16،17،18،19،20. يسمح بإجراء تلطيخ للخلايا ذات الاهتمام فقط. على الرغم من أن هذه الطريقة لا توفر تقييما دقيقا لتركيز الصبغة في الخلية المستهدفة ، إلا أنه يمكن تقدير التركيز تقريبا من خلال مقارنة مستوى تألق الخلايا في حالة السكون في المحاليل ذات التركيز المعروف للكالسيوم21. في هذه الدراسة ، يتم تقديم تعديل لهذه الطريقة المطبقة على نقاط الاشتباك العصبي للثدييات.
دخول الكالسيوم خلال مرحلة إزالة الاستقطاب من إمكانات العمل هو عملية سريعة ، وخاصة في التقاطع العصبي العضلي. لذلك ، لتسجيلها ، هناك حاجة إلى المعدات المناسبة1. أظهرت دراسة حديثة باستخدام صبغة فلورسنت حساسة للجهد أن مدة جهد العمل في المشبك المحيطي للفأر تبلغ حوالي 300 ميكروثانية22. الكالسيوم العابر ، الذي يتم تقييمه باستخدام أصباغ حساسة للكالسيوم في نقاط الاشتباك العصبي الطرفية للضفدع ، له مدة أطول: وقت الارتفاع حوالي 2-6 مللي ثانية ووقت الاضمحلال حوالي 30-90 مللي ثانية ، اعتمادا على صبغة الكالسيوم المستخدمة23,24. لقياس العمليات السريعة بمساعدة الأصباغ الفلورية ، يتم استخدام كاميرات CCD أو CMOS بشكل عام ، مع مصفوفات CCD سريعة وحساسة. ومع ذلك ، فإن هذه الكاميرات لها عيب الدقة المنخفضة ، محدودة بحجم العناصر الحساسة للمصفوفة25،26،27،28. أسرع الكاميرات ذات الحساسية الكافية لتسجيل كل من إمكانات الحركة وانتقالات الكالسيوم استجابة للتحفيز منخفض التردد للخلايا لديها تردد مسح ضوئي يبلغ 2000 هرتز ، ومصفوفة ببعد 80 × 8029. للحصول على إشارات ذات دقة مكانية أعلى ، يتم استخدام المجهر البؤري ، خاصة إذا كان من الضروري تقييم بعض التغيرات الحجمية في الإشارة 30،31،32. ولكن يجب أن نضع في اعتبارنا أن المجهر البؤري لديه سرعة مسح عالية في وضع المسح الضوئي الخطي ، ولكن لا تزال هناك قيود كبيرة على سرعة تسجيلات العمليات السريعة عند بناء صورة مكانية33. هناك مجاهر متحدة البؤرة تعتمد على أقراص Nipkow الدوارة (المجهر المجهري للمسح الشقي) والماسحات الضوئية متعددة النقاط ، والتي تتمتع بسرعة مسح أعلى. في الوقت نفسه ، فهي أدنى من المجاهر البؤرية الكلاسيكية في تصفية الصور البؤرية (الثقوب المتقاطعة للمجاهر مع قرص Nipkow)32،34،35. يمكن أن يوفر التصوير البؤري مع المسح الضوئي بالرنين أيضا دقة مكانية وزمنية عالية مطلوبة للقياسات الزمنية العالية36. ومع ذلك ، ضع في اعتبارك أن تسجيل استجابات الفلورسنت الضعيفة بسرعة مسح عالية عند استخدام الماسحات الضوئية بالرنين يتطلب كاشفات حساسة للغاية مثل أجهزة الكشف الهجينة36.
تقدم هذه المقالة طريقة لزيادة الدقة الزمنية للإشارات المسجلة باستخدام المجهر البؤري للمسح الضوئي بالليزر (LSCM) مع الحفاظ على الدقة المكانية37. الطريقة الحالية هي تطوير إضافي للطرق الموضحة سابقا ونقلها إلى منصة LSCM38,39,40. لا يتطلب هذا النهج تغييرات في أجهزة المجهر ويستند إلى تطبيق خوارزمية لتسجيل إشارات الفلورسنت المستحثة بشكل دوري مع تحول زمني بالنسبة للحظة التحفيز.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Capillary Glass</td>
			<td>Clark Electromedical instruments, UK</td>
			<td>GC150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal and multiphoton microscope system Leica TCS SP5 MP</td>
			<td>Leica Microsystems , Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flaming/Brown Micropipette Puller P 97</td>
			<td>Sutter Instrument, USA</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow regulator</td>
			<td>KD Medical GmbH Hospital Products, Germany</td>
			<td>KD REG</td>
			<td>Disposable infusion set with Flow regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>H0887</td>
			<td>100mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumination system Leica CLS 150X</td>
			<td>Leica Microsystems, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td>http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las AF software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las X software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Holder with Suction Tubing</td>
			<td>BIOSCIENCE TOOLS, USA</td>
			<td>MTH-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microspin FV 2400</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010201-AAA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien Pins</td>
			<td>Fine science tools, Canada</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-spin MSC 3000</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010205-AAN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 BAPTA-1 pentapotassium salt</td>
			<td>Molecular Probes, USA</td>
			<td>O6806</td>
			<td>500 &#956;g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>720210</td>
			<td>0.5-10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>781349</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasticine</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-use hypodermic needles</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>100 Sterican</td>
			<td>0.4&#215;40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet program</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope, Leica M80</td>
			<td>Leica Microsystems , Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction electrode</td>
			<td>Kazakov A. SIMPLE SUCTION ELECTRODE FOR ELECTRIC STIMULATION OF BIOLOGICAL OBJECTS / A. Kazakov, M. Alexandrov, N. V. Zhilyakov et al. // International research journal.&#160;- 2015. - No. 9 (40) Part 3. - P. 13-16.</td>
			<td></td>
			<td>http://research-journal.org/biology/prostoj-vsasyvayushhij-elektrod-dlya-elektricheskoj-stimulyacii-biologicheskix-obektov/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 elastomer</td>
			<td>Dow Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>60 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy

يعد تقدير مستوى الكالسيوم قبل المشبكي مهمة رئيسية في دراسة انتقال المشبكية لأن دخول الكالسيوم إلى الخلية قبل المشبكي يؤدي إلى سلسلة من الأحداث التي تؤدي إلى إطلاق الناقل العصبي. علاوة على ذلك ، فإن التغيرات في مستويات الكالسيوم قبل المشبكي تتوسط نشاط العديد من البروتينات داخل الخلايا وتلعب دورا مهما في اللدونة المتشابكة. دراسة إشارات الكالسيوم مهمة أيضا لإيجاد طرق لعلاج الأمراض العصبية التنكسية. التقاطع العصبي العضلي هو نموذج مناسب لدراسة اللدونة المشبكية ، لأنه يحتوي على نوع واحد فقط من الناقل العصبي. توضح هذه المقالة طريقة تحميل صبغة حساسة للكالسيوم من خلال حزمة الأعصاب المقطوعة في النهايات العصبية الحركية للفئران. تسمح هذه الطريقة بتقدير جميع المعلمات المتعلقة بتغيرات الكالسيوم داخل الخلايا ، مثل مستوى الكالسيوم القاعدي والكالسيوم العابر. نظرا لأن تدفق الكالسيوم من خارج الخلية إلى الأطراف العصبية وربطه / فك ارتباطه بالصبغة الحساسة للكالسيوم يحدث في حدود بضعة ميلي ثانية ، يلزم وجود نظام تصوير سريع لتسجيل هذه الأحداث. في الواقع ، تستخدم الكاميرات عالية السرعة بشكل شائع لتسجيل تغييرات الكالسيوم السريعة ، ولكن لديها معلمات دقة صورة منخفضة. يسمح البروتوكول المقدم هنا لتسجيل الكالسيوم العابر بدقة مكانية وزمنية جيدة للغاية يوفرها المجهر البؤري.

بعد تحميل المستحضر بالصبغة وفقا للتقنية المقدمة ، كان لمعظم نقاط الاشتباك العصبي الموجودة بالقرب من جذع العصب مستوى كاف من التألق (انظر الشكل 2). بعد تحميل التحضير بالصبغة وتطبيق الطريقة الموصوفة للتسجيل ومعالجة الصور ، تم الحصول على انتقالات الكالسيوم بالدقة المكانية وا?...

Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

يصف البروتوكول طريقة تحميل صبغة الكالسيوم الفلورية من خلال العصب المقطوع إلى أطراف العصب الحركي للفأر. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم طريقة فريدة لتسجيل انتقالات الكالسيوم السريعة في النهايات العصبية الطرفية باستخدام المجهر البؤري.

تسجيل انتقالات الكالسيوم في الوصلة العصبية العضلية للفأر بدقة زمنية عالية باستخدام المجهر البؤري

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...

يعد تقدير مستوى الكالسيوم قبل المشبكي مهمة رئيسية في دراسة الانتقال المشبكي. دراسة إشارات الكالسيوم مهمة أيضا لإيجاد طرق لعلاج الأمراض العصبية التنكسية. الميزة الرئيسية لتقنية التحميل المقدمة هي أن التلطيخ قد تم إجراؤه فقط للخلايا ذات الاهتمام.توفر طريقتنا لتسجيل تعنت الكالسيوم دقة مكانية وزمنية جيدة للغاية. يمكن أن تكون طريقة التسجيل المقدمة مفيدة لأخصائيي الفيزيولوجيا العصبية الذين يحتاجون إلى تسجيل عمليات دورية سريعة باستخدام المجهر البؤري. الخطوة الأكثر صعوبة في تقنية التحميل هي الإمساك بالعصب داخل الماصة.يجب أن يكون قطر الماصة مناسبا تماما ، لذا اصنع عدة منها. معرفة جميع الخطوات في البروتوكول معقدة وإظهار كل واحد منهم سيساعد كثيرا. ابدأ بتثبيت الأنسجة العضلية الرافعة أوريس لونغوس بطريقة ممتدة قليلا في طبق بتري المطلي بالمطاط الصناعي مع دبابيس الفولاذ المقاوم للصدأ الدقيقة وأضف محلول رينجر إلى الطبق حتى يتم تغطية العضلات بالكامل.بعد ذلك ، استخدم مجتذب الماصة الدقيقة لإعداد ماصة دقيقة مع طرف حاد دقيق للتسجيلات داخل الخلايا. استخدم الشعيرات الدموية بدون خيوط داخلية. بعد تسجيل المستدق باستخدام مادة كاشطة ، قم بقطع طرف الماصة الدقيقة ، تاركا الطرف مفتوحا لقطره حوالي 100 ميكرومتر.ثم ، قم بتلميع الطرف حتى يتقلص القطر الداخلي من 80 ميكرومتر إلى 12 ميكرومتر. عند الانتهاء ، قم بتوصيل أنبوب سيليكون إلى جانب واحد ومحقنة بدون إبرة إلى الجانب الآخر من ماصة التعبئة. تحت المجهر الاستريو ، ابحث عن المكان الذي يتحول فيه جذع العصب إلى فروع عصبية منفصلة.ضع ماصة الحشوة على طبق بتري باستخدام الشمع ثم حرك طرف الماصة حتى يقف فوق العصب. قطع العصب بالقرب من الألياف العضلية بمقص دقيق ، وترك قطعة صغيرة من الجذع العصبي ، يبلغ طولها حوالي ملليمتر واحد. ثم ، قم بشفط جذع العصب ببعض محلول رينجر في طرف ماصة الملء ، دون قرص العصب.بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإزالة أنبوب السيليكون من ماصة التعبئة. في وقت لاحق ، استخدم حقنة ذات خيوط طويلة لرسم محلول تحميل الصبغة. ثم أدخل طرف الخيوط مع محلول التحميل في ماصة الحشو وحرر الخليط على جذع العصب ، يليه احتضان المستحضر العصبي في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة 30 دقيقة.بعد الحضانة ، اشطف المستحضر العصبي بمحلول رينجر الطازج قبل معالجته ب 50 ملليلتر من محلول رينجر في كوب زجاجي عند 25 درجة مئوية لمدة ساعتين. بالنسبة للمجهر البؤري ، قم بتركيب المستحضر العصبي في غرفة تجريبية مطلية بمطاط صناعي من السيليكون وقم بإصلاحه ، ممتدا قليلا ، مع مجموعة من الإبر الدقيقة الفولاذية. ثم ، شطف التحضير على نطاق واسع مع حل رينجر.تثبيت قطب شفط على الغرفة. بعد تركيب غرفة التحضير على مرحلة المجهر ، ضع تركيبات المدخل والمخرج في الغرفة. قم بتشغيل نظام مدفوع بتدفق الجاذبية لإزالة المحلول الزائد من المستحضر.بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بتوصيل قطب الشفط المحفز بمحفز كهربائي وتأكد من حدوث تقلصات عضلية بعد المحفزات. بعد ذلك ، املأ نظام التروية بمحلول Ringer الذي يحتوي على 10 ميكرومولار d-tubocurarine وقم بتشغيل مضخة شفط التروية لبدء التروية. في المجهر البؤري المسح الضوئي بالليزر ، أو برنامج LSCM ، اختر الفيزيولوجيا الكهربية ووضع الاكتساب لتعيين معلمات التصوير.في إعدادات قائمة المهام ، حدد إعدادات المشغل لتشغيل المحفز باستخدام نبضة مزامنة المجهر واضبط الزناد على حقل الإطار على قناة OUT 1. أدر وضع المسح الضوئي إلى XYT عند تردد المسح الضوئي البالغ 1400 هرتز. يجب أن يكون عامل التكبير/التصغير 6.1 مع فتح الثقب بالكامل.تأكد من تشغيل وضع X المتسلسل والمحول ثنائي الاتجاه ، ثم قم بتعيين الحد الأدنى من الوقت لتشكيل إطار عند 52 مللي ثانية وجمع الإطارات في فيديو خام عند 20 إطارا. اضبط الطول الموجي للإثارة ليزر الأرجون على 488 نانومتر مع 8٪ من طاقة الإخراج. عند تعيين المعلمات، اضغط على زر الوضع المباشر للحصول على معاينة مباشرة للأطراف العصبية المحملة بالصبغة.في الوضع المباشر، ابحث عن المنطقة محل الاهتمام، أو عائد الاستثمار، للحصول على أفضل تركيز. بعد ذلك ، قم بتحويل التأخير على المحفز بمقدار مللي ثانية أقل بالنسبة للقيمة السابقة وقم بتشغيل برنامج الحصول على البيانات للحصول على 26 تسلسلا عن طريق تحويل كل تسلسل بمللي ثانية من التسلسل السابق. لمعالجة مقاطع الفيديو التي تم التقاطها، قم بتشغيل برنامج Leica Application Suite X، أو LAS X، وافتح المشروع الذي تم إنشاؤه.ثم انقر فوق تصدير وحفظ لحفظ الإطارات بتنسيق TIF في المجلد الوجهة. بعد ذلك ، قم بتشغيل برنامج ImageJ وانقر فوق تسلسل الملفات والاستيراد والصور. في نافذة تسلسل الصور المفتوحة، اختر المجلد الوجهة وافتح الإطار الأول.من خيارات التسلسل، انتقل إلى حقل صورة البدء واضبط رقم الإطار على واحد للإطار الأول. ثم، في حقل التزايد، قم بتعيين القيمة التي تساوي عدد الإطارات في تسجيل الإشارة الأولية قبل النقر فوق موافق. لحفظ الملف الذي تم إنشاؤه من الإطارات الأولى المخيطة في مجلد منفصل ، انقر فوق علامات تبويب الملف والحفظ والمجلد بالترتيب.كرر الإجراءات الخاصة ب 19 إطارا عن طريق تعيين رقم الإطار المقابل في حقل صورة البداية. عند الحصول على جميع الصور ، انقر فوق تسلسل الملف والاستيراد والصورة لتحديد واحد في حقلي صورة البدء والتزايد. يمكن رؤية الفيديو النهائي مع جميع الإطارات المخيطة معا بدقة زمنية متزايدة.ثم احفظ ملف الفيديو بتنسيق TIF. لتحليل الفيديو المخيط ، انقر فوق الصورة والمكدسات والأدوات وفارز المكدس. ثم انتقل إلى التحليل والأدوات ومدير عائد الاستثمار.اسحب ملف TIF المحفوظ مسبقا وأفلته في نافذة ImageJ ثم قم بتوسيع الصورة للحصول على عرض أفضل. لتحسين تصور الصورة ، انقر فوق الصورة ، وضبطها ، لتحويل تباين السطوع إلى تلقائي. قم بتعيين الخلفية بالقرب من الطرف العصبي عن طريق رسم عائد الاستثمار وإضافة قيمة إلى مدير عائد الاستثمار.ثم احسب الخلفية بالنقر فوق قياس أكثر ومتعدد. انسخ القيم المتوسطة للصقها في برنامج جدول البيانات. ثم احسب متوسط القيمة.بعد ذلك ، اطرح متوسط القيمة المحسوبة من المكدسات بالنقر فوق العملية والرئيسية والطرح. أدخل القيمة التي تم الحصول عليها وارسم عائد الاستثمار حول محطة عصبية عبر خط مضلع قبل إضافته إلى مدير عائد الاستثمار. قم بقياس الشدة العابرة للطرف العصبي عن طريق النقر فوق علامات تبويب قياس أكثر ومتعددة.بعد ذلك، انسخ قيم متوسط الكثافة والصقها في برنامج جدول البيانات لحساب متوسط إزاحة الإشارات. قسمة قيم الإشارة على متوسط قيمة الإزاحة. من القيمة التي تم الحصول عليها ، اطرح واحدا ثم اضرب بنسبة 100٪ متبوعا برسم رسم بياني عابر للكالسيوم لتحديد السعة.بعد تحميل إعداد العصب بصبغة ، يقع معظم المشبك بالقرب من جذع العصب ، مما يشير إلى مستوى كاف من التألق. بعد معالجة الصور ، تم الحصول على عبور الكالسيوم مع الدقة المكانية والزمنية المطلوبة. واحدة من أهم الخطوات في هذا البروتوكول هي أنه يجب وضع جذع العصب في محلول يحتوي على صبغة في الدقائق القليلة الأولى بعد قطع العصب.يمكن استخدام هذه الطريقة لتحميل مختلف الأصباغ والأدوية في الخلايا العصبية الحركية. يمكن أن يكون بروتوكول التسجيل مفيدا لتقييم الكالسيوم في التشعبات والعمود الفقري في مستحضرات الجهاز العصبي المركزي. تسمح تقنيتنا بتسجيل إشارة الكالسيوم بدقة مكانية وزمنية جيدة.دراسة انتقال الكالسيوم هي أداة قوية في تنظيم البحوث لإطلاق الناقل العصبي واللدونة المتشابكة.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Skeletal Muscle Relaxants

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

تشريح والتصوير من المناطق النشطة في ذبابة الفاكهة الوصل العصبي العضلي

The Drosophila  larvae neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model for the study of synaptic structure and function. Drosophila  is well known for ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

صور متتابعة تبيض لتحديد خلايا شوان واحدة عند تقاطع الاعصاب

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

ميكرون على نطاق بصري القرار المقطعي من أدمغة فئران كاملة مع متحد البؤر المجهري الخفيفة ورقة

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

الكشف عن<em&gt; في الموقع</em&gt; مجمعات البروتين البروتين في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقية الموصل العصبي العضلي عن طريق القرب ربط الفحص

Discs large (Dlg) is a conserved member of the membrane-associated guanylate kinase family, and serves as a major scaffolding protein at the larval ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

على الموصل العصبي العضلي: قياس المشبك الحجم، التغييرات تجزئة ومتشابك الكثافة البروتين عن طريق متحد البؤر مضان المجهر

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Loading a Calcium Dye into Frog Nerve Endings Through the Nerve Stump: Calcium Transient Registration in the Frog Neuromuscular Junction

تحميل صبغ الكالسيوم إلى نهايات العصب الضفدع من خلال الجذع العصبي: تسجيل الكالسيوم العابر في الضفدع العصبي العضلي تقاطع

One of the most feasible methods of measuring presynaptic calcium levels in presynaptic nerve terminals is optical recording. It is based on using ...

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

قياس الأداء الوظيفي الوصلات العصبية العضلية

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

اثنين من الخوارزميات لإنتاجية عالية ومتعدد حدودي الكمي ل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; عصبي عضلي مفرق الصرف

Synaptic morphology is tightly related to synaptic efficacy, and in many cases morphological synapse defects ultimately lead to synaptic malfunction. The ...

High-resolution Confocal Imaging of the Blood-brain Barrier: Imaging, 3D Reconstruction, and Quantification of Transcytosis

تصوير [كنفوكل] عالية الدقة لحاجز الدم في الدماغ: التصوير، وإعادة البناء ثلاثي الأبعاد، والتقدير الكمي ترانسسيتوسيس

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic multicellular interface that regulates the transport of molecules between the circulation and the brain. ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

تسجيلات ماكروباتش المحورية للتيارات متشابك من الوصلات العصبية العضلية اليرقات المورفولوجية

Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...