Name: registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy
Uploaded: 2021-12-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

מחקרים פלואורסצנטיים של עבודה זו בוצעו בתמיכה כספית של מענק קרן המדע הרוסית (פרויקט מס '19-15-00329). השיטה פותחה במימון המשימה הממשלתית עבור המרכז המדעי FRC קאזאן של RAS ААААА-А18-118022790083-9. המחקר פותח תוך שימוש בציוד של מרכז המחקר הפדרלי "מרכז מדעי קאזאן של RAS". המחברים מבקשים להודות לד"ר ויקטור א. איליין על הקריאה הביקורתית של כתב יד זה.

ניסויים בוצעו על תכשירים מבודדים של שריר עצב של levator auris longus (m. LAL) מהעכברים BALB/C (20-23 גרם, 2-3 חודשים)41. הליכי הניסוי בוצעו בהתאם להנחיות לשימוש בחיות מעבדה של האוניברסיטה הפדרלית של קאזאן והאוניברסיטה הרפואית של קאזאן, בהתאם למדריך NIH לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. פרוטוקול הניסו...

השיטה להעמסת צבע רגיש Ca2+ לתוך קצות העצבים של העכבר דרך גדם העצב ולרישום מעבר סידן מהיר באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי מוצגת במאמר זה. כתוצאה מיישום שיטת העמסה זו, לרוב הסינפסות הממוקמות קרוב לגדם העצב הייתה רמה מספקת של פלואורסצנטיות כדי לאפשר רישום של כניסת סידן לקצות העצבים בתגובה לג?...

הבעיה של מדידת גלי סידן מהירים בתאים מעוררים היא אחד ההיבטים החשובים והמאתגרים ביותר בחקר העברת אותות במערכת העצבים המרכזית וההיקפית. יוני סידן ממלאים תפקיד חשוב בהפעלת שחרור מוליכים עצביים, פלסטיות סינפטית וויסות הפעילות של חלבונים תוך-תאיים שונים 1,2,3,4,5. חקר איתות סידן חשוב גם למציאת דרכים לטיפול במחלות נוירודגנרטיביות6. כדי למדוד שינויים ברמות הסידן, צבעים פלואורסצנטיים רגישים לסידן נמצאים בשימוש נפוץ, ושינויים ברמת הפלואורסצנטיות שלהם מנותחים 7,8,9.
העמסה של צבעי סידן לתוך תאים יכולה להיות מושגת בדרכים שונות. בעיקר, צבעים המיועדים לתאים משמשים10,11. עם זאת, במקרה כזה, זה לא רק קשה לשלוט על הריכוז של צבע בתוך התא, אבל זה גם קשה לבחור תאי יעד לטעינה. שיטה זו אינה ישימה לחקר קצות עצבים היקפיים מכיוון שהצבע נכנס לתאים פוסט-סינפטיים. במקום זאת, צבעים אטומים לתאים מתאימים יותר להכנות כאלה. במקרה זה, הצבעים מועברים לתאים על ידי מיקרו הזרקה או דרך פיפטה טלאי12,13,14. יש גם שיטה של העמסה דרך גדם עצב. השיטה השנייה מתאימה ביותר לתכשירי צומת נוירומוסקולרי 15,16,17,18,19,20. זה מאפשר ביצוע צביעה רק עבור תאים מעניינים. למרות ששיטה זו אינה מספקת הערכה מדויקת של ריכוז הצבע בתא היעד, ניתן להעריך את הריכוז בקירוב על ידי השוואת רמת הפלואורסצנטיות של התאים במנוחה בתמיסות עם ריכוז ידוע של סידן21. במחקר זה מוצג שינוי של שיטה זו המיושמת על סינפסות של יונקים.
כניסת סידן בשלב הדה-פולריזציה של פוטנציאל הפעולה היא תהליך מהיר, במיוחד בצומת הנוירומוסקולרי; לכן, לרישום שלה, ציוד מתאים נדרש1. מחקר שנערך לאחרונה באמצעות צבע פלואורסצנטי רגיש למתח הראה כי משך פוטנציאל הפעולה בסינפסה ההיקפית של עכבר הוא כ-300 μs22. לסידן חולף, המוערך באמצעות צבעים רגישים לסידן בסינפסות ההיקפיות של הצפרדע, יש משך זמן ארוך יותר: זמן העלייה הוא כ 2-6 ms וזמן הדעיכה הוא כ 30-90 ms, בהתאם צבע סידן בשימוש23,24. כדי למדוד תהליכים מהירים בעזרת צבעים פלואורסצנטיים, מצלמות CCD או CMOS משמשות בדרך כלל, עם מטריצות CCD מהירות ורגישות. עם זאת, למצלמות אלה יש את החיסרון של רזולוציה נמוכה, המוגבלת על ידי גודל האלמנטים הרגישים של המטריצה25,26,27,28. למצלמות המהירות ביותר עם רגישות מספקת כדי לתעד הן פוטנציאל פעולה והן טרנזיינטים של סידן בתגובה לגירוי בתדר נמוך של תאים יש תדר סריקה של 2,000 הרץ, ומטריצה עם ממד של 80 x 8029. כדי לקבל אותות עם רזולוציה מרחבית גבוהה יותר, מיקרוסקופיה קונפוקלית משמשת, במיוחד אם יש צורך להעריך כמה שינויים נפחיים האות30,31,32. אבל יש לזכור כי מיקרוסקופיה קונפוקלית יש מהירות סריקה גבוהה במצב סריקת קו, אבל יש עדיין מגבלות משמעותיות על מהירות ההקלטות של תהליכים מהירים בעת בניית תמונה מרחבית33. ישנם מיקרוסקופים קונפוקליים המבוססים על דיסקים מסתובבים של Nipkow (מיקרוסקופיה לסריקת חריצים) וסורקי מערך רב-נקודתיים, בעלי מהירות סריקה גבוהה יותר. יחד עם זאת, הם נחותים מהמיקרוסקופים הקונפוקליים הקלאסיים בסינון תמונה קונפוקלית (חורים מוצלבים למיקרוסקופים עם דיסק Nipkow)32,34,35. הדמיה קונפוקלית עם סריקת תהודה יכולה גם לספק רזולוציה מרחבית-טמפורלית גבוהה הנדרשת למדידות טמפורליות גבוהות36. עם זאת, יש לקחת בחשבון כי רישום של תגובות פלואורסצנטיות חלשות במהירות סריקה גבוהה בעת שימוש בסורקי תהודה דורש גלאים רגישים ביותר כגון גלאים היברידיים36.
מאמר זה מציג שיטה להגדלת הרזולוציה הזמנית של אותות המוקלטים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית לסריקת לייזר (LSCM) תוך שמירה על הרזולוציה המרחבית37. השיטה הנוכחית היא פיתוח נוסף של השיטות שתוארו קודם לכן והועברו לפלטפורמת LSCM38,39,40. גישה זו אינה דורשת שינויים בחומרת המיקרוסקופ ומבוססת על יישום אלגוריתם להקלטת אותות פלואורסצנטיים מעוררים מעת לעת עם שינוי זמן ביחס לרגע הגירוי.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Capillary Glass</td>
			<td>Clark Electromedical instruments, UK</td>
			<td>GC150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal and multiphoton microscope system Leica TCS SP5 MP</td>
			<td>Leica Microsystems , Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flaming/Brown Micropipette Puller P 97</td>
			<td>Sutter Instrument, USA</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow regulator</td>
			<td>KD Medical GmbH Hospital Products, Germany</td>
			<td>KD REG</td>
			<td>Disposable infusion set with Flow regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>H0887</td>
			<td>100mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumination system Leica CLS 150X</td>
			<td>Leica Microsystems, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td>http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las AF software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las X software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Holder with Suction Tubing</td>
			<td>BIOSCIENCE TOOLS, USA</td>
			<td>MTH-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microspin FV 2400</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010201-AAA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien Pins</td>
			<td>Fine science tools, Canada</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-spin MSC 3000</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010205-AAN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 BAPTA-1 pentapotassium salt</td>
			<td>Molecular Probes, USA</td>
			<td>O6806</td>
			<td>500 &#956;g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>720210</td>
			<td>0.5-10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>781349</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasticine</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-use hypodermic needles</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>100 Sterican</td>
			<td>0.4&#215;40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet program</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope, Leica M80</td>
			<td>Leica Microsystems , Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction electrode</td>
			<td>Kazakov A. SIMPLE SUCTION ELECTRODE FOR ELECTRIC STIMULATION OF BIOLOGICAL OBJECTS / A. Kazakov, M. Alexandrov, N. V. Zhilyakov et al. // International research journal.&#160;- 2015. - No. 9 (40) Part 3. - P. 13-16.</td>
			<td></td>
			<td>http://research-journal.org/biology/prostoj-vsasyvayushhij-elektrod-dlya-elektricheskoj-stimulyacii-biologicheskix-obektov/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 elastomer</td>
			<td>Dow Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>60 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy

הערכה של רמת הסידן הקדם-סינפטי היא משימה מרכזית בחקר ההולכה הסינפטית, שכן כניסת סידן לתא הקדם-סינפטי מעוררת מפל של אירועים המובילים לשחרור מוליכים עצביים. יתר על כן, שינויים ברמות הסידן הקדם-סינפטי מתווכים את פעילותם של חלבונים תוך-תאיים רבים וממלאים תפקיד חשוב בגמישות הסינפטית. חקר איתות הסידן חשוב גם למציאת דרכים לטיפול במחלות נוירודגנרטיביות. הצומת העצבי-שרירי הוא מודל מתאים לחקר הפלסטיות הסינפטית, שכן יש לו רק סוג אחד של נוירוטרנסמיטר. מאמר זה מתאר את השיטה להעמסת צבע רגיש לסידן דרך צרור העצבים החתוך לתוך קצות העצבים המוטוריים של העכברים. שיטה זו מאפשרת להעריך את כל הפרמטרים הקשורים לשינויים בסידן תוך תאי, כגון רמת הסידן הבסיסית וסידן חולף. מאחר שזרימת הסידן מהחלק החיצוני של התא אל קצות העצבים וקשירתו/אי-כריכתו לצבע הרגיש לסידן מתרחשות בטווח של אלפיות השנייה הבודדות, נדרשת מערכת הדמיה מהירה לתיעוד אירועים אלה. ואכן, מצלמות במהירות גבוהה משמשות בדרך כלל לרישום של שינויי סידן מהירים, אך יש להם פרמטרים ברזולוציית תמונה נמוכה. הפרוטוקול המוצג כאן לרישום סידן חולף מאפשר רזולוציה מרחבית-טמפורלית טובה ביותר המסופקת על ידי מיקרוסקופיה קונפוקלית.

לאחר טעינת התכשיר בצבע על פי הטכניקה המוצגת, לרוב הסינפסות הממוקמות קרוב לגדם העצב הייתה רמה מספקת של פלואורסצנטיות (ראו איור 2). לאחר טעינת ההכנה עם הצבע ויישום השיטה המתוארת של רישום ועיבוד תמונה, התקבלו ארעי סידן ברזולוציה המרחבית והזמנית הרצויה (ראו איור 4</stro...

Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

הפרוטוקול מתאר את השיטה של העמסת צבע סידן פלואורסצנטי דרך העצב החתוך לתוך מסופי העצבים המוטוריים של העכבר. בנוסף, מוצגת שיטה ייחודית לרישום ארעי סידן מהירים בקצות העצבים ההיקפיים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית.

רישום של סידן חולף בצומת נוירומוסקולרי עכבר עם רזולוציה טמפורלית גבוהה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...

הערכה של רמת סידן קדם-סינפטית היא משימה מרכזית בחקר ההעברה הסינפטית. חקר איתות הסידן חשוב גם למציאת דרכים לטיפול במחלות נוירודגנרטיביות. היתרון העיקרי של טכניקת הטעינה המוצגת הוא שהכתמים בוצעו רק עבור תאי העניין.השיטה שלנו לרישום עקשנות סידן מספקת רזולוציה מרחבית-טמפורלית טובה ביותר. שיטת הרישום המוצגת יכולה להועיל לנוירופיזיולוגים שצריכים לרשום תהליכים תקופתיים מהירים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. השלב הקשה ביותר בטכניקת הטעינה הוא החזקת העצב בתוך הפיפטה.הקוטר של פיפטה חייב להיות בכושר מושלם, אז לעשות כמה כמה. לדעת את כל השלבים בפרוטוקול הם מסובכים להפגין כל אחד מהם יעזור הרבה. מתחילים בקיבוע רקמת השריר של הלבטור auris longus בצורה מעט מתוחה בצלחת פטרי המצופה אלסטומר עם סיכות הנירוסטה העדינות ומוסיפים את התמיסה של רינגר לצלחת עד לכיסוי מלא של השריר.לאחר מכן, השתמש במושך מיקרופיפטה כדי להכין מיקרופיפטה עם קצה חד עדין להקלטות התוך-תאיות. השתמש נימים ללא חוטים פנימיים. לאחר ניקוד המחדד עם שוחקים, נתקו את קצה המיקרופיפטה, והשאירו קצה פתוח לקוטר של כ-100 מיקרומטר.לאחר מכן, להבריק את הקצה עד שהקוטר הפנימי מתכווץ מ-80 מיקרומטר ל-12 מיקרומטר. בסיום, חברו צינור סיליקון לצד אחד ומזרק ללא מחט לצד השני של פיפטה המילוי. תחת מיקרוסקופ סטריאו, מצא היכן גזע העצבים הופך לענפי עצב נפרדים.מניחים את פיפטה המילוי על צלחת פטרי באמצעות שעווה ולאחר מכן להזיז את קצה פיפטה עד שהוא עומד מעל העצב. חותכים את העצב קרוב לסיבי השריר במספריים עדינים, ומשאירים חתיכה קטנה מגדם העצב, באורך של כמילימטר אחד. לאחר מכן, שאפו את גדם העצבים עם תמיסה כלשהי של רינגר לתוך קצה פיפטה המילוי, מבלי לצבוט את העצב.לאחר שתסיים, הסר את צינור הסיליקון מהפיפטה המלית. מאוחר יותר, השתמש מזרק עם נימה ארוכה כדי לצייר את פתרון העמסת צבע. לאחר מכן, הכנס את קצה החוט עם תמיסת ההעמסה לתוך פיפטה מילוי ולשחרר את התערובת על גדם העצב, ולאחר מכן דגירה של הכנת העצב בטמפרטורת החדר בחושך במשך 30 דקות.לאחר הדגירה, שוטפים את ההכנה העצבית בתמיסה טרייה של רינגר לפני שמטפלים בה ב-50 מיליליטר של תמיסה של רינגר בכוס זכוכית בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס למשך שעתיים. עבור המיקרוסקופיה הקונפוקלית, הרכיבו את ההכנה העצבית לתוך תא ניסוי מצופה סיליקון אלסטומר וקבעו אותו, מתוח מעט, עם סט של מיקרונידלים מפלדה. לאחר מכן, יש לשטוף את התכשיר באופן נרחב עם תמיסת הצלצול.התקן אלקטרודת יניקה על התא. לאחר הרכבת תא ההכנה על במת המיקרוסקופ, הכניסו את אביזרי הכניסה והיציאה לתא. הפעל מערכת מונעת זרימת כבידה כדי להסיר את התמיסה העודפת מההכנה.לאחר שתסיים, חבר את אלקטרודת היניקה הממריצה לממריץ חשמלי וודא כי התכווצויות השרירים מתרחשות לאחר גירויים. לאחר מכן, מלאו את מערכת הזלוף בתמיסה של רינגר המכילה 10 מיקרומולר d-טובוקוררין והפעילו את משאבת היניקה כדי להתחיל בזליפה. במיקרוסקופ הקונפוקלי לסריקת לייזר, או בתוכנת LSCM, בחר אלקטרופיזיולוגיה ומצב רכישה כדי להגדיר פרמטרים של הדמיה.בהגדרות תפריט העבודה, בחר את הגדרות ההדק כדי להפעיל את הגירוי באמצעות פולס הסנכרון של המיקרוסקופ והגדר את ההדק בשדה המסגרת לערוץ OUT 1. העבר את מצב הסריקה ל- XYT בתדירות סריקה של 1, 400 הרץ. מקדם הזום צריך להיות 6.1 כאשר חור הסיכה פתוח במלואו.ודא שמצב X רציף, מעבר, דו-כיווני מופעל, ולאחר מכן, הגדר את הזמן המינימלי ליצירת מסגרת ב- 52 אלפיות השנייה ואסוף מסגרות בסרטון גולמי ב- 20 מסגרות. הגדר את אורך גל העירור של לייזר הארגון ב-488 ננומטר עם 8% מעוצמת היציאה. כאשר הפרמטרים מוגדרים, לחץ על לחצן מצב חי כדי לקבל תצוגה מקדימה חיה של מסופי העצבים הטעונים בצבע.במצב חי, חפש את אזור העניין, או החזר ההשקעה, כדי להשיג את המיקוד הטוב ביותר. לאחר מכן, הזז את ההשהיה על הגירוי בשתי אלפיות השנייה פחות ביחס לערך הקודם והפעל את תוכנת רכישת הנתונים כדי לרכוש 26 רצפים על ידי הזזת כל רצף שתי אלפיות השנייה מהקודם. כדי לעבד את הסרטונים שצולמו, הפעל את Leica Application Suite X, או את תוכנת LAS X, ופתח את הפרויקט שנוצר.לאחר מכן, לחץ על ייצוא ושמור בשם כדי לשמור מסגרות בפורמט TIF בתיקיית היעד. לאחר מכן, הפעל את תוכנת ImageJ ולחץ על קובץ, ייבוא ורצף תמונות. בחלון רצף התמונות הפתוח, בחרו בתיקיית היעד ופתחו את המסגרת הראשונה.מתוך אפשרויות הרצף, עבור לשדה התמונה ההתחלתי והגדר את מספר המסגרת לאחד עבור המסגרת הראשונה. לאחר מכן, בשדה ההפרש הקבוע, הגדר את הערך השווה למספר המסגרות בהקלטת האות הראשונית לפני לחיצה על אישור. כדי לשמור את הקובץ שנוצר של מסגרות ראשונות תפורות בתיקייה נפרדת, לחץ על כרטיסיות הקובץ, השמירה והתיקייה לפי הסדר.חזור על ההליכים עבור 19 מסגרות על-ידי הגדרת מספר המסגרת המתאים בשדה התמונה הפותח. כשכל התמונות מתקבלות, לחצו על קובץ, ייבוא ורצף תמונות כדי לבחור אחת מהן בשדות התמונה ההתחלתית וההפרש הקבוע. ניתן לראות את הסרטון הסופי עם כל הפריימים תפורים יחד ברזולוציה זמנית מוגברת.לאחר מכן, שמור את קובץ הווידאו בפורמט TIF. כדי לנתח את הסרטון התפור, לחץ על תמונה, ערימות, כלים וסדרן ערימה. לאחר מכן, עבור אל ניתוח, כלים ומנהל ROI.גרור ושחרר את קובץ ה- TIF שנשמר בעבר בחלון ImageJ ולאחר מכן הרחב את התמונה לתצוגה טובה יותר. כדי לשפר את הדמיית התמונה, לחץ על התמונה, התאם, כדי להפוך את ניגודיות הבהירות לאוטומטית. הגדר את הרקע קרוב למסוף העצבים על ידי משיכת ROI והוספת ערך למנהל ההחזר על ההשקעה.לאחר מכן, חשב את הרקע על ידי לחיצה על עוד ורב מדידה. העתק ערכים ממוצעים להדבקה בתוכנית הגיליון האלקטרוני. לאחר מכן, חשב את הערך הממוצע.לאחר מכן, הפחת את הערך הממוצע המחושב מהערימות על ידי לחיצה על תהליך, ראשי וחיסור. הזן את הערך המתקבל וצייר ROI סביב מסוף עצבים באמצעות קו מצולע לפני הוספתו למנהל החזר ההשקעה. מדוד את העוצמה החולפת של מסוף העצבים על ידי לחיצה על כרטיסיות נוספות ורב-מדידות.לאחר מכן, העתק את ערכי העוצמה הממוצעת והדבק אותם בתוכנית הגיליון האלקטרוני כדי לחשב את ההסטה הממוצעת של אותות. חלק את ערכי האות בערך ההסטה הממוצע. מהערך המתקבל, הפחת אחד ולאחר מכן הכפל ב- 100% ואחריו התוויית גרף ארעי סידן כדי לקבוע את המשרעת.לאחר טעינת ההכנה העצבית עם צבע, רוב הסינפסה ממוקמת קרוב לגדם העצב, הצביע על רמה מספקת של פלואורסצנציה. לאחר עיבוד התמונה התקבלו ארעיות סידן ברזולוציה המרחבית והזמנית הרצויה. אחד השלבים החשובים ביותר בפרוטוקול זה הוא שיש למקם את גדם העצב בתמיסה המכילה צבע בדקות הראשונות לאחר חיתוך העצב.שיטה זו יכולה לשמש כדי לטעון צבעים שונים ותרופות לתוך נוירונים מוטוריים. פרוטוקול הרישום יכול להיות שימושי להערכת סידן בדנדריטים ובעמוד השדרה בהכנות CNS. הטכניקה שלנו מאפשרת לרשום אות סידן ברזולוציה מרחבית וזמנית טובה.חקר ארעיות סידן הוא כלי רב עוצמה בוויסות מחקרי של שחרור מוליך עצבי ופלסטיות סינפטית.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Skeletal Muscle Relaxants

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Dissection והדמיה של אזורי פעיל תסיסנית Neuromuscular צומת

The Drosophila  larvae neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model for the study of synaptic structure and function. Drosophila  is well known for ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

תמונה רציפה-הלבנה להתוות תאי שווא יחידים בצומת Neuromuscular

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

מיקרון בקנה מידת רזולוציה אופטית טומוגרפיה של מוח עכבר השלם עם מיקרוסקופית גיליון Confocal אור

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

זיהוי של<em&gt; באתר</em&gt; מכלולי חלבון-חלבון ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; הזחל Neuromuscular צומת שימוש סמיכות קשירת Assay

Discs large (Dlg) is a conserved member of the membrane-associated guanylate kinase family, and serves as a major scaffolding protein at the larval ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Neuromuscular צומת: גודל סינפסה מדידה, שינויי פיצול ובצפיפות חלבון Synaptic שימוש Confocal מיקרוסקופ פלואורסצנטי

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Loading a Calcium Dye into Frog Nerve Endings Through the Nerve Stump: Calcium Transient Registration in the Frog Neuromuscular Junction

טעינת צבע סידן לתוך צפרדע עצב צפרדע דרך גדם עצב: סידן חולף הרשמה צפרדע Neuromuscular צפרדע

One of the most feasible methods of measuring presynaptic calcium levels in presynaptic nerve terminals is optical recording. It is based on using ...

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

מדידת פונקציונליות צומת עצב-שריר

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

שני אלגוריתמים עבור תפוקה גבוהה וכימות Multi-פרמטרית של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; מורפולוגיה צומת Neuromuscular

Synaptic morphology is tightly related to synaptic efficacy, and in many cases morphological synapse defects ultimately lead to synaptic malfunction. The ...

High-resolution Confocal Imaging of the Blood-brain Barrier: Imaging, 3D Reconstruction, and Quantification of Transcytosis

דימות ברזולוציה קונאפוקלית של מחסום הדם - מוח: הדמיה, שחזור תלת-ממד, כימות של Transcytosis

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic multicellular interface that regulates the transport of molecules between the circulation and the brain. ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

מוקד Macropatch הקלטות של זרמי סינפטית מצומת דרוזופילה Neuromuscular זחל

Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...