Name: registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy
Uploaded: 2021-12-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

Fluorescensstudier av detta arbete utfördes med ekonomiskt stöd från Russian Science Foundation Grant (projekt nr 19-15-00329). Metoden utvecklades under finansiering från regeringsuppdraget för FRC Kazan Scientific Center of RAS АААА-А18-118022790083-9. Forskningen utvecklades med hjälp av utrustningen från Federal Research Center "Kazan Scientific Center of RAS". Författarna vill tacka Dr. Victor I. Ilyin för kritisk läsning av detta manuskript.

Experiment utfördes på isolerade nervmuskelpreparat av levator auris longus (m. LAL) från mössen BALB/C (20-23 g, 2-3 månader gamla)41. De experimentella förfarandena utfördes i enlighet med riktlinjerna för användning av laboratoriedjur från Kazan Federal University och Kazan Medical University, i enlighet med NIH-guiden för vård och användning av laboratoriedjur. Försöksprotokollet uppfyllde kraven i Europeiska gemenskapernas råds direktiv 86/609/EEG och godkändes av de...

Metoden för att ladda Ca2+-känsligt färgämne i musens nervändar genom nervstubben och för att registrera en snabb kalciumtransient med hjälp av ett konfokalmikroskop presenteras i denna artikel. Som ett resultat av genomförandet av denna laddningsmetod hade de flesta synapser som ligger nära nervstubben en tillräcklig nivå av fluorescens för att möjliggöra registrering av kalciumets inträde i nervändarna som svar på lågfrekvent stimulering av motornerven.
Till skil...

Problemet med att mäta snabba kalciumvågor i exciterbara celler är en av de viktigaste och mest utmanande aspekterna av att studera signalöverföring i centrala och perifera nervsystemet. Kalciumjoner spelar en viktig roll för att utlösa neurotransmittorfrisättning, synaptisk plasticitet och modulering av aktiviteten hos olika intracellulära proteiner 1,2,3,4,5. Att studera kalciumsignalering är också viktigt för att hitta sätt att behandla neurodegenerativa sjukdomar6. För att mäta förändringar i kalciumnivåerna används vanligtvis fluorescerande kalciumkänsliga färgämnen och förändringar i deras fluorescensnivå analyseras 7,8,9.
Laddning av kalciumfärger i celler kan uppnås på olika sätt. Övervägande används cellpermeanta färgämnen10,11. I ett sådant fall är det emellertid inte bara svårt att kontrollera koncentrationen av ett färgämne inuti cellen, men det är också svårt att välja målceller för laddning. Denna metod är inte tillämplig för att studera perifera nervändar eftersom färgämnet kommer in i postsynaptiska celler. Istället är cellimpermeant färgämnen mer lämpade för sådana preparat. I detta fall levereras färgämnena till cellerna genom mikroinjektion eller genom en patchpipett12,13,14. Det finns också en metod att ladda genom en nervstubbe. Den senare metoden är mest lämplig för neuromuskulära korsningspreparat 15,16,17,18,19,20. Det gör det möjligt att utföra färgning för endast celler av intresse. Även om denna metod inte ger en korrekt utvärdering av koncentrationen av färgämnet i målcellen, kan koncentrationen uppskattas ungefär genom att jämföra nivån av fluorescens hos cellerna i vila i lösningar med en känd koncentration av kalcium21. I denna studie presenteras en modifiering av denna metod som tillämpas på synapser av däggdjur.
Kalciuminträde under den depolariserande fasen av åtgärdspotentialen är en snabb process, särskilt i den neuromuskulära korsningen; För registrering krävs därför lämplig utrustning1. En nyligen genomförd studie med ett spänningskänsligt fluorescerande färgämne visade att varaktigheten av åtgärdspotentialen i musens perifera synaps är cirka 300 μs22. Kalciumövergående, utvärderat med kalciumkänsliga färgämnen i grodans perifera synapser, har en längre varaktighet: stigningstiden är cirka 2-6 ms och sönderfallstiden är cirka 30-90 ms, beroende på kalciumfärgämnet som används23,24. För att mäta snabba processer med hjälp av fluorescerande färgämnen används vanligtvis CCD- eller CMOS-kameror med snabba och känsliga CCD-matriser. Dessa kameror har emellertid nackdelen med låg upplösning, begränsad av storleken på de känsliga elementen i matrisen25,26,27,28. De snabbaste kamerorna med tillräcklig känslighet för att registrera både åtgärdspotentialer och kalciumtransienter som svar på lågfrekvent stimulering av celler har en skanningsfrekvens på 2 000 Hz och en matris med en dimension på 80 x 8029. För att erhålla signaler med högre rumslig upplösning används konfokalmikroskopi, särskilt om det är nödvändigt att bedöma vissa volymetriska förändringar i signalen30,31,32. Men det bör komma ihåg att konfokalmikroskopi har en hög skanningshastighet i linjeskanningsläge, men det finns fortfarande betydande begränsningar för hastigheten på inspelningar av snabba processer när man bygger en rumslig bild33. Det finns konfokalmikroskop baserade på roterande Nipkow-skivor (slitsskanningsmikroskopi) och Multipoint-Array-skannrar, som har en högre skanningshastighet. Samtidigt är de sämre än de klassiska konfokalmikroskopen i konfokal bildfiltrering (pinholes crosstalk för mikroskop med en Nipkow-skiva)32,34,35. Konfokal avbildning med resonansskanning kan också ge en hög spatio-temporal upplösning som krävs för höga temporala mätningar36. Tänk dock på att registrering av svaga fluorescerande svar vid hög skanningshastighet vid användning av resonansskannrar kräver mycket känsliga detektorer som hybriddetektorer36.
Den här artikeln presenterar en metod för att öka den tidsmässiga upplösningen för signaler som spelats in med laserskanningskonfokalmikroskopi (LSCM) samtidigt som den rumsliga upplösningen37 bibehålls. Den nuvarande metoden är en vidareutveckling av de metoder som beskrivits tidigare och överförts till LSCM-plattformen38,39,40. Detta tillvägagångssätt kräver inte förändringar i mikroskophårdvaran och bygger på tillämpningen av en algoritm för inspelning av periodiskt framkallade fluorescerande signaler med en tidsförskjutning i förhållande till stimuleringsmomentet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Capillary Glass</td>
			<td>Clark Electromedical instruments, UK</td>
			<td>GC150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal and multiphoton microscope system Leica TCS SP5 MP</td>
			<td>Leica Microsystems , Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flaming/Brown Micropipette Puller P 97</td>
			<td>Sutter Instrument, USA</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow regulator</td>
			<td>KD Medical GmbH Hospital Products, Germany</td>
			<td>KD REG</td>
			<td>Disposable infusion set with Flow regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>H0887</td>
			<td>100mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumination system Leica CLS 150X</td>
			<td>Leica Microsystems, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td>http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las AF software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las X software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Holder with Suction Tubing</td>
			<td>BIOSCIENCE TOOLS, USA</td>
			<td>MTH-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microspin FV 2400</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010201-AAA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien Pins</td>
			<td>Fine science tools, Canada</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-spin MSC 3000</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010205-AAN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 BAPTA-1 pentapotassium salt</td>
			<td>Molecular Probes, USA</td>
			<td>O6806</td>
			<td>500 &#956;g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>720210</td>
			<td>0.5-10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>781349</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasticine</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-use hypodermic needles</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>100 Sterican</td>
			<td>0.4&#215;40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet program</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope, Leica M80</td>
			<td>Leica Microsystems , Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction electrode</td>
			<td>Kazakov A. SIMPLE SUCTION ELECTRODE FOR ELECTRIC STIMULATION OF BIOLOGICAL OBJECTS / A. Kazakov, M. Alexandrov, N. V. Zhilyakov et al. // International research journal.&#160;- 2015. - No. 9 (40) Part 3. - P. 13-16.</td>
			<td></td>
			<td>http://research-journal.org/biology/prostoj-vsasyvayushhij-elektrod-dlya-elektricheskoj-stimulyacii-biologicheskix-obektov/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 elastomer</td>
			<td>Dow Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>60 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy

Uppskattning av den presynaptiska kalciumnivån är en nyckeluppgift för att studera synaptisk överföring eftersom kalciuminträde i den presynaptiska cellen utlöser en kaskad av händelser som leder till frisättning av neurotransmittorer. Dessutom förmedlar förändringar i presynaptiska kalciumnivåer aktiviteten hos många intracellulära proteiner och spelar en viktig roll i synaptisk plasticitet. Att studera kalciumsignalering är också viktigt för att hitta sätt att behandla neurodegenerativa sjukdomar. Den neuromuskulära korsningen är en lämplig modell för att studera synaptisk plasticitet, eftersom den bara har en typ av neurotransmittor. Denna artikel beskriver metoden för att ladda ett kalciumkänsligt färgämne genom det skurna nervknippet i mössens motoriska nervändar. Denna metod möjliggör uppskattning av alla parametrar relaterade till intracellulära kalciumförändringar, såsom basal kalciumnivå och kalciumövergående. Eftersom tillströmningen av kalcium från cellens yttre till nervterminalerna och dess bindning / avbindning till det kalciumkänsliga färgämnet sker inom några millisekunder, krävs ett snabbt bildsystem för att registrera dessa händelser. Faktum är att höghastighetskameror vanligtvis används för registrering av snabba kalciumförändringar, men de har parametrar med låg bildupplösning. Protokollet som presenteras här för inspelning av kalciumtransient möjliggör extremt god rumslig-tidsmässig upplösning som tillhandahålls av konfokalmikroskopi.

Efter att ha laddat preparatet med färgämne enligt den presenterade tekniken hade de flesta synapser som ligger nära nervstubben en tillräcklig nivå av fluorescens (se figur 2). Efter laddning av preparatet med färgämnet och tillämpning av den beskrivna metoden för registrering och bildbehandling erhölls kalciumtransienter med önskad rumslig och tidsmässig upplösning (se figur 4). Kalciumtransienten har återvunnits med den föreslagna metoden (se <...

Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Protokollet beskriver metoden att ladda ett fluorescerande kalciumfärgämne genom den skurna nerven i musmotoriska nervterminaler. Dessutom presenteras en unik metod för att registrera snabba kalciumtransienter i de perifera nervändarna med hjälp av konfokalmikroskopi.

Registrering av kalciumtransienter i musens neuromuskulära korsning med hög tidsupplösning med konfokalmikroskopi

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...

Uppskattning av en presynaptisk kalciumnivå är en nyckeluppgift för att studera synaptisk överföring. Att studera kalciumsignalering är också viktigt för att hitta sätt att behandla neurodegenerativa sjukdomar. Den största fördelen med den presenterade lastningstekniken är att färgningen endast har utförts för cellerna av intresse.Vår metod för att registrera kalciumintransiens ger extremt god rumslig-tidsmässig upplösning. Den presenterade registreringsmetoden kan vara till hjälp för neurofysiologer som behöver registrera snabba periodiska processer med hjälp av ett konfokalmikroskop. Det svåraste steget i lastningstekniken är att hålla nerven inuti pipetten.Pipettens diameter måste passa perfekt, så gör några flera. Att känna till alla steg i protokollet är komplicerat och att demonstrera var och en av dem hjälper mycket. Börja med att fixera levator auris longus muskelvävnad på ett något sträckt sätt i den elastomerbelagda petriskålen med de fina stiften i rostfritt stål och tillsätt Ringers lösning i skålen tills muskeln är helt täckt.Använd sedan en mikropipettdragare för att förbereda en mikropipett med en fin skarp spets för de intracellulära inspelningarna. Använd kapillärer utan inre filament. Efter att ha gjort avsmalningen med ett slipmedel, bryt av mikropipettspetsen och lämna en spets öppen till cirka 100 mikrometer i diameter.Brandpolera sedan spetsen tills den inre diametern krymper från 80 mikrometer till 12 mikrometer. När du är klar, fäst ett silikonrör på ena sidan och en spruta utan en nål på den andra sidan av påfyllningspipetten. Under ett stereomikroskop, hitta var nervstammen förvandlas till separata nervgrenar.Placera fyllningspipetten på petriskålen med vax och flytta sedan pipettspetsen tills den står ovanför nerven. Skär nerven nära muskelfibern med fin sax och lämna en liten bit av nervstubben, ungefär en millimeter lång. Aspirera sedan nervstubben med lite Ringers lösning i spetsen på fyllningspipetten utan att klämma nerven.När du är klar, ta bort silikonröret från påfyllningspipetten. Senare, använd en spruta med ett långt filament för att dra färgämnesladdningslösningen. Sätt sedan in filamentspetsen med lastlösningen i påfyllningspipetten och släpp blandningen på nervstubben, följt av att inkubera nervpreparatet vid rumstemperatur i mörkret i 30 minuter.Efter inkubationen, skölj nervpreparatet med färsk Ringers lösning innan du behandlar den med 50 ml Ringers lösning i en glasbägare vid 25 grader Celsius i två timmar. För konfokalmikroskopi, montera nervpreparatet i en kiselelastomerbelagd experimentkammare och fixa den, något sträckt, med en uppsättning stålmikronålar. Skölj sedan preparatet i stor utsträckning med Ringers lösning.Installera en sugelektrod på kammaren. Efter montering av beredningskammaren på mikroskopsteget, placera inlopps- och utloppsbeslagen i kammaren. Slå på ett gravitationsflödesdrivet system för att ta bort överskottslösningen från preparatet.När du är klar, anslut den stimulerande sugelektroden till en elektrisk stimulator och se till att muskelsammandragningar uppstår efter stimuli. Fyll sedan på perfusionssystemet med Ringers lösning som innehåller 10 mikromolar d-tubokurarin och slå på perfusionssugpumpen för att starta perfusion. I laserskanningskonfokalmikroskopet, eller LSCM-programvaran, väljer du elektrofysiologi och förvärvsläge för att ställa in bildparametrar.I jobbmenyinställningarna väljer du utlösningsinställningarna för att utlösa stimulatorn med mikroskopsynkroniseringspulsen och ställer in utlösaren på ramfältet till OUT 1-kanalen. Vrid skanningsläget till XYT vid en skanningsfrekvens på 1 400 hertz. Zoomfaktorn ska vara 6,1 med pinhålet helt öppet.Se till att sekventiellt, övergripande, dubbelriktat X-läge är på, ställ sedan in minimitiden för att bilda en ram på 52 millisekunder och samla ramar i en råvideo med 20 bilder. Ställ in argonlaserns excitationsvåglängd på 488 nanometer med 8% av uteffekten. När parametrarna är inställda trycker du på live-lägesknappen för att få en liveförhandsvisning av nervterminaler laddade med färgämnet.I live-läget söker du efter intresseregionen, eller ROI, för att få bästa fokus. Flytta sedan fördröjningen på stimulatorn med två millisekunder mindre i förhållande till föregående värde och kör datainsamlingsprogramvaran för att förvärva 26 sekvenser genom att flytta varje sekvens två millisekunder från den föregående. Om du vill bearbeta de inspelade videorna kör du Leica Application Suite X eller LAS X-programvaran och öppnar det skapade projektet.Klicka sedan på exportera och spara för att spara ramar i TIF-format i målmappen. Kör sedan ImageJ-programvaran och klicka på fil, import och bildsekvens. I det öppna bildsekvensfönstret väljer du målmappen och öppnar den första ramen.Från sekvensalternativen går du till startbildfältet och ställer in ramnumret till ett för den första bildrutan. Ställ sedan in värdet i ökningsfältet lika med antalet bilder i den ursprungliga signalinspelningen innan du klickar okej. För att spara den genererade filen med sydda första ramar i en separat mapp, klicka på fil-, spara och mappflikarna i ordning.Upprepa procedurerna för 19 bildrutor genom att ställa in motsvarande bildnummer i startbildsfältet. När alla bilder har erhållits klickar du på fil, import och bildsekvens för att välja en i startbilds- och ökningsfälten. Den slutliga videon med alla ramar sydda ihop med ökad tidsupplösning kan ses.Spara sedan videofilen i TIF-format. För att analysera den sydda videon, klicka på bild, staplar, verktyg och stacksorterare. Gå sedan till analys, verktyg och ROI-chef.Dra och släpp TIF-filen som sparats tidigare i ImageJ-fönstret och expandera sedan bilden för en bättre bild. För att förbättra bildvisualiseringen, klicka på bilden, justera, för att vrida ljusstyrkan kontrast till auto. Ställ bakgrunden nära nervterminalen genom att rita ROI och lägga till värde till ROI-chefen.Beräkna sedan bakgrunden genom att klicka på mer och flera mått. Kopiera medelvärden som du vill klistra in i kalkylprogrammet. Beräkna sedan medelvärdet.Därefter subtrahera det beräknade medelvärdet från staplarna genom att klicka på process, huvud och subtrahera. Ange det erhållna värdet och rita ROI runt en nervterminal via en polygonlinje innan du lägger till det i ROI-chefen. Mät nervterminalens övergående intensitet genom att klicka på fler och flermåttiga flikar.Kopiera sedan medelintensitetsvärdena och klistra in dem i kalkylprogrammet för att beräkna den genomsnittliga förskjutningen av signaler. Dela signalvärdena med det genomsnittliga offsetvärdet. Från det erhållna värdet subtraherar du ett och multiplicerar sedan med 100% följt av att plotta en kalciumövergående graf för att bestämma amplituden.Efter att ha laddat nervpreparatet med ett färgämne ligger det mesta av synapsen nära nervstubben, vilket indikerar en tillräcklig nivå av fluorescens. Efter bildbehandlingen erhölls kalciumförgänglighet med önskad rumslig och tidsmässig upplösning. Ett av de viktigaste stegen i detta protokoll är att nervstumpen måste placeras i färgämnet som innehåller lösningen under de första minuterna efter att nerven har skurits.Denna metod kan användas för att ladda olika färgämnen och droger i motorneuroner. Registreringsprotokoll kan vara användbart för att bedöma kalcium i dendriter och spines i CNS-preparat. Vår teknik gör det möjligt att registrera en kalciumsignal med god rumslig och tidsmässig upplösning.Att studera kalciumförgänglighet är ett kraftfullt verktyg i forskningsreglering av en neurotransmittorfrisättning och synaptisk plasticitet.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Skeletal Muscle Relaxants

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Dissekering och Imaging av Active Zoner i Drosophila Neuromuskulära förbindelsen

The Drosophila  larvae neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model for the study of synaptic structure and function. Drosophila  is well known for ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

Sekventiell fotoblekningsreaktion att avgränsa Single Schwann celler vid den neuromuskulära förbindelsen

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Micron-skala Upplösning Optisk Tomography för hela musen hjärnor med Confocal Ljus Sheet mikroskopi

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detektion av<em&gt; In situ</em&gt; Protein-proteinkomplex på<em&gt; Drosophila</em&gt; Larv Neuromuskulära förbindelsen Använda Proximity Ligation Assay

Discs large (Dlg) is a conserved member of the membrane-associated guanylate kinase family, and serves as a major scaffolding protein at the larval ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Den neuromuskulära förbindelsen: Mäta Synapse Storlek, fragmentering och Förändringar i Synaptic Protein Densitet Använda Confocal fluorescensmikroskopi

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Loading a Calcium Dye into Frog Nerve Endings Through the Nerve Stump: Calcium Transient Registration in the Frog Neuromuscular Junction

Fylla på en kalciumfärg i fröens nervändamål via nervstubben: Kalciumtransientregistrering i Neuromuskulär Junction

One of the most feasible methods of measuring presynaptic calcium levels in presynaptic nerve terminals is optical recording. It is based on using ...

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

Mäta neuromuskulära förbindelsen funktionalitet

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Två algoritmer för hög kapacitet och Multi-parametrisk Kvantifiering av<em&gt; Drosophila</em&gt; Neuromuskulära förbindelsen Morfologi

Synaptic morphology is tightly related to synaptic efficacy, and in many cases morphological synapse defects ultimately lead to synaptic malfunction. The ...

High-resolution Confocal Imaging of the Blood-brain Barrier: Imaging, 3D Reconstruction, and Quantification of Transcytosis

Högupplösta Confocal avbildning av den Blood - brain barriären: bildbehandling, 3D rekonstruktion och kvantifiering av transcytos

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic multicellular interface that regulates the transport of molecules between the circulation and the brain. ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Focal Macropatch inspelningar av Synaptic strömmar från den Drosophila Larval neuromuskulära förbindelsen

Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...