Name: registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy
Uploaded: 2021-12-01T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

Bu çalışmanın floresan çalışmaları, Rusya Bilim Vakfı Hibe (proje No. 19-15-00329) finansal desteği ile gerçekleştirilmiştir. Yöntem, RAS АААА-А18-118022790083-9 FRC Kazan Bilim Merkezi için hükümet görevlendirmesinden sağlanan finansman altında geliştirilmiştir. Araştırma, Federal Araştırma Merkezi "RAS Kazan Bilim Merkezi" ekipmanlarının kullanılmasıyla geliştirilmiştir. Yazarlar, bu makaleyi eleştirel bir şekilde okuduğu için Dr. Victor I. İlyin'e teşekkür eder.

Fareler BALB/C'den (20-23 g, 2-3 aylık) levator auris longus'un (m. LAL) izole sinir-kas preparatları üzerinde deneyler yapıldı41. Deneysel prosedürler, Kazan Federal Üniversitesi ve Kazan Tıp Üniversitesi'nin laboratuvar hayvanlarının kullanımına ilişkin kılavuzlara uygun olarak, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Deneysel protokol, 86/609/EEC sayılı Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi'nin gerekli...

Bu makalede, Ca 2 + 'ya duyarlı boyanın sinir kütüğü yoluyla fare sinir uçlarına yüklenmesi ve konfokal mikroskop kullanılarak hızlı bir kalsiyum geçicisinin kaydedilmesi yöntemi sunulmuştur. Bu yükleme yönteminin uygulanmasının bir sonucu olarak, sinir kütüğüne yakın bulunan sinapsların çoğu, motor sinirin düşük frekanslı uyarımına yanıt olarak kalsiyumun sinir uçlarına girişinin kaydedilmesini sağlamak için yeterli bir floresan seviyesine sahipti.
<p class="jove_con...

Uyarılabilir hücrelerde hızlı kalsiyum dalgalarını ölçme problemi, merkezi ve periferik sinir sistemlerinde sinyal iletimini incelemenin en önemli ve zorlu yönlerinden biridir. Kalsiyum iyonları, nörotransmitter salınımını, sinaptik plastisiteyi ve çeşitli hücre içi proteinlerin aktivitesinin modülasyonunu tetiklemede önemli bir rol oynar 1,2,3,4,5. Kalsiyum sinyallemesini incelemek, nörodejeneratif hastalıkları tedavi etmenin yollarını bulmak için de önemlidir6. Kalsiyum seviyelerindeki değişiklikleri ölçmek için, floresan kalsiyuma duyarlı boyalar yaygın olarak kullanılır ve floresan seviyelerindeki değişiklikler analiz edilir 7,8,9.
Kalsiyum boyalarının hücrelere yüklenmesi farklı şekillerde sağlanabilir. Ağırlıklı olarak, hücre perkastan boyalar10,11 oranında kullanılır. Bununla birlikte, böyle bir durumda, sadece hücre içindeki bir boya konsantrasyonunu kontrol etmek zor değildir, aynı zamanda yükleme için hedef hücreleri seçmek de zordur. Bu yöntem, boya postsinaptik hücrelere girdiğinden periferik sinir uçlarını incelemek için geçerli değildir. Bunun yerine, hücre geçirimsiz boyalar bu tür preparatlar için daha uygundur. Bu durumda, boyalar hücrelere mikroenjeksiyonla veya bir yama pipeti 12,13,14 yoluyla verilir. Bir sinir kütüğünden yükleme yöntemi de vardır. İkinci yöntem, nöromüsküler bileşke preparatları15,16,17,18,19,20 için en uygun yöntemdir. Sadece ilgilenilen hücreler için boyama yapılmasına izin verir. Bu yöntem, hedef hücredeki boya konsantrasyonunun doğru bir değerlendirmesini sağlamasa da, konsantrasyon, çözeltilerde duran hücrelerin floresan seviyesini, bilinen bir kalsiyum21 konsantrasyonu ile karşılaştırarak yaklaşık olarak tahmin edilebilir. Bu çalışmada, memelilerin sinapslarına uygulanan bu yöntemin bir modifikasyonu sunulmuştur.
Aksiyon potansiyelinin depolarize fazı sırasında kalsiyum girişi, özellikle nöromüsküler kavşakta hızlı bir süreçtir; bu nedenle, tescili için uygun ekipman gereklidir1. Voltaja duyarlı bir floresan boya kullanan yeni bir çalışma, bir farenin periferik sinapsındaki aksiyon potansiyelinin süresinin yaklaşık 300 μs22 olduğunu göstermiştir. Kurbağanın periferik sinapslarında kalsiyuma duyarlı boyalar kullanılarak değerlendirilen kalsiyum geçici, daha uzun bir süreye sahiptir: yükselme süresi yaklaşık 2-6 ms ve çürüme süresi, kullanılan kalsiyum boyasına bağlı olarak yaklaşık 30-90 ms'dir. Floresan boyaların yardımıyla hızlı süreçleri ölçmek için, genellikle hızlı ve hassas CCD matrislerine sahip CCD veya CMOS kameralar kullanılır. Bununla birlikte, bu kameralar,matris 25,26,27,28'in hassas elemanlarının boyutuyla sınırlı olan düşük çözünürlük dezavantajına sahiptir. Hücrelerin düşük frekanslı uyarılmasına yanıt olarak hem aksiyon potansiyellerini hem de kalsiyum geçicilerini kaydetmek için yeterli hassasiyete sahip en hızlı kameralar, 2.000 Hz'lik bir tarama frekansına ve 80 x 8029 boyutunda bir matrise sahiptir. Daha yüksek uzamsal çözünürlüğe sahip sinyaller elde etmek için, özellikle30,31,32 sinyalindeki bazı hacimsel değişiklikleri değerlendirmek gerekirse, konfokal mikroskopi kullanılır. Ancak, konfokal mikroskobun çizgi tarama modunda yüksek bir tarama hızına sahip olduğu akılda tutulmalıdır, ancak uzamsal bir görüntü oluştururken hızlı işlemlerin kayıt hızında hala önemli sınırlamalar vardır33. Daha yüksek tarama hızına sahip dönen Nipkow disklerine (yarık tarama mikroskobu) ve Çok Noktalı Dizi Tarayıcılara dayanan konfokal mikroskoplar vardır. Aynı zamanda, konfokal görüntü filtrelemede klasik konfokal mikroskoplardan daha düşüktürler (Nipkow diskli mikroskoplar için iğne delikleri çapraz konuşma)32,34,35. Rezonans taramalı konfokal görüntüleme aynı zamanda yüksek zamansal ölçümler için gereken yüksek uzaysal-zamansal çözünürlük sağlayabilir36. Bununla birlikte, rezonans tarayıcıları kullanırken zayıf floresan tepkilerinin yüksek bir tarama hızında kaydedilmesinin, hibrit dedektörler gibi son derece hassas dedektörler gerektirdiğini dikkate alın36.
Bu makalede, uzamsal çözünürlük37'yi korurken Lazer Tarama Konfokal Mikroskopisi (LSCM) ile kaydedilen sinyallerin zamansal çözünürlüğünü artırmak için bir yöntem sunulmaktadır. Mevcut yöntem, daha önce açıklanan ve LSCM platformu 38,39,40'a aktarılan yöntemlerin daha da geliştirilmesidir. Bu yaklaşım, mikroskop donanımında değişiklik gerektirmez ve periyodik olarak uyarılan floresan sinyalleri, stimülasyon anına göre bir zaman kayması ile kaydetmek için bir algoritmanın uygulanmasına dayanır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Capillary Glass</td>
			<td>Clark Electromedical instruments, UK</td>
			<td>GC150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal and multiphoton microscope system Leica TCS SP5 MP</td>
			<td>Leica Microsystems , Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flaming/Brown Micropipette Puller P 97</td>
			<td>Sutter Instrument, USA</td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow regulator</td>
			<td>KD Medical GmbH Hospital Products, Germany</td>
			<td>KD REG</td>
			<td>Disposable infusion set with Flow regulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich, USA</td>
			<td>H0887</td>
			<td>100mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumination system Leica CLS 150X</td>
			<td>Leica Microsystems, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institutes of Health, USA</td>
			<td></td>
			<td>http://rsb.info.nih.gov/ij/download.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las AF software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Las X software</td>
			<td>Leica Microsystems, Heidelberg, Germany</td>
			<td></td>
			<td>https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic Holder with Suction Tubing</td>
			<td>BIOSCIENCE TOOLS, USA</td>
			<td>MTH-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microspin FV 2400</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010201-AAA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minutien Pins</td>
			<td>Fine science tools, Canada</td>
			<td>26002-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-spin MSC 3000</td>
			<td>Biosan, Latvia</td>
			<td>BS-010205-AAN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green 488 BAPTA-1 pentapotassium salt</td>
			<td>Molecular Probes, USA</td>
			<td>O6806</td>
			<td>500 &#956;g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>720210</td>
			<td>0.5-10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tip</td>
			<td>Biohit, Russia</td>
			<td>781349</td>
			<td>10 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasticine</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-use hypodermic needles</td>
			<td>Bbraun</td>
			<td>100 Sterican</td>
			<td>0.4&#215;40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet program</td>
			<td>Microsoft, USA</td>
			<td>Microsoft Office Excel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope, Leica M80</td>
			<td>Leica Microsystems , Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suction electrode</td>
			<td>Kazakov A. SIMPLE SUCTION ELECTRODE FOR ELECTRIC STIMULATION OF BIOLOGICAL OBJECTS / A. Kazakov, M. Alexandrov, N. V. Zhilyakov et al. // International research journal.&#160;- 2015. - No. 9 (40) Part 3. - P. 13-16.</td>
			<td></td>
			<td>http://research-journal.org/biology/prostoj-vsasyvayushhij-elektrod-dlya-elektricheskoj-stimulyacii-biologicheskix-obektov/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 elastomer</td>
			<td>Dow Corning, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>0.5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>local producer</td>
			<td></td>
			<td>60 mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

registration of calcium transients in mouse neuromuscular junction with high temporal resolution using confocal microscopy

Presinaptik kalsiyum seviyesinin tahmini, sinaptik iletimin incelenmesinde kilit bir görevdir, çünkü presinaptik hücreye kalsiyum girişi, nörotransmitter salınımına yol açan bir dizi olayı tetikler. Ayrıca, presinaptik kalsiyum seviyelerindeki değişiklikler birçok hücre içi proteinin aktivitesine aracılık eder ve sinaptik plastisitede önemli bir rol oynar. Kalsiyum sinyallemesini incelemek, nörodejeneratif hastalıkları tedavi etmenin yollarını bulmak için de önemlidir. Nöromüsküler kavşak, sadece bir tür nörotransmittere sahip olduğu için sinaptik plastisiteyi incelemek için uygun bir modeldir. Bu makalede, kalsiyuma duyarlı bir boyanın kesilmiş sinir demeti boyunca farelerin motor sinir uçlarına yüklenme yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem, bazal kalsiyum seviyesi ve kalsiyum geçici gibi hücre içi kalsiyum değişiklikleriyle ilgili tüm parametrelerin tahmin edilmesini sağlar. Kalsiyumun hücre dışından sinir terminallerine akışı ve kalsiyuma duyarlı boyaya bağlanması/çözülmesi birkaç milisaniye aralığında gerçekleştiğinden bu olayları kaydetmek için hızlı bir görüntüleme sistemi gereklidir. Gerçekten de, yüksek hızlı kameralar hızlı kalsiyum değişimlerinin kaydedilmesi için yaygın olarak kullanılır, ancak düşük görüntü çözünürlüğü parametrelerine sahiptirler. Burada kalsiyum geçici kaydı için sunulan protokol, konfokal mikroskopi tarafından sağlanan son derece iyi mekansal-zamansal çözünürlüğe izin verir.

Preparatı sunulan tekniğe göre boya ile yükledikten sonra, sinir kütüğüne yakın bulunan sinapsların çoğu yeterli bir floresan seviyesine sahipti (bkz. Şekil 2). Boya ile hazırlama yüklendikten ve tarif edilen kayıt ve görüntü işleme yöntemi uygulandıktan sonra, istenen mekansal ve zamansal çözünürlüğe sahip kalsiyum geçicileri elde edildi (bkz. Şekil 4). Kalsiyum geçicisi önerilen yöntemle geri kazanılmıştır (bkz. <strong cla...

Watch this Scientific Journal Video about Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy at JoVE.com

Registration of Calcium Transients in Mouse Neuromuscular Junction with High Temporal Resolution using Confocal Microscopy

Protokol, kesilmiş sinirden fare motor sinir terminallerine floresan kalsiyum boyası yükleme yöntemini açıklar. Ek olarak, konfokal mikroskopi kullanarak periferik sinir uçlarındaki hızlı kalsiyum geçicilerini kaydetmek için benzersiz bir yöntem sunulmuştur.

Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Fare Nöromüsküler Kavşağında Yüksek Zamansal Çözünürlükte Kalsiyum Geçici Maddelerinin Kaydı

Estimation of the presynaptic calcium level is a key task in studying synaptic transmission since calcium entry into the presynaptic cell triggers a ...

Presinaptik kalsiyum seviyesinin tahmini, sinaptik iletimin incelenmesinde önemli bir görevdir. Kalsiyum sinyallemesini incelemek, nörodejeneratif hastalıkları tedavi etmenin yollarını bulmak için de önemlidir. Sunulan yükleme tekniğinin temel avantajı, boyamanın sadece ilgilenilen hücreler için yapılmış olmasıdır.Kalsiyum uyumsuzluğunu kaydetme yöntemimiz son derece iyi mekansal-zamansal çözünürlük sağlar. Sunulan kayıt yöntemi, konfokal mikroskop kullanarak hızlı periyodik süreçleri kaydetmesi gereken nörofizyologlar için yararlı olabilir. Yükleme tekniğindeki en zor adım, siniri pipetin içinde tutmaktır.Pipetin çapı mükemmel bir şekilde oturmalıdır, bu yüzden birkaç tane yapın. Protokoldeki tüm adımların karmaşık olduğunu bilmek ve her birini göstermek çok yardımcı olacaktır. Elastomer kaplı Petri kabında levator auris longus kas dokusunu ince paslanmaz çelik pimlerle hafifçe gerilmiş bir şekilde sabitleyerek başlayın ve kas tamamen kaplanana kadar Ringer'ın çözeltisini tabağa ekleyin.Ardından, hücre içi kayıtlar için ince keskin uçlu bir mikropipet hazırlamak üzere bir mikropipet çektirici kullanın. İç filamentler olmadan kılcal damarlar kullanın. Konikliği aşındırıcı ile puanladıktan sonra, mikropipet ucunu kırın ve bir ucu çapı yaklaşık 100 mikrometreye kadar açık bırakın.Ardından, iç çap 80 mikrometreden 12 mikrometreye düşene kadar ucu ateşle cilalayın. İşiniz bittiğinde, bir tarafa silikon bir tüp ve doldurma pipetinin diğer tarafına iğnesiz bir şırınga takın. Bir stereo mikroskop altında, sinir gövdesinin ayrı sinir dallarına dönüştüğü yeri bulun.Dolgu pipetini balmumu kullanarak Petri kabının üzerine yerleştirin ve ardından pipet ucunu sinirin üzerinde durana kadar hareket ettirin. Siniri kas lifine yakın ince makasla kesin, sinir kütüğünün yaklaşık bir milimetre uzunluğunda küçük bir parçasını bırakın. Ardından, sinir kütüğünü, siniri sıkıştırmadan, bir miktar Ringer çözeltisi ile doldurma pipetinin ucuna aspire edin.İşiniz bittiğinde, silikon tüpü doldurma pipetinden çıkarın. Daha sonra, boya yükleme çözeltisini çizmek için uzun bir filamentli bir şırınga kullanın. Daha sonra, filament ucunu yükleme çözeltisi ile doldurma pipetine yerleştirin ve karışımı sinir kütüğüne bırakın, ardından sinir preparatını karanlıkta oda sıcaklığında 30 dakika boyunca inkübe edin.Kuluçkadan sonra, sinir preparatını taze Ringer çözeltisi ile durulayın ve iki saat boyunca 25 santigrat derecede bir cam kapta 50 mililitre Ringer çözeltisi ile işlemden geçirin. Konfokal mikroskopi için, sinir preparatını silikon elastomer kaplı bir deney odasına monte edin ve hafifçe gerilmiş bir dizi çelik mikroiğne ile sabitleyin. Daha sonra, preparatı Ringer'ın çözeltisi ile kapsamlı bir şekilde durulayın.Odaya bir emme elektrodu takın. Hazırlama odasını mikroskop aşamasına monte ettikten sonra, giriş ve çıkış bağlantı parçalarını odaya yerleştirin. Fazla çözeltiyi preparattan çıkarmak için yerçekimi akışına bağlı bir sistemi açın.İşiniz bittiğinde, uyarıcı emme elektrodunu bir elektrik stimülatörüne takın ve uyaranlardan sonra kas kasılmalarının meydana gelmesini sağlayın. Daha sonra, perfüzyon sistemini 10 mikromolar d-tubokurarin içeren Ringer çözeltisi ile doldurun ve perfüzyonu başlatmak için perfüzyon emme pompasını açın. Lazer taramalı konfokal mikroskopta veya LSCM yazılımında, görüntüleme parametrelerini ayarlamak için elektrofizyoloji ve edinme modunu seçin.İş menüsü ayarlarında, uyarıcıyı mikroskop senkronizasyon darbesiyle tetiklemek için tetik ayarlarını seçin ve kare alanındaki tetikleyiciyi OUT 1 kanalına ayarlayın. Tarama modunu 1.400 hertz tarama frekansında XYT'ye çevirin. İğne deliği tamamen açıkken yakınlaştırma faktörü 6,1 olmalıdır.Sıralı, transpasif, çift yönlü X modunun açık olduğundan emin olun, ardından 52 milisaniyelik bir kare oluşturmak için minimum süreyi ayarlayın ve ham bir videoda kareleri 20 karede toplayın. Argon lazerin uyarma dalga boyunu çıkış gücünün% 8'i ile 488 nanometreye ayarlayın. Parametreler ayarlandığında, boya ile yüklenen sinir terminallerinin canlı önizlemesini almak için canlı mod düğmesine basın.Canlı modda, en iyi odağı elde etmek için ilgilenilen bölgeyi veya YG'yi arayın. Ardından, uyarıcıdaki gecikmeyi önceki değere göre iki milisaniye daha az değiştirin ve her bir diziyi bir öncekinden iki milisaniye kaydırarak 26 dizi elde etmek için veri toplama yazılımını çalıştırın. Çekilen videoları işlemek için Leica Application Suite X veya LAS X yazılımını çalıştırın ve oluşturulan projeyi açın.Ardından, çerçeveleri hedef klasöre TIF formatında kaydetmek için dışa aktar ve kaydet'e tıklayın. Ardından, ImageJ yazılımını çalıştırın ve dosyaya, içe aktarmaya ve görüntü dizisine tıklayın. Görüntü dizisini aç penceresinde, hedef klasörü seçin ve ilk kareyi açın.Sıra seçeneklerinden, başlangıç görüntüsü alanına gidin ve kare numarasını ilk kare için bir olarak ayarlayın. Ardından, artış alanında, Tamam'ı tıklatmadan önce değeri ilk sinyal kaydındaki kare sayısına eşit olarak ayarlayın. Dikişli ilk karelerin oluşturulan dosyasını ayrı bir klasöre kaydetmek için, dosya, kaydet ve klasör sekmelerini sırayla tıklatın.Başlangıç görüntüsü alanında karşılık gelen kare numarasını ayarlayarak 19 kare için prosedürleri tekrarlayın. Tüm görüntüler elde edildiğinde, başlangıç görüntüsünde ve artış alanlarında birini seçmek için dosyaya, içe aktarmaya ve görüntü dizisine tıklayın. Tüm karelerin artan zamansal çözünürlükte bir araya getirildiği son video görülebilir.Ardından, video dosyasını TIF biçiminde kaydedin. Dikişli videoyu analiz etmek için görüntüye, yığınlara, araçlara ve yığın sıralayıcıya tıklayın. Ardından analiz, araçlar ve yatırım getirisi yöneticisi'ne gidin.Daha önce kaydedilmiş TIF dosyasını sürükleyip ImageJ penceresine bırakın ve daha iyi bir görünüm için görüntüyü genişletin. Görüntü görselleştirmesini geliştirmek için, parlaklık kontrastını otomatik olarak açmak için resme tıklayın, ayarlayın. YG çizerek ve YG yöneticisine değer katarak arka planı sinir terminaline yakın bir yere ayarlayın.Ardından, daha fazla ve çoklu ölçüye tıklayarak arka planı hesaplayın. E-tablo programına yapıştırmak için ortalama değerleri kopyalayın. Ardından, ortalama değeri hesaplayın.Ardından, işlem, ana ve çıkar'a tıklayarak hesaplanan ortalama değeri yığınlardan çıkarın. Elde edilen değeri girin ve YG yöneticisine eklemeden önce bir çokgen çizgisi aracılığıyla bir sinir terminalinin etrafına YG çizin. Daha fazla ve çoklu ölçüm sekmelerine tıklayarak sinir terminalinin geçici yoğunluğunu ölçün.Ardından, ortalama yoğunluk değerlerini kopyalayın ve sinyallerin ortalama ofsetini hesaplamak için bunları elektronik tablo programına yapıştırın. Sinyal değerlerini ortalama ofset değerine bölün. Elde edilen değerden birini çıkarın ve% 100 ile çarpın, ardından genliği belirlemek için bir kalsiyum geçici grafiği çizin.Sinir preparatını bir boya ile yükledikten sonra, sinapsın çoğu sinir kütüğüne yakın bir yerde bulunur, yeterli bir floresan seviyesine işaret eder. Görüntü işleme sonrasında istenilen uzamsal ve zamansal çözünürlüğe sahip kalsiyum geçiciliği elde edildi. Bu protokoldeki en önemli adımlardan biri, sinir kütüğünün, siniri kestikten sonraki ilk birkaç dakika içinde boya içeren çözeltiye yerleştirilmesi gerektiğidir.Bu yöntem, motor nöronlara çeşitli boyalar ve ilaçlar yüklemek için kullanılabilir. Kayıt protokolü, CNS preparatlarındaki dendritlerde ve dikenlerde kalsiyumun değerlendirilmesinde yararlı olabilir. Tekniğimiz, iyi mekansal ve zamansal çözünürlüğe sahip bir kalsiyum sinyalinin kaydedilmesini sağlar.Kalsiyum geçiciliğini incelemek, bir nörotransmitter salınımının ve sinaptik plastisitenin araştırma düzenlemesinde güçlü bir araçtır.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Pharmacology

Neuroscience

Unit 1

Skeletal Muscle Relaxants

SCIENTISTS IN ACTION

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Aktif Bölgeleri Diseksiyon ve Görüntüleme Drosophila Nöromüsküler Junction

The Drosophila  larvae neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model for the study of synaptic structure and function. Drosophila  is well known for ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

Sıralı Nöromusküler Kavşağı&#39;nda Tek Schwann Hücreleri belirginleştiren Photo-beyazlatma

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Eşodaklı Işık Sac Mikroskobu ile Tüm Fare Brain mikron çaplı Çözünürlük Optik Tomografi

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Algılama<em&gt; In Situ</emEn&gt; Protein-protein kompleksleri<em&gt; Drosophila</emProximity ligasyon Testi Kullanımı&gt; Larva Nöromüsküler Junction

Discs large (Dlg) is a conserved member of the membrane-associated guanylate kinase family, and serves as a major scaffolding protein at the larval ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

Nöromusküler Kavşak: Ölçme Synapse Boyut, Konfokal Floresan Mikroskobu kullanılarak sinaptik Protein Yoğunluk Parçalanma ve Değişiklikler

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Loading a Calcium Dye into Frog Nerve Endings Through the Nerve Stump: Calcium Transient Registration in the Frog Neuromuscular Junction

Kurbağa Sinir Uçlarına Sinir Kütüğü Vasıtasıyla Kalsiyum Boyası Yükleme: Kurbağa Nöromüsküler Kavşağında Kalsiyum Geçici Kayıt

One of the most feasible methods of measuring presynaptic calcium levels in presynaptic nerve terminals is optical recording. It is based on using ...

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

Nöromüsküler kavşak işlevleri ölçme

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Yüksek throughput ve Çok parametrik Nicelik için iki Algoritmalar<em&gt; Drosophila</em&gt; Nöromusküler Junction Morfoloji

Synaptic morphology is tightly related to synaptic efficacy, and in many cases morphological synapse defects ultimately lead to synaptic malfunction. The ...

High-resolution Confocal Imaging of the Blood-brain Barrier: Imaging, 3D Reconstruction, and Quantification of Transcytosis

Kan - beyin bariyerini yüksek çözünürlüklü Confocal görüntüleme: görüntüleme, 3D yeniden yapılanma ve Transcytosis miktar

The blood-brain barrier (BBB) is a dynamic multicellular interface that regulates the transport of molecules between the circulation and the brain. ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Drosophila larva nöromüsküler kavşak sinaptik akımlardan Fokal Macropatch kayıtları

Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...