Name: a microphysiological system to study leukocyte-endothelial cell interaction during inflammation
Uploaded: 2021-12-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Microphysiological System to Study Leukocyte-Endothelial Cell Interaction during Inflammation at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health, Grant Number: GM114359 en GM134701 (M.F.K. en L.E.K.), 1F31AI164870-01 (J.C.L.), en Defense Threat Reduction Agency, Grant Number: HDTRA11910012 (M.F.K. en L.E.K.).

Hepariniseerd menselijk bloed wordt verkregen voor neutrofiele isolatie van gezonde volwassen donoren (mannen en vrouwen, tussen 21 en 60 jaar oud), na geïnformeerde toestemming zoals goedgekeurd door de Institutional Review Board van Temple University (Philadelphia, PA, VS).
1. Het apparaat primen en coaten met menselijke fibronectine
OPMERKING: De bMFA heeft twee inlaatpoorten en twee uitlaatpoorten die zijn aangesloten op het vasculaire compartime...

<ol>
	<li>Kolaczkowska, E., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+and+function+in+health+and+inflammation.">Neutrophil recruitment and function in health and inflammation.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).</li><li>Yang, Q., Wijerathne, H., Langston, J. C., Kiani, M. F., Kilpatrick, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+approaches+to+understanding+microvascular+endothelial+heterogeneity:+A+roadmap+for+developing+anti-inflammatory+therapeutics.">Emerging approaches to understanding microvascular endothelial heterogeneity: A roadmap for developing anti-inflammatory therapeutics.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7770 (2021).</li><li>Joffre, J., Hellman, J., Ince, C., Ait-Oufella, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+responses+in+sepsis.">Endothelial responses in sepsis.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 202, 361-370 (2020).</li><li>Ince, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endothelium+in+sepsis.">The endothelium in sepsis.</a> Shock. 45, 259-270 (2016).</li><li>Ruparelia, N., Chai, J. T., Fisher, E. A., Choudhury, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+processes+in+cardiovascular+disease:+a+route+to+targeted+therapies.">Inflammatory processes in cardiovascular disease: a route to targeted therapies.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 133-144 (2017).</li><li>Kilpatrick, L. E., Kiani, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+approaches+to+evaluate+leukocyte-endothelial+cell+interactions+in+sepsis+and+inflammation.">Experimental approaches to evaluate leukocyte-endothelial cell interactions in sepsis and inflammation.</a> Shock. 53, 585-595 (2020).</li><li>Langer, H. F., Chavakis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte-endothelial+interactions+in+inflammation.">Leukocyte-endothelial interactions in inflammation.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 13 (7), 1211-1220 (2009).</li><li>Sadik, C. D., Luster, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid-cytokine-chemokine+cascades+orchestrate+leukocyte+recruitment+in+inflammation.">Lipid-cytokine-chemokine cascades orchestrate leukocyte recruitment in inflammation.</a> Journal of Leukocyte Biology. 91 (2), 207-215 (2012).</li><li>Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neutrophil+in+vascular+inflammation.">The neutrophil in vascular inflammation.</a> Nature Medicine. 17, 1381-1390 (2011).</li><li>Maniatis, N. A., Orfanos, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endothelium+in+acute+lung+injury/acute+respiratory+distress+syndrome.">The endothelium in acute lung injury/acute respiratory distress syndrome.</a> Current Opinion in Critical Care. 14, 22-30 (2008).</li><li>Ley, K., Laudanna, C., Cybulsky, M. I., Nourshargh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+to+the+site+of+inflammation:+the+leukocyte+adhesion+cascade+updated.">Getting to the site of inflammation: the leukocyte adhesion cascade updated.</a> Nature Reviews Immunology. 7, 678-689 (2007).</li><li>Molteni, R., Fabbri, M., Bender, J. R., Pardi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+leukocyte-tissue+interactions.">Pathophysiology of leukocyte-tissue interactions.</a> Current Opinion in Cell Biology. 18, 491-498 (2006).</li><li>Chistiakov, D. A., Orekhov, A. N., Bobryshev, Y. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+shear+stress+on+endothelial+cells:+go+with+the+flow.">Effects of shear stress on endothelial cells: go with the flow.</a> Acta Physiologica. 219 (2), 382-408 (2017).</li><li>Prabhakarpandian, B., Shen, M. -. C., Pant, K., Kiani, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+devices+for+modeling+cell-cell+and+particle-cell+interactions+in+the+microvasculature.">Microfluidic devices for modeling cell-cell and particle-cell interactions in the microvasculature.</a> Microvascular Research. 82, 210-220 (2011).</li><li>Zou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PSGL-1+derived+from+human+neutrophils+is+a+high-efficiency+ligand+for+endothelium-expressed+E-selectin+under+flow.">PSGL-1 derived from human neutrophils is a high-efficiency ligand for endothelium-expressed E-selectin under flow.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 289, 415-424 (2005).</li><li>Lamberti, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinspired+microfluidic+assay+for+in+vitro+modeling+of+leukocyte-endothelium+interactions.">Bioinspired microfluidic assay for in vitro modeling of leukocyte-endothelium interactions.</a> Analytical Chemistry (Journal). 86, 8344-8351 (2014).</li><li>Prabhakarpandian, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+microvascular+networks+for+quantitative+analysis+of+particle+adhesion.">Synthetic microvascular networks for quantitative analysis of particle adhesion.</a> Biomedical Microdevices. 10 (4), 585-595 (2008).</li><li>Soroush, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+microfluidic+assay+reveals+a+key+role+for+protein+kinase+C+delta+in+regulating+human+neutrophil-endothelium+interaction.">A novel microfluidic assay reveals a key role for protein kinase C delta in regulating human neutrophil-endothelium interaction.</a> Journal of Leukocyte Biology. 100, 1027-1035 (2016).</li><li>Roth, N. M., Kiani, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+&amp;#34;geographic+information+systems&amp;#34;+based+technique+for+the+study+of+microvascular+networks.">A &amp;#34;geographic information systems&amp;#34; based technique for the study of microvascular networks.</a> Annals of Biomedical Engineering. 27, 42-47 (1999).</li><li>Prabhakarpandian, B., Wang, Y. I., Rea-Ramsey, A., Sundaram, S., Kiani, M. F., Pant, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bifurcations:+Focal+points+of+particle+adhesion+in+microvascular+networks.">Bifurcations: Focal points of particle adhesion in microvascular networks.</a> Microcirculation. 18, 380-389 (2011).</li><li>Rosano, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+physiologically+realistic+in+vitro+model+of+microvascular+networks.">A physiologically realistic in vitro model of microvascular networks.</a> Biomedical Microdevices. 11, 1051-1057 (2009).</li><li>Tousi, N., Wang, B., Pant, K., Kiani, M. F., Prabhakarpandian, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+adhesion+of+leukocytes+near+bifurcations+is+endothelium+independent.">Preferential adhesion of leukocytes near bifurcations is endothelium independent.</a> Microvascular Research. 80, 384-388 (2010).</li><li>Yona, S., Hayhoe, R., Avraham-Davidi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+and+neutrophil+isolation+and+migration+assays.">Monocyte and neutrophil isolation and migration assays.</a> Current Protocols in Immunology. 88 (1), 11-14 (2010).</li><li>Entschladen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+methods+of+human+cell+migration.">Analysis methods of human cell migration.</a> Experimental Cell Research. 307 (2), 418-426 (2005).</li><li>Chen, H. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boyden+chamber+assay.+Methods+in+Molecular+Biology.">Boyden chamber assay. Methods in Molecular Biology.</a> Cell Migration: Developmental Methods and Protocols. , (2005).</li><li>Deosarkar, S. P., Prabhakarpandian, B., Wang, B., Sheffield, J. B., Krynska, B., Kiani, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+dynamic+neonatal+blood-brain+barrier+on+a+chip.">A novel dynamic neonatal blood-brain barrier on a chip.</a> PloS one. 10, 142725 (2015).</li><li>Soroush, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-endothelial+interactions+of+murine+cells+is+not+a+good+predictor+of+their+interactions+in+human+cells.">Neutrophil-endothelial interactions of murine cells is not a good predictor of their interactions in human cells.</a> The FASEB Journal. 34, 2691-2702 (2020).</li><li>Soroush, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+C-Delta+(PKC&#948;)+tyrosine+phosphorylation+is+a+critical+regulator+of+neutrophil-endothelial+cell+interaction+in+inflammation.">Protein Kinase C-Delta (PKC&#948;) tyrosine phosphorylation is a critical regulator of neutrophil-endothelial cell interaction in inflammation.</a> Shock. 51 (5), 538-547 (2019).</li><li>Soroush, F., Tang, Y., Zaidi, H. M., Sheffield, J. B., Kilpatrick, L. E., Kiani, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKC&#948;+inhibition+as+a+novel+medical+countermeasure+for+radiation-induced+vascular+damage.">PKC&#948; inhibition as a novel medical countermeasure for radiation-induced vascular damage.</a> The FASEB Journal. 32, 6436-6444 (2018).</li><li>Pradhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microvascularized+tumor-mimetic+platform+for+assessing+anti-cancer+drug+efficacy.">A microvascularized tumor-mimetic platform for assessing anti-cancer drug efficacy.</a> Scientific Reports. 8 (1), 3171 (2018).</li><li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biomimetic+microfluidic+tumor+microenvironment+platform+mimicking+the+EPR+effect+for+rapid+screening+of+drug+delivery+systems.">A biomimetic microfluidic tumor microenvironment platform mimicking the EPR effect for rapid screening of drug delivery systems.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-14 (2017).</li><li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+kinase+C-delta+inhibition+protects+blood-brain+barrier+from+sepsis-induced+vascular+damage.">Protein kinase C-delta inhibition protects blood-brain barrier from sepsis-induced vascular damage.</a> Journal of Neuroinflammation. 15, 309 (2018).</li><li>Mondrinos, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+endothelial+protein+kinase+C-delta+(PKCd)+regulates+neutrophil+migration+in+acute+lung+inflammation.">Pulmonary endothelial protein kinase C-delta (PKCd) regulates neutrophil migration in acute lung inflammation.</a> The American Journal of Pathology. 184, 200-213 (2014).</li><li>Kilpatrick, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+against+sepsis-induced+lung+injury+by+selective+inhibition+of+protein+kinase+C-d+(d-PKC).">Protection against sepsis-induced lung injury by selective inhibition of protein kinase C-d (d-PKC).</a> Journal of Leukocyte Biology. 89, 3-10 (2011).</li><li>Mondrinos, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+and+efficacy+of+targeted+pulmonary+delivery+of+a+protein+kinase+C-d+inhibitory+peptide:+Impact+on+Indirect+lung+Injury.">Biodistribution and efficacy of targeted pulmonary delivery of a protein kinase C-d inhibitory peptide: Impact on Indirect lung Injury.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 355, 86-98 (2015).</li><li>Liverani, E., Mondrinos, M. J., Sun, S., Kunapuli, S. P., Kilpatrick, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+protein+kinase+C-delta+in+regulating+platelet+activation+and+platelet-leukocyte+interaction+during+sepsis.">Role of protein kinase C-delta in regulating platelet activation and platelet-leukocyte interaction during sepsis.</a> PloS one. 13, 0195379 (2018).</li><li>Smith, A. M., Prabhakarpandian, B., Pant, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+shear+adhesion+map+using+SynVivo+synthetic+microvascular+networks.">Generation of shear adhesion map using SynVivo synthetic microvascular networks.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (87), e51025 (2014).</li></ol>

De bMFA reproduceert de topografie en stromingscondities van de in vivo microvasculaire netwerken en kan worden gebruikt om leukocyten-endotheelcelinteractie en endotheelfunctie in vitro te bestuderen onder fysiologisch realistische omstandigheden. In de microvasculatuur van muis of mens is de geometrie van de microvasculaire netwerken zelfgelijkaardig en fractaal, en het Reynolds-getal << 1, wat aangeeft dat vasculaire geometrie geen significante invloed heeft op stromingspatronen. Daarom kan de bFMA w...

Ontsteking is de reactie van de gastheer op infectie en letsel, en het endotheel speelt een belangrijke rol in de ontstekingsreactie 1,2,3. Inflammatoire ontregeling is de onderliggende oorzaak van een aantal ziektepathologieën zoals sepsis, hart- en vaatziekten, astma, inflammatoire darmaandoeningen, kanker en COVID-19. Leukocyten-endotheelcelinteracties spelen een centrale rol bij deze ontstekingsziekten. Tijdens ontsteking activeert de afgifte van PAMPS (pathogen-associated molecular patterns) uit pathogenen of DAMPS (damage-associated molecular patterns) uit gewonde weefsels immuuncellen om cytokines/chemokines en andere pro-inflammatoire mediatoren vrij te maken die leiden tot de activering van endotheel, resulterend in veranderingen in de vasculaire endotheelbarrièrefunctie en verhoogde permeabiliteit 3,4 . Verhoogde activering van endotheelcellen tijdens ontsteking resulteert in verbeterde interactie tussen leukocyten en endotheelcellen, wat leidt tot overmatige migratie van geactiveerde leukocyten over het vasculaire endotheel naar sleutelorganen 1,5,6,7.
De rekrutering van leukocyten wordt geïnitieerd door chemisch diverse chemoattractanten bestaande uit bioactieve lipiden, cytokines, chemokines en complementcomponenten 8,9. Leukocytenrekrutering is een proces in meerdere stappen dat vijf afzonderlijke stappen omvat: 1) leukocytenmargeatie en vangst/ hechting, 2) rollen, 3) stevige arrestatie, 4) spreiden en kruipen en 5) extravasatie / migratie (figuur 1). Elke stap van dit proces vereist overspraak tussen leukocyten en endotheelcellen om dit dynamische fenomeen te orkestreren 1,9. Uiteindelijk extravaseren gestileerde leukocyten naar ontstoken weefsels over endotheel via een meerstapsproces dat wordt gecontroleerd door gelijktijdige chemoattractant-afhankelijke signalen, kleefgebeurtenissen en hemodynamische schuifkrachten 1,9,10,11,12.
Gezien de centrale rol van schuifstress bij het reguleren van de endotheelcelfunctie en de betekenis van de leukocyten-endotheelcelinteracties13, zijn er de afgelopen decennia verschillende in vitro modellen ontwikkeld om verschillende aspecten van de leukocytenmigratiecascade in een meer gecontroleerde omgeving te bestuderen14. Traditionele fluidische apparaten om leukocyten-endotheelcelinteracties te bestuderen, kunnen worden ingedeeld in twee brede categorieën14: a) apparaten voor het bestuderen van leukocytenrollen, adhesie en adhesiemolecuulexpressie zoals parallelle plaatstroomkamers en b) apparaten voor het bestuderen van leukocytenmigratie onder statische omstandigheden zoals transwellkamers. Systemen zoals parallelle plaatstroomkamers zijn gebruikt om de rol van adhesiemoleculen en hun liganden in de adhesiecascade onder schuifkrachten15 te bestuderen. Een belangrijk nadeel is echter dat deze simplistische, geïdealiseerde apparaten (bijv. Recht kanaal) niet in staat zijn om de schaal en geometrie van de in vivo microvasculatuur (bijv. Opeenvolgende vasculaire bifurcaties, vasculaire morfologie) en de resulterende stroomomstandigheden (bijv. Convergerende of divergerende stromen bij bifurcaties) te reproduceren. Als gevolg hiervan kunnen deze apparaten alleen adhesie modelleren, maar geen transmigratie. Transwellkamers kunnen transmigratie alleen onder statische omstandigheden bestuderen zonder rekening te houden met de in vivo geometrische kenmerken en stromingsomstandigheden. Deze traditionele modellen bootsen dus niet de micro-omgeving van levende weefsels na of lossen adhesie- en migratiecascade op in een enkele test6.
Om deze beperking aan te pakken, hebben we een nieuwe 3D-biomimetische microfluïdische assay (bMFA) ontwikkeld en uitgebreid gevalideerd (figuur 2), die realistisch in vivo microvasculaire netwerken reproduceert op een chip 16,17,18. Het protocol voor microfabricage van dit apparaat is eerdergepubliceerd 17 en wordt hier slechts kort beschreven. De microvasculatuur van muis cremaster spier werd gedigitaliseerd met behulp van een gemodificeerd Geografisch Informatie Systeem (GIS) benadering19. Vervolgens werd het synthetische microvasculaire netwerk gegenereerd op polydimethylsiloxaan (PDMS) met behulp van softlithografieprocessen op basis van het gedigitaliseerde microvasculaire netwerk 14,17,20,21,22. Kortom, de gedigitaliseerde netwerkbeelden werden afgedrukt op Mylar-film, die vervolgens werd gebruikt als een masker om een SU-8 positieve fotoresist bovenop een siliciumwafer te patroon om de meesters voor fabricage te maken. Microfabricated pilaren (10 μm diameter, 3 μm hoog) werden gebruikt om de 3 μm hoge en 100 μm brede poriën te creëren, een optimale grootte voor leukocytenmigratie 23,24,25, die de vasculaire kanalen en weefselcompartimenten met elkaar verbinden. PDMS werd bereid volgens de instructies van de fabrikant en over de ontwikkelde meesters gegoten. Verder werd het PDMS ontgast en een nacht in een oven (65 °C) uitharden om complementaire microkanalen in PDMS te creëren. Vervolgens werd het uitgeharde PDMS van de SU-8 master geschild, gevolgd door ponspoorten voor inlaten/uitgangen. Vervolgens werd de PMDS plasma gebonden aan een glasplaat. Het oppervlak van het microfluïdische apparaat bestaat uit native glas en PDMS. Om celaanhechting, verspreiding en proliferatie te bevorderen, is extracelluar matrix (ECM) coating vereist. De bMFA omvat een microvasculair netwerk en een weefselcompartiment verbonden via 3 μm hoge en 100 μm brede poriën (figuur 2). Dit microfluïdische systeem reproduceert de volledige leukocytenadhesie/migratiecascade in een fysiologisch relevante 3D-omgeving van een compleet microvasculair netwerk met onderling verbonden vaten en bifurcaties, inclusief circulatie, marginatie, rollen, adhesie en migratie van leukocyten naar het extra vasculaire weefselcompartiment in een enkel systeem 14,16,17,21,26.
Opgemerkt moet worden dat zelfs wanneer het debiet bij de inlaat van bMFA vaststaat, de stroomomstandigheden in het netwerk op verschillende locaties variëren en niet kunnen worden berekend met een eenvoudige wiskundige formule. Een op COMPUTATIONAL FLUID DYNAMICS (CFD) gebaseerd model werd ontwikkeld om verschillende stroomparameters (bijv. Schuifspanning, afschuifsnelheid, snelheid) op verschillende locaties in het netwerk te berekenen. Dit CFD-model werd gebruikt om de kleurstofperfusiepatronen en stromingsparameters in de bMFA te simuleren. Kruisvalidatie met experimentele resultaten suggereerde dat de stroomweerstanden over het netwerk goed worden voorspeld door het computationele model (figuur 3)17. Dit CFD-model werd vervolgens gebruikt om de snelheid en het afschuifsnelheidsprofiel in elk vat van bMFA te schatten (figuur 4), waardoor de effecten van afschuifstroom en geometrie op leukocytenrollen, adhesie en migratiekonden worden geanalyseerd 16. Leukocyten hechten zich bij voorkeur in de buurt van bifurcaties en in lage schuifgebieden in vivo, en deze ruimtelijke patronen van leukocytenadhesie werden met succes aangetoond in bMFA met behulp van neutrofielen (figuur 5)16. Dit artikel beschrijft het protocol voor het voorbereiden van bMFA om leukocyten-endotheelcelinteractie onder inflammatoire omstandigheden te bestuderen met behulp van menselijke longmicrovasculaire endotheelcellen (HLMVEC) en menselijke neutrofielen. Microfysiologische systemen, zoals de bMFA, kunnen worden gebruikt om endotheelcelinteracties te bestuderen met verschillende soorten cellen zoals neutrofielen, monocyten, lymfocyten en tumorcellen 18,27,28,29,30. De bMFA kan worden bezaaid met primaire endotheelcellen uit verschillende organen (bijv. Long versus hersenen) en verschillende soorten (bijv. Menselijke versus muriene endotheelcellen), evenals endotheelcellijnen 21,27,31,32. De bMFA kan worden gebruikt om meerdere cellulaire responsen, cel-cel interacties, barrièrefunctie, medicijnafgifte en geneesmiddeltoxiciteit te bestuderen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biomimetic microfluidic assay (bMFA)</td>
			<td>SynVivo</td>
			<td>SMN1-C001</td>
			<td>Exclusive at SynVivo</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt needle</td>
			<td>Jensen Global</td>
			<td>JG24-0.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C70-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CFDA, SE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>C1157</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran, 250,000, Powder</td>
			<td>Spectrum Chemical Mfg. Corp</td>
			<td>DE-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque Premium</td>
			<td>GE Health Care</td>
			<td>17-5442-02</td>
			<td>Leukocyte isolation media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fMLP</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AAJ1692630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human fibronectin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>33-016-015</td>
			<td>use vendor recommended ECM for different cell lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvascular Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>cc-3202</td>
			<td>Human lung microvascular endothelial cell culture medium (HLMVEC).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human lung microvascular endothelial cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>cc-2527</td>
			<td>use vedor remommended trypsin-EDTA and TNS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP214-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon Eclipse Ti2</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIS-elements, 5.20.01</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Imaging software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PhD Ultra Syringe Pump</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>70-3007</td>
			<td>Syringe Pump</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-003-763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TNF-alpha</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>210-TA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide clamp</td>
			<td>SynVivo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S640-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Synvivo Pneumatic Primer</td>
			<td>SynVivo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA, Trypsin Neutralization Solution(TNS)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>cc-5034</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tygon tubing</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-206-8921</td>
			<td>Tubing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a microphysiological system to study leukocyte-endothelial cell interaction during inflammation

Leukocyten-endotheelcelinteracties spelen een belangrijke rol bij ontstekingsziekten zoals sepsis. Tijdens ontsteking kan overmatige migratie van geactiveerde leukocyten over het vasculaire endotheel naar belangrijke organen leiden tot orgaanfalen. Een fysiologisch relevante biomimetische microfluïdische assay (bMFA) is ontwikkeld en gevalideerd met behulp van verschillende experimentele en computationele technieken, die de volledige leukocyten rollende / adhesie / migratiecascade kunnen reproduceren om leukocyten-endotheelcelinteracties te bestuderen. Microvasculaire netwerken verkregen uit in vivo beelden bij knaagdieren werden gedigitaliseerd met behulp van een Geografisch Informatie Systeem (GIS) benadering en gemicrofabriceerd met polydimethylsiloxaan (PDMS) op een microscoopglaasje. Om het effect van afschuifsnelheid en vasculaire topologie op leukocyten-endotheelcelinteracties te bestuderen, werd een Computational Fluid Dynamics (CFD) -model ontwikkeld om een overeenkomstige kaart van afschuifsnelheden en -snelheden in het hele netwerk te genereren. De bMFA maakt de kwantificering van leukocyten-endotheelcelinteracties mogelijk, waaronder rolsnelheid, aantal geconh adhered leukocyten in reactie op verschillende afschuifsnelheden, aantal gemigreerde leukocyten, endotheelceldoorlaatbaarheid, adhesiemolecuulexpressie en andere belangrijke variabelen. Bovendien biedt bMFA, door gebruik te maken van mensgerelateerde monsters, zoals menselijke endotheelcellen en leukocyten, een hulpmiddel voor snelle screening van potentiële therapieën om hun klinische vertaalbaarheid te vergroten.

Na 48 uur cultuur onder schuifstroom in bMFA bedekten endotheelcellen het oppervlak van de vasculaire kanalen in bMFA en uitgelijnd in de stroomrichting (figuur 6). Confocale microscopie gaf aan dat alle oppervlakken van de vasculaire kanalen bedekt waren door endotheelcellen, die een volledig 3D-lumen vormden in bMFA18.
Met behulp van dit protocol kan een neutrofielenadhesiekaart worden verkregen, waaruit blijkt dat er een significante hec...

Watch this Scientific Journal Video about A Microphysiological System to Study Leukocyte-Endothelial Cell Interaction during Inflammation at JoVE.com

A Microphysiological System to Study Leukocyte-Endothelial Cell Interaction during Inflammation

In dit protocol wordt een biomimetische microfluïde assay, die een fysiologisch relevante microvasculaire omgeving kan reproduceren en de gehele leukocytenadhesie / migratiecascade kan reproduceren, gebruikt om leukocyten-endotheelcelinteracties bij ontstekingsziekten te bestuderen.

Een microfysiologisch systeem om leukocyten-endotheelcelinteractie tijdens ontsteking te bestuderen

Leukocyte-endothelial cell interactions play an important role in inflammatory diseases such as sepsis. During inflammation, excessive migration of ...

Leukocyten-endotheelcelinteracties spelen een belangrijke rol bij ontstekingsziekten zoals sepsis. Ontstekingsontregeling veroorzaakt vaak een veranderde vasculaire endotheelbarrièrefunctie en overmatige leukocytenhandel, wat kan leiden tot orgaanschade. De biomimetische microfluïdische assay, wat we bMFA noemen, reproduceert topografie en stromingsomstandigheden van in-vivo microvasculaire netwerken en maakt realtime beoordeling mogelijk van rollende, stevige adhesie, verspreiding en migratie van neutrofielen in het weefselcompartiment.Een kracht van de biomimetische microfluïdische test is het vermogen om primaire menselijke cellen en klinisch relevante patiëntmonsters te gebruiken om de klinische vertaling te verhogen en potentiële therapieën snel te screenen. De procedures worden gedemonstreerd door Mr.Qingliang Yang, een afgestudeerde onderzoeksassistent van mijn laboratorium. Begin met het inbrengen van de buis van ongeveer een centimeter lengte in de poorten met behulp van een fijne tang, op één inlaatpoort na.Klem met behulp van kaakklemmen de twee uitlaatpoorten en het weefselcompartiment samen. Verdun de fibronectine-stamoplossing tot 100 microgram per milliliter met PBS. Laad een spuit van één milliliter die is aangesloten op een stompe naald van 24 gauge met de verdunde fibronectine-oplossing en sluit de spuit aan op een vier centimeter lange slang.Steek de slang in de open inlaatpoort, duw vervolgens op de zuiger totdat humaan fibronectine vrijkomt uit een andere inlaatpoort en klem deze vast. Herhaal het proces voor de resterende poorten totdat alle kanalen, weefselcompartiment en slangen zijn gevuld met de menselijke fibronectine-oplossing. Verwijder de naald, maar houd de vier inch lange slang ingebracht en ongecensureerd.Om ontgassing uit te voeren, sluit u de niet-verlichte buis aan op de pneumatische primer die is aangesloten op een gecomprimeerde stikstoftank met een druk van vijf pond per vierkante inch gedurende 15 minuten. Controleer onder de microscoop of er geen luchtbellen in het kanaal of weefselcompartiment zijn opgesloten en sluit het apparaat opnieuw aan als de luchtbellen aanwezig zijn. Verwijder het apparaat uit de pneumatische primer en incubeer het gedurende een uur bij 37 graden Celsius.Met behulp van voorverwarmde humane longmicrovasculaire endotheelcelkweekmedia, spoel alle kanalen en het weefselcompartiment. Na het oogsten van de endotheelcellen zoals beschreven in het teksthandschrift, pelleteert u de cellen door centrifugeren gedurende vijf minuten op 150 keer G.In de programmeerbare spuitpomp, monteert u een spuit van één milliliter en bevestigt u de slang aan de stompe naald. Trek ongeveer 20 microliter van de celsuspensie in de slang zonder deze in de spuitcilinder te laten.Verwijder de klem uit de uitlaatpoort van het apparaat. Sluit de slang aan op de inlaatpoort zonder een luchtbel in het kanaal te brengen. Stop de pomp met een debiet van vier tot acht microliter per minuut en observeer onder de microscoop.Stop de pomp wanneer de kanalen gevuld zijn met cellen. Klem de uitlaat vast en knip de inlaatbuis. Plaats het apparaat vier uur in de couveuse bij 5% koolstofdioxide en 37 graden Celsius.Na vier uur incubatie, bereid een andere spuit en vul deze met verse celkweekmedia. Monteer de spuit in een spuitpomp en sluit deze aan op de inlaatpoort. Verwijder de klem uit de uitlaatpoort.Laat de verse media ongeveer vijf minuten met vier tot acht microliter per minuut door het apparaat lopen om de zwevende of niet-losgemaakte cellen te verwijderen. Bereid een spuit voor door deze te vullen met verse celkweekmedia. Monteer de spuit in een spuitpomp en sluit deze aan op één inlaatpoort terwijl de uitlaatpoort open blijft.Plaats het apparaat in een incubator bij 37 graden Celsius en 5% koolstofdioxide. Programmeer de spuitpomp voor het kweken van endotheelcellen onder stroom zoals beschreven in het tekstmanuscript. Controleer met behulp van een microscoop bMFA na 48 uur cultuur onder stroom.Confocale microscopie gaf aan dat alle oppervlakken van de vasculaire kanalen bedekt waren door endotheelcellen, die een volledig 3D-lumen vormden in bMFA. Na het bereiden van drie verschillende bMFA-apparaten, laadt u drie spuiten van één milliliter met celkweekmedia of TNF-alfa of TNF-alfa in combinatie met pkc-deltaremmer respectievelijk, waarbij TNF-alfa en inflammatoir cytokine wordt gebruikt om endotheelcellen en neutrofielen te stimuleren. PKC delta inhibitor is een nieuwe ontstekingsremmer.Sluit de drie geladen spuiten aan op drie bMFA-apparaten. Gebruik buffer TNF-alfa of TNF-alfa met toegevoegde remmer, behandel menselijke longmicrovasculaire endotheelcellen gedurende vier uur met 0,1 microliter per minuut. Na het isoleren van de menselijke neutrofielen zoals beschreven in het teksthandschrift, resuspendeert u de neutrofielen in 999 microliter HEPES-buffer en voegt u één microliter 10-millimolaire CFDA SE-kleurstofvoorraadoplossing toe aan de suspensie, wat resulteert in een 10-micromolaire werkoplossing van CFDA SE en incubeer deze gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.Was de cellen tweemaal met hepes-buffer door de oplossing gedurende vijf minuten te centrifugeren op 315 maal G.Na het tellen van de cellen, resuspend met 2 miljoen neutrofielen per milliliter in celkweekmedia of TNF-alfa of TNF-alfa toegevoegd met PKC deltaremmer en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 15 minuten. Vul de spuit met één micromolair van een chemo-lokstof, fMLP, bereid in celkweekmedia. Open één inlaat en één uitlaatpoort van de bMFA.Verwijder de poortslang uit het weefselcompartiment en plaats de fMLP-slang. Injecteer ongeveer 20 microliter fMLP in het weefselcompartiment voor alle bMFA, waarbij degene die wordt behandeld met celkweekmedia. Knip de slang af en klem deze vast.Vul de spuit met ongeveer 200 microliter neutrofielensuspensie en monteer de spuit op de spuitpomp. Nadat u het apparaat op een omgekeerd microscooptrap hebt geplaatst, stelt u het debiet in op één microliter per minuut en start u de pomp. Wacht tot een kleine druppel van de neutrofielensuspensie uit de slang komt en steek de slang in de inlaatpoort.Fluorescerend gelabelde neutrofielen stromen in de vasculaire kanalen en interageren met endotheelcellen en de fysiologisch relevante stroomomstandigheden. Na 10 minuten na het starten van het experiment opent u de beeldanalysesoftware, schakelt u de objectieflens naar 10x en gebruikt u de podiumjoystick om het apparaat onder de microscoop te centreren. Als u de hechtingstoewijzing wilt ophalen, gaat u naar Verwerven en klikt u op Grote afbeelding scannen.Er verschijnt een nieuw venster. Kies 10x Objectief lens en stel de veldoptie in, bijvoorbeeld 5 bij 3. Klik op Scannen, klik op Bestand en sla de hechtingskaart op.Om de migratiekaart voor migratieanalyse te verkrijgen, centreert u het apparaat onder de microscoop met behulp van de podiumjoystick. Klik op Weergave, Acquisitiecontroles, ND-acquisitie. Er verschijnt een nieuw venster.Stel het pad in om het bestand op te slaan en typ de bestandsnaam. Controleer de functie Grote afbeelding, stel Scangebied in, bijvoorbeeld 5 bij 3. Controleer de functie Tijd, stel het interval in op vijf minuten en de duur op 60 minuten.Maak timelapse-afbeeldingen van het weefselcompartiment, waarbij het volgende uur elke vijf minuten één foto wordt gemaakt. CFD-simulatie toont het laminaire stromingspatroon in vasculaire kanalen, behalve voor bifurcatiegebieden waar het stromingspatroon verstoord is. Na het uitvoeren van de biomimetische microfluïdetest, onthulden fasecontrastbeelden dat de oppervlakken van de vasculaire kanalen bedekt waren met endotheelcellen en uitgelijnd in de richting van de schuifstroom na 48 uur cultuur.Fluorescentiebeeldvorming werd uitgevoerd met behulp van confocale microscopie, wat aangeeft dat de endotheelcellen een volledig driedimensionaal lumen vormen in bMFA Een neutrofiele adhesiekaart werd verkregen, waaruit bleek dat er een significante hechting van neutrofielen aan endotheelcellen in bMFA is. Neutrofielenmigratiekaart in bMFA toonde aan dat bij TNF-alfa-activering een aanzienlijke migratie van neutrofielen optreedt in het weefselcompartiment, terwijl een dergelijke migratie niet werd waargenomen zonder TNF-alfa-activering. Een adhesiekaart die de ruimtelijke verdeling van neutrofielen correleerde met de afschuifsnelheid toonde aan dat neutrofielenadhesie bij voorkeur optrad in vaten met een lage afschuifsnelheid en in de buurt van bifurcatiegebieden.Verder verhoogt TNF-alfabehandeling de hechting aanzienlijk, die werd geremd met de PKC-deltaremmer. Het analyseren van timelapse-beelden gaf aan dat TNF-activering van endotheelcellen de neutrofielenmigratie verhoogt als reactie op fMLP, terwijl behandeling met de PKC-deltaremmer de migratie verminderde in vergelijking met met TNF-alfa behandelde cellen. Zo kan bMFA worden gebruikt om de werkzaamheid van een nieuw therapeutisch middel voor de behandeling van ontstekingsziekten te testen.De bMFA kan ook worden gebruikt om de endotheelintegriteit te bestuderen door variabelen te meten zoals permeabiliteit en trans-endotheel elektrische weerstand, wat TEER wordt genoemd, en adhesiemolecuulexpressie tijdens ontsteking. De biomimetische microfluïdische test kan de micro-omgeving van verschillende organen nabootsen en is niet beperkt tot enkele celtypen of soorten, en kan ook cel / celcommunicatie modelleren die cruciaal is voor de orgaanfunctie en het modelleren van verschillende ziekten.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Ontwerp van een Cyclic Pressure Bioreactor voor de Ex Vivo Studie van Aorta hartkleppen

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Constructing a Low-budget Laser Axotomy System to Study Axon Regeneration in C. elegans

Constructing a Low-budget Laser Axotomy System to Study Axon Regeneration in C. elegans

De bouw van een Low-budget Laser axotomy Systeem om Axon Regeneration Study in C. elegans</em

Laser axotomy followed by time-lapse microscopy is a sensitive assay for axon regeneration phenotypes in C. elegans1.  The main difficulty of this assay ...

An Experimental System to Study Mechanotransduction in Fetal Lung Cells

Een experimenteel systeem om Mechanotransductie in foetale long cellen te bestuderen

Mechanical forces generated in utero by repetitive breathing-like movements and by fluid distension are critical for normal lung development. A key ...

Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies

Microfabricage van Nanoporeuze Gold Patronen voor Cell-materiaal Interaction Studies

Nanostructured materials with feature sizes in tens of nanometers have enhanced the performance of several technologies, including fuel cells, biosensors, ...

Assessing Leukocyte-endothelial Interactions Under Flow Conditions in an Ex Vivo Autoperfused Microflow Chamber Assay

Assessing Leukocyte-endothelial Interactions Under Flow Conditions in an Ex Vivo Autoperfused Microflow Chamber Assay

Het beoordelen Leukocyte-endotheliale Interacties Onder stroomtoestanden in een<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Autoperfused microflow Kamer Assay

Leukocyte-endothelial interactions are early and critical events in acute and chronic inflammation and can, when dysregulated, mediate tissue injury ...

Concentric Gel System to Study the Biophysical Role of Matrix Microenvironment on 3D Cell Migration

Concentrische Gel Systeem om de biofysische rol van matrix Microenvironment op 3D-Cell Migratie Bestudeer

The ability of cells to migrate is crucial in a wide variety of cell functions throughout life&#160;from embryonic development and wound healing&#160;to ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

Live cell imaging tijdens Mechanical Stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

De bouw van Defined Human Engineered hartweefsel om te studeren Mechanismen van Cardiac Cell Therapy

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

A Microfluidic System with Surface Patterning for Investigating Cavitation Bubble(s)&#8211;Cell Interaction and the Resultant Bioeffects at the Single-cell Level

A Microfluidic System with Surface Patterning for Investigating Cavitation BubblesÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã…â€œCell Interaction and the Resultant Bioeffects at the Single-cell Level

Een microfluïdische systeem met patronen aan oppervlakken voor het onderzoeken van Cavitatie Bubble (s)-cel interactie en de daaruit voortvloeiende Bioeffects bij de single-cell niveau

In this manuscript, we first describe the fabrication protocol of a microfluidic chip, with gold dots and fibronectin-coated regions on the same glass ...

DNA Nanotubes as a Versatile Tool to Study Semiflexible Polymers

DNA Nanotubes als een veelzijdig instrument om te studeren van Semiflexible polymeren

Mechanical properties of complex, polymer-based soft matter, such as cells or biopolymer networks, can be understood in neither the classical frame of ...