Name: analyzing the parkinson's disease mouse model induced by adeno-associated viral vectors encoding human &#945;-synuclein
Uploaded: 2022-07-29T13:00:00
Duration: 14 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human ÃŽÂ±-Synuclein at JoVE.com

نشكر الدكتور سيباستيان فالينزويلا والدكتورة ميكايلا ريكا على مساعدتهما البيطرية القيمة في منشأتنا الحيوانية. تم دعم هذا العمل من قبل "Financiamiento Basal para Centros Científicos y Tecnológicos de Excelencia de ANID" Centro Ciencia & Vida ، FB210008 (إلى Fundación Ciencia & Vida) ، ومركز Geroscience لصحة الدماغ والتمثيل الغذائي ، FONDAP-15150012. تم تمويل هذا العمل أيضا من خلال المنح FONDECYT-1210013 (إلى R.P) و FONDECYT-1150766 (إلى F.C.) من "الوكالة الوطنية للبحوث والتنمية في تشيلي (ANID)" و MJFF-10332.01 (إلى R.P) و MJFF-17303 (إلى F.C.) من مؤسسة مايكل جي فوكس لأبحاث باركنسون.

يعلن المؤلفون أن البحث قد أجري في غياب أي مصالح مالية أو غير مالية متنافسة.

قد يساعد نموذج الفأر للتنكس العصبي الذي تم تحليله هنا في دراسة العديد من الجوانب الحرجة المشاركة في الفيزيولوجيا المرضية لمرض باركنسون ، بما في ذلك الآليات المشاركة في علم أمراض αSyn والتنشيط الدبقي الصغير ، ومشاركة الجهاز المناعي المحيطي في تنظيم الالتهاب العصبي ، وآليات التنكس العصبي. من بين الآليات المشاركة في علم أمراض αSyn هي تلك الآليات دون الخلوية المرتبطة بخلل الميتوكوندريا أو الليزوسومات أو البروتيسومال في وجود حمل مفرط من αSyn في الخلايا العصبية الدوبامين في SN2. من المهم مراعاة أنه بالإضافة إلى تعبير hαSyn الناجم عن النقل بوساطة AAV ، يساهم الماوس الداخلي αSyn أيضا في حمل التعبير الكلي αSyn. الفئران المعدلة وراثيا التي تبالغ في التعبير عن الفئران αSyn تطور أمراض سينوكلين مماثلة ، وعلم الأمراض العصبية ، وضعف حركي لتلك النماذج الفئران على أساس الإفراط في التعبير عن hαSyn32. فيما يتعلق بالتنشيط الدبقي الصغير ، يمكن استخدام نموذج الفأر الحالي لدراسة كيف يمكن للاعبين الجزيئيين والخلويين المختلفين مثل السيتوكينات والناقلات العصبية والخلايا النجمية والخلايا العصبية والحاجز الدموي الدماغي والخلايا التائية تنظيم اكتساب الأنماط الظاهرية الوظيفية المؤيدة للالتهابات أو المضادة للالتهابات 8,10,11 . يشكل هذا النموذج أيضا أداة مهمة لدراسة دور الجهاز المناعي المحيطي ، بما في ذلك ليس فقط الخلايا التائية ولكن أيضا البلاعم والخلايا الوحيدة والعدلات ، على عمليات الالتهاب العصبي والتنكس العصبي للخلايا العصبية النيجيرية11،33،34. وأخيرا ، يمثل نموذج الفأر هذا أيضا نظاما قيما لدراسة الآليات الخلوية والجزيئية للتنكس العصبي في الجسم الحي ، بما في ذلك تلك التي تسببها العمليات الخلوية الداخلية ، مثل الإجهاد التأكسدي ، وعجز الطاقة ، والعضيات التالفة 2 ، أو تلك التي يمارسها اللاعبون الخارجيون ، مثل العوامل السمية العصبية التي تنتجها الخلايا الدبقية الدقيقة ، والخلايا النجمية ، والخلايا التائية السامة للخلايا8 ، 28,29,35.
أحد قيود نموذج الفأر هذا هو دراسة كيف أن التجميع المرضي ل αSyn في مواقع خارج الدماغ قد يشكل المراحل الأولية في تطور مرض باركنسون36. في هذا الصدد ، هناك أدلة متزايدة تشير إلى أنه قبل التنكس العصبي للخلايا العصبية النيجيرية والضعف الحركي ، يبدأ علم أمراض αSyn في الغشاء المخاطي للأمعاء والظهارة الشمية36 ، وربما استجابة الخلايا التائية الخاصة ب αSyn وكذلك12. بعد ذلك ، ستنتقل مجاميع αSyn عبر العصب المبهم إلى جذع الدماغ ، مما يؤدي إلى التهاب الأعصاب والتنكس العصبي للخلايا العصبية الدوبامينية12. على الرغم من أن نموذج AAV-hαSyn يلخص معظم جوانب مرض باركنسون ، إلا أنه لا توجد مشاركة واضحة للتجميع المرضي ل αSyn في مواقع خارج الدماغ في هذا النموذج. قد يكون النموذج البديل الذي يتضمن علم أمراض hαSyn مناسبا لدراسة هذه الجوانب من مرض باركنسون هو الفئران المعدلة وراثيا التي تبالغ في التعبير عن hαSyn تحت سيطرة مروج Thy1 ، نموذج Thy1-SNCA 37 ، حيث يعتمد تطور المرض على ميكروبات الأمعاء وينطوي على ضعف واضح في الجهاز الهضمي38.
على الرغم من أنه مفيد لدراسة العمليات المتنوعة المرتبطة بالفيزيولوجيا المرضية لمرض باركنسون ، إلا أن نموذج الفأر الحالي ينطوي على خطوات حاسمة يجب فحصها بدقة ، بما في ذلك التسليم الصحيح للناقلات الفيروسية في الإحداثيات المكانية المقابلة ، والتعبير الانتقائي عن hαSyn في الخلايا العصبية (التي تعتمد على النمط المصلي AAV وبناء المتجه) ، وجرعة AAV المناسبة وتوقيتها قبل تحليل النمط الظاهري لمرض باركنسون. من الضروري تحليل التوصيل السليم للناقلات الفيروسية في SN ، لأن استخدام الإحداثيات المكانية الصحيحة ل SN قد لا يكون كافيا عندما لا تكون الإبرة مستقيمة تماما ، والتي تكون في بعض الأحيان غير محسوسة للعين البشرية. علاوة على ذلك ، يعتمد انتشار ناقلات AAV على النمط المصلي AAV39. ولهذه الأسباب، من الضروري إجراء ضوابط دورية للجودة للتحقق من التسليم والانتشار الصحيحين لناقلات AAV-GFP المحقونة بعد ملاحظة GFP في شرائح الدماغ التي تحتوي على منطقة SN.
فيما يتعلق بالتعبير الانتقائي ل hαSyn في الخلايا العصبية ، من حيث المبدأ ، يمكن هندسة التعبير عن hαSyn ليتم التحكم فيه من قبل مروج انتقائي للخلايا العصبية أو ، بشكل أكثر دقة ، انتقائي للخلايا العصبية الدوبامينية ، مثل استخدام مروج TH في ناقلات AAV للحث على التعبير الانتقائي للجينات في الخلايا العصبية الدوبامينية40 . ومع ذلك ، فإن هذه الاستراتيجية لا تعمل عندما يكون ما يتم البحث عنه هو التعبير المفرط عن جين الاهتمام. لهذا السبب ، في النموذج الحالي ، من الضروري استخدام مروج قوي (مروج يحفز تعبيرا عاليا عن الجين النهائي) والأنماط المصلية AAV مع الاستوائية العصبية. في هذه الدراسة ، تم استخدام مروج CBA كمروج قوي للحث على الإفراط في التعبير عن hαSyn ، وتم استخدام النمط المصلي AAV5 للناقل الفيروسي. تم استخدام هذا النمط المصلي من قبل لنقل الخلايا العصبية للفئران والفئران41,42. هنا ، أظهرت النتائج أنه بعد 12 أسبوعا من تسليم AAV5-GFP في SN من الفئران ، كان التألق الأخضر موجودا بشكل انتقائي على الجانب الجانبي لكل من SN والمخطط (الشكل 1) ، مما يشير إلى النقل الفعال للخلايا العصبية في المسار nigrostriatal.
جانب آخر حاسم من نموذج الفأر هذا لمرض باركنسون هو النقطة الزمنية المطلوبة لتحليل عملية معينة بعد الجراحة. في هذا الصدد ، يظهر هذا العمل دراسة حركية للعمليات المختلفة التي ينطوي عليها علم الأمراض. نظرا لأن النقاط الزمنية الرئيسية تتغير مع جرعة الجينوم الفيروسي المعطاة لكل فأر ، فإن النمط المصلي ل AAV المستخدم ، أو حتى مع دفعة AAV المستخدمة ، تم إجراء تحليل استجابة الجرعة لكمية AAV-αSyn المطلوبة للحث على فقدان كبير في الخلايا العصبية TH+ والإعاقة الحركية لأول مرة. وقد أظهرت الدراسات السابقة ضعفا حركيا كبيرا وفقدان الخلايا العصبية TH+ في المسار nigrostriatal بعد 12 أسبوعا من حقن AAV-αSyn في الفئران بجرعات تتراوح بين 6 × 108-3 × 10 10 الجينوم الفيروسي لكل فأر 16,17,30,31. وفقا لذلك ، تراوحت جرعة AAV-hαSyn المستخدمة للحث على تعبير hαSyn في المسار nigrostriatal ، وفقدان الخلايا العصبية TH + ، والضعف الحركي في الفئران من 1 × 108-1 × 1010 الجينوم الفيروسي لكل فأر. علاوة على ذلك ، للسيطرة على أن فقدان الخلايا العصبية TH + والضعف الحركي قد تم إجراؤه بسبب الإفراط في التعبير عن hαSyn في SN وليس عن طريق عدوى AAV للخلايا العصبية في SN ، تم تضمين مجموعات التحكم التي تم فيها تسليم ترميز AAV لجين مراسل (AAV-eGFP) من جانب واحد في SN من الفئران وتم تحديد التنكس العصبي والإعاقة الحركية. أظهرت النتائج أنه بعد 12 أسبوعا من الجراحة المجسمة ، كان 1 ×10 10 جينومات فيروسية لكل فأر جرعة مناسبة من AAV5-hαSyn ، حيث أظهرت الفئران التي تتلقى هذا الحمل الفيروسي hαSyn كبيرا في المسار nigrostriatal (الشكل 2 والشكل 3) ، وفقدان الخلايا العصبية TH+ (الشكل 4) ، وضعف الحركة (الشكل 5). وعلى النقيض من ذلك، لم تكن الجرعات المنخفضة من AAV5-hαSyn (1 × 108 جينومات فيروسية لكل فأر و 1 × 109 جينومات فيروسية لكل ماوس) قوية بما يكفي للوصول إلى تغييرات كبيرة في جميع هذه المعلمات معا (الأشكال 2-4). تجدر الإشارة إلى أن إعطاء AAV-GFP عند 1 × 10 10 جينوم فيروسي لكل فأر أدى إلى انخفاض (~20٪) ، ولكن درجة كبيرة من فقدان الخلايا العصبية TH+ من الخلايا العصبية الدوبامينية النيجيرية (الشكل 4A ، B). تتفق هذه النتيجة مع الملاحظات السابقة باستخدام هذا النموذج41 وربما تكون نتيجة لانخفاض مستوى الالتهاب العصبي الناجم عن إعطاء ناقلات AAV في SN. ومع ذلك ، كان مدى فقدان الخلايا العصبية TH+ أعلى بكثير في الفئران التي تتلقى AAV5-hαSyn مقارنة بتلك التي تتلقى نفس الجرعة من AAV-GFP (الشكل 4C). تجدر الإشارة إلى أن حركية تعبير hαSyn لا تعتمد فقط على كفاءة النقل ولكن أيضا على مدى انتشار AAV39. نظرا لأن انتشار AAV يعتمد على النمط المصلي AAV ، فقد تختلف النقاط الزمنية الرئيسية الدقيقة في هذا النموذج الحيواني عند استخدام نمط مصلي AAV آخر مختلف عن AAV5.
بعد ذلك ، تم إجراء تحليل حركي باستخدام 1 × 1010 جينوم فيروسي لكل فأر لتحديد النقاط الزمنية الرئيسية في نموذج الماوس هذا. نظرا لأن الأدلة الحالية أظهرت بعض الأعراض المبكرة التي تظهر قبل الإعاقة الحركية ، والتي من شأنها أن تسمح بالتشخيص المبكر لمرض باركنسون43,44 ، سعت هذه التجارب إلى العثور على النقطة الزمنية التي كان فيها تعبير hαSyn واضحا بالفعل ولكن في غياب ضعف حركي. تظهر النتائج أن بداية تعبير hαSyn في SN كانت في 5 أسابيع بعد التسليم المجسمة ل AAV-hαSyn (الشكل 6). تشكل هذه النقطة الزمنية نقطة زمنية مثيرة للاهتمام لبدء إدارة العلاجات المصممة خصيصا لوقف العمليات العصبية الالتهابية والتنكسية العصبية. كانت النقاط الزمنية الرئيسية الأخرى المحددة هنا هي أوقات الذروة لحدثين حاسمين مرتبطين بعملية الالتهاب العصبي: الوقت الذي تصل فيه الخلايا الدبقية الصغيرة إلى أقصى درجة من التنشيط ووقت أقصى تسرب للخلايا التائية إلى SN. أظهرت النتائج منحنى مع اتجاه يصل إلى موجتين من التنشيط الدبقي الصغير الأقصى ، الأولى في 10 أسابيع بعد الجراحة والثانية في 15 أسبوعا بعد الجراحة (الشكل 7). أظهر التحليل الحركي لتسلل الخلايا التائية وقت الذروة لتسلل Treg إلى SN في 11 أسبوعا بعد الجراحة المجسمة (الشكل 8). والمثير للدهشة أنه لم يتم الكشف عن أي خلايا T مستجيبة (CD4 + Foxp3-) تتسلل إلى SN خلال الإطار الزمني الذي تم تحليله (الأسابيع 8-13 بعد الجراحة). إجمالا، تشير هذه النتائج إلى إطار زمني مناسب للبدء في إدارة العلاجات الموجهة نحو وقف عملية التهاب الأعصاب وتخفيف تسلل الخلايا التائية إلى SN باستخدام هذا النموذج قبل السريري، والذي يتراوح بين الأسبوع 5 بعد الجراحة (بداية الإفراط في التعبير عن hαsyn) والأسبوع 10 بعد الجراحة (الموجة الأولى من التهاب الأعصاب وتسلل الخلايا التائية) (الشكل 9).
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63313/63313fig09.jpg"> الشكل 9: ملخص للنقاط الزمنية الرئيسية التي تم العثور عليها لهذا النموذج الحيواني. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63313/63313fig09large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.</a>

بعد مرض الزهايمر ، يعد مرض باركنسون ثاني أكثر الأمراض العصبية التنكسية انتشارا في جميع أنحاء العالم. الخلايا العصبية الأولية المتأثرة بمرض باركنسون هي تلك الموجودة في المسار nigrostriatal ، والتي تنتج الدوبامين وتتحكم في الحركة الطوعية. ونتيجة لذلك ، فإن أكثر الأعراض المميزة المرتبطة بهذا الاضطراب هي الإعاقة الحركية. يتضمن هذا المرض أيضا ترسب مجاميع البروتين في الدماغ ، والتي تتكون أساسا من α-سينوكلين (αSyn)1 ، وهو بروتين خلوي مرتبط بأطراف ما قبل المشبكي. وقد أظهرت الأدلة أن توليد الشوائب المسببة للأمراض من αSyn يتم تشغيله عن طريق سوء الطي أو عن طريق بعض التعديلات بعد الترجمة لهذا البروتين2.
والجدير بالذكر أنه تم تأسيس علاقة وثيقة بين علم الأمراض αSyn وفقدان الخلايا العصبية الدوبامينية للمسار nigrostriatal في مرض باركنسون البشري والنماذج الحيوانية 3,4. يمثل فهم كيفية توليد مجاميع αSyn وكيف تحفز موت الخلايا العصبية تحديا كبيرا في هذا المجال. أظهرت مجموعة متزايدة من الدراسات أنه من خلال زيادة الإجهاد التأكسدي ، يعد خلل الميتوكوندريا أحد الأسباب الرئيسية لتوليد مجاميع αSyn2. في الواقع ، العديد من الجينات المرتبطة بخطر مرض باركنسون تشفر البروتينات المشاركة في وظيفة الميتوكوندريا ، والمورفولوجيا ، والديناميكيات 5,6. بالإضافة إلى ذلك ، يشكل الخلل الوظيفي في الليزوزومات ، والذي يؤدي إلى تراكم الميتوكوندريا المختلة وظيفيا و αSyn غير المطوي بشكل خاطئ حدثا رئيسيا آخر يعزز توليد مجاميع αSyn7.
وقد أشارت الأدلة الناشئة إلى أنه بمجرد ترسب مجاميع αSyn في الدماغ ، فإن هذه البروتينات المسببة للأمراض تحفز المستقبلات الشبيهة بالرسوم (TLRs) على الخلايا الدبقية الصغيرة ، وبالتالي تؤدي إلى تنشيط الخلايا الدبقية الدقيقة وبيئة التهابية أولية في المادة السوداء (SN) 8,9. علاوة على ذلك ، تشير الأدلة إلى أن مجاميع αSyn يتم التقاطها وتقديمها بواسطة الخلايا التي تقدم المستضدات إلى الخلايا التائية ، مما يؤدي إلى استجابة مناعية تكيفية خاصة ب αSyn10,11. هذه الخلايا التائية الخاصة ب αSyn تتسلل لاحقا إلى الدماغ ويتم إعادة تحريكها بواسطة الخلايا الدبقية الصغيرة المنشطة ، وبالتالي تعزيز إفراز العوامل السمية العصبية التي تثير الموت العصبي 9,10. ومن المثير للاهتمام ، أن العديد من خطوط الأدلة قد اقترحت أن مجاميع αSyn يتم توليدها أولا في الجهاز العصبي المعوي ثم يتم نقلها عبر العصب المبهم إلى جذع الدماغ12.
تم استخدام العديد من النماذج الحيوانية لمرض باركنسون لسنوات عديدة ، بما في ذلك تلك الناجمة عن إعطاء المواد السامة للأعصاب (أي 6-هيدروكسي دوبامين ، باراكوات ، روتينون ، 1-ميثيل-4-فينيل-1،2،3،6-رباعي هيدروبيريدين) وتلك التي تنطوي على حالات وراثية (أي α-سينوكلين المتحور ، كيناز متكرر غني بالليوسين المتحور 2)13 . على الرغم من أن النماذج التي تنطوي على تنكس عصبي ناجم عن السموم العصبية تكرر بعض جوانب مرض باركنسون ، إلا أن أيا منها لا يلخص جميع الجوانب الأساسية للمرض أو ليست تقدمية13. من ناحية أخرى ، على الرغم من أن نماذج الفئران الجينية التي تنطوي على التعبير عن نسخ متحولة من كيناز 2 المتكرر الغني بالليوسين ، أو الإصدارات المتحولة من α-سينوكلين ، أو الإفراط في التعبير عن α-سينوكلين البشري من النوع البري تؤدي إلى ضعف حركي ، وفي بعض الحالات ، أيضا تطور اعتلال سينوكلينولين ، فإنها لا تتكاثر تنكسا عصبيا بارزا للخلايا العصبية الدوبامينية النيجيرية ، وهو جانب أساسي من مرض باركنسون13 ، 14. تمكن نوع ثالث من النماذج الحيوانية للتنكس العصبي من تلبية معظم الجوانب الأساسية لمرض باركنسون ، وهو التسليم المجسمة للناقلات الفيروسية المرتبطة بالغدية (AAVs) التي تشفر α-سينوكلين البشري (AAV-hαSyn) 14,15. الأهم من ذلك ، تسمح AAVs بنقل الخلايا العصبية بفعالية عالية وعلى المدى الطويل في دماغ الثدييات البالغ. علاوة على ذلك ، فقد ثبت أن التسليم المجسمة ل AAV-hαSyn في SN يعيد إنتاج العديد من الجوانب الأساسية للمرض ، بما في ذلك علم أمراض αSyn ، والتنشيط الدبقي الصغير ، والتنكس العصبي ، والإعاقة الحركية16،17،18،19،20. تقدم هذه الدراسة تحليلا لكيفية تأثير جرعة الناقل الفيروسي والوقت الذي يلي توصيل الناقل الفيروسي على مدى تعبير hαSyn ، والتنكس العصبي ، والالتهاب العصبي في المسار nigrostriatal ، وكذلك درجة الضعف الحركي في نموذج الماوس للتوصيل المجسمة أحادية الجانب ل hαSyn في SN.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ANIMALS AND ANIMAL FOOD</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3-GFP C57BL/6 mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)</td>
			<td>Stock No:&#160;023800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Rodent Diet</td>
			<td>LabDiet</td>
			<td>Rodent Diet 5001</td>
			<td>Standard Rodent diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild-type C57BL/6 mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)</td>
			<td>Stock No: 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIRAL VECTORS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV5-CBA-&#945;Syn</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core Facility</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Stock concentration at 10E13 vg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV5-CBA-eGFP</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core Facility</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Stock concentration at 9.5 x 10E12 vg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANESTHETICS AND ANALGESICS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>218082</td>
			<td>1% for stereotaxic surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Drag Pharma</td>
			<td>CHE30</td>
			<td>70 mg/Kg&#160; for stereotaxic surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>VE2L9117</td>
			<td>For before transcardial perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tramadol</td>
			<td>Drag Pharma</td>
			<td>DPH134</td>
			<td>30 mg/Kg every 24 h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Centrovet</td>
			<td>EHL40</td>
			<td>9 mg/kg for stereotaxic surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beam test</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>horizontal beam 25 cm length and 3 cm width. The beam surface was covered by a metallic grid (1 cm2).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostate</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>S2800 Coolpix</td>
			<td>For recording the beam test performance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td>Used for IHC analysis (section 4.4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td>Used for IF analysis (section 5.3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI8</td>
			<td>Used for IF analysis (section 5.7)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Standard Stereotaxic, mouse</td>
			<td>Stoelting, Wood Dale, IL, USA</td>
			<td>51500</td>
			<td>stereotaxic frame for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td>C-flex L/S16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply unit</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>U-RFL-T</td>
			<td>Used for IF analysis (section 5.3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical suture</td>
			<td>Sylkam&#174;, B Braun</td>
			<td>C0760171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 100 U</td>
			<td>BD</td>
			<td>324918</td>
			<td>For anesthesia before transcardial perfusion, 29G needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe RN 5uL SYR W/O NEEDLE</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HA-7641-01</td>
			<td>For viral vector innoculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUFFERS AND REAGENTS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aviden, Peroxidase Conjugate</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>189728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotrotection buffer</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20% glycerine and 2% DMSO in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminobenzidine</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount -G T</td>
			<td>Electron Microscopy Science</td>
			<td>17984-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>104078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratory</td>
			<td>5000121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>104005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.125 M, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase inactivating buffer</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.03% H2O2 in methanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9036-19-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Hydrochloride</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>1185-53-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>822184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANTIBODIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-SP (long spacer) AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratory</td>
			<td>111065003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L)&#160; Alexa Fluor 546</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A11010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L)&#160; Alexa Fluor 647</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A21244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rat IgG (H+L)&#160; Alexa Fluor 546</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A11081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit monoclonal anti-alpha-Synuclein</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab138501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit monoclonal anti-Iba-1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>EPR16588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit polyclonal anti-Tyrosine Hydroxylase</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat monoclonal anti-CD4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOFTWARES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Prism</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Fos stats analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institute of Health</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS X</td>
			<td>Leica</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For image capture with Leica microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProgRes Capture Pro</td>
			<td>Jenoptik</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For image capture with Olympus microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VLC media player</td>
			<td>VideoLAN Organization</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For analysis of behavioural tests</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the parkinson's disease mouse model induced by adeno-associated viral vectors encoding human &#945;-synuclein

مرض باركنسون هو اضطراب تنكسي عصبي ينطوي على موت الخلايا العصبية الدوبامينية في المسار الزنجي ، وبالتالي ، الفقدان التدريجي للسيطرة على الحركات الطوعية. يتم تشغيل هذه العملية العصبية التنكسية عن طريق ترسب مجاميع البروتين في الدماغ ، والتي تتكون أساسا من α-سينوكلين. أشارت العديد من الدراسات إلى أن الالتهاب العصبي مطلوب لتطوير التنكس العصبي المرتبط بمرض باركنسون. والجدير بالذكر أن العملية الالتهابية العصبية تنطوي على تنشيط الخلايا الدبقية الدقيقة وكذلك تسلل الخلايا التائية الطرفية إلى المادة السوداء (SN). يحلل هذا العمل نموذج الفأر لمرض باركنسون الذي يلخص تنشيط الخلايا الدبقية الصغيرة ، وتسلل الخلايا التائية إلى SN ، والتنكس العصبي للخلايا العصبية الدوبامينية النيجيرية ، والإعاقة الحركية. يتم تحفيز نموذج الفأر هذا لمرض باركنسون من خلال التسليم المجسمة للناقلات الفيروسية المرتبطة بالغدية التي تشفر α-سينوكلين (AAV-hαSyn) من النوع البري البشري في SN. وتم تأكيد التوصيل الصحيح للنواقل الفيروسية إلى SN باستخدام نواقل المكافحة التي تشفر البروتين الفلوري الأخضر (GFP). بعد ذلك ، كيف أثرت جرعة AAV-hαSyn التي تم إعطاؤها في SN على مدى تعبير hαSyn ، وفقدان الخلايا العصبية الدوبامينية النيجيرية ، والضعف الحركي. علاوة على ذلك ، تم تحديد ديناميكيات تعبير hαSyn ، والتنشيط الدبقي الصغير ، وتسلل الخلايا التائية طوال الفترة الزمنية لتطور المرض. وبالتالي ، توفر هذه الدراسة نقاطا زمنية حرجة قد تكون مفيدة لاستهداف أمراض سينوكلين والالتهاب العصبي في هذا النموذج قبل السريري لمرض باركنسون.

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human ÃŽÂ±-Synuclein at JoVE.com

Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein

يحلل هذا العمل جرعة الناقل ووقت التعرض اللازم للحث على التهاب الأعصاب والتنكس العصبي والإعاقة الحركية في هذا النموذج قبل السريري لمرض باركنسون. يتم تسليم هذه النواقل التي تشفر α-سينوكلين البشري إلى المادة السوداء لتلخيص أمراض سينوكلين المرتبطة بمرض باركنسون.

تحليل نموذج فأر مرض باركنسون الناجم عن ناقلات الفيروسات المرتبطة بالأدينو التي تشفر α-سينوكلين البشري

Parkinson&#39;s disease is a neurodegenerative disorder that involves the death of the dopaminergic neurons of the nigrostriatal pathway and, ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو إعادة إنتاج معظم الجوانب الأساسية لمرض باركنسون في نموذج حيواني. التوصيل المجسمة للناقلات الفيروسية المرتبطة بالغدية ، وترميز السيوكلين البشري في المادة السوداء. مرض باركنسون هو اضطراب تنكسي عصبي ينطوي على موت الخلايا العصبية الدوبامينية ، في المسار nigrostriatal ، وبالتالي ، تطور فقدان السيطرة على الحركة الطوعية.ويرافق هذه العملية العصبية التنكسية ، عن طريق ترسب مجموع البروتين في الدماغ ، والتي تتكون أساسا من سينوكلين. وقد أشارت الأدلة الناشئة إلى أن مجاميع السيونوكلين يمكن أن تحفز المستقبلات الشبيهة بالرسوم على الخلايا الدبقية الصغيرة، وبالتالي تؤدي إلى التهاب عصبي في المادة السوداء. علاوة على ذلك ، تشير الأدلة إلى أنه يمكن التقاط مجاميع سينوكلين وتقديمها ، عن طريق الخلايا التي تقدم المستضدات إلى الخلايا التائية ، مما يؤدي إلى استجابة مناعية تكيفية خاصة ب synuclein.وقد أظهر التسليم المجسمة للناقلات الفيروسية المرتبطة بالغدية التي تشفر السيوكلين البشري في المادة السوداء ، أنه يعيد إنتاج العديد من الجوانب الأساسية للمرض ، بما في ذلك أمراض السينوكلين ، وتنشيط الخلايا الدبقية الدقيقة ، وتنشيط الخلايا التائية ، والتنكس العصبي ، والإعاقة الحركية. تقدم هذه الدراسة تحليلا لكيفية تأثير الناقل الفيروسي والوقت الذي يلي توصيل الناقل الفيروسي ، على المدى على تعبير سينوكلين البشري ، والتنكس العصبي ، والالتهاب العصبي في المسار nigrostriatal ، وكذلك درجة الضعف الحركي في نموذج الفأر للتوصيل المجسمة أحادية الجانب للسينوكلين البشري في المادة السوداء. للحفاظ على بيئة معقمة ، ارتد ملابس جراحية مناسبة أثناء الجراحة بأكملها ، بما في ذلك أغطية الأحذية وقناع الجراحة والحاجز الصحي والقفازات وقبعة الجراحة.رش الإيثانول على الفأر وجميع المواد الجراحية ، للحفاظ على البيئة المعقمة. للحث على التسكين ، حقن كاربروفين تحت الجلد كل 12 ساعة ، بدءا من ساعة واحدة قبل الجراحة ، ويستمر حتى ثلاثة أيام بعد الجراحة. لتخدير الماوس ، ضع الحيوان في غرفة حثية.افتح تدفق الايزوفلوران بمعدل 0.5٪ ثم قم بزيادته ببطء حتى يصل إلى 5٪ على مدى خمس دقائق تقريبا حتى يفقد الماوس رد فعل التصحيح. إزالة الحيوان من غرفة الحث. انقل الحيوان على الفور إلى دائرة غير قابلة لإعادة التنفس باستخدام مخروط أنف بحجم مناسب.الحفاظ على تخدير الفأر ، مع isoflurane 1 ٪ طوال فترة الجراحة. تأكد من تخدير الماوس بالكامل عن طريق قرص ذيوله ومخالبه. عندما لا يتفاعل الماوس عند قرص الذيل والكفوف ، فهذا يعني أن الماوس مخدر تماما.حلق رأس الماوس باستخدام المقص. نظف جلد الفأر باستخدام قطعة قطن مع الكلورهيكسيدين 2٪ وإزالة كل الشعر. إصلاح رأس الماوس في الإطار المجسم.ضع واقيا للقرنية في كلتا عيني الفأر ، باستخدام قطعة قطن. لمنع تحريض الإجهاد في القوارض الأخرى ، تجنب وجود أي فأر آخر في غرفة الجراحة. تنظيف رأس الفأر بثلاث جولات من الكلورهيكسيدين 2٪ متبوعا بالإيثانول 70٪ كشف الجمجمة باستخدام المواد الجراحية ، وعمل ثقب رفيع مع حفر عند إحداثيات أمامية خلفية 2.8 مم ، و 1.4 مم متوسطة الجانب ، فيما يتعلق بالخط الإنسي.ضع إبرة حقنة 10 ميكرولتر في الحفرة ، وحرك الإبرة داخل الدماغ ببطء ، حتى تصل إلى 7.2 مم ظهرية بطنية ، احتراما للجافية. اترك الإبرة في الموضع النهائي لمدة دقيقتين ، للسماح للأنسجة بالاستقرار قليلا ، ثم حقن ميكرولتر واحد من النواقل الفيروسية في المادة الصحيحة nigra ، بمعدل 0.2 ميكرولتر كل 30 ثانية. اترك الإبرة في نفس الموضع لمدة خمس دقائق بعد تسليم النواقل الفيروسية ، ثم اسحبها ببطء.أغلق الجرح باستخدام خياطة حريرية معقمة. ضع الماوس في قفص المنزل ، وتم تسخينه مسبقا عن طريق وضعه فوق مرتبة كهربائية دافئة. بعد 12 أسبوعا من الجراحة المجسمة ، قم بتقييم الأداء الحركي ، باستخدام نسخة مبسطة من اختبار الشعاع ، الموصوف من قبل.لهذا الغرض ، استخدم شعاعا أفقيا بطول 25 سم وعرض 3 سم. يجب تغطية سطح الشعاع بشبكة معدنية بمربعات سنتيمتر واحد ، ورفع سنتيمتر واحد فوق الشعاع. قم بعمل فيديو للماوس ، أثناء اجتياز شعاع سطح الشبكة ، من طرف إلى الطرف الآخر من الشعاع ، حيث يقع القفص المنزلي.تدريب الماوس لمدة يومين ، قبل تحديد أداء المحرك. في اليوم الأول ، قم بتدريب الماوس على المشي عبر الشعاع خمس مرات ، بدون الشبكة. في اليوم الثاني ، قم بتدريب الماوس على المشي عبر الشعاع ، في وجود الشبكة خمس مرات.في اليوم الثالث ، قم بتقييم الأداء الحركي. للقيام بذلك ، قم بتحديد عدد الأخطاء التي تم تنفيذها ، بواسطة الكفوف اليسرى أو الكفوف اليمنى بشكل منفصل ، من خلال مشاهدة مقاطع الفيديو في وضع الحركة البطيئة. لتخدير الماوس ، حقن خليط من الكيتامين والزيلازين داخل الصفاق.بمجرد تخدير الفأر بالكامل ، افتح الصدر بمواد جراحية ، وكشف القلب. ثم أدخل إبرة ذات طرف مسطح، في البطين الأيسر للقلب. عن طريق اقتران الإبرة بأنبوب ، قم بدمج 50 ملليلتر من محلول ملحي عازل للفوسفات ، بمعدل 9.5 ملليلتر في الدقيقة ، باستخدام مضخة تمعجية.قم بإزالة الدماغ باستخدام المقص والملقط ، ثم قم بإصلاحه عن طريق الغمر ، في خمسة ملليلتر من 4٪ paraformaldehyde ، في محلول ملحي عازل للفوسفات. بعد ذلك ، ضع الدماغ الثابت ، في 15 ملليلتر من 30 ٪ من السكروز لمدة 48 ساعة. ثم ضع الدماغ في أربعة ملليلترات من محلول الحماية من التبريد ، واحفظ الدماغ عند 80 درجة ، أو استخدمه على الفور في الخطوة التالية.للحصول على شرائح مخططة ، قم بقطع الدماغ إلى أقسام بسماكة 40 ميكرومتر ، تبدأ من 1.34 مم ، وتنتهي عند 0.26 مم. حصاد كل شريحة في أنبوب تبريد ملليلتر ، باتباع الترتيب الأمامي الخلفي. لإجراء التحليل الكيميائي المناعي والكيميائي المناعي والفلورسنت المناعي في المخطط ، اختر خمسة أقسام خطية إكليلية مأخوذة على فترات منتظمة ، والتي تغطي كامل المدى الوردي الذيلي للنواة.للتحقق من صحة التسليم الصحيح للناقلات الفيروسية في الخلايا العصبية الدوبامينية في مسار nigrostriatal ، تم حقن النواقل التي تشفر GFP ، في المادة السوداء ، وبعد 12 أسبوعا ، تم تحليل التألق GFP والتفاعل المناعي لهيدروكسيلاز التيروزين في المادة السوداء والمخطط بواسطة التألق المناعي. كان التألق المرتبط ب GFP ، موجودا حصريا في الموقع الجانبي ، ولوحظ توطين مشترك كبير مع التفاعل المناعي لهيدروكسيلاز التيروزين في كل من المادة السوداء والمخطط ، مما يشير إلى التسليم الصحيح للناقلات الفيروسية في الخلايا العصبية الدوبامينية للمسار nigrostriatal. لاختبار جرعة النواقل ، يتطلب ترميز synuclein ، للحث على الإفراط الكبير في التعبير عن synuclein البشري الذي يعزز التنكس العصبي للخلايا العصبية الدوبامينية النيجيرية ، تم حقن جرعات مختلفة من النواقل.وبعد 12 أسبوعا ، تم اختبار التفاعل المناعي للسينوكلين البشري ، ومدى التفاعل المناعي لهيدروكسيلاز التيروزين في المسار الزنجي الأذيني. كان التفاعل المناعي للسينوكلين البشري واضحا ، حيث تم اختبار جميع الجرعات في المادة السوداء. ومع ذلك ، فإن الفئران فقط التي تتلقى 10 إلى 10 جينومات فيروسية لكل فأر ، قدمت تفاعلا مناعيا واضحا للسينوكلين البشري ، في المخطط.أظهرت الفئران التي تتلقى 10 إلى 10 جينومات فيروسية لكل فأر من النواقل التي تشفر السينيوكلين البشري ، فقدانا كبيرا للخلايا العصبية الدوبامينية في المادة السوداء. على الرغم من أن الفئران التي تتلقى نفس الجرعة من النواقل التي تشفر GFP ، أظهرت درجة منخفضة من فقدان الخلايا العصبية ، إلا أن هذه الفئران قدمت درجة أقل بكثير من التنكس العصبي ، مقارنة بتلك الفئران التي تتلقى ناقلات ، وترميز السينوكلين البشري. باستخدام اختبار الشعاع ، تم الكشف عن انخفاض كبير في الأداء الحركي حصريا في تلك الفئران ، حيث تلقت 10 إلى 10 جينومات فيروسية لكل فأر من النواقل التي تشفر السيوكلين البشري ، عند مقارنة عدد الأخطاء التي ارتكبتها الكفوف اليمنى واليسرى ، أو عند مقارنة العدد الإجمالي للأخطاء ، من الفئران التي تتلقى ناقلات ترميز السيونوكلين البشري ، مع تلك الفئران التي تتلقى ناقلات المكافحة.لتحديد بداية التعبير عن السينوكلين البشري ، عولجت الفئران ب 10 إلى 10 جينومات فيروسية لكل فأر ، من ناقلات تشفر سينوكلين البشري ، أو جراحة صورية ، وتم تحليل مدى تعبير سينوكلين البشري في المادة السوداء ، مرة واحدة في الأسبوع ، خلال الأسابيع من أسبوعين إلى خمسة بعد الجراحة المجسمة. تظهر النتائج أن تعبير سينوكلين البشري بدأ واضحا في الأسبوع الخامس بعد الجراحة المجسمة. لتحديد ذروة التنشيط الدبقي الصغير ، تم تحديد مدى الخلايا التي تعبر عن مستويات عالية من Iba1 ، كميا في مخطط الفئران ، خلال الأسابيع 2-15 بعد الجراحة.تظهر النتائج زيادة كبيرة في التنشيط الدبقي الصغير للجانب الجانبي ، مقارنة بالجانب المقابل للفئران ، بعد 15 أسبوعا من التلقيح الفيروسي. تم تحليل عدد الخلايا التائية التنظيمية التي تسللت إلى الزنبق الكبير في نقاط زمنية مختلفة ، بعد الجراحة المجسمة بواسطة التألق المناعي ، تليها المراقبة المجهرية البؤرية. لوحظت ذروة تسلل الخلايا التائية التنظيمية إلى المادة السوداء في الأسبوع 11 بعد الجراحة.يمثل نموذج الفأر للتنكس العصبي الذي تم تحليله هنا نموذجا مفيدا لدراسة أرقام مشاركة الجانب الرئيسي في الفيزيولوجيا المرضية لمرض باركنسون. آليات المشاركة المشاركة في علم أمراض سينوكلين ، وتنشيط الخلايا الدبقية الدقيقة ، وإشراك الجهاز المناعي المحيطي ، في التهاب الأعصاب ، وآليات التنكس العصبي جرعة مناسبة من ناقل فيروسي مرتبط بالغدي ، النوع الفرعي الخامس ترميز سينوكلين البشري للحث على التنكس العصبي ، التهاب الأعصاب ، تسلل الخلايا التائية ، والإعاقة الحركية ، هو 10 إلى 10 جينومات فيروسية لكل فأر. تظهر هذه الدراسة ، أنه بعد خمسة أسابيع من الجراحة المجسمة ، تشكل نقطة زمنية رئيسية ، حيث كان تعبير السيوكلين البشري واضحا بالفعل ، ولكن في غياب ضعف حركي في هذا النموذج الحيواني.وبالتالي ، تمثل هذه النقطة الزمنية نقطة زمنية مثيرة للاهتمام ، لبدء إدارة العلاجات التجريبية المصممة خصيصا لوقف تقدم الالتهاب العصبي والتنكس العصبي. النقطة الزمنية الأنسب لتحليل التهاب الأعصاب في هذا النموذج الحيواني ، هي في الأسبوع 15 بعد الجراحة المجسمة. في حين أن نقطة زمنية مناسبة لتحليل تسلل الخلايا التائية إلى الجهاز العصبي المركزي.يبدو أنه في الأسبوع 11 بعد التطعيم بالنواقل الفيروسية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human &#945;-Synuclein

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

داخل القحف حقن الغدة المرتبطة ناقلات فيروسية

Intracranial injection of viral vectors engineered to express a fluorescent protein is a versatile labeling technique for visualization of specific ...

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

الكشف عن لوحات لالتهاب الأعصاب في مرض ألزهايمر النموذجي ماوس

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

طرق لتوصيف التلقائي وباغت الناجم عن تحرك في نموذج مرض باركنسون الناجم عن روتنون من<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

Parkinson&#8217;s disease is a neurodegenerative disorder that results from the degeneration of dopaminergic neurons in the central nervous system, ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

حقن الفيروسي Intracerebroventricular من حديثي الولادة ماوس الدماغ للاستمرار وانتشار تنبيغ العصبية

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Production, Purification, and Quality Control for Adeno-associated Virus-based Vectors

إنتاج وتنقية ومراقبة الجودة لناقلات القائم على الفيروسات المرتبطة بالغدة

Gene delivery tools based on adeno-associated viruses (AAVs) are a popular choice for the delivery of transgenes to the central nervous system (CNS), ...

Convection Enhanced Delivery of Optogenetic Adeno-associated Viral Vector to the Cortex of Rhesus Macaque Under Guidance of Online MRI Images

الحمل الحراري تعزيز التسليم من ناقلات الفيروسية المرتبطة الغدينو البصريات إلى قشرة ريسوس Macaque تحت توجيه الصور بالرنين المغناطيسي على الانترنت

In non-human primate (NHP) optogenetics, infecting large cortical areas with viral vectors is often a difficult and time-consuming task. Here, we ...

In Vivo Direct Reprogramming of Resident Glial Cells into Interneurons by Intracerebral Injection of Viral Vectors

في فيفو إعادة برمجة مباشرة من الخلايا الغلية المقيمة في الخلايا العصبية المشتركة عن طريق الحقن داخل الدماغ من ناقلات الفيروسية

Converting resident glia in the brain into functional and subtype-specific neurons in vivo provides a step forward towards the development of alternative ...

Cochlear Surface Preparation in the Adult Mouse

اعداد سطح القوقعة في فاره الكبار

Auditory processing in the cochlea depends on the integrity of the mechanosensory hair cells. Over a lifetime, hearing loss can be acquired from numerous ...

Applying the RatWalker System for Gait Analysis in a Genetic Rat Model of Parkinson's Disease

تطبيق نظام RatWalker لتحليل المشي في نموذج الفئران الجيني لمرض باركنسون

Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder caused by the loss of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars ...

The 6-hydroxydopamine Rat Model of Parkinson's Disease

نموذج الفئران 6-هيدروكسي دوبامين لمرض باركنسون

Motor symptoms of Parkinson's disease (PD)-bradykinesia, akinesia, and tremor at rest-are consequences of the neurodegeneration of dopaminergic neurons in ...