Name: analyzing the parkinson's disease mouse model induced by adeno-associated viral vectors encoding human &#945;-synuclein
Uploaded: 2022-07-29T13:00:00
Duration: 14 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human ÃŽÂ±-Synuclein at JoVE.com

אנו מודים לד"ר סבסטיאן ולנצואלה ולד"ר מיכאלה ריקה על הסיוע הווטרינרי החשוב שלהם במתקן בעלי החיים שלנו. עבודה זו נתמכה על ידי "Financiamiento Basal para Centros Científicos y Tecnológicos de Excelencia de ANID" Centro Ciencia &Vida, FB210008 (to Fundación Ciencia &Vida), והמרכז Geroscience לבריאות המוח ומטבוליזם, FONDAP-15150012. עבודה זו מומנה גם על ידי מענקים FONDECYT-1210013 (ל- R.P.) ו- FONDECYT-1150766 (ל- F.C.) מ-"Agencia Nacional de Investigación y Desarrollo de Chile (ANID)" ו- MJFF-10332.01 (ל- R.P.) ו- MJFF-17303 (ל- F.C.) מקרן מייקל ג'יי פוקס לחקר פרקינסון.

המחברים מצהירים כי המחקר נערך בהיעדר אינטרסים מתחרים כספיים או לא פיננסיים.

מודל העכברים של ניוון עצבי שנותח כאן עשוי לסייע בחקר היבטים קריטיים רבים המעורבים בפתופיזיולוגיה של מחלת פרקינסון, כולל המנגנונים המעורבים בפתולוגיה של αSyn והפעלה מיקרוגליאלית, המעורבות של מערכת החיסון ההיקפית בוויסות של דלקת עצבית, ומנגנוני הניוון העצבי. בין המנגנונים המעורבים בפתולוגיה של αSyn הם אותם מנגנונים תת-תאיים הקשורים לתפקוד מיטוכונדריאלי, ליזוזומלי או פרוטאסומלי בנוכחות עומס מוגזם של αSyn בתאי העצב הדופמינרגיים של SN2. חשוב לקחת בחשבון שבנוסף לביטוי hαSyn המושרה על ידי התמרה בתיווך AAV, העכבר האנדוגני αSyn תורם גם הוא לעומס של ביטוי αSyn הכולל. עכברים מהונדסים המבטאים יתר על המידה עכבר αSyn מפתחים פתולוגיה סינוקלאינית דומה, נוירופתולוגיה ופגיעה מוטורית למודלים של עכברים המבוססים על ביטוי יתר של hαSyn32. בנוגע להפעלה מיקרוגליאלית, מודל העכבר הנוכחי עשוי לשמש כדי לחקור כיצד שחקנים מולקולריים ותאיים שונים כגון ציטוקינים, נוירוטרנסמיטורים, אסטרוציטים, נוירונים, מחסום הדם-מוח ותאי T עשויים לווסת את הרכישה של פנוטיפים פונקציונליים פרו-דלקתיים או אנטי-דלקתיים 8,10,11 . מודל זה מהווה גם כלי חשוב לחקר תפקידה של מערכת החיסון ההיקפית, כולל לא רק תאי T אלא גם מקרופאגים, מונוציטים ונייטרופילים, על תהליכי הדלקת העצבים והניוון העצבי של נוירונים ניגרליים 11,33,34. לבסוף, מודל עכבר זה מייצג גם מערכת רבת ערך לחקר המנגנונים התאיים והמולקולריים של ניוון עצבי in vivo, כולל אלה המושרים על ידי תהליכים תאיים פנימיים, כגון עקה חמצונית, ליקויים באנרגיה ואברונים פגומים 2, או אלה המופעלים על ידי שחקנים חיצוניים, כגון גורמים נוירוטוקסיים המיוצרים על ידי תאים מיקרוגליאליים, אסטרוציטים ותאי T ציטוטוקסיים8, 28,29,35.
מגבלה של מודל עכבר זה היא המחקר של האופן שבו הצבירה הפתולוגית של αSyn במיקומים חוץ-מוחיים עשויה להוות את השלבים הראשונים בהתפתחות מחלת פרקינסון36. בהקשר זה, ישנן עדויות הולכות וגוברות המצביעות על כך שלפני הניוון העצבי של נוירונים ניגרליים ופגיעה מוטורית, הפתולוגיה של αSyn מתחילה ברירית המעיים ובאפיתל חוש הריח36, וככל הנראה גם בתגובת תאי ה-T הספציפיים ל-αSyn12. לאחר מכן, אגרגטים של αSyn היו נודדים דרך עצב הוואגוס אל גזע המוח, ומפעילים את הדלקת העצבית והניוון העצבי של נוירונים דופמינרגיים12. למרות שמודל AAV-hαSyn משחזר את רוב ההיבטים של מחלת פרקינסון, אין מעורבות ניכרת של הצבירה הפתולוגית של αSyn במיקומים חוץ-מוחיים במודל זה. מודל חלופי הכולל פתולוגיה של hαSyn המתאים לחקר היבטים אלה של מחלת פרקינסון עשוי להיות עכברים מהונדסים המבטאים יתר על המידה את hαSyn תחת שליטתו של מקדם Thy1, מודל Thy1-SNCA37, שבו התפתחות המחלה תלויה במיקרוביוטה של המעיים וכוללת פגיעה ניכרת במערכת העיכול38. 
למרות שזה מועיל לחקר התהליכים המגוונים הקשורים לפתופיזיולוגיה של מחלת פרקינסון, מודל העכבר הנוכחי כולל צעדים קריטיים שיש לבדוק בדקדקנות, כולל העברה נכונה של הווקטורים הנגיפיים בקואורדינטות המרחביות המתאימות, הביטוי הסלקטיבי של hαSyn בתאי עצב (התלוי בסרוטיפ AAV ובמבנה הווקטורי), ומינון ותזמון AAV תקינים לפני ניתוח הפנוטיפ הפרקינסון. ניתוח המסירה הנכונה של הווקטורים הנגיפיים ב- SN הוא הכרחי, שכן השימוש בקואורדינטות המרחביות הנכונות של ה- SN עשוי שלא להספיק כאשר המחט אינה ישרה לחלוטין, שלעתים אינה מורגשת לעין האנושית. יתר על כן, הדיפוזיה של וקטורי AAV תלויה בסרוטיפ AAV39. מסיבות אלה, יש צורך לבצע בקרות איכות תקופתיות הבודקות את המסירה הנכונה והדיפוזיה של וקטורי AAV-GFP המוזרקים בעקבות תצפית של GFP בפרוסות מוח המכילות את שטח ה- SN.
לגבי הביטוי הסלקטיבי של hαSyn בתאי עצב, באופן עקרוני, הביטוי של hαSyn יכול להיות מהונדס להיות נשלט על ידי מקדם סלקטיבי עבור נוירונים או, אפילו יותר מדויק, סלקטיבי עבור נוירונים דופמינרגיים, כגון השימוש של מקדם TH בווקטורים AAV כדי לגרום לביטוי סלקטיבי של גנים בתאי עצב דופמינרגיים40 . עם זאת, אסטרטגיה זו אינה פועלת כאשר מה שמתבקש הוא ביטוי יתר של הגן של העניין. מסיבה זו, במודל הנוכחי, חיוני להשתמש במקדם חזק (מקדם הגורם לביטוי גבוה של הגן במורד הזרם) ובסרוטיפים של AAV עם טרופיזם עצבי. במחקר זה, מקדם ה- CBA שימש כמקדם חזק כדי לגרום לביטוי יתר של hαSyn, והסרוטיפ AAV5 שימש לווקטור הנגיפי. סרוטיפ זה שימש בעבר לתמרת נוירונים של עכברים וחולדות41,42. כאן, התוצאות הראו כי 12 שבועות לאחר מסירת AAV5-GFP ב-SN של עכברים, הפלואורסצנציה הירוקה הייתה נוכחת באופן סלקטיבי הן בצד האיפסילטרלי של ה-SN והן של הסטריאטום (איור 1), מה שמצביע על התמרה יעילה של נוירונים של המסלול הניגרוסטריאלי.
היבט קריטי נוסף של מודל העכבר הזה של מחלת פרקינסון הוא נקודת הזמן הנדרשת לניתוח תהליך מסוים לאחר הניתוח. בהקשר זה, עבודה זו מראה מחקר קינטי של תהליכים שונים המעורבים בפתולוגיה. מאחר שנקודות זמן מרכזיות משתנות עם המינון של הגנומים הנגיפיים הניתנים לכל עכבר, הסרוטיפ של AAV שבו נעשה שימוש, או אפילו עם אצווה של AAV בשימוש, בוצע תחילה ניתוח מינון-תגובה של כמות ה-AAV-αSyn הנדרשת כדי לגרום לאובדן משמעותי של נוירוני TH+ ולפגיעה מוטורית. מחקרים קודמים הראו פגיעה מוטורית משמעותית ואובדן נוירוני TH+ של המסלול הניגרוסטריאלי לאחר 12 שבועות של זריקות AAV-αSyn בעכברים במינונים הנעים בין 6 x 108-3 x 1010 גנומים ויראליים לכל עכבר 16,17,30,31. בהתאם לכך, המינון של AAV-hαSyn ששימש להשראת ביטוי hαSyn במסלול הניגרוסטריאלי, אובדן נוירוני TH+ ופגיעה מוטורית בעכברים נעו בין 1 x 108-1 x 1010 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר. יתר על כן, כדי לשלוט בכך שאובדן נוירוני TH+ ופגיעה מוטורית הושרו על ידי ביטוי יתר של hαSyn ב- SN ולא על ידי זיהום AAV של נוירונים של SN, נכללו קבוצות ביקורת שבהן קידוד AAV עבור גן מדווח (AAV-eGFP) נמסר באופן חד צדדי ב- SN של עכברים ונקבעו ניוון עצבי ופגיעה מוטורית. התוצאות הראו ש-12 שבועות לאחר הניתוח הסטריאוטקסי, 1 x 1010 גנומים נגיפיים לכל עכבר היו מינון תקין של AAV5-hαSyn, שכן עכברים שקיבלו את העומס הנגיפי הזה הראו hαSyn משמעותי במסלול הניגרוסטריאטלי (איור 2 ואיור 3), אובדן נוירוני TH+ (איור 4) ופגיעה מוטורית (איור 5). לעומת זאת, מינונים נמוכים יותר של AAV5-hαSyn (1 x 108 גנומים נגיפיים לעכבר ו-1 x 109 גנומים נגיפיים לכל עכבר) לא היו חזקים מספיק כדי להגיע לשינויים משמעותיים בכל הפרמטרים האלה יחד (איורים 2-4). יש לציין כי מתן AAV-GFP ב-1 x 1010 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר גרם לרמה נמוכה (כ-20%), אך משמעותית של אובדן תאי עצב מסוג TH+ של נוירונים דופמינרגיים ניגריים (איור 4A,B). תוצאה זו מסכימה עם תצפיות קודמות שהשתמשו במודל זה41 והיא ככל הנראה תוצאה של רמה נמוכה של דלקת עצבית המושרה על ידי מתן וקטורי AAV ב- SN. אף על פי כן, היקף האובדן של תאי עצב מסוג TH+ היה גבוה משמעותית בעכברים שקיבלו AAV5-hαSyn בהשוואה לאלה שקיבלו את אותו מינון של AAV-GFP (איור 4C). יש לציין כי הקינטיקה של ביטוי hαSyn תלויה לא רק ביעילות ההעתקה אלא גם בהיקף הדיפוזיה של AAV39. מאחר שדיפוזיית AAV תלויה בסרוטיפ AAV, נקודות הזמן המדויקות של המפתח במודל חייתי זה עשויות להשתנות בעת שימוש בסרוטיפ AAV אחר השונה מ-AAV5.
לאחר מכן, נערך ניתוח קינטי באמצעות 1 x 1010 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר כדי לקבוע נקודות זמן מרכזיות במודל העכבר הזה. מכיוון שהראיות הנוכחיות הראו כמה תסמינים מוקדמים המופיעים לפני פגיעה מוטורית, אשר יאפשרו אבחון מוקדם של מחלת פרקינסון43,44, ניסויים אלה ביקשו למצוא את נקודת הזמן שבה ביטוי hαSyn כבר ניכר אך בהיעדר פגיעה מוטורית. התוצאות מראות כי הופעת הביטוי hαSyn ב-SN הייתה ב-5 שבועות לאחר המסירה הסטריאוטקסית של AAV-hαSyn (איור 6). נקודת זמן זו מהווה נקודה טמפורלית מעניינת להתחיל במתן טיפולים המותאמים לעצירת התהליכים הנוירו-דלקתיים והנוירודגנרטיביים. נקודות זמן מרכזיות נוספות שנקבעו כאן היו זמני השיא של שני אירועים קריטיים הקשורים לתהליך הדלקת העצבית: הזמן שבו המיקרוגליה מגיעה לדרגת ההפעלה המרבית וזמן החדירה המקסימלית של תאי T לתוך ה-SN. התוצאות הראו עקומה עם מגמה המגיעה לשני גלים של הפעלה מיקרוגליאלית מקסימלית, הראשון ב-10 שבועות לאחר הניתוח והשני ב-15 שבועות לאחר הניתוח (איור 7). הניתוח הקינטי של חדירת תאי T הראה את זמן השיא של חדירת Treg ל-SN ב-11 שבועות לאחר הניתוח הסטריאוטקסי (איור 8). באופן מפתיע, לא זוהו תאי T משפיעים (CD4+ Foxp3-) שחודרים ל-SN במהלך מסגרת הזמן שנותחה (שבועות 8-13 לאחר הניתוח). בסך הכל, תוצאות אלה מצביעות על פרק זמן מתאים להתחלת מתן טיפולים המיועדים לעצירת תהליך הדלקת העצבית והחלשת חדירת תאי T ל-SN באמצעות מודל פרה-קליני זה, שנע בין שבוע 5 לאחר הניתוח (תחילת ביטוי יתר של hαSyn) לבין שבוע 10 לאחר הניתוח (הגל הראשון של דלקת עצבית והסתננות תאי T) (איור 9).
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63313/63313fig09.jpg"> איור 9: סיכום של נקודות הזמן העיקריות שנמצאו עבור מודל זה של בעלי חיים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63313/63313fig09large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.</a>

לאחר מחלת אלצהיימר, מחלת פרקינסון היא המחלה הנוירודגנרטיבית השנייה בשכיחותה בעולם. הנוירונים העיקריים המושפעים ממחלת פרקינסון הם אלה של המסלול הניגרוסטריאלי, המייצרים דופמין ושולטים בתנועה רצונית. כתוצאה מכך, הסימפטום האופייני ביותר הקשור להפרעה זו הוא פגיעה מוטורית. פתולוגיה זו כוללת גם תצהיר של אגרגטי חלבונים במוח, המורכבים בעיקר α-סינוקלאין (αSyn)1, חלבון ציטוזולי הקשור לטרמינלים קדם-סינפטיים. עדויות הראו כי הדור של תכלילים פתוגניים של αSyn מופעל על ידי קיפול שגוי או על ידי כמה שינויים לאחר התרגום של חלבון זה2.
יש לציין כי נוצר קשר הדוק בין הפתולוגיה של αSyn לבין אובדן הנוירונים הדופמינרגיים של המסלול הניגרוסטריאלי במחלת פרקינסון אנושית ובמודלים של בעלי חיים 3,4. הבנת האופן שבו נוצרים אגרגטים של αSyn וכיצד הם גורמים למוות עצבי מייצגת אתגר משמעותי בתחום. קבוצה הולכת וגדלה של מחקרים הראתה כי על ידי הגברת העקה החמצונית, תפקוד לקוי של המיטוכונדריה הוא אחד הגורמים המובילים ליצירת אגרגטים αSyn2. ואכן, מספר גנים הקשורים למחלת פרקינסון מקודדים חלבונים המעורבים בתפקוד המיטוכונדריאלי, במורפולוגיה ובדינמיקה 5,6. בנוסף, תפקוד לקוי ליזוזומי, שמביא להצטברות של מיטוכונדריה לא מתפקדת ו-αSyn מקופלת בצורה שגויה, מהווה אירוע מרכזי נוסף המקדם את יצירתם של αSyn aggregates7.
עדויות חדשות מצביעות על כך שברגע שאגרגטים של αSyn מופקדים במוח, החלבונים הפתוגניים האלה מעוררים קולטנים דמויי אגרה (TLRs) על המיקרוגליה, ובכך מפעילים הפעלה מיקרוגליאלית וסביבה דלקתית ראשונית בסובסטנטיה ניגרה (SN)8,9. יתר על כן, הראיות מצביעות על כך שאגרגטים של αSyn נלכדים ומוצגים על-ידי תאים המציגים אנטיגן לתאי T, מה שגורם לתגובה חיסונית נרכשת ספציפית ל-αSyn10,11. תאי T ספציפיים ל-αSyn אלה מסתננים לאחר מכן למוח ונשענים מחדש על ידי מיקרוגליה מופעלת, ובכך מקדמים את הפרשת הגורמים הנוירוטוקסיים שמעוררים מוות עצבי 9,10. באופן מעניין, מספר שורות של ראיות הצביעו על כך שאגרגטים של αSyn נוצרים תחילה במערכת העצבים האנטרית ולאחר מכן מועברים דרך העצב התועה לגזע המוח12.
מספר מודלים של בעלי חיים של מחלת פרקינסון שימשו במשך שנים רבות, כולל אלה המושרים על ידי מתן חומרים נוירוטוקסיים (כלומר, 6-הידרוקסידופאמין, פרקוואט, רוטנון, 1-מתיל-4-פניל-1,2,3,6-טטרהידרופירידין) ואלה המערבים מצבים גנטיים (כלומר, מוטציה α-סינוקלאין, קינאז חוזר עשיר בלאוצין מוטנטי 2)13 . למרות מודלים המערבים ניוון עצבי הנגרם על ידי נוירוטוקסין המשכפלים היבטים מסוימים של מחלת פרקינסון, אף אחד מהם לא משחזר את כל ההיבטים החיוניים של המחלה או שאינם מתקדמים13. מאידך גיסא, אף על פי שמודלים גנטיים של עכברים גנטיים הכוללים ביטוי של גרסאות מוטנטיות של קינאז חוזר עשיר בלאוצין 2, גרסאות מוטנטיות של α-סינוקלאין, או ביטוי יתר של α-סינוקלאין מסוג פראי אנושי, גורמים לפגיעה מוטורית, ובמקרים מסוימים גם להתפתחות הסינוקלינופתיה, הם אינם משחזרים ניוון עצבי בולט של הנוירונים הדופמינרגיים הניגרליים, המהווים היבט חיוני של מחלת פרקינסון13, 14. סוג שלישי של מודל חייתי של ניוון עצבי הצליח לענות על רוב ההיבטים החיוניים של מחלת פרקינסון, המסירה הסטריאוטקסית של וקטורים ויראליים הקשורים לאדנו (AAVs) המקודדים את α-סינוקלאין האנושי (AAV-hαSyn)14,15. חשוב לציין, AAVs מאפשרים התמרה של נוירונים ביעילות גבוהה ובטווח הארוך במוח הבוגר של יונקים. יתר על כן, ההוכחה כי ההעברה הסטריאוטוקסית של AAV-hαSyn ב-SN משחזרת רבים מההיבטים החיוניים של המחלה, כולל פתולוגיה של αSyn, הפעלה מיקרוגליאלית, ניוון עצבי ופגיעה מוטורית 16,17,18,19,20. מחקר זה מציג ניתוח של האופן שבו המינון של הווקטור הנגיפי והזמן שלאחר מסירת וקטור נגיפי משפיע על היקף הביטוי hαSyn, ניוון עצבי ודלקת עצבית במסלול nigrostriatal, כמו גם את מידת הפגיעה המוטורית במודל העכבר של העברה סטריאוטקסית חד צדדית של hαSyn ב- SN.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ANIMALS AND ANIMAL FOOD</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3-GFP C57BL/6 mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)</td>
			<td>Stock No:&#160;023800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Rodent Diet</td>
			<td>LabDiet</td>
			<td>Rodent Diet 5001</td>
			<td>Standard Rodent diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wild-type C57BL/6 mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME)</td>
			<td>Stock No: 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VIRAL VECTORS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV5-CBA-&#945;Syn</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core Facility</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Stock concentration at 10E13 vg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AAV5-CBA-eGFP</td>
			<td>University of Iowa Viral Vector Core Facility</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Stock concentration at 9.5 x 10E12 vg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANESTHETICS AND ANALGESICS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>218082</td>
			<td>1% for stereotaxic surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Drag Pharma</td>
			<td>CHE30</td>
			<td>70 mg/Kg&#160; for stereotaxic surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>VE2L9117</td>
			<td>For before transcardial perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tramadol</td>
			<td>Drag Pharma</td>
			<td>DPH134</td>
			<td>30 mg/Kg every 24 h</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Centrovet</td>
			<td>EHL40</td>
			<td>9 mg/kg for stereotaxic surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beam test</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>horizontal beam 25 cm length and 3 cm width. The beam surface was covered by a metallic grid (1 cm2).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostate</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>S2800 Coolpix</td>
			<td>For recording the beam test performance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51</td>
			<td>Used for IHC analysis (section 4.4)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX71</td>
			<td>Used for IF analysis (section 5.3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI8</td>
			<td>Used for IF analysis (section 5.7)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Standard Stereotaxic, mouse</td>
			<td>Stoelting, Wood Dale, IL, USA</td>
			<td>51500</td>
			<td>stereotaxic frame for surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump</td>
			<td>Masterflex</td>
			<td>C-flex L/S16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply unit</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>U-RFL-T</td>
			<td>Used for IF analysis (section 5.3)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical suture</td>
			<td>Sylkam&#174;, B Braun</td>
			<td>C0760171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 100 U</td>
			<td>BD</td>
			<td>324918</td>
			<td>For anesthesia before transcardial perfusion, 29G needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe RN 5uL SYR W/O NEEDLE</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>HA-7641-01</td>
			<td>For viral vector innoculation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BUFFERS AND REAGENTS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aviden, Peroxidase Conjugate</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>189728</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryotrotection buffer</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>20% glycerine and 2% DMSO in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diaminobenzidine</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>D8001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount -G T</td>
			<td>Electron Microscopy Science</td>
			<td>17984-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>104078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal goat serum</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratory</td>
			<td>5000121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>104005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.125 M, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase inactivating buffer</td>
			<td>Home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>0.03% H2O2 in methanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9036-19-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma Hydrochloride</td>
			<td>Merck, Darmstadt, Germany</td>
			<td>1185-53-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>822184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ANTIBODIES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-SP (long spacer) AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch Laboratory</td>
			<td>111065003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L)&#160; Alexa Fluor 546</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A11010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L)&#160; Alexa Fluor 647</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A21244</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rat IgG (H+L)&#160; Alexa Fluor 546</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A11081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit monoclonal anti-alpha-Synuclein</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab138501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit monoclonal anti-Iba-1</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>EPR16588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit polyclonal anti-Tyrosine Hydroxylase</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat monoclonal anti-CD4</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SOFTWARES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad</td>
			<td>Prism</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Fos stats analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ</td>
			<td>National Institute of Health</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS X</td>
			<td>Leica</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For image capture with Leica microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProgRes Capture Pro</td>
			<td>Jenoptik</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For image capture with Olympus microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VLC media player</td>
			<td>VideoLAN Organization</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For analysis of behavioural tests</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analyzing the parkinson's disease mouse model induced by adeno-associated viral vectors encoding human &#945;-synuclein

מחלת פרקינסון היא הפרעה נוירודגנרטיבית הכוללת את מותם של הנוירונים הדופמינרגיים של המסלול הניגרוסטריאלי, וכתוצאה מכך, אובדן הדרגתי של שליטה בתנועות רצוניות. תהליך נוירודגנרטיבי זה מופעל על ידי תצהיר של אגרגטים של חלבונים במוח, אשר מורכבים בעיקר α-סינוקלאין. מספר מחקרים הצביעו על כך שנדרשת דלקת עצבית כדי לפתח את הניוון העצבי הקשור למחלת פרקינסון. יש לציין כי התהליך הנוירו-אינפלמטורי כולל הפעלה מיקרוגליאלית, כמו גם חדירה של תאי T היקפיים לתוך הסובסטנטיה ניגרה (SN). עבודה זו מנתחת מודל עכברי של מחלת פרקינסון המשחזרת הפעלה מיקרוגליאלית, חדירת תאי T ל-SN, ניוון עצבי של נוירונים דופמינרגיים ניגרליים ופגיעה מוטורית. מודל עכברי זה של מחלת פרקינסון מושרה על ידי העברה סטריאוטקסית של וקטורים נגיפיים הקשורים לאדנו המקודדים את סוג הבר האנושי α-סינוקלאין (AAV-hαSyn) לתוך SN. המסירה הנכונה של וקטורים ויראליים לתוך SN אושרה באמצעות וקטורים בקרה המקודדים חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP). לאחר מכן, כיצד הוערכו המינון של AAV-hαSyn שניתן ב-SN על היקף הביטוי של hαSyn, על אובדן הנוירונים הדופמינרגיים הניגרליים ועל הפגיעה המוטורית. יתר על כן, הדינמיקה של ביטוי hαSyn, הפעלה מיקרוגליאלית וחדירת תאי T נקבעו לאורך כל מהלך התפתחות המחלה. לפיכך, מחקר זה מספק נקודות זמן קריטיות שעשויות להיות שימושיות למיקוד פתולוגיה של סינוקלאין ודלקת עצבית במודל פרה-קליני זה של מחלת פרקינסון.

Watch this Scientific Journal Video about Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human ÃŽÂ±-Synuclein at JoVE.com

Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human ÃƒÅ½Ã‚Â±-Synuclein

עבודה זו מנתחת את המינון הווקטורי ואת זמן החשיפה הנדרשים כדי לגרום לדלקת עצבית, ניוון עצבי ופגיעה מוטורית במודל פרה-קליני זה של מחלת פרקינסון. וקטורים אלה המקודדים את α-סינוקלאין האנושי מועברים לתוך הסובסטנטיה ניגרה כדי לשחזר את הפתולוגיה הסינוקליינית הקשורה למחלת פרקינסון.

ניתוח מודל העכבר של מחלת הפרקינסון המושרה על ידי וקטורים ויראליים הקשורים לאדנו המקודדים α-סינוקלאין אנושי

Parkinson&#39;s disease is a neurodegenerative disorder that involves the death of the dopaminergic neurons of the nigrostriatal pathway and, ...

המטרה הכוללת של הליך זה, היא לשחזר את רוב ההיבטים החיוניים של מחלת פרקינסון במודל של בעלי חיים. המסירה הסטריאוטקסית של וקטורים ויראליים הקשורים לאדנו, המקודדים את הסינוקליין האנושי בסובסטנטיה ניגרה. מחלת פרקינסון היא הפרעה נוירודגנרטיבית הכרוכה במוות של נוירון דופמינרגי, במסלול הניגרוסטריאלי, וכתוצאה מכך, בהתקדמות של אובדן שליטה בתנועה רצונית.תהליך נוירודגנרטיבי זה מלווה, בתצהיר של צבירת חלבונים במוח, אשר מורכבים בעיקר על ידי סינוקלאין. עדויות חדשות מצביעות על כך שאגרגטים של סינוקלאין יכולים לעורר קולטנים דמויי אגרה על המיקרוגליה, ובכך לעורר דלקת עצבית בסובסטנטיה ניגרה. יתר על כן, עדויות מצביעות על כך שאגרגטים של סינוקלאין יכולים להיתפס ולהציגם, על ידי תאים המציגים אנטיגן לתאי T, ובכך לגרום לתגובה חיסונית נרכשת ספציפית לסינוקלאין.ההעברה הסטריאוטקסית של וקטורים נגיפיים הקשורים לאדנו המקודדים את הסינוקליין האנושי ב- substantia nigra, הראתה כי היא משחזרת היבטים חיוניים רבים של המחלה, כולל פתולוגיה של סינוקלאין, הפעלה מיקרוגליאלית, הפעלת תאי T, ניוון עצבי ופגיעה מוטורית. מחקר זה מציג ניתוח של האופן שבו וקטור ויראלי והזמן שלאחר מסירת וקטור ויראלי, משפיע על היקף הביטוי של הסינוקליין האנושי, ניוון עצבי ודלקת עצבית במסלול הניגרוסטריאלי, כמו גם על מידת הפגיעה המוטורית במודל עכבר של העברה סטריאוטקסית חד-צדדית של סינוקלאין אנושי בסובסטנטיה ניגרה. כדי לשמור על סביבה אספטית, לבשו בגדי ניתוח מתאימים במהלך כל הניתוח, כולל כיסויי נעליים, מסכת ניתוח, מחסום סניטרי, כפפות וכובע ניתוח.לרסס אתנול על העכבר ועל כל החומר הניתוחי, כדי לשמור על הסביבה האספטית. כדי לגרום לשיכוך כאבים, יש להזריק קרפרופן באופן תת עורי כל 12 שעות, החל משעה לפני הניתוח, ונמשך עד שלושה ימים לאחר הניתוח. כדי להרדים את העכבר, הניחו את החיה בתא אינדוקציה.פתחו את זרימת האיזופלורן בקצב של 0.5% ואז הגדילו אותה באיטיות עד 5% במשך כחמש דקות עד שהעכבר איבד את הרפלקס הימני שלו. הסר את החיה מתא האינדוקציה. מעבירים מיד את החיה למעגל שאינו מתרבה מחדש עם חרוט אף בגודל מתאים.שמור על הרדמה העכבר, עם איזופלורן 1% לאורך כל זמן הניתוח. אשרו שהעכבר מורדם לחלוטין על ידי צביטה בזנבותיו ובכפותיו. כאשר העכבר אינו מגיב בעת צביטה של הזנב והכפות, משמעות הדבר היא שהעכבר מורדם לחלוטין.לגלח את ראש העכבר באמצעות מספריים. נקו את עור העכבר באמצעות צמר גפן עם כלורהקסידין 2% והסירו את כל השיער. תקן את ראש העכבר במסגרת הסטריאוטקסית.הניחו מגן קרנית בשתי עיני העכבר, באמצעות צמר גפן. כדי למנוע אינדוקציה של לחץ אצל מכרסמים אחרים, הימנעו מנוכחותו של כל עכבר אחר בחדר הניתוח. נקו את ראש העכבר עם שלושה סיבובים של כלורהקסידין 2% ואחריו אתנול 70% חשפו את הגולגולת באמצעות חומר כירורגי, ועשו חור דק עם מקדחה בקואורדינטות אנטרופוסטריור 2.8 מ"מ, ובינולית 1.4 מ"מ, ביחס לקו המדיאלי.מכניסים את המחט של מזרק 10 מיקרוליטר לחור, ומזיזים את המחט בתוך המוח לאט, עד שמגיעים ל-7.2 מ"מ דורסו-גנטרלי, ביחס לדורה. השאירו את המחט במצב הסופי במשך שתי דקות, כדי לאפשר לרקמה להתיישב מעט, ולאחר מכן הזריקו מיקרוליטר אחד של וקטורים נגיפיים לתוך הסובסטנטיה ניגרה הימנית, בקצב של 0.2 מיקרוליטרים כל 30 שניות. להשאיר את המחט באותה תנוחה במשך חמש דקות לאחר המסירה של וקטורים ויראליים, ולאחר מכן למשוך אותו לאט.סגרו את הפצע באמצעות תפר משי סטרילי. הכניסו את העכבר לכלוב הביתי, התחממו מראש על ידי הנחתו מעל מזרן חשמלי וחם. 12 שבועות לאחר הניתוח הסטריאוטקסי, להעריך את הביצועים המוטוריים, באמצעות גרסה פשוטה של מבחן הקרן, שתוארה קודם לכן.לשם כך, יש להשתמש בקורה אופקית באורך 25 ס"מ וברוחב של 3 ס"מ. משטח הקרן חייב להיות מכוסה על ידי רשת מתכתית עם ריבועים של סנטימטר אחד, ומוגבה סנטימטר אחד מעל הקורה. הכינו סרטון של העכבר, תוך כדי חציית קרן פני השטח של הרשת, מקצה אחד לקצה הנגדי של הקורה, שם נמצא הכלוב הביתי.לאמן את העכבר במשך יומיים, לפני קביעת הביצועים המוטוריים. ביום הראשון, לאמן את העכבר ללכת דרך הקורה חמש פעמים, ללא הרשת. ביום השני, לאמן את העכבר ללכת דרך הקורה, בנוכחות הרשת חמש פעמים.ביום השלישי, להעריך את הביצועים המוטוריים. כדי לעשות זאת, לכמת את מספר השגיאות שבוצעו, על ידי כפות שמאל או על ידי כפות ימין בנפרד, על ידי צפייה בסרטונים במצב הילוך איטי. כדי להרדים את העכבר, להזריק תערובת של קטמין וקסילזין intraperitoneally.ברגע שהעכבר מורדם לחלוטין, פותחים את בית החזה בחומר כירורגי, וחושפים את הלב. לאחר מכן הכנס מחט קצה שטוחה, לתוך החדר השמאלי של הלב. על ידי צימוד המחט לצינור, מנקבים 50 מיליליטרים של מלח חיץ פוספט, בקצב של 9.5 מיליליטר לדקה, באמצעות משאבה פריסטלטית.הסר את המוח באמצעות מספריים ופינצטה, ולאחר מכן תקן אותו על ידי טבילה, בחמישה מיליליטרים של 4% paraformaldehyde, במי מלח מאגר פוספט. לאחר מכן, לשים את המוח הקבוע, ב 15 מיליליטר של 30% סוכרוז במשך 48 שעות. לאחר מכן מכניסים את המוח לארבעה מיליליטרים של תמיסת ההגנה על ההקפאה, ומצילים את המוח ב-80 מעלות, או משתמשים בו מיד בשלב הבא.כדי להשיג פרוסות סטריאליות, חותכים את המוח למקטעים בעובי 40 מיקרומטר, החל מ-1.34 מ"מ, וסיימו ב-0.26 מ"מ. קוצרים כל פרוסה בקריוטובה של שני מיליליטרים, לפי סדר אנטרופוסטריור. כדי לבצע ניתוח אימונוהיסטוכימי ואימונופלואורסצנטי בסטריאטום, בחר חמישה מקטעים סטריאליים קורונליים שנלקחו במרווחי זמן אחידים, המכסים את כל היקף הרוסטרוקואודלים של הגרעין.כדי לאמת את המסירה הנכונה של וקטורים נגיפיים בתאי העצב הדופמינרגיים של המסלול הניגרוסטריאלי, הוזרקו וקטורים המקודדים GFP, בסובסטנטיה ניגרה, ו -12 שבועות לאחר מכן, הפלואורסצנציה של GFP וטירוזין הידרוקסילאז פעילות חיסונית נותחו בסובסטנטיה ניגרה וסטריאטום על ידי אימונופלואורסצנציה. הפלואורסצנציה הקשורה ל-GFP, הייתה ממוקמת אך ורק באתר ה-ipsilateral, וקולוקליזציה משמעותית עם אימונו-פעילות חיסונית של טירוזין הידרוקסילאז נצפתה הן בסובסטנטיה ניגרה והן בסטריאטום, מה שמצביע על העברה נכונה של וקטורים נגיפיים בתאי העצב הדופמינרגיים של המסלול הניגרוסטריאלי. כדי לבחון את המינון של וקטורים, קידוד סינוקלאין נדרש, כדי לגרום לביטוי יתר משמעותי של סינוקלאין אנושי המקדם ניוון עצבי של הנוירונים הדופמינרגיים הניגרליים, הוזרקו מינונים שונים של הווקטורים.ו -12 שבועות לאחר מכן, החיסון של הסינוקליין האנושי, ומידת האימונו-פעילות החיסונית של טירוזין הידרוקסילאז נבדקו במסלול הניגרוסטריאטלי. האימונו-פעילות החיסונית של הסינוקליין האנושי ניכרה, כאשר כל המינונים נבדקו בסובסטנטיה ניגרה. עם זאת, רק עכברים שקיבלו 10 עד 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר, הציגו פעילות חיסונית ניכרת של הסינוקליין האנושי, בסטריאטום.עכברים שקיבלו 10 עד 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר של וקטורים המקודדים סינוקלאין אנושי, הציגו אובדן משמעותי של נוירונים דופמינרגיים בסובסטנטיה ניגרה. למרות שעכברים שקיבלו את אותו מינון של וקטורים המקודדים GFP, הציגו רמה נמוכה של אובדן עצבי, עכברים אלה הציגו רמה נמוכה יותר באופן משמעותי של ניוון עצבי, בהשוואה לאותם עכברים המקבלים וקטורים, המקודדים את הסינוקליין האנושי. באמצעות בדיקת הקרן, הפחתה משמעותית בביצועי המנוע זוהתה באופן בלעדי באותם עכברים, וקיבלה 10 עד 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר של וקטורים המקודדים את הסינוקליין האנושי, כאשר משווים את מספר השגיאות שנעשו על ידי הכפות הימניות והשמאליות, או כאשר משווים את המספר הכולל של השגיאות, של עכברים המקבלים וקטורים המקודדים את הסינוקליין האנושי, עם העכברים האלה שמקבלים את וקטור הבקרה.כדי להגדיר את הופעת ביטוי הסינוקליין האנושי, העכברים טופלו ב-10 עד 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר, של וקטורים המקודדים סינוקלאין אנושי, או ניתוח בושה, ומידת הביטוי של הסינוקליין האנושי נותחה ב-substantia nigra, פעם בשבוע, במהלך שבועות שניים עד חמישה לאחר הניתוח הסטריאוטקסי. התוצאות מראות כי ביטוי הסינוקליין האנושי החל להיות ניכר בשבוע החמישי לאחר הניתוח הסטריאוטקסי. כדי לקבוע את שיא ההפעלה המיקרוגליאלית, היקף התאים המבטאים רמות גבוהות של Iba1, כומת בסטריאטום של עכברים, במהלך שבועות 2-15 לאחר הניתוח.התוצאות מראות עלייה משמעותית בהפעלה המיקרוגליאלית של הצד האיפסילטרלי, בהשוואה לצד הקונטרה-צדדי של העכברים, 15 שבועות לאחר החיסון הנגיפי. מספר תאי ה-T הרגולטוריים שחדרו לתוך הניגרה המשמעותית נותח בנקודות זמן שונות, לאחר הניתוח הסטריאוטקסי על ידי אימונופלואורסצנציה, ולאחר מכן תצפית מיקרוסקופיה קונפוקלית. שיא חדירת תאי T רגולטוריים לתוך הסובסטנטיה ניגרה נצפה בשבוע 11 לאחר הניתוח.מודל העכברים של ניוון עצבי שנותח כאן, מייצג מודל שימושי לחקר מספרים של מעורבות היבטי מפתח בפתופיזיולוגיה של מחלת פרקינסון. מנגנוני המעורבות המעורבים בפתולוגיה של הסינוקליין, בהפעלה מיקרוגליאלית, במעורבות של מערכת החיסון ההיקפית, בדלקת עצבית ובמנגנוני הניוון העצבי מינון תקין של וקטור ויראלי הקשור לאדנו, תת-סוג 5 המקודד סינוקלאין אנושי כדי לגרום לניוון עצבי, דלקת עצבית, חדירה לתאי T ופגיעה מוטורית, הוא 10 עד 10 גנומים נגיפיים לכל עכבר. מחקר זה מראה, כי חמישה שבועות לאחר הניתוח הסטריאוטקסי, מהווה נקודת זמן מרכזית, שבה ביטוי הסינוקלין האנושי כבר ניכר, אך בהיעדר פגיעה מוטורית במודל חייתי זה.לפיכך, נקודת זמן זו, מייצגת נקודה זמנית מעניינת, להתחיל את מתן הטיפולים הניסוייים המותאמים לעצירת ההתקדמות של דלקת עצבית וניוון עצבי. נקודת הזמן המתאימה ביותר לניתוח דלקת עצבית במודל חייתי זה, היא בשבוע 15 לאחר ניתוח סטריאוטקסי. בעוד נקודת זמן נכונה לניתוח חדירת תאי T למערכת העצבים המרכזית.נראה שהוא בשבוע 11 לאחר חיסון וקטור ויראלי.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Analyzing the Parkinson's Disease Mouse Model Induced by Adeno-associated Viral Vectors Encoding Human &#945;-Synuclein

Intracranial Injection of Adeno-associated Viral Vectors

הזרקה תוך גולגולתי של Adeno הקשורים וקטורים ויראליים

Intracranial injection of viral vectors engineered to express a fluorescent protein is a versatile labeling technique for visualization of specific ...

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

איתור של הפלאק מדלקת עצבים במודל מחלת אלצהיימר עכבר

Alzheimer's disease (AD) is the most common neurodegenerative disorder leading to dementia. Neuritic plaque formation is one of the pathological hallmarks ...

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

שיטות כדי לאפיין ספונטניות ומושרות רתיעת תנועה במודל של מחלת פרקינסון מושרה Rotenone של<em&gt; דרוזופילה</em

Parkinson&#8217;s disease is a neurodegenerative disorder that results from the degeneration of dopaminergic neurons in the central nervous system, ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

הזרקת נגיפי Intracerebroventricular של ילודים עכבר המוח לתמרה עצבית מתמשכת ונרחבת

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Production, Purification, and Quality Control for Adeno-associated Virus-based Vectors

הפקה, טיהור, ובקרת איכות על Adeno-הקשורים וקטורים מבוסס-וירוס

Gene delivery tools based on adeno-associated viruses (AAVs) are a popular choice for the delivery of transgenes to the central nervous system (CNS), ...

Convection Enhanced Delivery of Optogenetic Adeno-associated Viral Vector to the Cortex of Rhesus Macaque Under Guidance of Online MRI Images

הסעה משופר משלוח אלקטרואופטיקה Adeno-וקטור ויראלי הקשורים לקליפת מקוק רזוס תחת הדרכה של תמונות MRI מקוונות

In non-human primate (NHP) optogenetics, infecting large cortical areas with viral vectors is often a difficult and time-consuming task. Here, we ...

In Vivo Direct Reprogramming of Resident Glial Cells into Interneurons by Intracerebral Injection of Viral Vectors

בתוך Vivo ישיר של תאים Glial תושב לתוך Interneurons על ידי הזרקת גרם של וקטורים ויראלי

Converting resident glia in the brain into functional and subtype-specific neurons in vivo provides a step forward towards the development of alternative ...

Cochlear Surface Preparation in the Adult Mouse

הכנה לפני שבלול בעכבר למבוגרים

Auditory processing in the cochlea depends on the integrity of the mechanosensory hair cells. Over a lifetime, hearing loss can be acquired from numerous ...

Applying the RatWalker System for Gait Analysis in a Genetic Rat Model of Parkinson's Disease

יישום מערכת RatWalker לניתוח הליכה במודל חולדה גנטי של מחלת פרקינסון

Parkinson's disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder caused by the loss of dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars ...

The 6-hydroxydopamine Rat Model of Parkinson's Disease

מודל עכברוש 6-הידרוקסידופמין של מחלת פרקינסון

Motor symptoms of Parkinson's disease (PD)-bradykinesia, akinesia, and tremor at rest-are consequences of the neurodegeneration of dopaminergic neurons in ...