Name: using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes
Uploaded: 2022-03-04T12:30:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل المعهد الوطني للسكري ومنح أمراض الجهاز الهضمي والكلى RO1DK091623 و P30DK079312 (إلى B.A.M.). نشكر الموظفين في مرفق الجينوم الأساسي التابع لمرفق دعم تكنولوجيا الأبحاث (RTSF) في جامعة ولاية ميشيغان لإجراء تحليل الأوتار النانوية.

<ol>
	<li>Dunn, K. W., Molitoris, B. A., Dagher, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Indiana+O'Brien+center+for+advanced+renal+microscopic+analysis.">The Indiana O'Brien center for advanced renal microscopic analysis.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 320 (5), 671-682 (2021).</li><li>Dunn, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+the+kidney+of+living+animals+using+multicolor+two-photon+microscopy.">Functional studies of the kidney of living animals using multicolor two-photon microscopy.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 283 (3), 905-916 (2002).</li><li>Eisenbach, G., Liew, J., Boylan, J., Manz, N., Muir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+angiotensin+on+the+filtration+of+protein+in+the+rat+kidney:+a+micropuncture+study.">Effect of angiotensin on the filtration of protein in the rat kidney: a micropuncture study.</a> Kidney International. 8 (2), 80-87 (1975).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+multiphoton+microscopy+as+a+tool+for+studying+renal+physiology+and+pathophysiology.">Intravital multiphoton microscopy as a tool for studying renal physiology and pathophysiology.</a> Methods. 128, 20-32 (2017).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A., Palygin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+imaging+and+microscopy+for+dynamic+processes+in+rats.">Fluorescent imaging and microscopy for dynamic processes in rats.</a> Methods in Molecular Biology. 2018, 151-175 (2019).</li><li>Huber, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+the+functional+podocin-nephrin+complex:+mutations+in+the+NPHS2+gene+disrupt+nephrin+targeting+to+lipid+raft+microdomains.">Molecular basis of the functional podocin-nephrin complex: mutations in the NPHS2 gene disrupt nephrin targeting to lipid raft microdomains.</a> Human Molecular Genetics. 12 (24), 3397-3405 (2003).</li><li>Kawachi, H., Koike, H., Kurihara, H., Sakai, T., Shimizu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+rat+homologue+of+podocin:+expression+in+proteinuric+states+and+in+developing+glomeruli.">Cloning of rat homologue of podocin: expression in proteinuric states and in developing glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology JASN. 14 (1), 46-56 (2003).</li><li>Roselli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+filtration+defect+and+severe+renal+disease+in+podocin-deficient+mice.">Early glomerular filtration defect and severe renal disease in podocin-deficient mice.</a> Molecular and Cellular Biology. 24 (2), 550-560 (2004).</li><li>Schie&#223;l, I., Bardehle, S., Castrop, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superficial+nephrons+in+BALB/c+and+C57BL/6+mice+facilitate+in+vivo+multiphoton+microscopy+of+the+kidney.">Superficial nephrons in BALB/c and C57BL/6 mice facilitate in vivo multiphoton microscopy of the kidney.</a> PloS One. 8 (1), 52499 (2013).</li><li>Chevalier, R., Forbes, M., Thornhill, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureteral+obstruction+as+a+model+of+renal+interstitial+fibrosis+and+obstructive+nephropathy.">Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy.</a> Kidney International. 75 (11), 1145-1152 (2009).</li><li>Forbes, M., Thornhill, B., Chevalier, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+tubular+injury+and+rapid+formation+of+atubular+glomeruli+in+mice+with+unilateral+ureteral+obstruction:+a+new+look+at+an+old+model.">Proximal tubular injury and rapid formation of atubular glomeruli in mice with unilateral ureteral obstruction: a new look at an old model.</a> American Journal of Physiology. Renal physiology. 301 (1), 110-117 (2011).</li><li>Yang, H. -. C., Zuo, Y., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+chronic+kidney+disease.">Models of chronic kidney disease.</a> Drug Discovery Today. Disease Models. 7 (1-2), 13-19 (2010).</li><li>Hackl, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+fate+of+glomerular+epithelial+cells+in+vivo+using+serial+multiphoton+imaging+in+new+mouse+models+with+fluorescent+lineage+tags.">Tracking the fate of glomerular epithelial cells in vivo using serial multiphoton imaging in new mouse models with fluorescent lineage tags.</a> Nature Medicine. 19 (12), 1661-1666 (2013).</li><li>Kitching, A., Kuligowski, M., Hickey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+recruitment+to+glomeruli+in+mice+using+intravital+microscopy.">In vivo imaging of leukocyte recruitment to glomeruli in mice using intravital microscopy.</a> Methods in Molecular Biology. 466, 109-117 (2009).</li><li>Savin, V. J., Terreros, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filtration+in+single+isolated+mammalian+glomeruli.">Filtration in single isolated mammalian glomeruli.</a> Kidney International. 20 (2), 188-197 (1981).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction:+twenty-something+years+on.">The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on.</a> Nature Protocols. 1 (2), 581-585 (2006).</li><li>El Karoui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+drives+proteinuria-induced+kidney+lesions+via+Lipocalin+2.">Endoplasmic reticulum stress drives proteinuria-induced kidney lesions via Lipocalin 2.</a> Nature Communications. 7, 10330 (2016).</li><li>VA, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+measurements+of+gene+signatures+in+different+analytes+using+the+Nanostring+nCounter+Assay+System.">Multiplexed measurements of gene signatures in different analytes using the Nanostring nCounter Assay System.</a> BMC Research Notes. 2, 80 (2009).</li><li>Springer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+transcriptome+and+bioinformatics+approach+to+unilateral+ureteral+obstructive+uropathy+in+the+fetal+sheep+model.">A combined transcriptome and bioinformatics approach to unilateral ureteral obstructive uropathy in the fetal sheep model.</a> The Journal of Urology. 187 (2), 751-756 (2012).</li><li>Braun, F., Becker, J., Brinkkoetter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+or+let+die:+Is+there+any+cell+death+in+podocytes.">Live or let die: Is there any cell death in podocytes.</a> Seminars in Nephrology. 36 (3), 208-219 (2016).</li><li>Kim, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+angiopoietin-1+in+kidney+disease.">The role of angiopoietin-1 in kidney disease.</a> Electrolyte &amp; Blood Pressure E &amp; BP. 6 (1), 22-26 (2008).</li><li>Liu, F., Zhuang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+receptor+tyrosine+kinase+signaling+in+renal+fibrosis.">Role of receptor tyrosine kinase signaling in renal fibrosis.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (5), 972 (2016).</li><li>Martini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+biology+identifies+shared+transcriptional+networks+in+CKD.">Integrative biology identifies shared transcriptional networks in CKD.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 25 (11), 2559-2572 (2014).</li><li>M&#252;hlberger, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+bioinformatics+analysis+of+proteins+associated+with+the+cardiorenal+syndrome.">Integrative bioinformatics analysis of proteins associated with the cardiorenal syndrome.</a> International Journal of Nephrology. 2011, 809378 (2010).</li><li>Satirapoj, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periostin:+novel+tissue+and+urinary+biomarker+of+progressive+renal+injury+induces+a+coordinated+mesenchymal+phenotype+in+tubular+cells.">Periostin: novel tissue and urinary biomarker of progressive renal injury induces a coordinated mesenchymal phenotype in tubular cells.</a> Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (7), 2702-2711 (2012).</li><li>Fengxin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numb+contributes+to+renal+fibrosis+by+promoting+tubular+epithelial+cell+cycle+arrest+at+G2/M.">Numb contributes to renal fibrosis by promoting tubular epithelial cell cycle arrest at G2/M.</a> Oncotarget. 7 (18), 25604-25619 (2016).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+glomerular+permeability+of+fluorescent+macromolecules+using+2-photon+microscopy+in+Munich+Wistar+rats.">Quantifying glomerular permeability of fluorescent macromolecules using 2-photon microscopy in Munich Wistar rats.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (74), e50052 (2013).</li><li>Russo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+tubular+uptake+explains+albuminuria+in+early+diabetic+nephropathy.">Impaired tubular uptake explains albuminuria in early diabetic nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (3), 489-494 (2009).</li><li>Russo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+kidney+filters+nephrotic+levels+of+albumin+retrieved+by+proximal+tubule+cells:+retrieval+is+disrupted+in+nephrotic+states.">The normal kidney filters nephrotic levels of albumin retrieved by proximal tubule cells: retrieval is disrupted in nephrotic states.</a> Kidney International. 71 (6), 504-513 (2007).</li><li>Sandoval, R. M., Wang, E., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+the+bottom+and+using+it:+Offsets+and+sensitivity+in+the+detection+of+low+intensity+values+in+vivo+with+2-photon+microscopy.">Finding the bottom and using it: Offsets and sensitivity in the detection of low intensity values in vivo with 2-photon microscopy.</a> Intravital. 2 (1), 23674 (2014).</li><li>Kuligowski, M. P., Kitching, A. R., Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+recruitment+to+the+inflamed+glomerulus:+a+critical+role+for+platelet-derived+P-selectin+in+the+absence+of+rolling.">Leukocyte recruitment to the inflamed glomerulus: a critical role for platelet-derived P-selectin in the absence of rolling.</a> Journal of Immunology. 176 (11), 6991-6999 (2006).</li><li>Devi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+reveals+a+new+leukocyte+recruitment+paradigm+in+the+glomerulus.">Multiphoton imaging reveals a new leukocyte recruitment paradigm in the glomerulus.</a> Nature Medicine. 19 (1), 107-112 (2013).</li><li>Finsterbusch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patrolling+monocytes+promote+intravascular+neutrophil+activation+and+glomerular+injury+in+the+acutely+inflamed+glomerulus.">Patrolling monocytes promote intravascular neutrophil activation and glomerular injury in the acutely inflamed glomerulus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (35), 5172-5181 (2016).</li><li>Shroff, U. N., Gyarmati, G., Izuhara, A., Deepak, S., Peti-Peterdi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+view+of+macula+densa+cell+protein+synthesis.">A new view of macula densa cell protein synthesis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 321 (6), 689-704 (2021).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح.

شهدت دراسة فسيولوجيا الكبيبات العديد من الأساليب المختلفة ، وأبرزها استخدام البزل الدقيق ، ونضح الكبيبات المعزولة ، والفحص المجهري. سمح توافر الكبيبات السطحية في فئران ميونيخ ويستار ، سلالات فروتر وسيمونسن ، بإجراء دراسات ديناميكية في الجسم الحي . إحدى الملاحظات المهمة للباحثين الذين يتبنون هذه التقنية هي الحاجة إلى تعيين معلمات اكتساب للحفاظ على صور متسقة بين الدراسات ، بحيث يظل التألق الذاتي في الأنسجة ثابتا. إن استخدام مكعب الفلوريسئين / الرودامين ثنائي التمرير وضبط إعدادات الكسب على قنوات الانبعاث الخضراء والحمراء لتقليد ما يتم رؤيته من خلال العدسات على شاشة الكمبيوتر سيضمن توقيعا لونيا متسقا في التألق الذاتي حتى بين أنظمة المجهر المختلفة.
تم استخدام سلالة فرومتر على نطاق واسع لأنها تحتوي على عدد أقل من الكبيبات الكلية ، ~ 75٪ طبيعية ، ويصاب الذكور تلقائيا بارتفاع ضغط الدم في حوالي 12 أسبوعا من العمر ، مع بيلة بروتينية تدريجية وتصلب كبيبي بؤري لاحق ، يموت في النهاية بسبب الفشل الكلوي12. إن استخدام هذه الفئران وإضافة الفحص المجهري 2-الفوتون مع انخفاض السمية الضوئية ، وتحسين عمق الاختراق ، والقدرة على عرض مجسات الفلورسنت المتعددة في وقت واحد مهد الطريق لاكتشافات جديدة1،4،5. مع تطور أجهزة وبرامج الكمبيوتر ، أصبحت البيانات الكمية الآن هي المعيار لجميع مختبرات الفوتون 2. تم تطوير تقنيات كمية متعددة وتطبيقها على العمليات الكبيبية والنبيبية القريبة والأوعية الدموية والخلالية في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية1،4،5،27،28،29،30.
أضافت مرافق توليد الفئران المعدلة وراثيا بعدا جديدا لدراسة فسيولوجيا الكلى وعلم الأمراض ، وكانت مسألة وقت فقط حتى تم دمج ذلك مع الفحص المجهري 2-فوتون لتحديد أهمية منتجات جينية محددة في بنية الكلى ووظيفتها. ومع ذلك ، تقع كبيبات الماوس ، باستثناء الفئران الصغيرة جدا ، على بعد أكثر من 100 ميكرومتر من سطح الكلى9. من الأفضل إجراء الفحص المجهري ثنائي الفوتون على عمق يتراوح بين 20 و 50 ميكرومتر كدقة ، وتتضاءل شدة التألق بسرعة بعد ذلك بسبب تشتت الضوء المنبعث والامتصاص من التفاعل مع الهيموجلوبين. لذلك ، كان من الضروري حث الكبيبات السطحية. النهج المستخدم بشكل شائع هو نموذج عرقلة أحادية مطولة لمدة 12 أسبوعا. وبما أن هذه النماذج لا تسمح بتحديد خط الأساس، فإن فصل آثار UUO عن العملية قيد الدراسة غير ممكن.
باستخدام فئران MWF ، يمكن للمرء مقارنة دالة الكبيبات الأساسية مع تلك التالية UUO. من المعروف أن نموذج UUO هذا يحفز الالتهاب ومعدل التليف السريع وقد تم استخدامه لدراسة مرض الكلى المزمن والتليف10،11،12. كما هو متوقع ، كانت هناك زيادة في الكبيبات السطحية في كل من الفئران MWF و SD. علاوة على ذلك ، كانت النتائج الكمية التي تم الحصول عليها بعد UUO لفئران MWF و SD قابلة للمقارنة للغاية. تم الإبلاغ سابقا عن انخفاض تدفق الدم المسجل هنا مقارنة البيانات المجهرية بعد UUO ببيانات البزل الدقيق3. كان من المعروف أيضا أن الأنسجة الأنبوبية والخلالية قد تغيرت بشكل ملحوظ ، وأن PTs في الغالب غير وظيفية ، كما هو مذكور هنا ، مع نقص في الألبومين الخلوي. تظهر الدراسات في الشكل 2 والشكل 3 انخفاضا كبيرا في معدل تدفق كرات الدم الحمراء في الشعيرات الدموية الكبيبية والمحيطة بالأنبوب وتعزيز التصاق كرات الدم البيضاء. من المحتمل أن يكون الانخفاض في التدفق بسبب انسداد الشعيرات الدموية من التصاق WBC وتشكيلات الرولو.
لمزيد من تقييم الالتهاب ، قمنا بقياس نفاذية الألبومين وأظهرنا أنها تزيد عشرة أضعاف. بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت الكبيبات المعزولة أن تعبير mRNA زاد للعديد من الجينات المعروفة سابقا بأنها تزداد في التهاب الكلى في مجموعة متنوعة من حالات أمراض الكلى17،19،20،21،22،23،24،25،26 . كانت الزيادات في كثافة سطح الكبيبات ونفاذية الألبومين تقدمية ، كما هو موضح في بيانات UUO لمدة 12 أسبوعا. البيانات الحالية هي الأولى التي تظهر بشكل مباشر أن الكبيبات تتعرض لأضرار هيكلية كبيرة والتهاب وتغيرات جزيئية في نموذج UUO. تتوافق النتائج مع دراسة سابقة لأنسجة الكلى الكاملة التي حللت خزعات كلى الأغنام بعد UUO ، ووجدت علامات التهاب متعددة مرتفعة19. تشير النتائج الحالية إلى وجود التهاب ملحوظ داخل الكبيبات ، وكان معروفا سابقا فقط بالأنسجة القشرية.
تختلف البيانات الحالية عن الدراسات السابقة في الفئران حيث لم يتم العثور على تغييرات في تعبير جزيء الالتصاق ، وترسب المكملات ، وتسلل العدلات بين 12 أسبوعا بعد استسقاء الكلية والكبيبات الطبيعية31. بالإضافة إلى ذلك ، استخدم مختبر هيكي نموذج UUO لمدة 12 أسبوعا لدراسة ردود الفعل المناعية في كبيبات الفئران. لم يجدوا أي اختلافات في تسلل العدلات بين كبيبات الفئران البالغة من العمر أربعة أسابيع والكبيبات التاليةللانسداد 32,33. أجريت هذه الدراسات اللاحقة بعد تصريف حوض الكلى المسدودة من البول. لم نفعل ذلك لأننا أردنا تحديد تأثير UUO على وظيفة الكبيبات كما سيكون في الجسم الحي ، دون إزالة السائل المسبب للانسداد بشكل مصطنع. أخيرا ، يتم استبدال استخدام UUO في الفئران بتصوير الكبيبات عند أكثر من 100 ميكرومتر تحت السطح. في حين أن ذلك ممكن ، هناك مقايضة في الدقة والشدة ، وكلاهما ينخفض بشكل كبير مع تجاوز واحد 50 ميكرومتر34.
النتائج المقدمة ليست مفاجئة إذا قام المرء بتجميع البيانات من الأدبيات الموجودة حول التغيرات النسيجية ، وتشكيل الكبيبات الأنبوبية ، والالتهاب ، والتليف ، وديناميكا الدم10،11،12. تشير البيانات المقدمة ، بما في ذلك التصاق WBC ، وتشكيلات الرولو ، وعلامات الالتهاب الجزيئي الكبيبي ، وزيادة نفاذية الألبومين ، إلى الالتهاب الشامل المستمر في نموذج UUO هذا حتى في خمسة أسابيع وموجود أيضا في اثني عشر أسبوعا. من الواضح أن UUO المزمن ليس حالة فسيولوجية ، واستخدام UUO للحث على الكبيبات السطحية يمثل نموذجا للإصابة. يمكن دراسة فئران MWF ، التي تحتوي على كبيبات سطحية في ظل الظروف الفسيولوجية ، طوليا عند حدوث الإصابة. من الممكن توليد فئران معدلة وراثيا ، ويقوم العديد من الباحثين بإنشائها باستخدام أجهزة استشعار حيوية لطرح أسئلة محددة. على وجه الخصوص ، تمتلك كلية الطب في ويسكونسن الآن مستعمرة من الفئران MWF وصنعت الفئران المعدلة وراثيا لغرض دراسة العمليات الكبيبية في ظل الظروف الفسيولوجية والمرضية. توفر فئران MWF هذه فرصة رائعة لدراسة العمليات الكبيبية في الفئران الطبيعية والمريضة والمعدلة وراثيا.

كان فهم العمليات الكبيبية ، وخاصة بيولوجيا الخلايا الخيطية ، هدفا لأكثر من 50 عاما. لعبت فئران ميونيخ ويستار ذات الكبيبات السطحية دورا مركزيا في هذه الدراسات ، بما في ذلك دراسات البزل الدقيق ، لفهم العديد من جوانب العمليات الفسيولوجية والمرضية1،2،3. كان استخدام الفحص المجهري لدراسة المكونات الكبيبية داخل الجسم محدودا بسبب تأثيرات السمية الضوئية حتى ظهور الفحص المجهري ثنائي الفوتون الذي قلل من هذا التعرض السام وزاد من عمق الاختراق 1,2. جنبا إلى جنب مع التقدم السريع في أجهزة الكمبيوتر والبرمجيات ، وقد سمح هذا لدراسات ثلاثية الأبعاد (3D) وأربعة الأبعاد (الوقت) لساعات في إعداد واحد1،4،5.
إن القياس الكمي لتدفق الدم الشعري الكبيبي ، وتضيق الأوعية والتوسع استجابة للأدوية ، والنفاذية ، وتأثيرات الشحنة على النفاذية والالتهاب ليست سوى بعض العمليات الكبيبية التي تمت دراستها. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن تحديد الجزء S1 من النبيب القريب ، ويمكن تحديد الاختلافات في سلوك الظهارة الأنبوبية S1 و S2 1,4. أدت الدراسات التي أجريت على الفئران ، خاصة مع التوافر العالمي للمرافق المعدلة وراثيا للفئران ، إلى تقدم سريع في فهم البيولوجيا الجزيئية لعمليات أمراض الكبيبات. البروتينات الفردية هي المسؤولة عن الخلل الكبيبي في دراسات خروج المغلوب ، وخاصة فيما يتعلق ببروتينية6،7،8. ومع ذلك ، فإن استخدام نماذج الفئران لدراسات التصوير الكبيبي كان محدودا لأن الكبيبات أكثر من 100 ميكرومتر تحت السطح في السلالات العديدة التي تمت دراستها9.
وقد أدى ذلك إلى قيام الباحثين بتطوير واستخدام نماذج الفئران مما أدى إلى كبيبات سطحية يمكن دراستها. النموذج الأكثر شيوعا هو استخدام UUOالكامل 10،11،12. في نهاية فترة UUO الممتدة ، هناك العديد من الكبيبات السطحية في كلى الفئران التي يمكن دراستها وقد تمت دراستها13,14. لم تكن هناك دراسة أساسية أو مراقبة في دراسات الفئران هذه لتحديد آثار UUO المطولة على بيولوجيا الكبيبات. نظرا لأن هذا نموذج شديد وطويل الأمد للإصابة مما يؤدي إلى التليف السريع والتدمير القشري10،11،12 ، فقد افترضنا أنه ستكون هناك تأثيرات على العمليات الكبيبية ووظيفتها. للإجابة على هذا السؤال ، تم استخدام فئران ميونيخ Wistar Fromter (MWF) مع الكبيبات السطحية لدراسة معلمات التحكم / خط الأساس ، وتمت مقارنة النتيجة الأساسية مع الدراسات الكبيبية في الفئران MWF بعد خمسة أسابيع من UUO. درسنا أيضا فئران Sprague Dawley (SD) التي لا تحتوي على كبيبات سطحية بعد UUO. تشير النتائج إلى أن 5 أسابيع من UUO في الفئران MWF و SD تزيد بالفعل من عدد الكبيبات السطحية. ومع ذلك ، كانت هذه الكبيبات غير طبيعية مع تغيرات ملحوظة في تدفق الدم الكبيبي ، والالتهاب ، ونفاذية الجزيئات الكبيرة وحجمها.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>70 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CA Micro scissors Model 1C300</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handling Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kelly Hemostatic Forceps (straight)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat#72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Dive SP-8 Multi-Photon Inverted Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Note: Version 7.1r1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaiTai DeepSee titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Dissecting Scissors</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 78180-1C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph Image processing Software</td>
			<td>Molecular Dynamics</td>
			<td>Cat# 78266-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corportation</td>
			<td>2007 version</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RNA Assay Kit</td>
			<td>Invitrogen/ThermoFisher</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reptitherm Undertank Heater</td>
			<td>Zoomed</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy MinElute Cleanup Kit (Spin columns)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strate-Line Autoclave Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 11-889-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRI Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willco-dish Coverslip Bottom Dishes (50 mm/40 mm coverslip)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 70665-07</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes

لا يزال تطبيق طرق الفحص المجهري الجديدة على نماذج الأمراض الحيوانية المناسبة لاستكشاف علم وظائف الأعضاء الديناميكي للكلية يمثل تحديا. توفر الفئران ذات الكبيبات السطحية فرصة فريدة للتحقيق في العمليات الفسيولوجية والفيزيولوجية المرضية باستخدام الفحص المجهري 2-الفوتون داخل الجسم. القياس الكمي لتدفق الدم الشعري الكبيبي وتضيق الأوعية والتوسيع استجابة للأدوية والنفاذية والالتهاب ليست سوى بعض العمليات التي يمكن دراستها. بالإضافة إلى ذلك ، توفر الفئران المحورة وراثيا ، أي الخلايا المحورة وراثيا الموسومة بأصباغ الفلورسنت وغيرها من مناهج العلامات الحيوية الجزيئية ، دقة متزايدة لمراقبة تفاعلات البروتين والبروتين وقياسها بشكل مباشر وتأثيرات التغيرات الجزيئية المحددة.
في الفئران ، التي تفتقر إلى الكبيبات السطحية بعد أربعة أسابيع من العمر ، تم استخدام انسداد الحالب من جانب واحد (UUO) لعدة أسابيع للحث على الكبيبات السطحية. نظرا لأن نموذج الحث هذا لا يسمح بإجراء دراسات أساسية ، فقد قمنا بقياس تأثيرات UUO على العمليات الكبيبية في نموذج UUO في فئران Munich Wistar Frömter (MWF) ، والتي تحتوي على كبيبات سطحية في ظل الظروف الفسيولوجية. أحدث نموذج UUO لمدة خمسة أسابيع أو أكثر تغييرات كبيرة في مورفولوجيا الكلى الإجمالية ، والأوعية الدموية الدقيقة المحيطة بالأنبوبي والكبيبي ، بالإضافة إلى بنية ووظيفة الظهارة الأنبوبية. انخفض تدفق خلايا الدم الحمراء الكبيبية والمحيطة بالأنبوب (RBC) بشكل ملحوظ (p < 0.01) ، ربما بسبب الزيادة الكبيرة في التصاق خلايا الدم البيضاء (WBCs) داخل الشعيرات الدموية الكبيبية والمحيطة بالأنابيب. ارتفع معامل الغربلة الكبيبي للألبومين من 0.015 ± 0.002 في MWFs غير المعالجة إلى 0.045 ± 0.05 في فئران UUO MWF البالغة من العمر 5 أسابيع. أدى اثنا عشر أسبوعا من UUO إلى مزيد من الزيادات في الكثافة الكبيبية السطحية ومعامل الغربلة الكبيبية (GSC) للألبومين. لم يتم إعادة امتصاص الألبومين الفلوري المصفى عبر الكبيبات بواسطة الأنابيب القريبة. تشير هذه البيانات إلى أن استخدام UUO للحث على الكبيبات السطحية يحد من القدرة على دراسة وتفسير العمليات الكبيبية الطبيعية وتغيرات المرض.

Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes

هنا ، نقدم بروتوكولا باستخدام الفحص المجهري 2-فوتون في فئران ميونيخ ويستار فروتر مع الكبيبات السطحية لتحديد آثار انسداد الحالب لفترات طويلة على ديناميكيات الكبيبات ووظيفتها.

استخدام الفحص المجهري 2-فوتون لتحديد آثار انسداد الحالب المزمن من جانب واحد على العمليات الكبيبية

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface ...

في البيانات المقدمة في هذه الدراسة تظهر الآثار الدراماتيكية لانسداد الحالب من جانب واحد على وظائف الكلى والالتهابات والتليف. يساعدنا على فهم الآليات الفيزيولوجية المرضية لانسداد الحالب من جانب واحد. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي القدرة على دراسة تفاعلات الخلية والخلية ، والأحداث تحت الخلوية ، والبنية المرتبطة بها ووظيفتها بطريقة ديناميكية داخل كلية عاملة.سيتم إجراء عملية الحالب من قبل الدكتورة سيلفيا كامبوس بيلدرباك وهي جراح في مختبرنا. للبدء ، قم بتخدير الفئران ، ثم قم بعمل شق على طول خط الوسط وحدد موقع الكلية اليسرى لفصلها عن الأعضاء البريتونية المحيطة. بعد تحديد موقع عنيق الكلى ، الذي يضم الشريان الكلوي والوريد الكلوي والحالب ، افصل الحالب دون الإضرار بالبنية الحساسة.استخدم الملقط لحلقة وربط خياطة 3-0 حول الحالب ، ثم اربط عقدة بضعة ملليمترات على جانبي العقدة الأولى لضمان انسداد كامل. بمجرد ربط الحالب ، أغلق طبقات العضلات المتتالية بعناية ، ثم أغلق البطن تماما. أغلق الجلد الخارجي بدبابيس جراحية.للتحضير الجراحي ، ضع الجرذ المخدر مع خط وصول وريدي ساكن على الجانب مع توجيه الجناح الأيسر المحلوق لأعلى بشكل مسطح ومستقيم على الطاولة. تأكد من أن الكفوف الأمامية للفأر تلمس بعضها البعض كما ينبغي أن الكفوف الخلفية. بمجرد وضع الجرذ ، اشعر بالجناح الأيسر أسفل الأضلاع مباشرة لتحسس الكلى وتحديد الوضع الطبيعي في البطن ، ثم ارسم خطا باستخدام علامة دائمة على طول منطقة الحلاقة ، مع تقسيم مركز الكلى في اتجاه من الأنف إلى الذيل.استخدم زوجا من الملقط المسنن للإمساك بالجلد ورفعه لأعلى وقرص خط العلامة الدائم بزوج من مرقئ الدم لسحق الأوعية الدموية الأساسية ومنع النزيف. كرر الإجراء لطبقة العضلات الخارجية الرقيقة لتقليل النزيف. لعمل شق نهائي لطبقة عضلات البطن الداخلية الرقيقة ، قم بجس الكلى لتقدير الحجم والموضع ورفع طبقة العضلات الداخلية بزوج من الملقط ، ثم سحق خطا يقسم الجلد فوق الكلى باستخدام مرقئ يبلغ حوالي 1/3 الحجم المقدر للكلية.مع الحفاظ على قبضة على طبقة العضلات مع ملقط ، قم بعمل شق نهائي. بعد ذلك ، استخدم ملقط في كل يد للإمساك بدهون الكلى والاحتفاظ بها في القطب السفلي من الكلى باستخدام تقنية اليد فوق اليد التي تعمل لأسفل. وجود قبضة قوية على الدهون بيد واحدة ، وسحب الدهون والضغط بلطف شديد على الكلى من خلال شق.إذا لم تمر الكلى ، فقم بتوسيع الشق بسهولة. لتحديد خلايا الدم البيضاء أو كرات الدم البيضاء الموجودة في الحلقات الشعرية ، قم بإعطاء صبغة Hoechst 33342 النووية بمعدل 8 ميكروغرام لكل كيلوغرام من وزن الفئران عبر خط وصول وريدي ساكن. على المجهر ، ضع الكلية المكشوفة على حافة الطبق مع دوران طفيف بحيث يلامس الجانب البطني من الكلى زلة الغطاء والجانب الظهري متجها بعيدا عن الحافة.لتقليل الحركة بشكل أكبر ، قم بتعبئة وسادتين شاشيتين معقمتين 2 × 2 مبللتين بمحلول ملحي على الجانب الظهري من الكلى مما يعزز ملامسة الجانب البطني من الكلى للحافة. عندما يتم وضع العينة ، انظر من خلال عدسة المجهر تحت إضاءة epifluorescence باستخدام مكعب rhodamine FITC مزدوج التمرير. إذا تم الكشف عن حركة في موضع العينة ، فقم بإجراء تعديلات طفيفة عن طريق ضبط الشاش لضمان عدم دفعه تحت الكلى.لف الجرذ قليلا حتى يكون الصدر بعيدا عن الطبق. مسح سطح الكلى باستخدام إضاءة epifluorescence ووضع علامة على مواضع الكبيبات باستخدام البرنامج المرتبط بوحدة التحكم في المرحلة الآلية. لكل قناة ملونة تحت إضاءة 2-فوتون ، خذ حجم 3D ضحل للجزء العلوي من كل كبيبة مميزة لتكون بمثابة صورة الخلفية.في خيار العرض لبرنامج التصوير ، استخدم لوحة ألوان زائفة لتصور الشدة الخافتة لمضان الخلفية للحلقات الشعرية الكبيبية. باستخدام وعاء دموي سطحي كنقطة محورية ، قم بضخ ألبومين مصل تكساس الأحمر RAP الفلوري أو TRRSA ببطء مع ملاحظة صعود وهبوط التألق بسبب التوزيع الجهازي حتى تكون الكثافة في الأوعية الدموية المحيطة بالحلقات الشعرية أقل بقليل من التشبع. بعد 10 دقائق ، احصل على وحدات تخزين 3D لجميع الكبيبات المميزة والمصورة على فترات 1 ميكرومتر.ابحث عن وعاء مناسب ، إما حلقة شعرية أو وعاء محيطي ، ثم قم بتدوير الصورة باستخدام وظيفة Rotate لأن وظيفة Line Scan في برنامج الحصول على الصور تتطلب أن يكون الوعاء عموديا. بمجرد تدوير الوعاء ووضعه بشكل مسطح ، حدد وظيفة XT في قائمة الاستحواذ وقم بإعدادها لمسح 4000 خط. ضع الخط عبر الوعاء المراد فحصه بالمستوى البؤري عند أقصى قطر للقطعة.بعد ذلك ، انقر بزر الماوس الأيسر على الصورة المركبة الملونة وحدد علامة التبويب Take Snapshot لإنشاء صورة مرجعية للمنطقة التي تم فيها إجراء مسح الخط. انقر على الفور فوق الزر "ابدأ" لالتقاط مسح خط السفينة. في وقت لاحق ، قم باستيراد مسح الخط إلى برنامج معالجة الصور لتحديد معدل تدفق RBC.ضمن القائمة المنسدلة قياس، افتح مربع الحوار إظهار إحصائيات المنطقة وحدد أداة رسم سطر واحد لرسم خط يطابق ميل ظلال RBC. بعد ملاحظة عرض الخط وارتفاعه ، استخدم معادلة لحساب السرعة ، ثم احصل على متوسط خمس عمليات حسابية للإبلاغ عن السرعة لكل مسح للخط. توسيط الكبيبة في مجال التصوير واتخاذ مجموعة بيانات ثلاثية الأبعاد تبدأ من سطح الكبيبة وتنتهي من 30 إلى 35 ميكرومتر.استخدم حجم خطوة 1 ميكرومتر في الاتجاه Z. حدد كرات الدم البيضاء من خلال مقارنة قناة Hoechst الزرقاء بقناة الألبومين الأحمر في تكساس من خلال البحث عن استبعاد الصبغة الحمراء في الحلقة الشعرية والبقعة النووية المقابلة. إذا ظهرت كرات الدم البيضاء ثابتة على ثلاثة أقسام بصرية ، فحدد الخلايا على أنها ملتصقة ، ثم أبلغ عن القيم على أنها تحدث لكل 10 أقسام بصرية من أعلى الكبيبة المأخوذة على فترات 1 ميكرومتر.تم زيادة عدد الكبيبات لكل حقل في فئران ميونيخ Wistar Fromter أو MWF في مجموعة UUO لمدة 5 أسابيع مقارنة بالفئران غير المعالجة. انتقلت فئران Sprague-Dawley ، أو فئران SD ، من عدم وجود كبيبات سطحية إلى 2.02 لكل حقل بعد خمسة أسابيع من انسداد الحالب من جانب واحد. لوحظت صور ثلاثية الأبعاد أعيد بناؤها لعرض سطح الكلى.لم ينتج عن انسداد الحالب أحادي الجانب لمدة 5 أسابيع في فئران SD مناطق تشبه الظهارة الأنبوبية الطبيعية كما هو موضح في MWF ، غير المعالجة ، وجزئيا في فئران UUO MWF لمدة 5 أسابيع. في دراسة ديناميكيات الأوعية الدموية الكلوية ، انخفض تدفق الدم الكلوي بشكل كبير في مجموعات UUO MWF لمدة 5 أسابيع ، ومجموعات SD مقارنة بالفئران غير المعالجة. انخفضت سرعة كرات الدم الحمراء داخل الحلقات الشعرية الكبيبية بشكل ملحوظ في فئران UUO MWF لمدة 5 أسابيع ، وفئران SD مقارنة بفئران MWF غير المعالجة.بالإضافة إلى ذلك ، كان لدى فئران MWF غير المعالجة عدد أقل من كرات الدم البيضاء لكل 10 أقسام بصرية من الأعلى بينما زاد العدد في 5 أسابيع UUO MWF و 5 أسابيع من فئران UUO SD. مع انسداد الحالب من جانب واحد ، لوحظت زيادة في نفاذية الألبومين. كان تراكم الألبومين داخل مساحة بومان شديدا بعد انسداد الحالب من جانب واحد.الجزء S1 endocytosis كميات كبيرة من الألبومين كما لوحظ مع الظروف الفسيولوجية في الفئران MWF غير المعالجة. لا يمكن رؤية نفس الامتصاص في الفئران MWF أو SD بعد 5 أسابيع من انسداد الحالب من جانب واحد. يمكن إجراء العديد من الطرق المختلفة مثل التصوير المتكرر لدراسة عملية بمرور الوقت ، وتثبيت منطقة معينة للتصوير ، والاستخدام اللاحق للأنسجة الثابتة لإجراء فحص مجهري عالي الدقة بالتزامن مع هذه التقنية.تعتبر هذه التقنية تقنية تخريبية. يتم تمكين المحققين من الإجابة على العديد من الأسئلة الجديدة. وبذلك، تم تقديم رؤى جديدة وتم الحصول على بيانات تغيير النماذج.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

نموذج من جانب واحد راض عنق الرحم لاصابة النخاع الشوكي باستخدام المتصادم الأفق اللانهائي

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

قياس نفاذية كبيبي الجزيئات نيون باستخدام المجهر 2 فوتون في ميونيخ فئران ويستار

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

وهناك نموذج من الفئران لا رجعة فيه وعكسها من جانب واحد الحالبي إعاقة

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Lepr<sup&gt; ديسيبل</sup&gt; نموذج الفأر من النوع 2 من مرض السكري: البنكرياس عزل جزيرة وتعيش خلية 2 فوتون التصوير من الجزر سليمة

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

Using a Laminating Technique to Perform Confocal Microscopy of the Human Sclera

باستخدام تقنية الترقق لتنفيذ متحد البؤر المجهري للالصلبة الإنسان


The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

تحليل مفيد آثار المكملات الغذائية على وظائف الأمعاء طلائي الحاجز أثناء التجريبية التهاب القولون

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

التي تقتصد في العصب منتصف الإحليلية إعاقة (نيمو) في أنثى القوارض الصغيرة

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

قياس اثار البكتيريا والمواد الكيميائية علي نفاذيه المعوية من اليجان

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a ...