Name: using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes
Uploaded: 2022-03-04T12:30:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par les subventions RO1DK091623 et P30DK079312 de l’Institut national du diabète et des maladies digestives et rénales (à B.A.M.). Nous remercions le personnel de l’installation de base en génomique de l’installation de soutien à la technologie de la recherche (RTSF) de la Michigan State University pour avoir effectué l’analyse des nanocordes.

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Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts.

L’étude de la physiologie glomérulaire a vu de nombreuses approches différentes, notamment l’utilisation de la microponction, la perfusion de glomérules isolés et la microscopie. La disponibilité de glomérules de surface chez les rats Wistar de Munich, souches de Fromter et Simonsen, a permis des études dynamiques in vivo . Une note importante pour les chercheurs qui adoptent cette technologie est la nécessité de définir des paramètres d’acquisition pour maintenir des images cohérentes entre les études, afin que l’autofluorescence dans les tissus reste cohérente. L’utilisation d’un cube d’épifluorescence fluorescéine/rhodamine à double passage et l’ajustement des paramètres de gain aux canaux d’émission verts et rouges pour imiter sur l’écran de l’ordinateur ce qui est vu à travers les oculaires assureront une signature de couleur cohérente dans l’autofluorescence, même entre différents systèmes de microscope.
La souche de Fromter a été largement utilisée car elle a un nombre réduit de glomérules totaux, ~75% normal, et les mâles développent spontanément une hypertension vers l’âge de 12 semaines, avec protéinurie progressive et sclérose glomérulaire focale subséquente, mourant finalement d’insuffisance rénale12. L’utilisation de ces rats et l’ajout de la microscopie à 2 photons avec sa phototoxicité réduite, une profondeur de pénétration améliorée et la capacité de visualiser simultanément plusieurs sondes fluorescentes ont ouvert la voie à de nouvelles découvertes 1,4,5. Avec le développement du matériel informatique et des logiciels, les données quantitatives sont maintenant la norme pour tous les laboratoires à 2 photons. De multiples techniques quantitatives ont été développées et appliquées aux processus glomérulaires, tubulaires proximaux, vasculaires et interstitiels dans des conditions physiologiques et pathologiques 1,4,5,27,28,29,30.
Les installations de génération de souris transgéniques ont ajouté une nouvelle dimension à l’étude de la physiologie et de la pathologie rénales, et ce n’était qu’une question de temps avant que cela ne soit combiné avec la microscopie à 2 photons pour délimiter davantage l’importance de produits géniques spécifiques dans la structure et la fonction rénales. Cependant, les glomérules de souris, sauf chez les souris très jeunes, sont situés à plus de 100 μm de la surface du rein9. La microscopie à deux photons est mieux entreprise à une profondeur comprise entre 20 et 50 μm comme résolution, et l’intensité de la fluorescence diminue rapidement par la suite en raison de la diffusion de la lumière émise et de l’absorption de l’interaction avec l’hémoglobine. Par conséquent, il était nécessaire d’induire des glomérules de surface. L’approche couramment utilisée est un modèle d’obstruction unilatérale prolongée pendant 12 semaines. Comme ces modèles ne permettent pas de déterminer les valeurs de référence, il n’est pas possible de séparer les effets de l’UUO du procédé étudié.
En utilisant des rats MWF, on peut comparer la fonction glomérulaire de base avec celle suivant UUO. Ce modèle UUO est connu pour induire une inflammation et un taux rapide de fibrose et a été utilisé pour étudier la MRC et la fibrose10,11,12. Comme prévu, il y a eu une augmentation des glomérules de surface chez les rats MWF et SD. De plus, les résultats quantitatifs obtenus à la suite de l’UUO pour les rats MWF et SD étaient très comparables. La réduction du débit sanguin enregistrée ici avait déjà été rapportée en comparant les données microscopiques après UUO aux données de microponction3. Il était également bien connu que l’histologie tubulaire et interstitielle est nettement altérée et que les PT sont pour la plupart non fonctionnels, comme indiqué ici, avec un manque d’endocytose à l’albumine. Les études de la figure 2 et de la figure 3 montrent une réduction spectaculaire du débit des globules rouges dans les capillaires glomérulaires et péritubulaires et une meilleure adhérence au globule blanc. Les réductions du débit sont probablement dues au blocage capillaire dû à l’adhérence WBC et aux formations de rouleaux.
Pour évaluer davantage l’inflammation, nous avons quantifié la perméabilité de l’albumine et montré qu’elle était multipliée par dix. De plus, des glomérules isolés ont montré que l’expression de l’ARNm augmentait pour de nombreux gènes précédemment connus pour être augmentés dans l’inflammation rénale dans une variété d’états de maladie rénale 17,19,20,21,22,23,24,25,26 . Les augmentations de la densité de surface glomérulaire et de la perméabilité à l’albumine étaient progressives, comme le montrent les données UUO sur 12 semaines. Les données actuelles sont les premières à montrer directement que les glomérules subissent des dommages structurels importants, une inflammation et des changements moléculaires dans le modèle UUO. Les résultats sont cohérents avec une étude antérieure sur le tissu rénal entier qui a analysé des biopsies de rein de mouton après UUO, trouvant de multiples marqueurs d’inflammation élevés19. Les résultats actuels indiquent qu’une inflammation marquée existe dans les glomérules, auparavant connus uniquement pour le tissu cortical.
Les données actuelles diffèrent des études antérieures chez la souris où aucun changement n’a été observé dans l’expression des molécules d’adhésion, le dépôt du complément et l’infiltration des neutrophiles entre les glomérules posthydronéphrotiques et normaux de 12 semaines31. De plus, le laboratoire Hickey a utilisé le modèle UUO de 12 semaines pour étudier les réactions immunitaires dans les glomérules de souris. Ils n’ont trouvé aucune différence dans l’infiltration des neutrophiles entre les glomérules de souris âgés de quatre semaines et les glomérules postobstructifs32,33. Ces études ultérieures ont été menées après que le bassin du rein obstrué ait été vidé de l’urine. Nous ne l’avons pas fait car nous voulions déterminer l’effet de l’UUO sur la fonction glomérulaire telle qu’elle serait in vivo, sans éliminer artificiellement le fluide à l’origine de l’obstruction. Enfin, l’utilisation de l’UUO chez la souris est remplacée par l’imagerie des glomérules à plus de 100 μm sous la surface. Bien que possible, il y a un compromis entre la résolution et l’intensité, les deux étant considérablement réduits lorsque l’on dépasse 50 μm34.
Les résultats présentés ne sont pas surprenants si l’on rassemble les données de la littérature existante sur les changements histologiques, la formation de glomérules atubulaires, l’inflammation, la fibrose, l’hémodynamique10,11,12. Les données présentées, y compris l’adhésion WBC, les formations de rouleaux, les marqueurs d’inflammation moléculaire glomérulaire et l’augmentation de la perméabilité à l’albumine, indiquent en outre l’inflammation étendue qui se poursuit dans ce modèle UUO même à cinq semaines et également présente à douze semaines. De toute évidence, l’UUO chronique n’est pas un état physiologique, et l’utilisation de l’UUO pour induire des glomérules de surface représente un modèle de blessure. Les rats MWF, qui ont des glomérules de surface dans des conditions physiologiques, peuvent être étudiés longitudinalement au fur et à mesure que des blessures se produisent. Il est possible de générer des rats transgéniques, et de nombreux chercheurs les créent avec des biocapteurs pour poser des questions spécifiques. En particulier, le Medical College of Wisconsin a maintenant une colonie de rats MWF et a fabriqué des rats transgéniques dans le but d’étudier les processus glomérulaires dans des conditions physiologiques et pathologiques. Ces rats MWF offrent une excellente occasion d’étudier les processus glomérulaires chez les rats normaux, malades et génétiquement modifiés.

Comprendre les processus glomérulaires, en particulier la biologie des podocytes, est un objectif depuis plus de 50 ans. Les rats Wistar de Munich avec des glomérules de surface ont joué un rôle central dans ces études, y compris les études de microponction, pour comprendre de nombreux aspects des processus physiologiques et pathologiques 1,2,3. L’utilisation de la microscopie pour étudier les composants glomérulaires par voie intravitale était limitée en raison des effets de la phototoxicité jusqu’à l’avènement de la microscopie à 2 photons qui minimisait cette exposition toxique et augmentait la profondeur de pénétration 1,2. Parallèlement aux progrès rapides du matériel informatique et des logiciels, cela a permis des études tridimensionnelles (3D) et quadridimensionnelles (temps) pendant des heures dans un seul cadre 1,4,5.
La quantification du débit sanguin capillaire glomérulaire, la vasoconstriction et la dilatation en réponse aux médicaments, la perméabilité et les effets de la charge sur la perméabilité et l’inflammation ne sont que quelques-uns des processus glomérulaires étudiés. De plus, le segment S1 du tubule proximal est identifiable, et les différences de comportement de l’épithélium tubulaire S1 et S2 peuvent être quantifiées 1,4. Des études chez la souris, en particulier avec la disponibilité universelle d’installations transgéniques chez la souris, ont conduit à des progrès rapides dans la compréhension de la biologie moléculaire des processus de maladies glomérulaires. Les protéines individuelles sont responsables de la dysfonction glomérulaire dans les études knockout, en particulier en ce qui concerne la protéinurie 6,7,8. Cependant, l’utilisation de modèles murins pour les études d’imagerie glomérulaire a été limitée car les glomérules se trouvent à plus de 100 μm sous la surface dans les nombreuses souches étudiées9.
Cela a conduit les chercheurs à développer et à utiliser des modèles murins résultant en glomérules de surface qui peuvent être étudiés. Le modèle le plus courant est l’utilisation de UUO 10,11,12 complet. À la fin de la période UUO prolongée, il existe de nombreux glomérules de surface dans les reins de souris qui peuvent être et ont été étudiés13,14. Il n’y a pas eu d’étude de base ou de contrôle dans ces études sur la souris pour déterminer les effets de l’UUO prolongée sur la biologie glomérulaire. Comme il s’agit d’un modèle grave et prolongé de blessure entraînant une fibrose rapide et une destruction corticale10,11,12, nous avons émis l’hypothèse qu’il y aurait des effets sur les processus glomérulaires et la fonction. Pour répondre à cette question, des rats Wistar Fromter de Munich (MWF) avec des glomérules de surface ont été utilisés pour étudier les paramètres de contrôle / de base, et les résultats de base ont été comparés aux études glomérulaires chez les rats MWF après cinq semaines d’UUO. Nous avons également étudié des rats Sprague Dawley (SD) qui n’ont pas de glomérules de surface après UUO. Les résultats indiquent que 5 semaines d’UUO chez les rats MWF et SD augmentent effectivement le nombre de glomérules de surface. Cependant, il s’agissait de glomérules anormaux avec des changements marqués dans le flux sanguin glomérulaire, l’inflammation, la perméabilité et la taille des macromolécules.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>70 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CA Micro scissors Model 1C300</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handling Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kelly Hemostatic Forceps (straight)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat#72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Dive SP-8 Multi-Photon Inverted Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Note: Version 7.1r1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaiTai DeepSee titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Dissecting Scissors</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 78180-1C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph Image processing Software</td>
			<td>Molecular Dynamics</td>
			<td>Cat# 78266-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corportation</td>
			<td>2007 version</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RNA Assay Kit</td>
			<td>Invitrogen/ThermoFisher</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reptitherm Undertank Heater</td>
			<td>Zoomed</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy MinElute Cleanup Kit (Spin columns)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strate-Line Autoclave Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 11-889-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRI Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willco-dish Coverslip Bottom Dishes (50 mm/40 mm coverslip)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 70665-07</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes

L’application de nouvelles méthodes de microscopie à des modèles de maladies animales appropriés pour explorer la physiologie dynamique du rein reste un défi. Les rats avec des glomérules de surface offrent une occasion unique d’étudier les processus physiologiques et physiopathologiques en utilisant la microscopie intravitale à 2 photons. La quantification du flux sanguin capillaire glomérulaire et la vasoconstriction et la dilatation en réponse aux médicaments, la perméabilité et l’inflammation ne sont que quelques-uns des processus qui peuvent être étudiés. De plus, les rats transgéniques, c’est-à-dire les podocytes marqués avec des colorants fluorescents et d’autres approches de biomarqueurs moléculaires, offrent une résolution accrue pour surveiller et quantifier directement les interactions protéine-protéine et les effets d’altérations moléculaires spécifiques.
Chez les souris, qui n’ont pas de glomérules de surface après l’âge de quatre semaines, l’obstruction urétérale unilatérale (UUO) pendant plusieurs semaines a été utilisée pour induire des glomérules de surface. Comme ce modèle d’induction ne permet pas d’études de base, nous avons quantifié les effets de l’UUO sur les processus glomérulaires dans le modèle UUO chez les rats Munich Wistar Frömter (MWF), qui ont des glomérules de surface dans des conditions physiologiques. Le modèle UUO pendant cinq semaines ou plus a induit des altérations significatives de la morphologie rénale globale, de la microvascularisation péritubulaire et glomérulaire, ainsi que de la structure et de la fonction des épithéliums tubulaires. Le flux de globules rouges (GR) glomérulaires et péritubulaires a diminué de manière significative (p < 0,01), probablement en raison de l’augmentation significative de l’adhérence des globules blancs (GB) dans les capillaires glomérulaires et péritubulaires. Le coefficient de tamisage glomérulaire de l’albumine est passé de 0,015 ± 0,002 chez les MWF non traités à 0,045 ± 0,05 chez les rats UUO MWF âgés de 5 semaines. Douze semaines d’UUO ont entraîné de nouvelles augmentations de la densité glomérulaire de surface et du coefficient de tamisage glomérulaire (GSC) pour l’albumine. L’albumine fluorescente filtrée à travers les glomérules n’a pas été réabsorbée par les tubules proximaux. Ces données suggèrent que l’utilisation de l’UUO pour induire des glomérules de surface limite la capacité d’étudier et d’interpréter les processus glomérulaires normaux et les altérations de la maladie.

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Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes

Ici, nous présentons un protocole utilisant la microscopie à 2 photons chez des rats Wistar Fromter de Munich avec des glomérules de surface pour quantifier les effets de l’obstruction urétérale prolongée sur la dynamique et la fonction glomérulaires.

Utilisation de la microscopie à 2 photons pour quantifier les effets de l’obstruction urétérale unilatérale chronique sur les processus glomérulaires

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface ...

Dans les données présentées dans cette étude montrent les effets dramatiques de l’obstruction urétérale unilatérale sur la fonction rénale, l’inflammation et la fibrose. Il nous aide à comprendre les mécanismes physiopathologiques de l’obstruction urétérale unilatérale. Le principal avantage de cette technique est la capacité d’étudier les interactions cellule-cellule, les événements subcellulaires et d’associer la structure et la fonction de manière dynamique au sein d’un rein fonctionnel.La démonstration de la procédure urétérale sera effectuée par le Dr Silvia Campos-Bilderback, chirurgien dans notre laboratoire. Pour commencer, anesthésiez le rat, puis faites une incision le long de la ligne médiane et localisez le rein gauche pour le séparer des organes péritonéaux environnants. Après avoir localisé le pédicule rénal, comprenant l’artère rénale, la veine rénale et l’uretère, séparez l’uretère sans endommager la structure délicate.Utilisez une pince pour boucler et attacher une suture 3-0 autour de l’uretère, puis nouez un nœud de quelques millimètres de chaque côté du premier nœud pour assurer une obstruction complète. Une fois l’uretère attaché, fermez soigneusement les couches musculaires successives, puis fermez complètement l’abdomen. Fermez la peau externe avec des agrafes chirurgicales.Pour la préparation chirurgicale, placer le rat anesthésié avec une ligne d’accès veineux à demeure sur le côté avec le flanc gauche rasé vers le haut et droit sur la table. Assurez-vous que les pattes avant du rat se touchent, tout comme les pattes arrière. Une fois que le rat est positionné, palper le flanc gauche juste en dessous des côtes pour palper le rein et déterminer la position naturelle dans l’abdomen, puis tracez une ligne à l’aide d’un marqueur permanent le long de la zone rasée, en divisant le centre du rein dans une orientation nez à queue.Utilisez une paire de pinces dentées pour saisir et soulever la peau vers le haut et pincez la ligne de marquage permanent avec une paire d’hémostatiques pour écraser le système vasculaire sous-jacent et prévenir les saignements. Répétez la procédure pour la fine couche musculaire externe afin de minimiser les saignements. Pour faire l’incision finale de la fine couche musculaire abdominale interne, palper le rein pour estimer la taille et la position et soulever la couche musculaire interne avec une paire de forceps, puis écraser une ligne qui coupe la peau au-dessus du rein avec les hémostatiques qui est environ 1/3 de la taille estimée du rein.Tout en maintenant la prise sur la couche musculaire avec la pince, faites l’incision finale. Ensuite, utilisez une pince dans chaque main pour saisir et maintenir la graisse rénale au pôle inférieur du rein avec une technique main sur main travaillant vers le bas. Ayant une prise ferme sur la graisse d’une main, tirez la graisse et pressez très doucement le rein à travers l’incision.Si le rein ne passe pas à travers, élargissez facilement l’incision. Pour identifier les globules blancs ou les globules blancs logés dans les anses capillaires, administrer la coloration nucléaire Hoechst 33342 à 8 microgrammes par kilogramme de poids de rat via une ligne d’accès veineux à demeure. Au microscope, placez le rein exposé contre le bord de la capsule avec une légère rotation de sorte que le côté abdominal du rein entre en contact avec la glissière de couverture et que le côté dorsal soit tourné vers l’extérieur du bord.Pour minimiser davantage les mouvements, emportez deux compresses de gaze stériles 2 par 2 humidifiées avec une solution saline contre la face dorsale du rein, renforçant ainsi le contact de la face abdominale du rein avec le bord. Lorsque l’échantillon est positionné, regardez à travers l’oculaire du microscope sous éclairage d’épifluorescence à l’aide d’un cube FITC de rhodamine à double passage. Si un mouvement est détecté dans la position de l’échantillon, faites des ajustements mineurs en ajustant la gaze pour vous assurer qu’elle ne pousse pas sous le rein.Rouler légèrement le rat pour que le thorax soit plus éloigné du plat. Balayez la surface du rein à l’aide de l’éclairage par épifluorescence et marquez les positions des glomérules à l’aide du logiciel associé au contrôleur de scène motorisé. Pour chaque canal de couleur sous éclairage à 2 photons, prenez un volume 3D peu profond de la partie supérieure de chaque glomérule marqué pour servir d’image d’arrière-plan.Dans l’option d’affichage du logiciel d’imagerie, utilisez une pseudo-palette de couleurs pour visualiser les faibles intensités de la fluorescence de fond des boucles capillaires glomérulaires. En utilisant un vaisseau sanguin superficiel comme point focal, infuser lentement l’albumine sérique fluorescente Texas Red RAP ou TRRSA tout en observant la montée et la baisse de la fluorescence due à la distribution systémique jusqu’à ce qu’une intensité dans les boucles vasculaires péritubulaires et capillaires soit juste en dessous de la saturation. Après 10 minutes, acquérir des volumes 3D pour tous les glomérules marqués et imagés à des intervalles de 1 micromètre.Trouvez un vaisseau approprié, soit une boucle capillaire ou un vaisseau péritubulaire, puis faites pivoter l’image à l’aide de la fonction Rotate, car la fonction Line Scan du logiciel d’acquisition d’images exige que le vaisseau soit perpendiculaire. Une fois le navire pivoté et couché à plat, sélectionnez la fonction XT dans le menu Acquisition et configurez-la pour balayer 4 000 lignes. Placer la ligne à travers le récipient à examiner avec le plan focal au diamètre maximal du segment.Cliquez ensuite avec le bouton gauche de la souris sur l’image composite couleur et sélectionnez l’onglet Prendre un instantané pour générer une image de référence de la zone où le balayage au trait a été effectué. Cliquez immédiatement sur le bouton Démarrer pour capturer le balayage de la ligne du navire. Plus tard, importez les balayages de ligne dans le logiciel de traitement d’image pour déterminer le débit RBC.Dans le menu déroulant Mesure, ouvrez la boîte de dialogue Afficher les statistiques de région et sélectionnez l’outil Dessin au trait unique pour tracer une ligne qui correspond à la pente des ombres RBC. Après avoir noté la largeur et la hauteur de la ligne, utilisez une équation pour calculer la vitesse, puis obtenez une moyenne de cinq calculs pour indiquer la vitesse de chaque balayage de ligne. Centrez un glomérule dans le champ d’imagerie et prenez un ensemble de données 3D commençant à la surface glomérulaire et se terminant à 30 à 35 micromètres.Utilisez une taille de pas de 1 micromètre dans la direction Z. Identifier les globules blancs en comparant le canal bleu Hoechst avec le canal d’albumine Texas Red en recherchant l’exclusion du colorant rouge dans la boucle capillaire et une coloration nucléaire correspondante. Si les globules blancs apparaissent statiques sur trois sections optiques, définissez les cellules comme étant adhérentes, puis indiquez les valeurs comme occurrence par 10 sections optiques du haut du glomérule prélevées à des intervalles de 1 micromètre.Le nombre de rats glomérulaires par champ chez les rats Wistar Fromter ou MWF de Munich a augmenté dans le groupe UUO de 5 semaines que chez les rats non traités. Les rats Sprague-Dawley, ou rats SD, sont passés de l’absence de glomérules de surface à 2,02 par champ après cinq semaines d’obstruction urétérale unilatérale. Des images reconstruites en trois dimensions ont été observées pour voir la surface rénale.L’obstruction unilatérale de l’urétale pendant 5 semaines chez les rats SD n’a pas entraîné de zones ressemblant à des épithéliums tubulaires normaux comme on l’a vu chez les rats MWF UUO, non traités et partiellement chez les rats UUO MWF de 5 semaines. Dans l’étude de la dynamique vasculaire rénale, le débit sanguin rénal a été significativement réduit dans les groupes UUO MWF et SD de 5 semaines par rapport aux rats non traités. La vitesse des globules rouges dans les boucles capillaires glomérulaires a été significativement réduite chez les rats UUO MWF et SD de 5 semaines par rapport aux rats MWF non traités.De plus, les rats MWF non traités avaient moins de globules blancs par 10 sections optiques à partir du sommet, tandis que le nombre augmentait chez les rats UUO MWF à 5 semaines et UUO SD à 5 semaines. Avec l’obstruction unilatérale de l’urétal, une augmentation de la perméabilité de l’albumine a été observée. Une accumulation d’albumine dans l’espace Bowman était intense après une obstruction unilatérale de l’urétal.L’endocytose du segment S1 de grandes quantités d’albumine observées avec des conditions physiologiques chez des rats MWF non traités. La même absorption n’a pas pu être observée chez les rats MWF ou SD après 5 semaines d’obstruction unilatérale de l’urétal. De nombreuses méthodes différentes telles que l’imagerie répétée pour étudier un processus au fil du temps, la fixation d’une zone spécifique pour l’imagerie et l’utilisation ultérieure du tissu fixe pour effectuer une microscopie à plus haute résolution peuvent être effectuées en conjonction avec cette technique.La technique est considérée comme une technologie perturbatrice. Il permet aux enquêteurs de répondre à de nombreuses nouvelles questions. Ce faisant, de nouvelles idées ont été fournies et des données sur le changement de paradigme ont été obtenues.

Research

JoVE Journal

Medicine

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