Name: using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes
Uploaded: 2022-03-04T12:30:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המכון הלאומי לסוכרת ומחלות עיכול וכליות RO1DK091623 ו- P30DK079312 (ל- B.A.M.). אנו מודים לצוות מתקן הליבה הגנומית של מתקן התמיכה בטכנולוגיית המחקר (RTSF) באוניברסיטת מישיגן סטייט על ביצוע ניתוח הננו-מיתרים.

<ol>
	<li>Dunn, K. W., Molitoris, B. A., Dagher, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Indiana+O'Brien+center+for+advanced+renal+microscopic+analysis.">The Indiana O'Brien center for advanced renal microscopic analysis.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 320 (5), 671-682 (2021).</li><li>Dunn, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+the+kidney+of+living+animals+using+multicolor+two-photon+microscopy.">Functional studies of the kidney of living animals using multicolor two-photon microscopy.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 283 (3), 905-916 (2002).</li><li>Eisenbach, G., Liew, J., Boylan, J., Manz, N., Muir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+angiotensin+on+the+filtration+of+protein+in+the+rat+kidney:+a+micropuncture+study.">Effect of angiotensin on the filtration of protein in the rat kidney: a micropuncture study.</a> Kidney International. 8 (2), 80-87 (1975).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+multiphoton+microscopy+as+a+tool+for+studying+renal+physiology+and+pathophysiology.">Intravital multiphoton microscopy as a tool for studying renal physiology and pathophysiology.</a> Methods. 128, 20-32 (2017).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A., Palygin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+imaging+and+microscopy+for+dynamic+processes+in+rats.">Fluorescent imaging and microscopy for dynamic processes in rats.</a> Methods in Molecular Biology. 2018, 151-175 (2019).</li><li>Huber, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+the+functional+podocin-nephrin+complex:+mutations+in+the+NPHS2+gene+disrupt+nephrin+targeting+to+lipid+raft+microdomains.">Molecular basis of the functional podocin-nephrin complex: mutations in the NPHS2 gene disrupt nephrin targeting to lipid raft microdomains.</a> Human Molecular Genetics. 12 (24), 3397-3405 (2003).</li><li>Kawachi, H., Koike, H., Kurihara, H., Sakai, T., Shimizu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+rat+homologue+of+podocin:+expression+in+proteinuric+states+and+in+developing+glomeruli.">Cloning of rat homologue of podocin: expression in proteinuric states and in developing glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology JASN. 14 (1), 46-56 (2003).</li><li>Roselli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+filtration+defect+and+severe+renal+disease+in+podocin-deficient+mice.">Early glomerular filtration defect and severe renal disease in podocin-deficient mice.</a> Molecular and Cellular Biology. 24 (2), 550-560 (2004).</li><li>Schie&#223;l, I., Bardehle, S., Castrop, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superficial+nephrons+in+BALB/c+and+C57BL/6+mice+facilitate+in+vivo+multiphoton+microscopy+of+the+kidney.">Superficial nephrons in BALB/c and C57BL/6 mice facilitate in vivo multiphoton microscopy of the kidney.</a> PloS One. 8 (1), 52499 (2013).</li><li>Chevalier, R., Forbes, M., Thornhill, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureteral+obstruction+as+a+model+of+renal+interstitial+fibrosis+and+obstructive+nephropathy.">Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy.</a> Kidney International. 75 (11), 1145-1152 (2009).</li><li>Forbes, M., Thornhill, B., Chevalier, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+tubular+injury+and+rapid+formation+of+atubular+glomeruli+in+mice+with+unilateral+ureteral+obstruction:+a+new+look+at+an+old+model.">Proximal tubular injury and rapid formation of atubular glomeruli in mice with unilateral ureteral obstruction: a new look at an old model.</a> American Journal of Physiology. Renal physiology. 301 (1), 110-117 (2011).</li><li>Yang, H. -. C., Zuo, Y., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+chronic+kidney+disease.">Models of chronic kidney disease.</a> Drug Discovery Today. Disease Models. 7 (1-2), 13-19 (2010).</li><li>Hackl, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+fate+of+glomerular+epithelial+cells+in+vivo+using+serial+multiphoton+imaging+in+new+mouse+models+with+fluorescent+lineage+tags.">Tracking the fate of glomerular epithelial cells in vivo using serial multiphoton imaging in new mouse models with fluorescent lineage tags.</a> Nature Medicine. 19 (12), 1661-1666 (2013).</li><li>Kitching, A., Kuligowski, M., Hickey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+recruitment+to+glomeruli+in+mice+using+intravital+microscopy.">In vivo imaging of leukocyte recruitment to glomeruli in mice using intravital microscopy.</a> Methods in Molecular Biology. 466, 109-117 (2009).</li><li>Savin, V. J., Terreros, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filtration+in+single+isolated+mammalian+glomeruli.">Filtration in single isolated mammalian glomeruli.</a> Kidney International. 20 (2), 188-197 (1981).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction:+twenty-something+years+on.">The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on.</a> Nature Protocols. 1 (2), 581-585 (2006).</li><li>El Karoui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+drives+proteinuria-induced+kidney+lesions+via+Lipocalin+2.">Endoplasmic reticulum stress drives proteinuria-induced kidney lesions via Lipocalin 2.</a> Nature Communications. 7, 10330 (2016).</li><li>VA, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+measurements+of+gene+signatures+in+different+analytes+using+the+Nanostring+nCounter+Assay+System.">Multiplexed measurements of gene signatures in different analytes using the Nanostring nCounter Assay System.</a> BMC Research Notes. 2, 80 (2009).</li><li>Springer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+transcriptome+and+bioinformatics+approach+to+unilateral+ureteral+obstructive+uropathy+in+the+fetal+sheep+model.">A combined transcriptome and bioinformatics approach to unilateral ureteral obstructive uropathy in the fetal sheep model.</a> The Journal of Urology. 187 (2), 751-756 (2012).</li><li>Braun, F., Becker, J., Brinkkoetter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+or+let+die:+Is+there+any+cell+death+in+podocytes.">Live or let die: Is there any cell death in podocytes.</a> Seminars in Nephrology. 36 (3), 208-219 (2016).</li><li>Kim, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+angiopoietin-1+in+kidney+disease.">The role of angiopoietin-1 in kidney disease.</a> Electrolyte &amp; Blood Pressure E &amp; BP. 6 (1), 22-26 (2008).</li><li>Liu, F., Zhuang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+receptor+tyrosine+kinase+signaling+in+renal+fibrosis.">Role of receptor tyrosine kinase signaling in renal fibrosis.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (5), 972 (2016).</li><li>Martini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+biology+identifies+shared+transcriptional+networks+in+CKD.">Integrative biology identifies shared transcriptional networks in CKD.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 25 (11), 2559-2572 (2014).</li><li>M&#252;hlberger, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+bioinformatics+analysis+of+proteins+associated+with+the+cardiorenal+syndrome.">Integrative bioinformatics analysis of proteins associated with the cardiorenal syndrome.</a> International Journal of Nephrology. 2011, 809378 (2010).</li><li>Satirapoj, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periostin:+novel+tissue+and+urinary+biomarker+of+progressive+renal+injury+induces+a+coordinated+mesenchymal+phenotype+in+tubular+cells.">Periostin: novel tissue and urinary biomarker of progressive renal injury induces a coordinated mesenchymal phenotype in tubular cells.</a> Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (7), 2702-2711 (2012).</li><li>Fengxin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numb+contributes+to+renal+fibrosis+by+promoting+tubular+epithelial+cell+cycle+arrest+at+G2/M.">Numb contributes to renal fibrosis by promoting tubular epithelial cell cycle arrest at G2/M.</a> Oncotarget. 7 (18), 25604-25619 (2016).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+glomerular+permeability+of+fluorescent+macromolecules+using+2-photon+microscopy+in+Munich+Wistar+rats.">Quantifying glomerular permeability of fluorescent macromolecules using 2-photon microscopy in Munich Wistar rats.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (74), e50052 (2013).</li><li>Russo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+tubular+uptake+explains+albuminuria+in+early+diabetic+nephropathy.">Impaired tubular uptake explains albuminuria in early diabetic nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (3), 489-494 (2009).</li><li>Russo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+kidney+filters+nephrotic+levels+of+albumin+retrieved+by+proximal+tubule+cells:+retrieval+is+disrupted+in+nephrotic+states.">The normal kidney filters nephrotic levels of albumin retrieved by proximal tubule cells: retrieval is disrupted in nephrotic states.</a> Kidney International. 71 (6), 504-513 (2007).</li><li>Sandoval, R. M., Wang, E., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+the+bottom+and+using+it:+Offsets+and+sensitivity+in+the+detection+of+low+intensity+values+in+vivo+with+2-photon+microscopy.">Finding the bottom and using it: Offsets and sensitivity in the detection of low intensity values in vivo with 2-photon microscopy.</a> Intravital. 2 (1), 23674 (2014).</li><li>Kuligowski, M. P., Kitching, A. R., Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+recruitment+to+the+inflamed+glomerulus:+a+critical+role+for+platelet-derived+P-selectin+in+the+absence+of+rolling.">Leukocyte recruitment to the inflamed glomerulus: a critical role for platelet-derived P-selectin in the absence of rolling.</a> Journal of Immunology. 176 (11), 6991-6999 (2006).</li><li>Devi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+reveals+a+new+leukocyte+recruitment+paradigm+in+the+glomerulus.">Multiphoton imaging reveals a new leukocyte recruitment paradigm in the glomerulus.</a> Nature Medicine. 19 (1), 107-112 (2013).</li><li>Finsterbusch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patrolling+monocytes+promote+intravascular+neutrophil+activation+and+glomerular+injury+in+the+acutely+inflamed+glomerulus.">Patrolling monocytes promote intravascular neutrophil activation and glomerular injury in the acutely inflamed glomerulus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (35), 5172-5181 (2016).</li><li>Shroff, U. N., Gyarmati, G., Izuhara, A., Deepak, S., Peti-Peterdi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+view+of+macula+densa+cell+protein+synthesis.">A new view of macula densa cell protein synthesis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 321 (6), 689-704 (2021).</li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים.

המחקר של פיזיולוגיה גלומרולרית ראה גישות רבות ושונות, בעיקר השימוש במיקרופונקטורה, פרפוזיה של גלומרולי מבודד ומיקרוסקופיה. הזמינות של גלומרולי פני השטח בחולדות ויסטאר במינכן, זני פרומטר וסימונסן, אפשרה מחקרים דינמיים in vivo . הערה חשובה אחת לחוקרים המאמצים טכנולוגיה זו היא הצורך להגדיר פרמטרים לרכישה כדי לשמור על תמונות עקביות בין המחקרים, כך שהאוטופלואורסצנציה ברקמה תישאר עקבית. שימוש בקוביית פלואורסצנט/רודמין אפיפלואורסצנטית בעלת מעבר כפול והתאמת הגדרות הרווח לתעלות הפליטה הירוקות והאדומות כדי לחקות על מסך המחשב את מה שנראה דרך העיניות יבטיחו חתימת צבע עקבית באוטופלואורסצנציה גם בין מערכות מיקרוסקופ שונות.
זן פרומטר נמצא בשימוש נרחב מכיוון שיש לו מספר מופחת של גלומרולי כולל, ~ 75% נורמלי, והזכרים מפתחים באופן ספונטני יתר לחץ דם בסביבות גיל 12 שבועות, עם פרוטאינוריה מתקדמת וטרשת גלומרולרית מוקדית לאחר מכן, ובסופו של דבר מתים מאי ספיקת כליות12. השימוש בחולדות אלה והוספת מיקרוסקופיה של 2 פוטונים עם הפוטוטוקסיות המופחתת שלה, שיפור עומק החדירה והיכולת לצפות במספר בדיקות פלואורסצנטיות בו זמנית סללו את הדרך לתגליות חדשות 1,4,5. עם התפתחות החומרה והתוכנה של המחשב, נתונים כמותיים הם כיום הסטנדרט עבור כל מעבדות 2-פוטון. טכניקות כמותיות מרובות פותחו ויושמו על תהליכים גלומרולריים, פרוקסימליים, כלי דם ותהליכים אינטרסטיציאליים בתנאים פיזיולוגיים ומחלות 1,4,5,27,28,29,30.
מתקנים לייצור עכברים מהונדסים הוסיפו ממד חדש לחקר הפיזיולוגיה והפתולוגיה של הכליות, וזה היה רק עניין של זמן עד שזה ישולב עם מיקרוסקופיה של 2 פוטונים כדי להגדיר עוד יותר את החשיבות של תוצרי גנים ספציפיים במבנה ובתפקוד הכליות. עם זאת, גלומרולי עכבר, למעט בעכברים צעירים מאוד, ממוקמים מעל 100 מיקרומטר מפני השטח של הכליה9. מיקרוסקופיה של שני פוטונים מתבצעת בצורה הטובה ביותר בעומק של בין 20 ל-50 מיקרומטר כרזולוציה, ועוצמת הפלואורסצנציה פוחתת במהירות לאחר מכן עקב פיזור אור של אור שנפלט ובליעה מאינטראקציה עם המוגלובין. לכן, היה צורך לגרום glomeruli פני השטח. הגישה הנפוצה היא מודל חסימה חד-צדדי ממושך למשך 12 שבועות. מכיוון שמודלים אלה אינם מאפשרים קביעות בסיסיות, הפרדת ההשפעות של UUO מהתהליך הנחקר אינה אפשרית.
באמצעות חולדות MWF, ניתן להשוות את הפונקציה הגלומרולרית הבסיסית עם זו שלאחר UUO. מודל UUO זה ידוע כגורם לדלקת ולקצב מהיר של פיברוזיס ושימש לחקר CKD ופיברוזיס10,11,12. כצפוי, חלה עלייה בגלומרולי פני השטח הן בחולדות MWF והן בחולדות SD. יתר על כן, התוצאות הכמותיות שהתקבלו לאחר UUO עבור חולדות MWF ו- SD היו דומות מאוד. הירידה בזרימת הדם שתועדה כאן דווחה בעבר בהשוואה בין נתונים מיקרוסקופיים בעקבות UUO לנתוני מיקרופונקטורה3. זה היה ידוע גם כי היסטולוגיה צינורית interstitial משתנה במידה ניכרת, ואת PTs הם בעיקר לא פונקציונלי, כפי שדווח כאן, עם חוסר אנדוציטוזה אלבומין. המחקרים באיור 2 ובאיור 3 מראים ירידה דרמטית בקצב זרימת ה-RBC בנימים גלומרולריים ופריטובולריים והידבקות WBC מוגברת. ההפחתה בזרימה נובעת ככל הנראה מחסימה נימית מהידבקות WBC ותצורות רולו.
כדי להעריך עוד יותר את הדלקת, כימתנו את חדירות האלבומין והראינו שהיא גדלה פי עשרה. בנוסף, גלומרולי מבודד הראה כי ביטוי mRNA עלה עבור גנים רבים שהיו ידועים בעבר כבעלי עלייה בדלקת בכליות במגוון מצבי מחלת כליות 17,19,20,21,22,23,24,25,26 . העליות בצפיפות פני השטח הגלומרולרית ובחדירות האלבומין היו הדרגתיות, כפי שמוצג בנתוני UUO של 12 שבועות. הנתונים הנוכחיים הם הראשונים שמראים באופן ישיר כי גלומרולי עובר נזק מבני משמעותי, דלקת ושינויים מולקולריים במודל UUO. התוצאות עולות בקנה אחד עם מחקר קודם של רקמת כליה שלמה שניתח ביופסיות כליות של כבשים בעקבות UUO, ומצא סמני דלקת מרובים גבוהיםב-19. התוצאות הנוכחיות מצביעות על כך שקיימת דלקת ניכרת בתוך הגלומרולי, שבעבר הייתה ידועה רק לרקמת קליפת המוח.
הנתונים הנוכחיים שונים ממחקרים קודמים בעכברים שבהם לא נמצאו שינויים בביטוי מולקולות הידבקות, תצהיר משלים וחדירת נויטרופילים בין 12 שבועות פוסט-הידרונפרוטיים לגלומרולירגיל 31. בנוסף, מעבדת היקי השתמשה במודל UUO בן 12 השבועות כדי לחקור תגובות חיסוניות בגלומרולי של עכברים. הם לא מצאו הבדלים בחדירת נויטרופילים בין גלומרולי עכבר בן ארבעה שבועות לבין גלומרולי32,33 לאחר חסימה. מחקרים מאוחרים אלה נערכו לאחר שהאגן של הכליה החסומה התרוקן משתן. לא עשינו זאת מכיוון שרצינו לקבוע את ההשפעה של UUO על תפקוד גלומרולרי כפי שהוא יהיה in vivo, מבלי להסיר באופן מלאכותי את הנוזל הגורם לחסימה. לבסוף, השימוש ב-UUO בעכברים מוחלף על ידי הדמיה של גלומרולי בעומק של יותר מ-100 מיקרומטר מתחת לפני השטח. אמנם זה אפשרי, אבל יש פשרה של רזולוציה ועוצמה, שניהם מופחתים משמעותית ככל שעוברים את ה-50 מיקרומטר34.
התוצאות המוצגות אינן מפתיעות אם מחברים יחד את הנתונים מהספרות הקיימת על שינויים היסטולוגיים, היווצרות גלומרולי אטובולרי, דלקת, פיברוזיס, המודינמיקה10,11,12. הנתונים שהוצגו, כולל הידבקות WBC, תצורות רולו, סמני דלקת מולקולריים גלומרולריים וחדירות אלבומין מוגברת, מצביעים עוד יותר על הדלקת הנרחבת שנמשכת במודל UUO זה אפילו בחמישה שבועות וגם נוכחת ב-12 שבועות. ברור ש-UUO כרוני אינו מצב פיזיולוגי, והשימוש ב-UUO כדי לגרום לגלומרולי פני השטח מייצג מודל של פציעה. חולדות MWF, שיש להן גלומרולי פני השטח בתנאים פיזיולוגיים, ניתנות לחקירה אורכית כאשר מתרחשת פציעה. אפשר ליצור חולדות מהונדסות, וחוקרים רבים יוצרים אותן עם ביוסנסורים כדי לשאול שאלות ספציפיות. בפרט, במכללה הרפואית של ויסקונסין יש כיום מושבה של חולדות MWF והיא ייצרה חולדות מהונדסות לצורך חקר תהליכים גלומרולריים בתנאים פיזיולוגיים ופתולוגיים. חולדות MWF אלה מציעות הזדמנות מצוינת לחקור תהליכים גלומרולריים בחולדות רגילות, חולות ומשתנות גנטית.

הבנת תהליכים גלומרולריים, במיוחד ביולוגיה של פודוציטים, היא מטרה כבר למעלה מ-50 שנה. חולדות Wistar ממינכן עם גלומרולי פני השטח מילאו תפקיד מרכזי במחקרים אלה, כולל מחקרי מיקרו-פונקטורה, בהבנת היבטים רבים של תהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים 1,2,3. השימוש במיקרוסקופיה לחקר רכיבים גלומרולריים באופן תוך-ויטאלי היה מוגבל בשל ההשפעות של פוטוטוקסיות עד להופעת מיקרוסקופיה של 2-פוטונים שמזערה את החשיפה הרעילה הזו והגדילה את עומק החדירה 1,2. יחד עם ההתקדמות המהירה בחומרת המחשב ובתוכנה, זה איפשר לימודים תלת-ממדיים (תלת-ממדיים) וארבע-ממדיים (זמן) במשך שעות במסגרתאחת 1,4,5.
כימות זרימת הדם הנימית הגלומרולרית, התפשטות כלי הדם וההתרחבות בתגובה לתרופות, חדירות והשפעות המטען על חדירות ודלקת הם רק חלק מהתהליכים הגלומרולריים שנחקרו. בנוסף, ניתן לזהות את קטע S1 של הצינורית הפרוקסימלית, ואת ההבדלים בהתנהגות של אפיתל צינורי S1 ו- S2 ניתן לכמת 1,4. מחקרים בעכברים, במיוחד עם הזמינות האוניברסלית של מתקנים מהונדסים לעכברים, הובילו להתקדמות מהירה בהבנת הביולוגיה המולקולרית של תהליכי מחלה גלומרולריים. חלבונים בודדים אחראים לתפקוד לקוי של גלומרולרי במחקרי נוקאאוט, במיוחד בכל הנוגע לפרוטאינוריה 6,7,8. עם זאת, השימוש במודלים של עכברים למחקרי הדמיה גלומרולרית הוגבל מכיוון שגלומרולי נמצאים יותר מ-100 מיקרומטר מתחת לפני השטח בזנים הרבים שנחקרו9.
זה הוביל חוקרים לפתח ולהשתמש במודלים של עכברים וכתוצאה מכך גלומרולי פני השטח שניתן לחקור. המודל הנפוץ ביותר הוא השימוש ב- UUOשלם 10,11,12. בתום תקופת ה-UUO המורחבת, ישנם גלומרולי פני שטח רבים בכליות עכברים שניתן לחקור13,14. לא נערך מחקר בסיס או בקרה במחקרי עכברים אלה כדי לקבוע את ההשפעות של UUO ממושך על הביולוגיה הגלומרולרית. מכיוון שמדובר במודל חמור וממושך של פגיעה וכתוצאה מכך פיברוזיס מהיר והרס קליפת המוח10,11,12, שיערנו שתהיה השפעה על תהליכים גלומרולריים ותפקודם. כדי לענות על שאלה זו, חולדות מינכן Wistar Fromter (MWF) עם גלומרולי פני השטח שימשו לחקר פרמטרים של בקרה/בסיס, והממצא הבסיסי הושווה למחקרים גלומרולריים בחולדות MWF לאחר חמישה שבועות של UUO. חקרנו גם חולדות ספראג דאולי (SD) שאין להן גלומרולי פני השטח בעקבות UUO. הממצאים מצביעים על כך ש-5 שבועות של UUO בחולדות MWF ו-SD אכן מגדילים את מספר הגלומרולי על פני השטח. עם זאת, אלה היו גלומרולי לא תקינים עם שינויים ניכרים בזרימת הדם הגלומרולרית, בדלקת ובחדירות המקרומולקולות ובגודלן.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>70 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CA Micro scissors Model 1C300</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handling Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kelly Hemostatic Forceps (straight)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat#72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Dive SP-8 Multi-Photon Inverted Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Note: Version 7.1r1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaiTai DeepSee titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Dissecting Scissors</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 78180-1C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph Image processing Software</td>
			<td>Molecular Dynamics</td>
			<td>Cat# 78266-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corportation</td>
			<td>2007 version</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RNA Assay Kit</td>
			<td>Invitrogen/ThermoFisher</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reptitherm Undertank Heater</td>
			<td>Zoomed</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy MinElute Cleanup Kit (Spin columns)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strate-Line Autoclave Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 11-889-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRI Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willco-dish Coverslip Bottom Dishes (50 mm/40 mm coverslip)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 70665-07</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes

יישום שיטות מיקרוסקופיה חדשניות למודלים מתאימים של מחלות בעלי חיים כדי לחקור את הפיזיולוגיה הדינמית של הכליה נותר אתגר. חולדות עם גלומרולי פני השטח מספקות הזדמנות ייחודית לחקור תהליכים פיזיולוגיים ופתופיזיולוגיים באמצעות מיקרוסקופיה תוך-חיונית של 2 פוטונים. כימות של זרימת הדם הנימית הגלומרולרית והתפשטות כלי הדם בתגובה לתרופות, חדירות ודלקת הם רק חלק מהתהליכים שניתן לחקור. בנוסף, חולדות מהונדסות, כלומר פודוציטים המסומנים בצבעים פלואורסצנטיים וגישות אחרות של סמנים ביולוגיים מולקולריים, מספקים רזולוציה מוגברת לניטור וכימות ישיר של אינטראקציות חלבון-חלבון והשפעות של שינויים מולקולריים ספציפיים.
בעכברים, אשר חסרים גלומרולי פני השטח לאחר ארבעה שבועות של גיל, חסימת שופכה חד צדדית (UUO) במשך מספר שבועות שימשה כדי לגרום glomeruli פני השטח. מכיוון שמודל אינדוקציה זה אינו מאפשר מחקרים בסיסיים, כימתנו את ההשפעות של UUO על תהליכים גלומרולריים במודל UUO בחולדות Wistar Frömter (MWF) במינכן, שיש להן גלומרולי פני שטח בתנאים פיזיולוגיים. מודל UUO במשך חמישה שבועות או יותר גרם לשינויים משמעותיים במורפולוגיה הכלייתית ברוטו, microvasculature peritubular ו glomerular, כמו גם את המבנה והתפקוד של אפיתליה צינורית. זרימת תאי הדם האדומים הגלומרולריים והפריטובולריים (RBC) ירדה באופן משמעותי (p < 0.01), ככל הנראה בשל העלייה המשמעותית בהיצמדות של תאי דם לבנים (WBCs) בתוך נימים גלומרולריים ופריטובולריים. מקדם הניפוי הגלומרולרי של אלבומין עלה מ-0.015 ± 0.002 ב-MWFs לא מטופלים ל-0.045 ±-0.05 בחולדות UUO MWF בנות 5 שבועות. 12 שבועות של UUO הביאו לעלייה נוספת בצפיפות הגלומרולרית של פני השטח ובמקדם הניפוי הגלומרולרי (GSC) עבור אלבומין. אלבומין פלואורסצנטי שסונן על פני הגלומרולי לא נספג מחדש על ידי הצינוריות הפרוקסימליות. נתונים אלה מצביעים על כך ששימוש ב- UUO כדי לגרום לגלומרולי פני השטח מגביל את היכולת לחקור ולפרש תהליכים גלומרולריים נורמליים ושינויים במחלות.

Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes

כאן אנו מציגים פרוטוקול המשתמש במיקרוסקופיה של 2 פוטונים בחולדות Wistar Fromter במינכן עם גלומרולי פני השטח כדי לכמת את ההשפעות של חסימת שופכה ממושכת על הדינמיקה והתפקוד של גלומרולרי.

שימוש במיקרוסקופיה של 2-פוטונים כדי לכמת את ההשפעות של חסימת שופכה חד-צדדית כרונית על תהליכים גלומרולריים

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface ...

הנתונים שהוצגו במחקר זה מראים את ההשפעות הדרמטיות של חסימת שופכה חד צדדית על תפקוד הכליות, דלקת ופיברוזיס. זה עוזר לנו להבין את המנגנונים הפתופיזיולוגיים של חסימת שופכה חד צדדית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היכולת לחקור אינטראקציות בין תאים, אירועים תת-תאיים, ולקשר מבנה ותפקוד באופן דינמי בתוך כליה מתפקדת.הדגמת הליך השופכה תיעשה על ידי ד"ר סילביה קמפוס-בילדרבק שהיא מנתחת במעבדתנו. כדי להתחיל, להרדים את החולדה, ולאחר מכן לבצע חתך לאורך קו האמצע ולאתר את הכליה השמאלית כדי להפריד אותה מאיברי הצפק שמסביב. לאחר איתור פדיקל הכליה, הכולל את עורק הכליה, וריד הכליה והשופכן, מפרידים את השופכן מבלי לפגוע במבנה העדין.השתמש מלקחיים כדי לולאה ולקשור תפר 3-0 סביב השופכן, ולאחר מכן לקשור קשר כמה מילימטרים משני צדי הקשר הראשון כדי להבטיח חסימה מוחלטת. ברגע שהשופכן קשור, סגור בזהירות את שכבות השרירים העוקבות, ולאחר מכן סגור את הבטן לחלוטין. סגור את העור החיצוני עם סיכות כירורגיות.להכנה כירורגית, הניחו את החולדה המורדמת עם קו גישה ורידי שוכן בצד כאשר האגף השמאלי המגולח פונה כלפי מעלה שטוח וישר על השולחן. ודאו שהכפות הקדמיות של החולדה נוגעות זו בזו וכך גם הכפות האחוריות. לאחר מיקום החולדה, מישוש את האגף השמאלי ממש מתחת לצלעות כדי להרגיש את הכליה ולקבוע את המיקום הטבעי בבטן, ולאחר מכן צייר קו באמצעות סמן קבוע לאורך האזור המגולח, חוצה את מרכז הכליה בכיוון האף אל הזנב.השתמש בזוג מלקחיים משוננים כדי לתפוס ולהרים את העור כלפי מעלה ולצבוט את קו הסימון הקבוע עם זוג המוסטאטים כדי לרסק את כלי הדם שמתחת ולמנוע דימום. חזור על ההליך עבור שכבת השריר החיצוני הדק כדי למזער את הדימום. כדי לבצע את החתך הסופי של שכבת שריר הבטן הפנימית הדקה, למשש את הכליה כדי להעריך את הגודל והמיקום ולהרים את שכבת השריר הפנימית עם זוג מלקחיים, ולאחר מכן למחוץ קו החוצה את העור מעל הכליה עם hemostats כי הוא בערך 1/3 את הגודל המשוער של הכליה.תוך שמירה על האחיזה בשכבת השריר עם המלקחיים, בצע את החתך הסופי. לאחר מכן, השתמש במלקחיים בכל יד כדי לאחוז ולהחזיק את שומן הכליות בקוטב התחתון של הכליה בטכניקת יד ביד הפועלת כלפי מטה. לאחר אחיזה איתנה על השומן ביד אחת, למשוך את השומן בעדינות רבה לסחוט את הכליה דרך החתך.אם הכליה לא עוברת, בקלות להרחיב את החתך. כדי לזהות את תאי הדם הלבנים או ה-WBCs שנתקעו בלולאות הנימיות, יש לתת את הכתם הגרעיני של Hoechst 33342 ב-8 מיקרוגרם לקילוגרם של משקל חולדה דרך קו גישה ורידי שוכן. במיקרוסקופ, מניחים את הכליה החשופה על קצה המנה בסיבוב קל כך שצד הבטן של הכליה יוצר מגע עם החלק המכסה והצד הגבי פונה הרחק מהקצה.כדי למזער עוד יותר את התנועה, לארוז שתי רפידות גזה סטריליות 2 על 2 רטוב עם מלוחים נגד הצד הגבי של הכליה מחזק את המגע של הצד הבטן של הכליה לקצה. כאשר הדגימה ממוקמת, התבונן דרך עינית המיקרוסקופ תחת תאורת אפיפלואורסצנציה באמצעות קוביית רודמין FITC בעלת מעבר כפול. אם מזוהה תנועה במצב הדגימה, בצע התאמות קלות על ידי התאמת הגזה כדי להבטיח שהיא לא תדחוף מתחת לכליה.מגלגלים מעט את החולדה כך שבית החזה יהיה רחוק יותר מהמנה. סרוק את פני הכליה באמצעות תאורת אפיפלואורסצנציה וסמן את מיקומי הגלומרולי באמצעות התוכנה המשויכת לבקר הבמה הממונע. עבור כל ערוץ צבע תחת תאורת 2 פוטונים, צלם נפח תלת-ממדי רדוד של החלק העליון של כל גלומרולוס מסומן כדי לשמש כתמונת הרקע.באפשרות התצוגה של תוכנת ההדמיה, השתמש בלוח צבעים פסאודו כדי לדמיין את העוצמות הקלושות של פלואורסצנטיות הרקע של הלולאות הנימיות הגלומרוליות. באמצעות כלי דם שטחי כנקודת המוקד, להחדיר באיטיות את אלבומין סרום טקסס רד ראפ או TRRSA תוך התבוננות בעלייתה ונפילתה של פלואורסצנציה עקב ההתפלגות המערכתית עד שעוצמה בכלי הדם הפריטובולאריים ולולאות נימי היא ממש מתחת לרוויה. לאחר 10 דקות, רכשו נפחים תלת-ממדיים עבור כל הגלומרולי המסומנים והמצולמים במרווחים של 1 מיקרומטר.מצאו כלי מתאים, לולאה נימית או כלי פריטובולרי, ולאחר מכן סובבו את התמונה באמצעות פונקציית הסיבוב, שכן פונקציית סריקת הקו בתוכנת רכישת התמונה דורשת שהכלי יהיה בניצב. לאחר סיבוב הספינה ושכיבה שטוחה, בחר את פונקציית XT בתפריט רכישה והגדר אותה לסריקה של 4, 000 שורות. מניחים את הקו לרוחב הכלי כדי להיבדק עם מישור המוקד בקוטר המרבי של המקטע.לאחר מכן לחץ לחיצה ימנית על התמונה ללא הפרדות צבע ובחר בכרטיסייה צלם תמונה כדי ליצור תמונת הפניה של האזור שבו צולמה סריקת הקו. לחץ מיד על התחלה כפתור כדי ללכוד את סריקת הקו של הספינה. מאוחר יותר, ייבא את סריקות הקווים לתוכנת עיבוד התמונה כדי לקבוע את קצב הזרימה של RBC.תחת התפריט הנפתח מדידה, פתח את תיבת הדו-שיח הצג סטטיסטיקה של אזור ובחר בכלי ציור קו בודד כדי לצייר קו התואם לשיפוע של צללי RBC. לאחר ציון הרוחב והגובה של הקו, השתמש במשוואה כדי לחשב את המהירות, ולאחר מכן קבל ממוצע של חמישה חישובים כדי לדווח על המהירות עבור כל סריקת שורה. מרכזו גלומרולוס בתחום ההדמיה וקחו סט נתונים תלת-ממדי המתחיל במשטח הגלומרולרי ומסתיים ב-30 עד 35 מיקרומטר.השתמש בגודל צעד של 1 מיקרומטר בכיוון Z. זהה את ה- WBCs על ידי השוואת ערוץ Hoechst הכחול עם ערוץ האלבומין האדום של טקסס על ידי חיפוש הרחקה של צבע אדום בלולאה הנימית וכתם גרעיני מתאים. אם ה- WBC נראה סטטי על פני שלושה מקטעים אופטיים, הגדר את התאים כדבוקים, ולאחר מכן דווח על הערכים כמופע לכל 10 מקטעים אופטיים מראש הגלומרולוס שצולמו במרווחים של 1 מיקרומטר.מספר הגלומרולרים לכל שדה בחולדות Wistar Fromter או MWF במינכן הוגדל בקבוצת UUO במשך 5 שבועות מאשר בחולדות שלא טופלו. חולדות ספראג-דאולי, או חולדות SD, עברו ממצב ללא גלומרולי משטח ל-2.02 לכל שדה לאחר חמישה שבועות של חסימת שופכה חד-צדדית. תמונות משוחזרות תלת מימדיות נצפו כדי להציג את פני הכליה.חסימת השופכה החד-צדדית בת 5 שבועות בחולדות SD לא גרמה לאזורים הדומים לאפיתליה צינורית רגילה כפי שניתן לראות בחולדות MWF, לא מטופלות, ובחלקן בחולדות UUO MWF בנות 5 שבועות. במחקר של הדינמיקה הכלית של כלי הדם, זרימת הדם הכלייתית הופחתה באופן משמעותי בקבוצות UUO MWF ו-SD במשך 5 שבועות, בהשוואה לחולדות שלא טופלו. מהירות ה-RBC בתוך הלולאות הנימיות הגלומרולריות ירדה משמעותית בחולדות UUO MWF ו-SD במשך 5 שבועות, בהשוואה לחולדות MWF שלא טופלו.בנוסף, לחולדות MWF שלא טופלו היו פחות WBC לכל 10 מקטעים אופטיים מלמעלה, בעוד שהמספר גדל בחולדות UUO MWF של 5 שבועות וחולדות UUO SD של 5 שבועות. עם חסימת שופכה חד צדדית, נצפתה עלייה בחדירות אלבומין. הצטברות אלבומין בחלל באומן הייתה אינטנסיבית לאחר חסימת שופכה חד צדדית.מקטע S1 אנדוציטוזה כמויות גדולות של אלבומין כפי שנצפה עם מצבים פיזיולוגיים בחולדות MWF שלא טופלו. לא ניתן היה לראות את אותה קליטה בחולדות MWF או SD לאחר 5 שבועות של חסימת שופכה חד צדדית. שיטות רבות ושונות כגון הדמיה חוזרת כדי לחקור תהליך לאורך זמן, קיבוע של אזור מסוים להדמיה, ולאחר מכן ניצול של הרקמה הקבועה כדי לבצע מיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה יותר יכול להיעשות בשילוב עם טכניקה זו.הטכניקה נחשבת לטכנולוגיה משבשת. הוא מאפשר לחוקרים לענות על שאלות חדשות רבות. בכך סופקו תובנות חדשות והתקבלו נתונים משנים פרדיגמה.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

דגם Contusive של פגיעה בחוט השדרה באמצעות צוואר הרחם חד צדדית Impactor אופק אינסופי

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

כימות חדירות גלומרולרי של מקרומולקולות פלורסנט באמצעות מיקרוסקופ 2-פוטון בחולדות Wistar מינכן

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

דגם Murine של חסימת Ureteric חד-צדדית בלתי הפיכה והפיכה

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; עכבר דגם של סוכרת מסוג 2: בידוד לבלב וLive- תא 2-פוטון הדמיה של איי שלמים

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

Using a Laminating Technique to Perform Confocal Microscopy of the Human Sclera

באמצעות טכניקה למינציה לבצע Confocal מיקרוסקופית של האדם בלובן העין


The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

ניתוח מועיל אפקטים של תוספי תזונה על פונקציות מעיים אפיתל מכשול במהלך ניסיוני קוליטיס

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

עצב-מקמץ חסימת אמצע שופכה (Nemo) ב הנקבה קטנה מכרסם

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

מדידת ההשפעות של חיידקים וכימיקלים על חדירות המעי של האלמרנים

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a ...