Name: using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes
Uploaded: 2022-03-04T12:30:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases Grants RO1DK091623 e P30DK079312 (a B.A.M.). Ringraziamo il personale della Genomics Core Facility della Research Technology Support Facility (RTSF) della Michigan State University per aver eseguito l'analisi delle nanostringhe.

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Gli autori non hanno conflitti di interesse.

Lo studio della fisiologia glomerulare ha visto molti approcci diversi, in particolare l'uso della micropuntura, la perfusione di glomeruli isolati e la microscopia. La disponibilità di glomeruli superficiali nei ratti Wistar di Monaco, ceppi di Fromter e Simonsen, ha permesso studi dinamici in vivo . Una nota importante per i ricercatori che adottano questa tecnologia è la necessità di impostare parametri di acquisizione per mantenere immagini coerenti tra gli studi, in modo che l'autofluorescenza nei tessuti rimanga coerente. Utilizzando un cubo di epifluorescenza a doppio passaggio di fluoresceina/rodamina e regolando le impostazioni di guadagno sui canali di emissione verde e rosso per imitare sullo schermo del computer ciò che viene visto attraverso gli oculari garantirà una firma cromatica coerente nell'autofluorescenza anche tra diversi sistemi di microscopi.
Il ceppo Fromter è stato ampiamente utilizzato in quanto ha un numero ridotto di glomeruli totali, ~ 75% normale, e i maschi sviluppano spontaneamente ipertensione a circa 12 settimane di età, con proteinuria progressiva e successiva sclerosi glomerulare focale, morendo infine di insufficienza renale12. L'uso di questi ratti e l'aggiunta della microscopia a 2 fotoni con la sua fototossicità ridotta, una migliore profondità di penetrazione e la capacità di visualizzare più sonde fluorescenti contemporaneamente hanno aperto la strada a nuove scoperte 1,4,5. Con lo sviluppo dell'hardware e del software del computer, i dati quantitativi sono ora lo standard per tutti i laboratori a 2 fotoni. Molteplici tecniche quantitative sono state sviluppate e applicate ai processi glomerulari, tubuli prossimali, vascolari e interstiziali in condizioni fisiologiche e patologiche 1,4,5,27,28,29,30.
Le strutture di generazione di topi transgenici hanno aggiunto una nuova dimensione allo studio della fisiologia e della patologia renale, ed era solo una questione di tempo prima che questo fosse combinato con la microscopia a 2 fotoni per delineare ulteriormente l'importanza di specifici prodotti genici nella struttura e nella funzione renale. Tuttavia, i glomeruli di topo, tranne nei topi molto giovani, si trovano a oltre 100 μm dalla superficie del rene9. La microscopia a due fotoni viene eseguita al meglio a una profondità compresa tra 20 e 50 μm come risoluzione, e l'intensità della fluorescenza diminuisce rapidamente in seguito a causa della diffusione della luce emessa e dell'assorbimento dall'interazione con l'emoglobina. Pertanto, era necessario indurre glomeruli superficiali. L'approccio comunemente usato è un modello di ostruzione unilaterale prolungato per 12 settimane. Poiché questi modelli non consentono determinazioni di base, non è possibile separare gli effetti dell'UUO dal processo studiato.
Utilizzando ratti MWF, si può confrontare la funzione glomerulare basale con quella successiva UUO. Questo modello UUO è noto per indurre infiammazione e un rapido tasso di fibrosi ed è stato utilizzato per studiare CKD e fibrosi10,11,12. Come previsto, c'è stato un aumento dei glomeruli superficiali sia nei ratti MWF che SD. Inoltre, i risultati quantitativi ottenuti dopo UUO per i ratti MWF e SD erano molto comparabili. La riduzione del flusso sanguigno registrata qui era stata precedentemente riportata confrontando i dati microscopici dopo UUO con i dati di micropuntura3. Era anche noto che l'istologia tubulare e interstiziale è marcatamente alterata e i PT sono per lo più non funzionali, come riportato qui, con una mancanza di endocitosi dell'albumina. Gli studi in Figura 2 e Figura 3 mostrano una drastica riduzione della velocità di flusso dei globuli rossi nei capillari glomerulari e peritubulari e una maggiore adesione del WBC. Le riduzioni del flusso sono probabilmente dovute al blocco capillare dell'adesione dei globuli bianchi e delle formazioni di rouleaux.
Per valutare ulteriormente l'infiammazione, abbiamo quantificato la permeabilità all'albumina e abbiamo dimostrato che aumenta di dieci volte. Inoltre, glomeruli isolati hanno mostrato che l'espressione di mRNA è aumentata per molti geni precedentemente noti per essere aumentati nell'infiammazione renale in una varietà di stati di malattia renale 17,19,20,21,22,23,24,25,26 . Gli aumenti della densità superficiale glomerulare e della permeabilità all'albumina sono stati progressivi, come mostrato dai dati UUO a 12 settimane. I dati attuali sono i primi a mostrare direttamente che i glomeruli subiscono danni strutturali significativi, infiammazione e cambiamenti molecolari nel modello UUO. I risultati sono coerenti con uno studio precedente sul tessuto renale intero che ha analizzato le biopsie renali delle pecore dopo UUO, trovando più marcatori di infiammazione elevati19. I risultati attuali indicano che esiste una marcata infiammazione all'interno dei glomeruli, precedentemente noti solo per il tessuto corticale.
I dati attuali differiscono da studi precedenti su topi in cui non sono stati trovati cambiamenti nell'espressione della molecola di adesione, nella deposizione del complemento e nell'infiltrazione dei neutrofili tra i glomeruli postidronefrosi postidronefrosi di 12 settimane e i glomeruli normali31. Inoltre, il laboratorio Hickey ha utilizzato il modello UUO di 12 settimane per studiare le reazioni immunitarie nei glomeruli dei topi. Non hanno trovato differenze nell'infiltrazione di neutrofili tra glomeruli di topo di quattro settimane e glomeruli post-distruttivi32,33. Questi studi successivi sono stati condotti dopo che il bacino del rene ostruito è stato drenato dall'urina. Non lo abbiamo fatto perché volevamo determinare l'effetto di UUO sulla funzione glomerulare come sarebbe in vivo, senza rimuovere artificialmente il fluido che causa l'ostruzione. Infine, l'uso di UUO nei topi viene sostituito dall'imaging dei glomeruli a più di 100 μm sotto la superficie. Sebbene possibile, c'è un compromesso tra risoluzione e intensità, entrambe ridotte significativamente quando si va oltre 50 μm34.
I risultati presentati non sono sorprendenti se si mettono insieme i dati della letteratura esistente sui cambiamenti istologici, la formazione di glomeruli atubulari, l'infiammazione, la fibrosi, l'emodinamica10,11,12. I dati presentati, tra cui l'adesione al WBC, le formazioni di rouleaux, i marcatori di infiammazione molecolare glomerulare e l'aumentata permeabilità all'albumina, indicano ulteriormente l'estesa infiammazione che è in corso in questo modello UUO anche a cinque settimane e presente anche a dodici settimane. Chiaramente, l'UUO cronica non è uno stato fisiologico e l'uso di UUO per indurre glomeruli superficiali rappresenta un modello di lesione. I ratti MWF, che hanno glomeruli superficiali in condizioni fisiologiche, possono essere studiati longitudinalmente quando si verifica una lesione. È possibile generare ratti transgenici e numerosi ricercatori li stanno creando con biosensori per porre domande specifiche. In particolare, il Medical College of Wisconsin ha ora una colonia di ratti MWF e ha realizzato ratti transgenici allo scopo di studiare i processi glomerulari in condizioni fisiologiche e patologiche. Questi ratti MWF offrono una grande opportunità per studiare i processi glomerulari in ratti normali, malati e geneticamente modificati.

Comprendere i processi glomerulari, in particolare la biologia dei podociti, è stato un obiettivo per oltre 50 anni. I ratti Wistar di Monaco con glomeruli superficiali hanno svolto un ruolo centrale in questi studi, compresi gli studi di micropuntura, per comprendere numerosi aspetti dei processi fisiologici e patologici 1,2,3. L'uso della microscopia per studiare i componenti glomerulari per via intravitale è stato limitato a causa degli effetti della fototossicità fino all'avvento della microscopia a 2 fotoni che ha minimizzato questa esposizione tossica e aumentato la profondità di penetrazione 1,2. Insieme ai rapidi progressi nell'hardware e nel software del computer, questo ha permesso studi tridimensionali (3D) e quadridimensionali (tempo) per ore in un unico ambiente 1,4,5.
La quantificazione del flusso sanguigno capillare glomerulare, la vasocostrizione e la dilatazione in risposta ai farmaci, la permeabilità e gli effetti della carica sulla permeabilità e l'infiammazione sono solo alcuni dei processi glomerulari che sono stati studiati. Inoltre, il segmento S1 del tubulo prossimale è identificabile e le differenze nel comportamento dell'epitelio tubulare S1 e S2 possono essere quantificate 1,4. Gli studi sui topi, in particolare con la disponibilità universale di strutture transgeniche di topo, hanno portato a rapidi progressi nella comprensione della biologia molecolare dei processi di malattia glomerulare. Le singole proteine sono responsabili della disfunzione glomerulare negli studi knockout, specialmente per quanto riguarda la proteinuria 6,7,8. Tuttavia, l'utilizzo di modelli murini per gli studi di imaging glomerulare è stato limitato in quanto i glomeruli si trovano più di 100 μm sotto la superficie nei numerosi ceppi studiati9.
Ciò ha portato i ricercatori a sviluppare e utilizzare modelli murini con conseguente glomeruli superficiali che possono essere studiati. Il modello più comune è l'uso di UUO completo10,11,12. Alla fine del periodo prolungato di UUO, ci sono numerosi glomeruli superficiali nei reni dei topi che possono essere e sono stati studiati13,14. Non c'è stato alcuno studio di riferimento o di controllo in questi studi sui topi per determinare gli effetti di UUO prolungato sulla biologia glomerulare. Poiché si tratta di un modello grave e prolungato di lesione con conseguente fibrosi rapida e distruzione corticale10,11,12, abbiamo ipotizzato che ci sarebbero effetti sui processi glomerulari e sulla funzione. Per rispondere a questa domanda, i ratti Munich Wistar Fromter (MWF) con glomeruli superficiali sono stati utilizzati per studiare i parametri di controllo / basali e il risultato basale è stato confrontato con studi glomerulari in ratti MWF dopo cinque settimane di UUO. Abbiamo anche studiato ratti Sprague Dawley (SD) che non hanno glomeruli superficiali dopo UUO. I risultati indicano che 5 settimane di UUO nei ratti MWF e SD aumentano effettivamente il numero di glomeruli superficiali. Tuttavia, questi erano glomeruli anormali con marcati cambiamenti nel flusso sanguigno glomerulare, infiammazione e permeabilità e dimensione delle macromolecole.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>70 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CA Micro scissors Model 1C300</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handling Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kelly Hemostatic Forceps (straight)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat#72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Dive SP-8 Multi-Photon Inverted Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Note: Version 7.1r1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaiTai DeepSee titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Dissecting Scissors</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 78180-1C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph Image processing Software</td>
			<td>Molecular Dynamics</td>
			<td>Cat# 78266-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corportation</td>
			<td>2007 version</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RNA Assay Kit</td>
			<td>Invitrogen/ThermoFisher</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reptitherm Undertank Heater</td>
			<td>Zoomed</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy MinElute Cleanup Kit (Spin columns)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strate-Line Autoclave Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 11-889-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRI Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willco-dish Coverslip Bottom Dishes (50 mm/40 mm coverslip)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 70665-07</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes

L'applicazione di nuovi metodi di microscopia a modelli di malattie animali adatti per esplorare la fisiologia dinamica del rene rimane una sfida. I ratti con glomeruli superficiali offrono un'opportunità unica per studiare i processi fisiologici e fisiopatologici utilizzando la microscopia intravitale a 2 fotoni. La quantificazione del flusso sanguigno capillare glomerulare e la vasocostrizione e dilatazione in risposta ai farmaci, la permeabilità e l'infiammazione sono solo alcuni dei processi che possono essere studiati. Inoltre, ratti transgenici, cioè podociti marcati con coloranti fluorescenti e altri approcci di biomarcatori molecolari, forniscono una maggiore risoluzione per monitorare e quantificare direttamente le interazioni proteina-proteina e gli effetti di specifiche alterazioni molecolari.
Nei topi, che mancano di glomeruli superficiali dopo quattro settimane di età, l'ostruzione ureterale unilaterale (UUO) per diverse settimane è stata utilizzata per indurre glomeruli superficiali. Poiché questo modello di induzione non consente studi di base, abbiamo quantificato gli effetti dell'UUO sui processi glomerulari nel modello UUO nei ratti Wistar Frömter (MWF) di Monaco, che hanno glomeruli superficiali in condizioni fisiologiche. Il modello UUO per cinque settimane o più ha indotto alterazioni significative della morfologia renale grossolana, della microvascolarizzazione peritubulare e glomerulare, nonché della struttura e della funzione degli epiteli tubulari. Il flusso glomerulare e peritubulare dei globuli rossi (RBC) è diminuito significativamente (p < 0,01), probabilmente a causa del significativo aumento dell'aderenza dei globuli bianchi (WBC) all'interno dei capillari glomerulari e peritubulari. Il coefficiente di setacciatura glomerulare dell'albumina è aumentato da 0,015 ± 0,002 nei MWF non trattati a 0,045 ± 0,05 nei ratti MWF UUO di 5 settimane. Dodici settimane di UUO hanno portato a ulteriori aumenti della densità glomerulare superficiale e del coefficiente di setacciatura glomerulare (GSC) per l'albumina. L'albumina fluorescente filtrata attraverso i glomeruli non è stata riassorbita dai tubuli prossimali. Questi dati suggeriscono che l'uso di UUO per indurre glomeruli superficiali limita la capacità di studiare e interpretare i normali processi glomerulari e le alterazioni della malattia.

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Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes

Qui presentiamo un protocollo che utilizza la microscopia a 2 fotoni a Monaco di Baviera nei ratti Wistar Fromter con glomeruli di superficie per quantificare gli effetti dell'ostruzione ureterale prolungata sulla dinamica e sulla funzione glomerulare.

Utilizzo della microscopia a 2 fotoni per quantificare gli effetti dell'ostruzione ureterale unilaterale cronica sui processi glomerulari

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface ...

Nei dati presentati in questo studio mostrano gli effetti drammatici dell'ostruzione ureterale unilaterale sulla funzionalità renale, sull'infiammazione e sulla fibrosi. Ci aiuta a comprendere i meccanismi fisiopatologici dell'ostruzione ureterale unilaterale. Il vantaggio principale di questa tecnica è la capacità di studiare le interazioni cellula-cellula, gli eventi subcellulari e associare la struttura e la funzione in modo dinamico all'interno di un rene funzionante.La dimostrazione della procedura ureterale sarà eseguita dalla dott.ssa Silvia Campos-Bilderback che è un chirurgo nel nostro laboratorio. Per iniziare, anestetizzare il ratto, quindi fare un'incisione lungo la linea mediana e individuare il rene sinistro per separarlo dagli organi peritoneali circostanti. Dopo aver localizzato il peduncolo renale, comprendente l'arteria renale, la vena renale e l'uretere, separare l'uretere senza danneggiare la delicata struttura.Utilizzare una pinza per avvolgere e legare una sutura 3-0 attorno all'uretere, quindi legare un nodo di pochi millimetri su entrambi i lati del primo nodo per assicurare l'ostruzione completa. Una volta che l'uretere è legato, chiudere con attenzione gli strati muscolari successivi, quindi chiudere completamente l'addome. Chiudere la pelle esterna con graffette chirurgiche.Per la preparazione chirurgica, posizionare il ratto anestetizzato con una linea di accesso venoso permanente sul lato con il fianco sinistro rasato rivolto verso l'alto piatto e dritto sul tavolo. Assicurarsi che le zampe anteriori del topo si tocchino l'un l'altra così come le zampe posteriori. Una volta posizionato il ratto, palpare il fianco sinistro appena sotto le costole per sentire il rene e determinare la posizione naturale nell'addome, quindi tracciare una linea usando un pennarello permanente lungo l'area rasata, tagliando in due il centro del rene in un orientamento naso-coda.Utilizzare un paio di pinze dentate per afferrare e sollevare la pelle verso l'alto e pizzicare la linea marcatrice permanente con un paio di emostatici per schiacciare la vascolarizzazione sottostante e prevenire il sanguinamento. Ripetere la procedura per il sottile strato muscolare esterno per ridurre al minimo il sanguinamento. Per fare l'incisione finale del sottile strato muscolare addominale interno, palpare il rene per stimare le dimensioni e la posizione e sollevare lo strato muscolare interno con un paio di pinze, quindi schiacciare una linea che taglia in due la pelle sopra il rene con gli emostatici che è circa 1/3 della dimensione stimata del rene.Mantenendo la presa sullo strato muscolare con la pinza, fare l'incisione finale. Successivamente, utilizzare una pinza in ogni mano per afferrare e trattenere il grasso del rene al polo inferiore del rene con una tecnica hand-over-hand che lavora verso il basso. Avere una presa salda sul grasso con una mano, tirare il grasso e spremere molto delicatamente il rene attraverso l'incisione.Se il rene non passa attraverso, allargare facilmente l'incisione. Per identificare i globuli bianchi o globuli bianchi depositati nelle anse capillari, somministrare la colorazione nucleare Hoechst 33342 a 8 microgrammi per chilogrammo di peso del ratto attraverso una linea di accesso venoso permanente. Al microscopio, posizionare il rene esposto contro il bordo del piatto con una leggera rotazione in modo che il lato addominale del rene entri in contatto con il vetrino di copertura e il lato dorsale sia rivolto lontano dal bordo.Per ridurre ulteriormente il movimento, imballare due garze sterili 2 per 2 inumidite con soluzione salina contro il lato dorsale del rene rinforzando il contatto del lato addominale del rene al bordo. Quando il campione è posizionato, guardare attraverso l'oculare del microscopio sotto l'illuminazione a epifluorescenza utilizzando un cubo FITC a doppio passaggio di rodamina. Se viene rilevato un movimento nella posizione del campione, apportare piccole regolazioni regolando la garza assicurandosi che non spinga sotto il rene.Arrotolare leggermente il topo in modo che il torace sia più lontano dal piatto. Scansiona la superficie del rene utilizzando l'illuminazione a epifluorescenza e contrassegna le posizioni dei glomeruli utilizzando il software associato al controller di scena motorizzato. Per ogni canale di colore sotto illuminazione a 2 fotoni, prendi un volume 3D poco profondo della parte superiore di ciascun glomerulo marcato per fungere da immagine di sfondo.Nell'opzione di visualizzazione del software di imaging, utilizzare una pseudo tavolozza di colori per visualizzare le deboli intensità della fluorescenza di fondo degli anelli capillari glomerulari. Utilizzando un vaso sanguigno superficiale come punto focale, infondere lentamente l'albumina sierica fluorescente Texas Red RAP o TRRSA osservando l'aumento e la caduta della fluorescenza dovuta alla distribuzione sistemica fino a quando un'intensità nella vascolarizzazione peritubulare e nelle anse capillari è appena al di sotto della saturazione. Dopo 10 minuti, acquisire volumi 3D per tutti i glomeruli marcati e ripresi a intervalli di 1 micrometro.Trova un vaso appropriato, un anello capillare o un vaso peritubolare, quindi ruota l'immagine utilizzando la funzione Ruota poiché la funzione Line Scan nel software di acquisizione delle immagini richiede che il vaso sia perpendicolare. Una volta che il recipiente è ruotato e sdraiato in piano, selezionare la funzione XT nel menu Acquisizione e impostarlo per scansionare 4.000 linee. Posizionare la linea attraverso il recipiente da esaminare con il piano focale al diametro massimo del segmento.Quindi fare clic con il pulsante sinistro del mouse sull'immagine composita a colori e selezionare la scheda Scatta istantanea per generare un'immagine di riferimento dell'area in cui è stata eseguita la scansione lineare. Fare immediatamente clic sul pulsante Start per acquisire la scansione della linea della nave. Successivamente, importare le scansioni lineari nel software di elaborazione delle immagini per determinare la portata RBC.Nel menu a discesa Misura, aprite la finestra di dialogo Mostra statistiche regione e selezionate lo strumento Disegno a linea singola per disegnare una linea che corrisponda alla pendenza delle ombre RBC. Dopo aver notato la larghezza e l'altezza della linea, utilizzare un'equazione per calcolare la velocità, quindi ottenere una media di cinque calcoli per segnalare la velocità per ogni scansione della linea. Centrare un glomerulo nel campo dell'imaging e prendere un set di dati 3D a partire dalla superficie glomerulare e terminare a 30-35 micrometri.Utilizzare una dimensione di passo di 1 micrometro nella direzione Z. Identificare i globuli bianchi confrontando il canale blu di Hoechst con il canale dell'albumina rossa del Texas cercando l'esclusione del colorante rosso nel ciclo capillare e una corrispondente colorazione nucleare. Se i globuli bianchi appaiono statici su tre sezioni ottiche, definire le celle come aderite, quindi riportare i valori come occorrenza per 10 sezioni ottiche dalla parte superiore del glomerulo prelevate a intervalli di 1 micrometro.Il numero di glomerulari per campo nei ratti Wistar Fromter o MWF di Monaco è aumentato nel gruppo UUO di 5 settimane rispetto ai ratti non trattati. I ratti Sprague-Dawley, o ratti SD, sono passati dall'assenza di glomeruli superficiali a 2,02 per campo dopo cinque settimane di ostruzione ureterale unilaterale. Sono state osservate immagini tridimensionali ricostruite per visualizzare la superficie renale.L'ostruzione uretale unilaterale di 5 settimane nei ratti SD non ha portato ad aree simili ai normali epiteli tubulari come visto nel MWF, non trattata, e parzialmente nei ratti MWF UUO di 5 settimane. Nello studio della dinamica vascolare renale, il flusso sanguigno renale è stato significativamente ridotto nei gruppi MWF UUO a 5 settimane e SD rispetto ai ratti non trattati. La velocità dei globuli rossi all'interno dei loop capillari glomerulari è stata significativamente ridotta nel MWF UUO a 5 settimane e nei ratti SD rispetto ai ratti MWF non trattati.Inoltre, i ratti MWF non trattati avevano meno globuli bianchi per 10 sezioni ottiche dall'alto, mentre il numero aumentava nei ratti MWF UUO a 5 settimane e UUO SD a 5 settimane. Con l'ostruzione uretale unilaterale, è stato osservato un aumento della permeabilità all'albumina. Un accumulo di albumina all'interno dello spazio di Bowman era intenso dopo l'ostruzione uretale unilaterale.L'endocitosi del segmento S1 presenta grandi quantità di albumina osservate con condizioni fisiologiche in ratti MWF non trattati. Lo stesso assorbimento non è stato osservato nei ratti MWF o SD dopo 5 settimane di ostruzione uretale unilaterale. Molti metodi diversi come l'imaging ripetuto per studiare un processo nel tempo, la fissazione di un'area specifica per l'imaging e il successivo utilizzo del tessuto fisso per eseguire la microscopia a risoluzione più elevata possono essere eseguiti in combinazione con questa tecnica.La tecnica è considerata tecnologia dirompente. È consentito agli investigatori di rispondere a molte nuove domande. In tal modo, sono state fornite nuove intuizioni e sono stati ottenuti dati che cambiano il paradigma.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Ricerca

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Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

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