Name: using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes
Uploaded: 2022-03-04T12:30:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

Bu çalışma Ulusal Diyabet ve Sindirim ve Böbrek Hastalıkları Enstitüsü tarafından desteklenmiştir RO1DK091623 ve P30DK079312 (B.A.M.'ye). Michigan State Üniversitesi'ndeki Araştırma Teknolojisi Destek Tesisi'nin (RTSF) Genomik Çekirdek Tesisi'ndeki personele Nanostring analizini gerçekleştirdikleri için teşekkür ederiz.

<ol>
	<li>Dunn, K. W., Molitoris, B. A., Dagher, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Indiana+O'Brien+center+for+advanced+renal+microscopic+analysis.">The Indiana O'Brien center for advanced renal microscopic analysis.</a> American Journal of Physiology-Renal Physiology. 320 (5), 671-682 (2021).</li><li>Dunn, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+the+kidney+of+living+animals+using+multicolor+two-photon+microscopy.">Functional studies of the kidney of living animals using multicolor two-photon microscopy.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 283 (3), 905-916 (2002).</li><li>Eisenbach, G., Liew, J., Boylan, J., Manz, N., Muir, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+angiotensin+on+the+filtration+of+protein+in+the+rat+kidney:+a+micropuncture+study.">Effect of angiotensin on the filtration of protein in the rat kidney: a micropuncture study.</a> Kidney International. 8 (2), 80-87 (1975).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+multiphoton+microscopy+as+a+tool+for+studying+renal+physiology+and+pathophysiology.">Intravital multiphoton microscopy as a tool for studying renal physiology and pathophysiology.</a> Methods. 128, 20-32 (2017).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A., Palygin, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+imaging+and+microscopy+for+dynamic+processes+in+rats.">Fluorescent imaging and microscopy for dynamic processes in rats.</a> Methods in Molecular Biology. 2018, 151-175 (2019).</li><li>Huber, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+basis+of+the+functional+podocin-nephrin+complex:+mutations+in+the+NPHS2+gene+disrupt+nephrin+targeting+to+lipid+raft+microdomains.">Molecular basis of the functional podocin-nephrin complex: mutations in the NPHS2 gene disrupt nephrin targeting to lipid raft microdomains.</a> Human Molecular Genetics. 12 (24), 3397-3405 (2003).</li><li>Kawachi, H., Koike, H., Kurihara, H., Sakai, T., Shimizu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+of+rat+homologue+of+podocin:+expression+in+proteinuric+states+and+in+developing+glomeruli.">Cloning of rat homologue of podocin: expression in proteinuric states and in developing glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology JASN. 14 (1), 46-56 (2003).</li><li>Roselli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+filtration+defect+and+severe+renal+disease+in+podocin-deficient+mice.">Early glomerular filtration defect and severe renal disease in podocin-deficient mice.</a> Molecular and Cellular Biology. 24 (2), 550-560 (2004).</li><li>Schie&#223;l, I., Bardehle, S., Castrop, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superficial+nephrons+in+BALB/c+and+C57BL/6+mice+facilitate+in+vivo+multiphoton+microscopy+of+the+kidney.">Superficial nephrons in BALB/c and C57BL/6 mice facilitate in vivo multiphoton microscopy of the kidney.</a> PloS One. 8 (1), 52499 (2013).</li><li>Chevalier, R., Forbes, M., Thornhill, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ureteral+obstruction+as+a+model+of+renal+interstitial+fibrosis+and+obstructive+nephropathy.">Ureteral obstruction as a model of renal interstitial fibrosis and obstructive nephropathy.</a> Kidney International. 75 (11), 1145-1152 (2009).</li><li>Forbes, M., Thornhill, B., Chevalier, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+tubular+injury+and+rapid+formation+of+atubular+glomeruli+in+mice+with+unilateral+ureteral+obstruction:+a+new+look+at+an+old+model.">Proximal tubular injury and rapid formation of atubular glomeruli in mice with unilateral ureteral obstruction: a new look at an old model.</a> American Journal of Physiology. Renal physiology. 301 (1), 110-117 (2011).</li><li>Yang, H. -. C., Zuo, Y., Fogo, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+chronic+kidney+disease.">Models of chronic kidney disease.</a> Drug Discovery Today. Disease Models. 7 (1-2), 13-19 (2010).</li><li>Hackl, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+fate+of+glomerular+epithelial+cells+in+vivo+using+serial+multiphoton+imaging+in+new+mouse+models+with+fluorescent+lineage+tags.">Tracking the fate of glomerular epithelial cells in vivo using serial multiphoton imaging in new mouse models with fluorescent lineage tags.</a> Nature Medicine. 19 (12), 1661-1666 (2013).</li><li>Kitching, A., Kuligowski, M., Hickey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+leukocyte+recruitment+to+glomeruli+in+mice+using+intravital+microscopy.">In vivo imaging of leukocyte recruitment to glomeruli in mice using intravital microscopy.</a> Methods in Molecular Biology. 466, 109-117 (2009).</li><li>Savin, V. J., Terreros, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filtration+in+single+isolated+mammalian+glomeruli.">Filtration in single isolated mammalian glomeruli.</a> Kidney International. 20 (2), 188-197 (1981).</li><li>Chomczynski, P., Sacchi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+single-step+method+of+RNA+isolation+by+acid+guanidinium+thiocyanate-phenol-chloroform+extraction:+twenty-something+years+on.">The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction: twenty-something years on.</a> Nature Protocols. 1 (2), 581-585 (2006).</li><li>El Karoui, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+stress+drives+proteinuria-induced+kidney+lesions+via+Lipocalin+2.">Endoplasmic reticulum stress drives proteinuria-induced kidney lesions via Lipocalin 2.</a> Nature Communications. 7, 10330 (2016).</li><li>VA, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+measurements+of+gene+signatures+in+different+analytes+using+the+Nanostring+nCounter+Assay+System.">Multiplexed measurements of gene signatures in different analytes using the Nanostring nCounter Assay System.</a> BMC Research Notes. 2, 80 (2009).</li><li>Springer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combined+transcriptome+and+bioinformatics+approach+to+unilateral+ureteral+obstructive+uropathy+in+the+fetal+sheep+model.">A combined transcriptome and bioinformatics approach to unilateral ureteral obstructive uropathy in the fetal sheep model.</a> The Journal of Urology. 187 (2), 751-756 (2012).</li><li>Braun, F., Becker, J., Brinkkoetter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+or+let+die:+Is+there+any+cell+death+in+podocytes.">Live or let die: Is there any cell death in podocytes.</a> Seminars in Nephrology. 36 (3), 208-219 (2016).</li><li>Kim, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+angiopoietin-1+in+kidney+disease.">The role of angiopoietin-1 in kidney disease.</a> Electrolyte &amp; Blood Pressure E &amp; BP. 6 (1), 22-26 (2008).</li><li>Liu, F., Zhuang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+receptor+tyrosine+kinase+signaling+in+renal+fibrosis.">Role of receptor tyrosine kinase signaling in renal fibrosis.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (5), 972 (2016).</li><li>Martini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+biology+identifies+shared+transcriptional+networks+in+CKD.">Integrative biology identifies shared transcriptional networks in CKD.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 25 (11), 2559-2572 (2014).</li><li>M&#252;hlberger, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+bioinformatics+analysis+of+proteins+associated+with+the+cardiorenal+syndrome.">Integrative bioinformatics analysis of proteins associated with the cardiorenal syndrome.</a> International Journal of Nephrology. 2011, 809378 (2010).</li><li>Satirapoj, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Periostin:+novel+tissue+and+urinary+biomarker+of+progressive+renal+injury+induces+a+coordinated+mesenchymal+phenotype+in+tubular+cells.">Periostin: novel tissue and urinary biomarker of progressive renal injury induces a coordinated mesenchymal phenotype in tubular cells.</a> Nephrology, Dialysis, Transplantation. 27 (7), 2702-2711 (2012).</li><li>Fengxin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Numb+contributes+to+renal+fibrosis+by+promoting+tubular+epithelial+cell+cycle+arrest+at+G2/M.">Numb contributes to renal fibrosis by promoting tubular epithelial cell cycle arrest at G2/M.</a> Oncotarget. 7 (18), 25604-25619 (2016).</li><li>Sandoval, R. M., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+glomerular+permeability+of+fluorescent+macromolecules+using+2-photon+microscopy+in+Munich+Wistar+rats.">Quantifying glomerular permeability of fluorescent macromolecules using 2-photon microscopy in Munich Wistar rats.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (74), e50052 (2013).</li><li>Russo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+tubular+uptake+explains+albuminuria+in+early+diabetic+nephropathy.">Impaired tubular uptake explains albuminuria in early diabetic nephropathy.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 20 (3), 489-494 (2009).</li><li>Russo, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+kidney+filters+nephrotic+levels+of+albumin+retrieved+by+proximal+tubule+cells:+retrieval+is+disrupted+in+nephrotic+states.">The normal kidney filters nephrotic levels of albumin retrieved by proximal tubule cells: retrieval is disrupted in nephrotic states.</a> Kidney International. 71 (6), 504-513 (2007).</li><li>Sandoval, R. M., Wang, E., Molitoris, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+the+bottom+and+using+it:+Offsets+and+sensitivity+in+the+detection+of+low+intensity+values+in+vivo+with+2-photon+microscopy.">Finding the bottom and using it: Offsets and sensitivity in the detection of low intensity values in vivo with 2-photon microscopy.</a> Intravital. 2 (1), 23674 (2014).</li><li>Kuligowski, M. P., Kitching, A. R., Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+recruitment+to+the+inflamed+glomerulus:+a+critical+role+for+platelet-derived+P-selectin+in+the+absence+of+rolling.">Leukocyte recruitment to the inflamed glomerulus: a critical role for platelet-derived P-selectin in the absence of rolling.</a> Journal of Immunology. 176 (11), 6991-6999 (2006).</li><li>Devi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+reveals+a+new+leukocyte+recruitment+paradigm+in+the+glomerulus.">Multiphoton imaging reveals a new leukocyte recruitment paradigm in the glomerulus.</a> Nature Medicine. 19 (1), 107-112 (2013).</li><li>Finsterbusch, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patrolling+monocytes+promote+intravascular+neutrophil+activation+and+glomerular+injury+in+the+acutely+inflamed+glomerulus.">Patrolling monocytes promote intravascular neutrophil activation and glomerular injury in the acutely inflamed glomerulus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (35), 5172-5181 (2016).</li><li>Shroff, U. N., Gyarmati, G., Izuhara, A., Deepak, S., Peti-Peterdi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+view+of+macula+densa+cell+protein+synthesis.">A new view of macula densa cell protein synthesis.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 321 (6), 689-704 (2021).</li></ol>

Yazarların çıkar çatışması yoktur.

Glomerüler fizyolojinin incelenmesi, özellikle mikroponktur kullanımı, izole glomerüllerin perfüzyonu ve mikroskopi gibi birçok farklı yaklaşım görmüştür. Münih Wistar sıçanlarında, Fromter ve Simonsen suşlarında yüzey glomerüllerinin mevcudiyeti, in vivo dinamik çalışmalara izin vermiştir. Bu teknolojiyi benimseyen araştırmacılara önemli bir not, çalışmalar arasında tutarlı görüntüleri korumak için edinme parametrelerini ayarlama ihtiyacıdır, böylece dokudaki otofloresan tutarlı kalır. Çift geçişli bir floresein/rodamin epifloresan küpü kullanmak ve bilgisayar ekranında göz merceklerinden görülenleri taklit etmek için kazanç ayarlarını yeşil ve kırmızı emisyon kanallarına ayarlamak, farklı mikroskop sistemleri arasında bile otofloresanda tutarlı bir renk imzası sağlayacaktır.
Fromter suşu, toplam glomerül sayısının azalması, ~% 75'i normal olduğu için yaygın olarak kullanılmıştır ve erkekler yaklaşık 12 haftalıkken kendiliğinden hipertansiyon geliştirir, ilerleyici proteinüri ve ardından fokal glomerüler skleroz ile sonunda böbrek yetmezliğinden ölürler12. Bu sıçanların kullanımı ve azaltılmış fototoksisitesi, gelişmiş penetrasyon derinliği ve aynı anda birden fazla floresan probu görüntüleme yeteneği ile 2-foton mikroskobunun eklenmesi, yeni keşiflerin yolunu açtı 1,4,5. Bilgisayar donanımı ve yazılımının gelişmesiyle birlikte, nicel veriler artık tüm 2-foton laboratuvarları için standarttır. Fizyolojik ve hastalık koşulları altında glomerüler, proksimal tübül, vasküler ve interstisyel süreçlere çoklu kantitatif teknikler geliştirilmiş ve uygulanmıştır 1,4,5,27,28,29,30.
Transgenik fare üretim tesisleri, böbrek fizyolojisi ve patolojisi çalışmalarına yeni bir boyut ekledi ve bu, spesifik gen ürünlerinin böbrek yapısı ve fonksiyonundaki önemini daha da tanımlamak için 2-foton mikroskobu ile birleştirilmesi sadece bir zaman meselesiydi. Bununla birlikte, fare glomerülleri, çok genç fareler hariç, böbrekyüzeyinden 100 μm'nin üzerinde bulunur 9. İki foton mikroskobu en iyi çözünürlük olarak 20 ila 50 μm arasında bir derinlikte gerçekleştirilir ve floresan yoğunluğu, yayılan ışığın ışık saçılması ve hemoglobin ile etkileşimden emilim nedeniyle hızla azalır. Bu nedenle, yüzey glomerüllerini indüklemek gerekliydi. Yaygın olarak kullanılan yaklaşım, 12 hafta boyunca uzatılmış tek taraflı bir obstrüksiyon modelidir. Bu modeller temel belirlemelere izin vermediğinden, UUO'nun etkilerinin çalışılan süreçten ayrılması mümkün değildir.
MWF sıçanlarını kullanarak, temel glomerüler fonksiyonu takip eden UUO ile karşılaştırabilirsiniz. Bu UUO modelinin inflamasyonu ve hızlı bir fibroz oranını indüklediği bilinmektedir ve KBH ve fibroz10,11,12'yi incelemek için kullanılmıştır. Beklendiği gibi, hem MWF hem de SD sıçanlarında yüzey glomerüllerinde bir artış oldu. Ayrıca, MWF ve SD sıçanları için UUO'yu takiben elde edilen nicel sonuçlar çok karşılaştırılabilirdi. Burada kaydedilen kan akışındaki azalma daha önce UUO'yu takip eden mikroskobik verileri mikroponktur verileriyle karşılaştırarak bildirilmişti3. Ayrıca, tübüler ve interstisyel histolojinin belirgin bir şekilde değiştiği ve PT'lerin burada bildirildiği gibi, albümin endositozu eksikliği ile çoğunlukla işlevsiz olduğu iyi bilinmektedir. Şekil 2 ve Şekil 3'teki çalışmalar, glomerüler ve peritübüler kılcal damarlarda RBC akış hızında dramatik bir azalma ve artmış WBC adezyonu göstermektedir. Akıştaki azalmalar muhtemelen WBC adezyonu ve rouleaux oluşumlarından kaynaklanan kılcal tıkanmalardan kaynaklanmaktadır.
Enflamasyonu daha iyi değerlendirmek için, albümin geçirgenliğini ölçtük ve on kat arttığını gösterdik. Ek olarak, izole glomerüller, daha önce çeşitli böbrek hastalığı durumlarında böbrek iltihabında arttığı bilinen birçok gen için mRNA ekspresyonunun arttığını göstermiştir 17,19,20,21,22,23,24,25,26 . Glomerüler yüzey yoğunluğundaki ve albümin geçirgenliğindeki artışlar, 12 haftalık UUO verilerinde gösterildiği gibi progresifti. Mevcut veriler, glomerüllerin UUO modelinde önemli yapısal hasar, inflamasyon ve moleküler değişikliklere uğradığını doğrudan gösteren ilk verilerdir. Sonuçlar, UUO'yu takiben koyun böbrek biyopsilerini analiz eden ve19'u yükselten çoklu inflamasyon belirteçleri bulan tüm böbrek dokusunun daha önceki bir çalışmasıyla tutarlıdır. Mevcut sonuçlar, daha önce sadece kortikal doku için bilinen glomerüllerde belirgin inflamasyon olduğunu göstermektedir.
Mevcut veriler, 12 haftalık posthidronefrotik ve normal glomerüller31 arasında adezyon molekülü ekspresyonu, kompleman birikimi ve nötrofil infiltrasyonunda herhangi bir değişiklik bulunmayan farelerde yapılan önceki çalışmalardan farklıdır. Ek olarak, Hickey laboratuvarı, farelerin glomerüllerinde bağışıklık reaksiyonlarını incelemek için 12 haftalık UUO modelini kullandı. Dört haftalık fare glomerülleri ile postobstrüktif glomerüller arasında nötrofil infiltrasyonunda fark bulamadılar32,33. Bu daha sonraki çalışmalar, tıkanmış böbreğin pelvisi idrardan boşaltıldıktan sonra yapıldı. Bunu, UUO'nun glomerüler fonksiyon üzerindeki etkisini, obstrüksiyona neden olan sıvıyı yapay olarak çıkarmadan, in vivo olacağı gibi belirlemek istediğimiz için yapmadık. Son olarak, farelerde UUO kullanımı, yüzeyin altında 100 μm'den daha büyük görüntüleme glomerülleri ile değiştirilmektedir. Mümkün olsa da, çözünürlük ve yoğunlukta bir denge vardır, her ikisi de 50 μm34'ün ötesine geçtikçe önemli ölçüde azalır.
Histolojik değişiklikler, tübüler glomerül oluşumu, inflamasyon, fibrozis, hemodinamik10,11,12 ile ilgili mevcut literatürdeki verilerin bir araya getirilmesi şaşırtıcı değildir. WBC adezyonu, rouleaux oluşumları, glomerüler moleküler inflamasyon belirteçleri ve artmış albümin geçirgenliği dahil olmak üzere sunulan veriler, bu UUO modelinde beş haftada bile devam eden ve on iki haftada bile mevcut olan kapsamlı inflamasyonu göstermektedir. Açıkçası, kronik UUO fizyolojik bir durum değildir ve yüzey glomerüllerini indüklemek için UUO'nun kullanılması bir yaralanma modelini temsil eder. Fizyolojik koşullar altında yüzey glomerüllerine sahip olan MWF sıçanları, yaralanma meydana geldikçe uzunlamasına incelenebilir. Transgenik sıçanlar üretmek mümkündür ve çok sayıda araştırmacı bunları belirli sorular sormak için biyosensörlerle yaratmaktadır. Özellikle, Wisconsin Tıp Fakültesi şimdi MWF sıçanlarının bir kolonisine sahiptir ve fizyolojik ve patolojik koşullar altında glomerüler süreçleri incelemek amacıyla transgenik sıçanlar yapmıştır. Bu MWF sıçanları, normal, hastalıklı ve genetiği değiştirilmiş sıçanlarda glomerüler süreçleri incelemek için harika bir fırsat sunmaktadır.

Glomerüler süreçleri, özellikle podosit biyolojisini anlamak, 50 yılı aşkın bir süredir bir hedef olmuştur. Yüzey glomerüllü Münih Wistar sıçanları, fizyolojik ve patolojik süreçlerin birçok yönünü anlamak için mikroponktur çalışmaları da dahil olmak üzere bu çalışmalarda merkezi bir rol oynamıştır 1,2,3. Glomerüler bileşenleri intravital olarak incelemek için mikroskopinin kullanımı, bu toksik maruziyeti en aza indiren ve penetrasyon derinliğini artıran 2-foton mikroskobunun ortaya çıkmasına kadar fototoksisitenin etkileri nedeniyle sınırlıydı 1,2. Bilgisayar donanım ve yazılımındaki hızlı gelişmelerin yanı sıra, bu, tek bir ayarda saatlerce üç boyutlu (3B) ve dört boyutlu (zaman) çalışmalara izin vermiştir 1,4,5.
Glomerüler kılcal kan akımının miktarı, ilaçlara yanıt olarak vazokonstriksiyon ve dilatasyon, geçirgenlik ve yükün geçirgenlik ve inflamasyon üzerindeki etkileri, incelenen glomerüler süreçlerden sadece birkaçıdır. Ek olarak, proksimal tübülün S1 segmenti tanımlanabilir ve S1 ve S2 tübüler epitelinin davranışındaki farklılıklar 1,4 olarak ölçülebilir. Farelerde yapılan çalışmalar, özellikle fare transgenik tesislerinin evrensel mevcudiyeti ile, glomerüler hastalık süreçlerinin moleküler biyolojisinin anlaşılmasında hızlı ilerlemelere yol açmıştır. Bireysel proteinler, özellikle proteinüri 6,7,8 ile ilgili olarak, nakavt çalışmalarında glomerüler disfonksiyondan sorumludur. Bununla birlikte, glomerüler görüntüleme çalışmaları için fare modellerinin kullanımı, glomerüller incelenen çok sayıda suşta yüzeyin 100 μm'den daha az olduğu için sınırlandırılmıştır9.
Bu, araştırmacıların incelenebilecek yüzey glomerülleri ile sonuçlanan fare modellerini geliştirmelerine ve kullanmalarına neden olmuştur. En yaygın model, tam UUO10,11,12'nin kullanılmasıdır. Uzatılmış UUO periyodunun sonunda, farelerin böbreklerinde13,14 olabilen ve çalışılan çok sayıda yüzey glomerül vardır. Bu fare çalışmalarında, uzamış UUO'nun glomerüler biyoloji üzerindeki etkilerini belirlemek için herhangi bir temel veya kontrol çalışması yapılmamıştır. Bu, hızlı fibroz ve kortikal yıkımla sonuçlanan ciddi ve uzun süreli bir yaralanma modeli olduğu için10,11,12, glomerüler süreçler ve fonksiyon üzerinde etkiler olacağını varsaydık. Bu soruyu cevaplamak için, kontrol / taban çizgisi parametrelerini incelemek için yüzey glomerüllü Münih Wistar Fromter (MWF) sıçanları kullanıldı ve temel bulgu, beş haftalık UUO'yu takiben MWF sıçanlarında yapılan glomerüler çalışmalarla karşılaştırıldı. Ayrıca UUO'yu takiben yüzey glomerülleri olmayan Sprague Dawley (SD) sıçanlarını da inceledik. Bulgular, MWF ve SD sıçanlarda 5 haftalık UUO'nun yüzey glomerüllerinin sayısını gerçekten artırdığını göstermektedir. Bununla birlikte, bunlar glomerüler kan akışında, inflamasyonda ve makromolekül geçirgenliğinde ve boyutunda belirgin değişiklikler olan anormal glomerüllerdi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>70 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 &#181;m sterile cell strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>#421752</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CA Micro scissors Model 1C300</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>Kroger</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Handling Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 72962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kelly Hemostatic Forceps (straight)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat#72930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Dive SP-8 Multi-Photon Inverted Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Note: Version 7.1r1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MaiTai DeepSee titanium-sapphire laser</td>
			<td>Spectra-Physics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo Dissecting Scissors</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 78180-1C3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamorph Image processing Software</td>
			<td>Molecular Dynamics</td>
			<td>Cat# 78266-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft Corportation</td>
			<td>2007 version</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quant-iT RNA Assay Kit</td>
			<td>Invitrogen/ThermoFisher</td>
			<td>Q33140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reptitherm Undertank Heater</td>
			<td>Zoomed</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy MinElute Cleanup Kit (Spin columns)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPE buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>1018013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strate-Line Autoclave Tape</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 11-889-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRI Reagent</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T9424</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Willco-dish Coverslip Bottom Dishes (50 mm/40 mm coverslip)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>Cat# 70665-07</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

using 2-photon microscopy to quantify the effects of chronic unilateral ureteral obstruction on glomerular processes

Böbreğin dinamik fizyolojisini keşfetmek için uygun hayvan hastalığı modellerine yeni mikroskopi yöntemleri uygulamak zor olmaya devam etmektedir. Yüzey glomerüllü sıçanlar, intravital 2-foton mikroskopisi kullanarak fizyolojik ve patofizyolojik süreçleri araştırmak için eşsiz bir fırsat sağlar. Glomerüler kılcal kan akımının nicelleştirilmesi ve ilaçlara, geçirgenliğe ve inflamasyona yanıt olarak vazokonstriksiyon ve dilatasyon, çalışılabilecek süreçlerden sadece birkaçıdır. Ek olarak, transgenik sıçanlar, yani floresan boyalar ve diğer moleküler biyobelirteç yaklaşımları ile etiketlenmiş podositler, protein-protein etkileşimlerini ve spesifik moleküler değişikliklerin etkilerini doğrudan izlemek ve ölçmek için artan çözünürlük sağlar.
Dört haftalıktan sonra yüzey glomerüllerinden yoksun olan farelerde, yüzey glomerüllerini indüklemek için birkaç hafta boyunca tek taraflı üreter tıkanıklığı (UUO) kullanılmıştır. Bu indüksiyon modeli temel çalışmalara izin vermediğinden, fizyolojik koşullar altında yüzey glomerüllerine sahip Münih Wistar Frömter (MWF) sıçanlarındaki UUO modelinde UUO'nun glomerüler süreçler üzerindeki etkilerini ölçtük. Beş hafta veya daha uzun süreli UUO modeli, brüt böbrek morfolojisinde, peritübüler ve glomerüler mikrovaskülatürde ve ayrıca tübüler epitelin yapısında ve fonksiyonunda önemli değişikliklere neden oldu. Glomerüler ve peritübüler kırmızı kan hücresi (RBC) akımı, muhtemelen glomerüler ve peritübüler kılcal damarlar içindeki beyaz kan hücrelerinin (WBC'ler) aderansındaki anlamlı artışa bağlı olarak anlamlı olarak azalmıştır (p < 0.01). Albüminin glomerüler eleme katsayısı, tedavi edilmemiş MWF'lerde 0.015 ± 0.002'den 5 haftalık UUO MWF sıçanlarında 0.045 ± 0.05'e yükselmiştir. On iki haftalık UUO, albümin için yüzey glomerüler yoğunluğunda ve glomerüler eleme katsayısında (GSC) daha fazla artışa neden oldu. Glomerüller boyunca filtrelenen floresan albümin, proksimal tübüller tarafından yeniden emilmedi. Bu veriler, yüzey glomerüllerini indüklemek için UUO kullanmanın normal glomerüler süreçleri ve hastalık değişikliklerini inceleme ve yorumlama yeteneğini sınırladığını göstermektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes at JoVE.com

Using 2-Photon Microscopy to Quantify the Effects of Chronic Unilateral Ureteral Obstruction on Glomerular Processes

Burada, uzun süreli üreter tıkanıklığının glomerüler dinamikler ve fonksiyon üzerindeki etkilerini ölçmek için Münih Wistar Fromter sıçanlarında yüzey glomerüllü 2-foton mikroskobu kullanan bir protokol sunuyoruz.

Kronik Tek Taraflı Üreter Tıkanıklığının Glomerüler Prosesler Üzerindeki Etkilerini Ölçmek için 2-Foton Mikroskobu Kullanılması

Applying novel microscopy methods to suitable animal disease models to explore the dynamic physiology of the kidney remains a challenge. Rats with surface ...

Bu çalışmada sunulan verilerde tek taraflı üreter tıkanıklığının böbrek fonksiyonu, inflamasyon ve fibroz üzerine dramatik etkileri gösterilmiştir. Tek taraflı üreter obstrüksiyonunun patofizyolojik mekanizmalarını anlamamıza yardımcı olur. Bu tekniğin temel avantajı, hücre-hücre etkileşimlerini, hücre altı olayları inceleme ve işleyen bir böbrek içinde yapı ve işlevi dinamik bir şekilde ilişkilendirme yeteneğidir.Üreter prosedürünün gösterilmesi, laboratuvarımızda cerrah olan Dr. Silvia Campos-Bilderback tarafından yapılacaktır. Başlamak için, sıçanı uyuşturun, daha sonra orta hat boyunca bir kesi yapın ve sol böbreği çevreleyen periton organlarından ayırmak için bulun. Renal arter, böbrek damarı ve üreteri içeren renal pedikülü bulduktan sonra, hassas yapıya zarar vermeden üreteri ayırın.Üreterin etrafına 3-0'lık bir dikiş ilmek ve bağlamak için forseps kullanın, ardından tam tıkanıklığı sağlamak için ilk düğümün her iki tarafına birkaç milimetre düğüm bağlayın. Üreter bağlandıktan sonra, ardışık kas katmanlarını dikkatlice kapatın, ardından karnı tamamen kapatın. Dış cildi cerrahi zımbalarla kapatın.Cerrahi hazırlık için, anestezi uygulanan sıçanı, tıraşlı sol kanadı düz ve düz bir şekilde masanın üzerine bakacak şekilde yan tarafa yerleşik bir venöz erişim çizgisi ile yerleştirin. Sıçanın ön pençelerinin, arka pençelerin olması gerektiği gibi birbirine temas ettiğinden emin olun. Sıçan yerleştirildikten sonra, böbreği hissetmek ve karındaki doğal pozisyonu belirlemek için kaburgaların hemen altındaki sol kanadı palpe edin, daha sonra tıraş edilen bölge boyunca kalıcı bir belirteç kullanarak bir çizgi çizin ve böbrek merkezini burundan kuyruğa doğru ikiye bölün.Cildi yukarı doğru kavramak ve kaldırmak için bir çift dişli forseps kullanın ve altta yatan vaskülatürü ezmek ve kanamayı önlemek için kalıcı belirteç çizgisini bir çift hemostatla sıkıştırın. Kanamayı en aza indirmek için ince dış kas tabakası için prosedürü tekrarlayın. İnce iç karın kası tabakasının son kesisini yapmak için, büyüklüğü ve pozisyonu tahmin etmek için böbreği palpe edin ve iç kas tabakasını bir çift forseps ile kaldırın, ardından böbreğin üzerindeki cildi böbreğin tahmini büyüklüğünün yaklaşık 1 / 3'ü olan hemostatlarla ikiye bölen bir çizgiyi ezin.Forseps ile kas tabakası üzerindeki tutuşu korurken, son kesiyi yapın. Daha sonra, böbrek yağını böbreğin alt kutbunda tutmak ve tutmak için her elinizde forseps kullanın ve aşağı doğru çalışan bir el ele tekniği kullanın. Bir elinizle yağ üzerinde sıkı bir tutuşa sahip olarak, yağı çekin ve böbreği kesiden çok nazikçe sıkın.Böbrek geçmezse, insizyonu kolayca genişletin. Kılcal halkalara yerleştirilen beyaz kan hücrelerini veya WBC'leri tanımlamak için, Hoechst 33342 nükleer boyasını, yerleşik bir venöz erişim hattı aracılığıyla sıçan ağırlığının kilogramı başına 8 mikrogramda uygulayın. Mikroskopta, maruz kalan böbreği hafif bir rotasyonla çanağın kenarına yerleştirin, böylece böbreğin karın tarafı kapak kaymasına temas eder ve sırt tarafı kenardan uzağa bakar.Hareketi daha da azaltmak için, böbreğin karın tarafının kenara temasını güçlendiren böbreğin dorsal tarafına salin ile nemlendirilmiş iki steril 2'ye 2 gazlı bez pedi paketleyin. Örnek konumlandırıldığında, çift geçişli bir rodamin FITC küpü kullanarak epifloresan aydınlatma altında mikroskop göz merceğinden bakın. Numune pozisyonunda bir hareket tespit edilirse, gazlı bezi böbreğin altına itmediğinden emin olacak şekilde ayarlayarak küçük ayarlamalar yapın.Sıçanı hafifçe yuvarlayın, böylece toraks çanaktan daha uzakta olur. Epifloresan aydınlatmayı kullanarak böbreğin yüzeyini tarayın ve motorlu aşama kontrolörü ile ilişkili yazılımı kullanarak glomerül konumlarını işaretleyin. 2 foton aydınlatması altındaki her renk kanalı için, arka plan görüntüsü olarak hizmet etmek üzere işaretlenmiş her glomerulusun üst kısmının sığ bir 3D hacmini alın.Görüntüleme yazılımının görüntüleme seçeneğinde, glomerüler kılcal halkaların arka plan floresansının soluk yoğunluklarını görselleştirmek için sahte bir renk paleti kullanın. Odak noktası olarak yüzeysel bir kan damarı kullanarak, peritübüler vaskülatür ve kılcal halkalardaki bir yoğunluk doygunluğun hemen altına gelene kadar sistemik dağılım nedeniyle floresanın yükselişini ve düşüşünü gözlemlerken floresan Texas Red RAP serum albüminini veya TRRSA'yı yavaşça infüze edin. 10 dakika sonra, 1 mikrometre aralıklarla işaretlenmiş ve görüntülenen tüm glomerüller için 3D hacimler elde edin.Kılcal bir döngü veya peritübüler bir kap olan uygun bir kap bulun, ardından görüntü alma yazılımındaki Çizgi Tarama işlevi kabın dik olmasını gerektirdiğinden Döndür işlevini kullanarak görüntüyü döndürün. Gemi döndürüldükten ve düz bir şekilde yattıktan sonra, Edinme menüsünde XT işlevini seçin ve 4.000 satırı tarayacak şekilde ayarlayın. Çizgiyi, segmentin maksimum çapında, odak düzlemi ile incelenecek kap boyunca yerleştirin.Ardından, renkli bileşik görüntüye sol tıklayın ve çizgi taramasının yapıldığı alanın referans görüntüsünü oluşturmak için Anlık Görüntü Al sekmesini seçin. Geminin hat taramasını yakalamak için hemen Başlat düğmesine tıklayın. Daha sonra, RBC akış hızını belirlemek için hat taramalarını görüntü işleme yazılımına aktarın.Ölçü açılır menüsünün altında, Bölge İstatistiklerini Göster iletişim kutusunu açın ve RBC gölgelerinin eğimiyle eşleşen bir çizgi çizmek için Tek Çizgi Çizimi aracını seçin. Çizginin genişliğini ve yüksekliğini not ettikten sonra, hızı hesaplamak için bir denklem kullanın, ardından her çizgi taramasının hızını raporlamak için ortalama beş hesaplama elde edin. Görüntüleme alanında bir glomerulusu ortalayın ve glomerüler yüzeyden başlayıp 30 ila 35 mikrometrede biten bir 3D veri seti alın.Z yönünde 1 mikrometrelik bir adım boyutu kullanın. Mavi Hoechst kanalını Texas Red albümin kanalı ile karşılaştırarak, kılcal döngüde kırmızı boyanın dışlanmasını ve buna karşılık gelen bir nükleer lekeyi arayarak WBC'leri tanımlayın. WBC'ler üç optik bölüm üzerinde statik görünüyorsa, hücreleri yapışmış olarak tanımlayın, ardından değerleri, 1 mikrometre aralıklarla alınan glomerulusun tepesinden 10 optik bölüm başına oluşum olarak rapor edin.Münih Wistar Fromter veya MWF sıçanlarında alan başına glomerüler sayı, 5 haftalık UUO grubunda, tedavi edilmemiş sıçanlara göre artmıştır. Sprague-Dawley sıçanları veya SD sıçanları, tek taraflı üreter tıkanıklığının beş haftasını takiben yüzey glomerülleri olmamasından alan başına 2.02'ye çıktı. Böbrek yüzeyini görmek için üç boyutlu yeniden yapılandırılmış görüntüler gözlendi.SD sıçanlarda 5 haftalık tek taraflı üretal obstrüksiyon, MWF'de görüldüğü gibi normal tübüler epiteliye benzeyen alanlarda, tedavi edilmemiş ve kısmen 5 haftalık UUO MWF sıçanlarında sonuçlanmadı. Renal vasküler dinamiklerin incelenmesinde, 5 haftalık UUO MWF ve SD gruplarında böbrek kan akışı, tedavi edilmeyen sıçanlara kıyasla anlamlı derecede azalmıştır. Glomerüler kılcal döngülerdeki RBC hızı, 5 haftalık UUO MWF'de ve SD sıçanlarında, tedavi edilmemiş MWF sıçanlarına kıyasla önemli ölçüde azalmıştır.Ek olarak, tedavi edilmemiş MWF sıçanları, üstten 10 optik bölüm başına daha az WBC'ye sahipken, sayı 5 haftalık UUO MWF ve 5 haftalık UUO SD sıçanlarında artmıştır. Tek taraflı üretal obstrüksiyon ile albümin geçirgenliğinde artış görüldü. Tek taraflı üretal obstrüksiyondan sonra Bowman boşluğunda albümin birikimi yoğundu.S1 segmenti endositoz, tedavi edilmemiş MWF sıçanlarında fizyolojik koşullarla gözlendiği gibi büyük miktarlarda albümin içerir. Aynı alım, 5 haftalık tek taraflı üretal obstrüksiyonu takiben MWF veya SD sıçanlarda görülemedi. Zaman içinde bir süreci incelemek için tekrar görüntüleme, görüntüleme için belirli bir alanın sabitlenmesi ve daha sonra daha yüksek çözünürlüklü mikroskopi gerçekleştirmek için sabit dokunun kullanılması gibi birçok farklı yöntem bu teknikle birlikte yapılabilir.Bu teknik yıkıcı teknoloji olarak kabul edilir. Araştırmacıların birçok yeni soruyu cevaplaması sağlanır. Bunu yaparken, yeni içgörüler sağlanmış ve paradigma değiştiren veriler elde edilmiştir.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

Sonsuz Horizon Darbeli kullanarak tek taraflı Servikal Spinal Kord Yaralanması bir Contusive Modeli

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Quantifying Glomerular Permeability of Fluorescent Macromolecules Using 2-Photon Microscopy in Munich Wistar Rats

Münih Wistar Sıçanlarda 2-Foton Mikroskopi kullanarak Floresan Makromoleküllerin Glomerüler geçirgenliği miktarının

Kidney  diseases involving urinary loss of large essential macromolecules, such as  serum albumin, have long been thought to be caused by alterations in ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

Geri dönüşümsüz ve Tersinir Tek taraflı Üreterik Obstrüksiyon bir fare modeli

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Leprdb Mouse Model of Type 2 Diabetes: Pancreatic Islet Isolation and Live-cell 2-Photon Imaging Of Intact Islets

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Tip 2 Diyabet Fare Modeli: Bozulmamış Islets Of Pankreas Adacık İzolasyonu ve Canlı hücre 2-Foton Görüntüleme

Type 2 diabetes is a chronic disease affecting 382 million people in 2013, and is expected to rise to 592 million by 2035 1. During the past 2 decades, ...

Using a Laminating Technique to Perform Confocal Microscopy of the Human Sclera

İnsan sklera Konfokal Mikroskobu gerçekleştirmek için bir Laminasyon Tekniği


The sclera is a dense connective tissue that covers and protects the eye. It mainly consists of dense collagen bundles (types I, III, IV, V, VI, and ...

Analyzing Beneficial Effects of Nutritional Supplements on Intestinal Epithelial Barrier Functions During Experimental Colitis

Deneysel Kolit sırasında Bağırsak epitel Bariyer Fonksiyonları Üzerine Ek Beslenme Faydalı Etkileri Analizi

Inflammatory bowel diseases (IBD), including Crohn&#39;s disease and ulcerative colitis, are chronic relapsing disorders of the intestines. They cause ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

Measuring the Effects of Bacteria and Chemicals on the Intestinal Permeability of Caenorhabditis elegans

Bakteri ve Kimyasalların Caenorhabditis elegans'ın Bağırsak Geçirgenliği Üzerine Etkilerinin Ölçülmesi

In living organisms, intestinal hyperpermeability is a serious symptom that leads to many inflammatory bowel diseases (IBDs). Caenorhabditis elegans is a ...